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Biomarqueurs et cancer du poumon En pratique Plateforme de génétique moléculaire des cancers • Responsable plateforme: E Delabesse • Trois sites: Rangueil/Purpan/ICR • Poumon (EGFR+BIOMARQUEURS): Responsable Dr I. Rouquette Rangueil : - Centralise les demandes poumon - Recherche mutations EGFR/ALK/KRAS/BRAF/HER2 - Transfère dossiers PI3K à l’ICR (G. Favre) Circuit des examens de biologie moléculaire Tumeurs pulmonaires PRESCRIPTION DE GENOTYPAGE Numéro INSC : Numéro ONCOMIP : A COMPLETER PAR LE MEDECIN PRESCRIPTEUR DE L’EXAMEN ET A ENVOYER AU PATHOLOGISTE Identification du Patient NOM : NOM DE JEUNE FILLE : PRENOM : DATE DE NAISSANCE : Homme Femme Date de demande du test : Type de test : EGFR KRAS BRAF ALK HER2 PI3K Matériel Tumoral à analyser Type de prélèvement Biopsie Résection chirurgicale Autre : Identification MEDECIN PRESCRIPTEUR Site de prélèvement : Bronche Poumon NOM : ADRESSE : Autre : Date de prélèvement : Statut tabagique : Fumeur Non fumeur Nombre paquets/année : Tel : Fax : E-mail : Ancien fumeur (stop en .....) Autre :………... Stade TNM : IIIB IV Indications (si autre) : CADRE, A COMPLETER PAR LE PATHOLOGISTE, ACCOMPAGNEE : 1. Du prélèvement tumoral (1 fragment de tumeur fixée et incluse en paraffine ou congelée/ choisir un bloc riche en cellules tumorales). 2. Du compte-rendu anapath. ET A ENVOYER AU LABORATOIRE REALISANT LES GENOTYPAGES, A l’ADRESSE SUIVANTE : Service d’Anatomie Pathologique et Histologie Cytologie du Pr Delisle CHU Rangueil 1 avenue Jean-Poulhès TSA 50032 31059 TOULOUSE Cedex 9 Responsables : Dr Isabelle Rouquette, Mélanie Boussard tel Secrétariat 05 61 32 28 61 fax 05 61 32 21 27 PAS DE FIXATION BOUIN, ni fixateur à base d’acide picrique. Eviter AFA. Matériel tumoral transmis: NON Identification MEDECIN PRESCRIPTEUR NOM : ADRESSE : Nombre de blocs: Tumeur primitive Histologie : Tel : Fax : E-mail : N° bloc: Métastases Adénocarcinome Autre : Tissu congelé : Tumorothèque Emplacement Fixateur (indispensable): Cérébrales Ganglionnaires Autres : Epidermoïde/malpighien oui non ONCOMIP Formol Rangueil Glyoxal RCL2 Purpan Autre Date de réception au service d’Anatomie Pathologique de Rangueil : …….../…….../……….. Heure :……… Visa :……….. Le résultat du génotypage sera renvoyé au médecin prescripteur et au médecin anatomo-pathologiste. Version 23/11/2011 Pathologiste détenteur du matériel CHG, CHU, Secteur Privé Pathologiste de la plateforme Prescription complétée + Compte-rendu anapath + Bloc Contrôle morphologique Extraction d’ADN Amplification ADN EXON 19 EXON 21 EXON 18 EXON 20 Mutation recherchée DELETIONS MUTATIONS PONCTUELLES MUTATIONS PONCTUELLES T790M INSERTIONS Techniques utilisées HRM/ ANALYSE DE FRAGMENT PCR-ASO HRM/ SEQUENCAGE PCR-ASO/ SEQUENCAGE Techniques biomarqueurs - EML4-ALK: FISH - KRAS, HER2: HRM/séquençage - BRAF V600E: PCR ASO - PI3K: séquençage direct Améliorations Techniques • EGFR: Passage techniques plus rapides et sensibles, redesign des amorces, sensibilisation fixateur: moins de prélèvements non interprétables, délais raccourcis • FISH ALK: criblage IHC systématique corrections éosine acidité, contrôle externalisé des cas litigieux Améliorations gestion (ORPAMIP) Interface cliniciens/plateforme: Mélanie Boussard Fiche modifiée téléchargeable Développements informatiques pour recueil de données et rendu résultats (fiches complémentaires) PRESCRIPTION DE GENOTYPAGE EGFR exons 19 à 21 Tumeurs pulmonaires Service d'Anatomie Pathologique et Histologie-Cytologie du Pr M.B. Delisle CHU Rangueil, Bt L2 - 1 avenue Jean Poulhès - TSA 50032 - 31059 Toulouse Cedex 9 Responsables : Dr Isabelle Rouquette, Camille Allera Moreau. Tél Accueil 05 61 32 28 42 --- Fax 05 61 32 21 27 Identification PATIENT Nom : …………………………. Nom de jeune fille : ………………… Prénom : ……………………….. Date de naissance : ……./……./……. Adresse : ……………………………………………………………………………………………. PRESCRIPTION DE GENOTYPAGE Numéro INSC : Numéro ONCOMIP : A COMPLETER PAR LE MEDECIN PRESCRIPTEUR DE L’EXAMEN ET A ENVOYER AU PATHOLOGISTE Identification MEDECIN PRESCRIPTEUR (Nom et coordonnées dont tel et fax) Identification A. PATHOLOGISTE REFERENT détenteur du matériel tumoral (Nom et coordonnées dont tel et fax) Identification du Patient NOM : NOM DE JEUNE FILLE : PRENOM : DATE DE NAISSANCE : Homme Femme Date de demande du test : Type de test : EGFR KRAS BRAF ALK HER2 PI3K Matériel Tumoral à analyser Type de prélèvement Biopsie Résection chirurgicale Autre : Identification MEDECIN PRESCRIPTEUR Site de prélèvement : Bronche Poumon NOM : ADRESSE : Autre : Date de prélèvement : Date de la demande de génotypage EGFR : / / 20….. Matériel tumoral à analyser : Tabagisme : Biopsie bronchique Biopsie pulmonaire sous scanner Pièce opératoire (lobectomie, pneumonectomie) Site métastatique, préciser : ……………………………………… Date du prélèvement : / / 20….. Fumeur Non fumeur Indication : ………………………… Stade de la maladie : ……………. Statut tabagique : Fumeur Non fumeur Nombre paquets/année : Tel : Fax : E-mail : Ancien fumeur (stop en .....) Autre :………... Stade TNM : IIIB IV Indications (si autre) : CADRE, A COMPLETER PAR LE PATHOLOGISTE, ACCOMPAGNEE : 1. Du prélèvement tumoral (1 fragment de tumeur fixée et incluse en paraffine ou congelée/ choisir un bloc riche en cellules tumorales). 2. Du compte-rendu anapath. ET A ENVOYER AU LABORATOIRE REALISANT LES GENOTYPAGES, A l’ADRESSE SUIVANTE : Service d’Anatomie Pathologique et Histologie Cytologie du Pr Delisle CHU Rangueil 1 avenue Jean-Poulhès TSA 50032 31059 TOULOUSE Cedex 9 Responsables : Dr Isabelle Rouquette, Mélanie Boussard tel Secrétariat 05 61 32 28 61 fax 05 61 32 21 27 Remarques : PAS DE FIXATION BOUIN, ni fixateur à base d’acide picrique. Eviter AFA. Matériel tumoral transmis: Identification MEDECIN PRESCRIPTEUR FICHE à compléter par le médecin prescripteur de l’examen et à envoyer au médecin pathologiste en possession du prélèvement tumoral du patient. NOM : ADRESSE : Nombre de blocs: Tumeur primitive Histologie : Cette fiche sera secondairement envoyée au laboratoire de génotypage par le pathologiste avec le Tel : Fax : E-mail : N° bloc: Métastases Adénocarcinome Autre : Tissu congelé : Tumorothèque Emplacement Fixateur (indispensable): Cérébrales Ganglionnaires Autres : Epidermoïde/malpighien oui non ONCOMIP Formol Rangueil Glyoxal RCL2 Purpan Autre Date de réception au service d’Anatomie Pathologique de Rangueil : …….../…….../……….. Heure :……… Visa :……….. Le résultat du génotypage sera renvoyé au médecin prescripteur et au médecin anatomo-pathologiste. Version 23/11/2011 Tabagisme chez les patients mutés EGFR/KRAS et transloqués ALK Profil EGFR muté: - Femme - Non Fumeuse Profil KRAS muté: - Homme - Fumeur Augmentation du nombre de dossiers pour les différentes analyses depuis le début de l’activité Délais Délai de rendu des résultats (en jours) TRIM 1 TRIM 2 TRIM 3 TRIM 4 2010 15 15 11 9 2011 8 5 5 5 Délai d’acheminement de la demande entre le prescripteur et le laboratoire de biologie moléculaire (en jours) TRIM 1 TRIM 2 TRIM 3 TRIM 4 2010 - 8 10 5 2011 4 4 6 5 Délais V L M M Réception des demandes J V L M M Analyse Exons 1920-21 J V L M M J Analyses Exons 18 – KRAS – HER2 – BRAF - ALK RÉSULTATS EXONS 1920-21 V Envoi des PI3K à l’ICR ADDENDUM EX 18 – KRAS – HER2 – BRAF - ALK Il faut compter de 1 jour à 1 semaine de délai pour le transfert du matériel de l’anatomopathologiste au laboratoire de biologie moléculaire (long car envoi groupé) NB: Les Feuillants nous envoient les dossiers tous les jeudis Il faut compter 3 à 9 jours pour les résultats dès la réception du dossier Il faut compter 7 à 14 jours pour les addendum. L Les non conformités les plus retrouvées 1 dossier de prescription sur 3 n’est pas conforme… Fiches de prescription directement envoyée au laboratoire de la plateforme Stade TNM non précisé ou ne correspond pas aux indications de l’analyse Statut tabagique non renseigné Date de prélèvement non renseignée Fixateur non renseigné Le numéro du prélèvement inscrit sur la fiche de prescription est absent ou ne correspond pas au numéro du bloc Congélation du prélèvement non indiquée - Retard de traitement donc retard de rendu des résultats - Perte de temps pour l’ingénieur qui doit rappeler les prescripteurs et/ou pathologistes - Défaut dans les statistiques rendues à l’INCA Le futur sur la plateforme • Prescrire via le DCC ONCOMIP (suivi, rendu des résultats) • Améliorer la détection des anomalies les plus utiles (évolutions techniques) • Développer l’IHC • Participation au recueil de données projet IFCT • Participer aux études nationales et aux STIC (TALK PREDICTAMM) • Développer la détection de nouveaux biomarqueurs Clin Cancer Res 2010 D5F3 or D9E4 antibodies J Clin Pathol 2010 ALK 5A4 Journal of Thoracic Oncology 2011 ALK1+ système de révélation