Concentrations urinaires d`isoniazide/acétylisoniazide

INT J TUBERC LUNG DIS 18(5):528–530
© 2014 The Union
COMMUNICATION BRÈVE
Concentrations urinaires d’isoniazide/acétylisoniazide : marqueurs
de l’observance du traitement préventif par isoniazide chez l’enfant
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V. Amlabu,* C. Mulligan, N. Jele, A. Evans,* D. Gray, H. J. Zar, H. McIlleron,* P. Smith*
* Division of Clinical Pharmacology, Department of Medicine, University of Cape Town, Cape Town, †Department of Paediatrics
and Child Health, Red Cross War Memorial Children's Hospital, University of Cape Town, Cape Town, South Africa
________________________________________________________________________________RÉSUMÉ
La méthode colorimétrique Arkansas vérifie l’observance des patients du traitement en détectant les métabolites de
l’isoniazide (INH) dans l’urine. Des échantillons d’urine recueillis 4 h après une dose d’INH chez 31 enfants infectés par le
virus de l'immunodéficience humaine recevant un traitement préventif par INH quotidien ou trihebdomadaire ont été 29
(94%) à avoir un test Arkansas positif, tandis que l’acétylisoniazide (AcINH) était détecté chez 30 enfants (97%) grâce à la
spectrométrie de masse. A 24, 48 et 72 h, seulement 78%, 23% et 0%, respectivement, étaient positifs au test Arkansas, tandis
que l’INH ou l’AcINH étaient détectés chez respectivement 94%, 69% et 33% des enfants. Le test Arkansas a donc confirmé
de façon fiable la prise d’INH lors d’une consultation 4 h après l’ingestion de la dose matinale, mais n’a pas été très performant à 24 h.
MOTS CLÉS : infecté par le VIH ; test Arkansas ; spectrométrie de masse
LE TRAITEMENT PREVENTIF PAR ISONIAZIDE
(TPI) est recommandé pour les enfants qui risquent de
développer une tuberculose (TB).1 L’observance du
traitement conditionne son efficacité.2 La méthode
Arkansas est un test urinaire qualitatif qui permet de
vérifier l’ingestion d’INH3–7 en détectant ses métabolites urinaires réagissant avec le chlorure de cyanogène
et l’acide barbiturique pour produire une teinte bleue
violette témoignant d’une réaction positive.8 Ce test est
limité par sa sensibilité qui décroit avec le temps écoulé depuis l’ingestion d’INH. De plus, la méthode Arkansas n’a pas fait l’objet d’évaluations vis-à-vis de
mesures objectives de l’INH et de l’acétylisoniazide
(AcINH) dans l’urine.
Cette étude a eu pour but de mesurer les concentrations urinaires d’INH et d’AcINH à différents moments
suivant l’administration d’INH aux enfants pour évaluer la sensibilité du test Arkansas par rapport à la
spectrométrie de masse.
POPULATION D’ÉTUDE ET MÉTHODES
Une cohorte d’enfants infectés par le virus de l'immunodéficience humaine (VIH) randomisés pour recevoir
soit le TPI quotidien ou intermittent (8–12 mg/kg/dose)
soit un placebo dans le cadre d’une plus vaste étude
randomisée contrôlée (NCT00330304) à l’hôpital
d’enfants Red Cross War Memorial au Cap, a été recrutée pour cette étude. Ces enfants âgés de <15 ans et
sous traitement ARV ont été invités à fournir des
échantillons d’urine afin de déterminer les concentrations urinaires d’INH et d’AcINH et de réaliser le test
Arkansas.
Un parent ou un tuteur légal a donné son consentement à la participation de l’enfant. L’étude a été approuvée par le comité d’éthique en recherche humaine
de l’Université du Cap, au Cap en Afrique du Sud
(HREC ref no. 299/2005).
Les enfants ont été recrutés de manière séquentielle
à partir d’une liste générée par le pharmacien de l’étude
à raison de trois enfants sous INH contre un sous placebo. Le reste de l’équipe d’étude n’a pas eu connaissance de l’attribution du traitement jusqu'après le test
urinaire. On a demandé aux parents de ne pas donner
d’INH ou de placebo le jour du test urinaire. Pour le
bras intermittent, les échantillons d’urine ont été recueillis un lundi, environ 72 h après la dernière dose.
Les enfants ont ensuite ingéré une dose d’INH sous
observation et les échantillons d’urine ont été recueillis
4 et 48 heures plus tard. Pour les enfants sous INH
quotidien, les échantillons d’urine ont été recueillis
environ 24 heures après une dose, suivis immédiatement par une dose d’INH sous observation puis par le
recueil d’urine réalisé 4 heures plus tard. L’observance
de l’INH avant la consultation a été maximisée grâce à
des appels téléphoniques à la famille de l’enfant. Un
aliquot d’urine d’1 ml a été conservé à -80°C.
Le test Arkansas a été réalisé sur des échantillons
d’urine comme décrit ailleurs.3 Des photographies
numériques en couleur des échantillons ont mis en
évidence les changements de couleur après mise au
repos des tubes pendant environ 10 minutes. Les colorations ont été lues en comparant les images numériques à un tableau (obtenu auprès de www.artpaints.com). Deux observateurs ont d'abord lu les colorations dans un sous-groupe de 48 échantillons indépendamment ; cependant, en raison d’une excellente
concordance entre les deux observateurs, un seul observateur a lu les échantillons suivants. La gamme des
colorations observées sont montrées dans la Figure. En
se basant sur les rapports d’études précédentes,3–7 et
Auteur pour correspondance : H McIlleron, Division of Clinical Pharmacology, Department of Medicine, University of Cape
Town, Cape Town, Afrique du Sud. Tel: (+27) 21 406 6292; Fax: (+27) 21 448 1989. e-mail: [email protected]
[Traduction de l’article : « Isoniazid/acetylisoniazid urine concentrations: adherence markers of isoniazid preventive therapy in
children » Int J Tuberc Lung Dis 2014 ; 18(5) : 528–530. http://dx.doi.org/10.5588/ijtld.13.0730]
2
The International Journal of Tuberculosis and Lung Disease
Figure Histogramme montrant les couleurs observées au test
Arkansas et leur survenue en pourcentage à différents moments chez les 31 enfants sous isoniazide quotidien ou intermittent. Le résultat à 4 heures combine les bras quotidien et
intermittent, comptant respectivement 18 et 13 échantillons.
sur les résultats de la chromatographie liquide couplée
à la spectrométrie de masse (HPLC-MS/MS), le jaune a
été défini comme négatif, alors que les autres couleurs
ont été considérées comme positives.
Les concentrations d’INH et d’AcINH ont été déterminées par HPLC-MS/MS. Les échantillons d’urine
ont été centrifugés puis dilués 10 fois avec de l’eau
avant injection. Une chromatographie à gradient a été
réalisée sur une colonne d’analyse Phenomenex Luna 5
μm PFP(2) 100 A, 50 mm x 2 mm (Phenomenex,
Macclesfield, Royaume-Uni), avec de l’acétonitrile et 5
mM d’acétate d’ammonium comme phase mobile. La
fourchette de calibrage a été de 0,125 mg/l à 20 mg/l
pour les deux composés. On a attribué la valeur zéro
aux échantillons dont la concentration était en-dessous
de 0,125 mg/l.
RÉSULTATS
Un ensemble de 41 enfants, d’âge médian 7,7 ans (intervalle interquartile 6,6–9,5) a participé à l’étude ; 18
enfants ont reçu une dose quotidienne et 13 ont reçu un
traitement intermittent par INH tandis que 10 enfants
ont eu un placebo. A chaque moment de l’étude, tous
les échantillons d’urine ont été recueillis, sauf un
échantillon manquant à 72 heures. Tous les échantillons des enfants sous placebo ont eu une coloration
jaune. Les résultats du test Arkansas pour les enfants
sous INH sont présentés dans la Figure ci-dessous. Les
concentrations urinaires d’INH et d’AcINH à 4 heures
pour le bras quotidien et le bras intermittent n’ont pas
été statistiquement significativement différentes (P =
0,517 ; Mann-Whitney U-test).
Les proportions d’échantillons d’urine à 4 heures
avec INH / AcINH détectable par HPLC-MS/MS et un
test Arkansas positif étaient similaires (Tableau). Un
certain nombre d’observations aberrantes ont été notées. Les échantillons de 4 heures et 24 heures d’un
enfant sous INH quotidien ne contenaient pas d’INH
ou d’AcINH détectable et ont été Arkansas négatifs,
tandis que les échantillons de 4 heures de deux enfants
sous INH ont eu une concentration faible d’INH et
d’AcINH (< 2,1 mg/l) et ont été respectivement vert
pâle et jaune au test Arkansas. Ceci correspond aux
résultats des échantillons de 24 et 72 heures. Inversement, un échantillon de 48 heures a eu une concentration élevée d’INH (137 mg/l) et d’AcINH (26,87 mg/l)
correspondant à l’ingestion récente d’INH. En excluant
les observations aberrantes, probablement dues à un
défaut d’observance du protocole, les deux tests ont
détecté les produits de dégradation de l’INH dans
100% des échantillons. A 24, 48 et 72 heures, respectivement 94%, 69% et 33% des échantillons contenaient
de l’AcINH détectable par HPLC-MS/MS mais seulement 78%, 23% et 0% des échantillons, respectivement, ont été positifs au test Arkansas.
DISCUSSION
Ceci est la première étude visant à évaluer le test Arkansas de mesure de l’observance du traitement par
INH contre la mesure objective des concentrations
urinaires d’INH et d’AcINH. Nous avons constaté que
le test Arkansas était fiable 4 heures après l’ingestion
de la dose, d’où son utilité pour suivre la prise de la
dose matinale d’INH chez les enfants venant au centre
de santé le même jour. Il est également significativement moins cher que le HPLC-MS/MS. Cependant, à
mesure que la concentration des métabolites de l’INH
décroit, la sensibilité du test Arkansas diminue avec le
temps écoulé depuis la prise d’INH et n’est plus utile
au-delà de 24 heures après la prise. Ces résultats sont
Tableau Proportion d’échantillons avec un test Arkansas positif et concentrations d’INH et d’AcINH par spectrométrie de masse
Arkansas positif
Echantillons avec INH détectable (HPLC-MS/MS)
Concentration d’INH, mg/l,
médiane [IIQ]
Echantillons avec AcINH
detectable (HPLC-MS/MS)
Concentration d’AcINH, mg/l,
médiane [IIQ]
Quotidien
4h
(n = 18)
n (%)
17 (94)
17 (94)
24 h
(n = 18)
n (%)
14 (78)
17 (94)
Intermittent
4h
(n = 13)
n (%)
12 (92)
12 (92)
48 h
(n = 13)
n (%)
3 (23)
4 (31)
72 h
(n = 12)
n (%)
0 (0)
3 (25)
139
[18,0–273]
17 (94)
0,53
[0,34–4,90]
17 (94)
122
[52,0–255]
13 (100)
0,00
[0,00–0,20]
9 (69)
0,00
[0,00–0,07]
4 (33)
103
[36,0-227]
3,91
[1,39–9,95]
217
[69,0–421]
0,22
[0,00–0,37]
0,00
[0,00–0,18]
INH = isoniazide ; AcINH = acétylisoniazide ; HPLC-MS/MS = chromatographie liquide haute performance couplée à la spectrométrie de masse ; IIQ = intervalle interquartile.
INH/AcINH dans l’urine comme mesure de l’observance
conformes au rapport de Hanifa et al.,5 et sont utiles
pour l’interprétation des résultats du test Arkansas.
Cependant, cette étude est seulement exploratoire et
devrait être suivie d’études à plus grande échelle pour
en confirmer les résultats avec une meilleure caractérisation de l’excrétion urinaire de l’INH entre 4 et 12
heures, période pendant laquelle les consultations au
centre de santé pourraient avoir lieu.
En conclusion, le test Arkansas peut détecter de
manière fiable une ingestion récente d’INH jusqu'à 4
heures après la prise tandis que la HPLC-MS/MS est
utile jusqu'à 24 h après la prise.
Remerciements
Les auteurs remercient les enfants qui ont participé à cette
étude ainsi que leurs parents.
Le financement a été fourni par le Medical Research
Council d’Afrique du Sud, Department of Health South
Africa ; la Division de Pharmacologie clinique, Université du
Cap, Le Cap, Afrique du Sud.
Conflit d’intérêt : pas de conflit déclaré.
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