Sénégal - Revue de Médecine Vétérinaire
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Résidus d’antibactériens dans le foie et le gésier de poulets de chair dans les régions de Dakar et de Thiès (Sénégal) F.A. ABIOLA1*, M.M. DIOP1, A. TEKO-AGBO1, B. DELEPINE2, F.C. BIAOU1, B. ROUDAUT2, V. GAUDIN2 et P. SANDERS2 1 2 Laboratoire de Contrôle des Médicaments Vétérinaires de l’EISMV BP 5 077 DAKAR, Sénégal. Laboratoire d’Etudes et de Recherches sur les Médicaments Vétérinaires et les Désinfectants AFSSA BP 90 203 35 302 FOUGERES, France. * auteur chargé de la correspondance : [email protected] RÉSUMÉ SUMMARY Dans le but de contribuer à la sécurité chimique des aliments, une étude préliminaire a été réalisée sur les résidus d’anti-infectieux dans le foie et le gésier de poulets de chair dans les régions de Dakar et de Thiès (Sénégal). Trente-sept échantillons de foie ou de gésier ont été prélevés dont 23 dans les marchés et 14 dans les exploitations avicoles. Ils ont été analysés par des méthodes microbiologiques et physico-chimiques au Laboratoire d’Etudes et de Recherches sur les Médicaments Vétérinaires et les Désinfectants de l’Agence Française de Sécurité Sanitaire des Aliments (AFSSA). Soixantecinq pour cent et 36% des produits analysés, respectivement dans les marchés et dans les exploitations, contenaient des résidus d’antibactériens. Il ressort de cette analyse que 14% des échantillons contenaient des résidus de tétracyclines, 8% des résidus de sulfamides, 41% des résidus de nitrofuranes et 5% du chloramphénicol (gésiers uniquement). Sur les 37 échantillons analysés, 20 échantillons (soit 54%) avaient des teneurs en résidus très largement supérieures aux limites maximales de résidus (LMR). Cette étude montre ainsi la présence de résidus de substances interdites (chloramphénicol et nitrofuranes) dans les denrées d’origine animale destinées à la consommation humaine. Antimicrobial agents residues in liver and gizzard of broilers in the areas of Dakar and Thiès (Sénégal). By F.A. ABIOLA, M.M. DIOP, A. TEKO-AGBO, B. DELEPINE, F.C. BIAOU, B. ROUDAUT, V. GAUDIN and P. SANDERS. Mots-clés : Sénégal - résidus - anti-infectieux - foie gésier. Introduction Au Sénégal, les statistiques sur la consommation des médicaments vétérinaires ne sont pas précises. En outre, peu d’investigations sur la présence des résidus des médicaments vétérinaires dans les denrées animales ont été menées, rarement publiées et ne sont pas intégrées dans un véritable programme de surveillance. BIAGUI [11] a mis en évidence dans son étude sur des produits aviaires destinés à la consommation, la présence d’inhibiteurs de croissance bactérienne dans 9,6% des fermes suivies dans la région de Dakar qui produit annuellement 6 millions de poulets de chairs [25]. Dans une autre étude menée par la Direction de l’élevage du Sénégal et l’Institut Pasteur de Dakar en 2003, 27,4% d’échantillons de viandes contenaient des résidus d’anti-infectieux [32]. CARDINALE et al. [14] avaient mis en évidence 25% de Salmonella et 77% de Campylobacter sur des fientes de poulets de chair à Dakar. Les efforts actuellement perceptibles sur la sécurité sanitaire des aliments ne concernent que les produits exportés vers les pays du nord A preliminary study was realised to check antimicrobial agents residues in the broilers in the areas of Dakar and Thiès (Senegal). Thirty seven samples of liver or gizzard were collected, 23 in the markets and 14 in the poultry farms. They were analysed by microbiological and physico-chemistry methods at the Laboratory of Control and Researchs on Veterinary Drugs and Disinfectants of the French Food Security and Sanitary Agency (AFSSA). Antibiotic-residue positive samples were identified in the products collected respectively in the markets (65 %) and in the poultry farms (36 %). The results showed that 14% of the samples were contaminated by tetracyclins, 8% by sulfamids, 41% by nitrofuran residues and 5% by chloramphenicol residues (gizzard samples only). Within the 37 analysed samples, 20 samples (54%) contained residues at concentrations exceeding the permissible maximum residue limit (MRL). The results showed that the animal products for human consumption contained banned residues (chloramphenicol and nitrofurans). Keywords : Senegal - residues - antimicrobial - liver - gizzard. (les produits halieutiques et horticoles essentiellement), le consommateur local étant laissé pour compte. Or les résidus de médicaments vétérinaires peuvent compromettre la sécurité sanitaire des denrées et mettre en danger la santé du consommateur [5]. Leur présence met en évidence une mauvaise utilisation des médicaments vétérinaires notamment le non-respect du temps d’attente. L’Ecole Inter - Etats des Sciences et Médecine Vétérinaires (EISMV) de Dakar avait opté d’aborder la problématique de la pharmacocinétique [1, 2, 3] et des résidus de médicaments vétérinaires [8] dans le but d’assurer une bonne couverture sanitaire des animaux et de contribuer à l’amélioration de la sécurité chimique des aliments. La présente étude a été menée en collaboration avec le Laboratoire d’Etudes et de Recherches sur les Médicaments Vétérinaires et les Désinfectants de l’Agence Française de Sécurité Sanitaire des Aliments (AFSSA) en France et le Laboratoire de Contrôle des Médicaments Vétérinaires (LACOMEV) de l’EISMV de Dakar. Le but de cette étude est de permettre un transfert de compétences et de technoloRevue Méd. Vét., 2005, 156, 5, 264-268 RÉSIDUS D’ANTIBACTÉRIENS DANS LE FOIE ET LE GÉSIER DE POULETS DE CHAIR gies d’un laboratoire de référence expérimenté au Nord vers un laboratoire du Sud. Les résidus de 4 groupes de molécules médicamenteuses ont été ciblés (nitrofuranes, sulfamides, tétracyclines et chloramphénicol) en raison de leur utilisation importante et non contrôlée dans les élevages avicoles au Sénégal [10, 11, 32] et de la méconnaissance par les utilisateurs, de la pharmacocinétique de ces composés. Plusieurs de ces substances (chloramphénicol et nitrofuranes) ne sont pas autorisées, au niveau international, pour un usage chez les animaux dont les denrées sont destinées à la consommation humaine [19, 21, 30] ce qui justifie leur recherche. Diverses méthodes de dépistage, de quantification et d’identification ont été utilisées pour la recherche de ces résidus dans les muscles du gésier et dans le foie de poulets de chair. 265 les désinfectants de l’AFSSA en France, laboratoire communautaire de référence pour les résidus d’antibiotiques. Les méthodes sont validées et utilisées en routine. MATÉRIELS D’ANALYSE MICROBIOLOGIQUE Les matériels sont constitués des souches bactériennes tests ensemencées sur des géloses appropriées, coulées en boîtes de Pétri : Bacillus cereus ATCC 11778 sur gélose pH 6 (Bc 6), Bacillus stearothermophilus ATCC 10149 sur gélose pH 7 (Bst 7), Escherichia coli ATCC 11303 sur gélose pH 8 (Ec 8), Bacillus subtilis B.G.A. sur gélose pH 7,2 (Bs 7,2) et Kocuria varians ATCC 9341 sur gélose pH 8 (Kv 8). MATÉRIELS D’ANALYSES PHYSICO-CHIMIQUES Méthodes de dépistage Matériel et méthodes Deux méthodes de dépistage ont été utilisées pour la recherche de tétracyclines et de sulfamides : SITES ET PÉRIODE DE PRÉLÈVEMENT - la méthode microbiologique « Screening Test for Antibiotic Residues (STAR) » [20]. Cette méthode mise au point pour le muscle et le lait a été adaptée et appliquée aux 16 échantillons de foie et aux 21 échantillons de gésier ; L’ étude a été réalisée dans les régions de Dakar (Dakar ville, Pikine, Rufisque et Malika) et de Thiès (ville de Thiès) (Sénégal). Les prélèvements ont été faits de février à mai 2003 sur 16 sites (4 marchés et 12 exploitations). Dans chacun des marchés, les prélèvements ont été réalisés à 3 reprises et ont concerné des vendeurs différents. Au total 37 échantillons ont été prélevés, 23 sur les marchés et 14 dans les exploitations : 21 gésiers (11 issus des marchés et 10 des exploitations) et 16 foies (12 issus des marchés et 4 des exploitations. Le foie et le gésier n’ont jamais été prélevés sur le même animal. ECHANTILLONNAGE Les tissus prélevés sont le gésier ou le foie. Dans les exploitations et marchés choisis au hasard (tirage au sort parmi 115 exploitations et 8 marchés), les responsables d’abattage ont été préalablement informés de l’étude et leur accord a été obtenu pour réaliser les prélèvements pendant la phase d’éviscération. Les échantillons ont été prélevés à l’aide de ciseaux et de pinces à dents de souris. Ils ont été directement enveloppés dans du papier aluminium, mis dans des sachets de congélation en plastique puis compactés et identifiés. Les échantillons ont été conservés dans une glacière avec des conservateurs de glace pour le transport jusqu’au LACOMEV où ils ont été conservés à une température inférieure à -20°C. Ils ont été ensuite acheminés au laboratoire d’essai de l’AFSSA (France) par avion dans des caisses isothermes en polyester avec des conservateurs de froid. Lors du débarquement, il a été vérifié que les échantillons n’avaient pas été décongelés avant d’être transférés de nouveau dans les congélateurs du laboratoire. ANALYSE DE LABORATOIRE Les analyses ont été réalisées au laboratoire de référence d’études et de recherches sur les médicaments vétérinaires et Revue Méd. Vét., 2005, 156, 5, 264-268 - la méthode de détection des résidus de sulfamides dans le muscle d’animaux de boucherie par chromatographie sur couche mince (CCM) [7] a été appliquée aux 21 échantillons de gésier. Méthodes d’identification et de dosage Une méthode de quantification des sulfamides dans le muscle par CLHP [35] a été utilisée pour analyser les échantillons suspectés contenir des sulfamides lors du dépistage. La méthode de détection et d’identification des résidus d’antibiotiques dans les denrées basée sur la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (CL/SM-SM) [16], [17] a été appliquée aux échantillons suspectés contenir des tétracyclines et des sulfamides. La méthode de recherche et de confirmation de la présence de résidus de chloramphénicol dans les matrices d’origine biologique basée sur la chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CG/SM) [13] a été appliquée aux 21 échantillons de gésier. La méthode de détermination de résidus de 4 nitrofuranes (furazolidone, furaltadone, nitrofurazone, nitrofurantoïne) dans les tissus est basée sur la recherche des métabolites liés par CL/SM-SM [28]. Cette méthode a été appliquée aux 16 échantillons de foie et 21 échantillons de gésier. Résultats TESTS DE DÉPISTAGE Sur 37 échantillons analysés par dépistage microbiologique selon la méthode STAR, 6 ont été suspectés contenir des résidus de tétracyclines (soit 16%), 2 des résidus de sulfamides (soit 5%), 7 des résidus de macrolides et/ou de bêta - lactamines (soit 19%) et 3 des résidus d’aminocyclitols 266 ABIOLA (F.A.) ET COLLABORATEURS TABLEAU I — Résultats de l’analyse microbiologique des échantillons de foie (n=16) ou de gésiers (n=21) prélevés dans des marchés ou des exploitations avicoles des régions de Thiès et de Dakar (Sénégal) * : FAO/OMS [19]. ** : Molécules interdites dans les denrées animales destinées à la consommation humaine [19, 20, 30]. *** : Molécules non ciblées par cette étude et n’ont pas fait l’objet d’une analyse de confirmation. (soit 8%). Deux échantillons de gésier sur 21 ont été suspectés contenir des résidus de sulfamides (soit 9%) à partir d’un dépistage de résidus de sulfamides par CCM. Ces deux échantillons sont différents des deux autres révélés par la méthode STAR. Les tests de dépistage ont donc permis de suspecter la présence de résidus de sulfamides dans 4 échantillons, de tétracyclines dans 6 échantillons, de résidus de macrolides et ou bêta - lactamines dans 7 échantillons et d’aminocyclitols dans 3 échantillons (Tableau I). La présence de résidus de sulfamides a été confirmée par CLHP dans 3 échantillons sur les 4 suspectés. Les molécules identifiées sont la sulfadimérazine à une teneur de 63 µg/kg et la sulfadiazine dont la teneur a varié de 114 à 188 µg/kg selon les échantillons. La présence de résidus de tétracyclines a été confirmée par CL/SM-SM dans 5 échantillons parmi les 6 échantillons suspectés contenir des résidus de tétracyclines et les molécules identifiées ont été l’oxytétracycline dont les teneurs ont varié de 77 à 294 µg/kg et la tétracycline à une teneur de 376 µg/kg. Cette méthode a également permis de confirmer la présence de résidus de sulfamides (sulfadiazine et sulfadimérazine) dans 3 échantillons sur les 4 suspectés contenir ces résidus, et celle de traces de résidus de chloramphénicol a été mise en évidence dans un échantillon de gésier sur 21 (soit 5%). La méthode CL/SM-SM a révélé la présence de résidus de nitrofuranes dans 4 échantillons de gésiers sur 21 (soit 19%), 11 échantillons de foie sur 16 (69%). Les résidus de nitrofuranes ont été retrouvés sous la forme de 3-amino-5 morpholinomethyl-1,3-oxazolidin-2-one (AMOZ), métabolite lié de la furaltadone. Les teneurs ont varié de 2 à 77 µg/kg dans les gésiers et de 0,7 à 243 µg/kg dans les foies. Les échantillons suspectés contenir des macrolides, bêta - lactamines et aminocyclitols n’ont pas été analysés pour confirmation. Les différentes méthodes d’analyse ont montré la présence de résidus d’antibactériens dans 11 gésiers sur 21 (soit 52%) et 13 foies sur 16 (soit 81%). Ces échantillons proviennent aussi bien des marchés que des exploitations. Ainsi, 65% (15 sur 23) des échantillons provenant des marchés et 36% (5 sur 14) des échantillons provenant des exploitations étaient contaminés par des résidus d’antibactériens. Les échan- tillons sont soit monocontaminés (16 sur 37) avec une prédominance en résidus de nitrofuranes (10 sur 37, soit 27%) ou polycontaminés (8 sur 37) associant les résidus de nitrofuranes, de tétracyclines, de chloramphénicol, avec des résidus suspects de macrolides et/ou bêta - lactamines et d’aminocyclitols (Tableau II). Certains de ces échantillons avaient des teneurs de résidus dépassant les LMR (Limites Maximales de Résidus) ou contenaient des résidus de molécules interdites dans l’Union Européenne pour une utilisation chez les animaux producteurs de denrées alimentaires. (Tableau I). TABLEAU II — Nature de la contamination des échantillons de foie (n=16) ou de gésiers (n=21) prélevés dans des marchés ou des exploitations avicoles des régions de Thiès et de Dakar (Sénégal) ; N= nombre d’échantillons. Discussion Ce travail a concerné un sondage des résidus des médicaments vétérinaires dans les produits aviaires dans les régions de Dakar et de Thiès. Le choix de ces régions pour ce sondage a été motivé par le fait qu’elles représentent la principale zone d’aviculture du Pays [29]. Les prélèvements ont été effectués de février à mai 2003, période des fêtes religieuses (Tamkharite, Magal de Touba, Pâques et Maouloud) où la demande et la production de produits aviaires sont importantes. Revue Méd. Vét., 2005, 156, 5, 264-268 RÉSIDUS D’ANTIBACTÉRIENS DANS LE FOIE ET LE GÉSIER DE POULETS DE CHAIR LA NATURE RELATIVEMENT IMPORTANTE D’ÉCHANTILLONS POSITIFS Après analyse, un nombre important d’échantillons contenaient des résidus de médicaments vétérinaires, avec 11 gésiers contaminés sur 21 (soit 52%), 13 foies contaminés sur 16 (soit 81%). Toutes les molécules ciblées ont été identifiées et quantifiées aussi bien dans le foie que dans le gésier. Quarante et un pour cent des échantillons analysés contenaient des résidus de furaltadone sous forme d’AMOZ à des teneurs variant de 0,7 à 243 µg/kg. L’utilisation des molécules de la famille des nitrofuranes est interdite chez les animaux producteurs de denrées alimentaires dans l’Union Européenne du fait de leur profil toxicologique ne permettant pas de fixer une dose journalière admissible. Ces observations se rapprochent du cas du Maroc où KRIBEL [24] a obtenu 92% des échantillons d’œufs et de chairs de poulet contenant des résidus de nitrofuranes avec des teneurs plus basses allant de 0,6 à 31,6 µg/kg. De même des traces de chloramphénicol ont été retrouvées dans 5% des échantillons de gésiers analysés bien qu’il s’agisse également d’un produit interdit au niveau international. Ce résultat est comparable à celui observé en France où des traces de chloramphénicol (0,3 µg/kg) ont été mises en évidence dans les abattoirs de poulets de chair [34]. Huit pour cent (8%) des échantillons analysés contenaient des résidus de sulfamides dont les teneurs ont été comprises entre 63 et 188 µg/kg. Les sulfamides détectés ont été la sulfadimérazine et la sulfadiazine. Pour les sulfamides, les concentrations observées (188 µg/kg) dépassaient la LMR fixée par la FAO/OMS [19] qui est de 100 µg/kg. Quant aux tétracyclines, 14% des échantillons analysés étaient positifs, les teneurs obtenues allaient de 77 à 376 µg/kg, donc avec des concentrations parfois supérieures à la LMR qui est de 100 µg/kg [19]. Certains échantillons ont été suspectés contenir des macrolides et/ou des bêta- lactamines (19%) ou des aminocyclitols (8%) mais n’ont pas fait l’objet de confirmation au cours de l’étude. Ces résultats démontrent une diversité d’usage en terme de molécules et le recours à des associations d’antibiotiques. La présence de résidus a été relevée aussi bien dans les marchés que dans les exploitations avicoles. En effet, sur les marchés, 15 échantillons sur 23 prélevés (soit 65%) contenaient des résidus d’antibactériens contre 5 échantillons sur 14 (soit 36%) dans les exploitations. Des études similaires ont été réalisées en France par VALDEBOUZE et al., [37] qui avaient trouvé dans les viandes de poulets vendus dans le commerce un taux de 10% de résidus d’antibiotiques à activité antibactérienne. HUBERT et al., [22] aux Etats-Unis avaient obtenu un taux de 25% de résidus d’antibactériens dans les fientes de poulets avant abattage. Plus récemment, AL-GHAMDI et al., [9], en recherchant des résidus de tétracyclines dans les produits aviaires dans la province orientale en Arabie Saoudite avaient trouvé 69,7% de résidus d’antibiotiques dans les poulets de chair, ce qui se rapproche de la proportion rencontrée dans notre étude (65%). POURQUOI Y A-T-IL DES CAS POSITIFS ? La présence de ces résidus d’antibactériens est probableRevue Méd. Vét., 2005, 156, 5, 264-268 267 ment liée à un traitement des animaux suivi d’un délai d’attente insuffisant [12, 15]. Le délai d’attente est défini comme le délai à observer entre la dernière administration d’un médicament et la commercialisation des denrées produites par l’animal traité. Le respect de ce délai garantit que la teneur des résidus de médicaments dans les aliments sera conforme à la LMR pour ce médicament vétérinaire [19]. Le délai d’attente est donc déterminé pour chaque formulation de médicaments vétérinaires et dépend du produit, de la posologie et de la voie d’administration. Le respect de ce temps d’attente suppose donc un enregistrement de la prescription du médicament, un suivi de son utilisation et un arrêt des traitements avant l’abattage. Une enquête réalisée en 2002 par BIAGUI [11] a révélé l’utilisation anarchique des produits même interdits dans les exploitations avicoles dans la zone des Niayes par un personnel non qualifié. Dans le cas des substances interdites, la recherche analytique ne se focalise pas sur la quantification mais sur la capacité de détecter et de confirmer ces substances ou leurs métabolites. Les méthodes utilisées dans cette étude sont extrêmement sensibles avec des limites de détection inférieures ou égales à 1 µg/kg permettant de détecter la présence de ces résidus dès que ces produits sont utilisés et plusieurs jours ou semaines après la dernière utilisation. Ces molécules interdites dans de nombreux pays se retrouvent sur le marché des pays en développement du fait du manque de contrôle ou de surveillance des pratiques d’utilisation des médicaments vétérinaires par les services officiels. Tous ces constats mettent en relief l’intérêt du vœu émis par ABIOLA [6] en 1986 pour une mise en place d’un cadre réglementaire et législatif sur les médicaments vétérinaires en Afrique en général et le problème des résidus en particulier. RISQUES LIÉS À LA CONSOMMATION DE CES DENRÉES La consommation de ces denrées contaminées par ces molécules est source potentielle de risques toxicologique [5, 31], allergique [23, 26] et microbiologique [4, 18, 27, 36]. Leur mise en évidence reflète un mauvais usage des antibiotiques, substances indispensables à la médecine. Outre ces risques sanitaires, la présence des résidus de médicaments vétérinaires dans les denrées d’origine animale est une entrave économique importante dans les échanges internationaux avec les nouvelles règles sanitaires et phytosanitaires de l’OMC [33]. Conclusion En conclusion, ce travail a d’abord permis l’acquisition d’un savoir faire en matière de résidus de médicaments vétérinaires à l’EISMV. Il a également révélé que les produits aviaires issus de la zone des Niayes (Dakar et Thiès) au moment de l’étude, présentaient des résidus de divers antiinfectieux dans 52% des gésiers et 81% des foies dépassant parfois les limites maximales de résidus. Ces résultats non représentatifs de la situation générale sont cependant alarmants et reflètent une mauvaise utilisation des antibiotiques en élevage. Cette mauvaise utilisation a pour conséquence, 268 un risque accru de sélection de bactéries zoonotiques résistantes aux antibiotiques telles que Salmonella et Campylobacter, pouvant causer des infections graves chez l’homme. Cette situation nécessite une étude plus poussée au plan national avec un échantillonnage plus large tant en nombre d’échantillons qu’en variétés de matrices et la mise en place d’une communication vers les utilisateurs destinés à améliorer l’usage de ces médicaments en élevage. Remerciements Nous remercions Dr DIENG (Sangalkam), Dr P. A. DIALLO (Thiès), S.GAUTIER (AFSSA), Y. BLOT (AFSSA), Dr K.AKODA (LACOMEV) et Mr ELH. M. NIANG (LACOMEV) pour leur participation généreuse et très précieuse à cette étude. 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