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COLINESTERASA
CHOLINESTERASE
SUBSTRATO BUTIRILTIOCOLINA
Para la determinación “in vitro” de la Colinesterasa en suero o plasma
BUTYRYLTHIOCHOLINE SUBSTRATE
For “in vitro” determination of Cholinesterase in serum or plasma
Principio
Principle
Colinesterasa
Butiriltiocolina + H2O
Tiocolina + DTNB*
2-Nitro-mercapto-benzoato
* Ditiobis-nitrobenzoato.
Reactivos
Kit 5 x 25 ml.(Ref. 99 08 92). Contiene:
A. 5 x 25 ml. Tampón / cromógeno.
B. 5 x 1 ml. Sustrato liofilizado.
Cálculos
Determinar la ΔE/30 seg. obtenida en cada lectura y
hallar el valor medio.
U/L (25º/30ºC) = 23460 x ΔE 405 nm/ 30 seg.
U/L (37º C) = 46920 x ΔE 405 nm/ 30 seg.
Ref. 99 08 08
Ref. 99 05 62
Reactivo de trabajo
Reactivo A: Reactivo listo para su uso.
Reactivo B: Rehidratar el vial de sustrato con 1 ml. de agua desionizada.
Las concentraciones en la disolución reactiva son:
Tampón fosfato pH 7,4
DTNB*
Yoduro de butiriltiocolina
Conservantes y estabilizantes
Valores Normales
25º C
30º C
37º C
* Niños, hombres de cualquier edad y mujeres a
partir de 40 años.
3500-8500 U/L 4300-10500 U/L 5400-13200 U/L
50 mM
0,26 mM
6 mM
* Mujeres (18 - 39 años, no embarazadas y que no
tomen anticonceptivos orales).
2800-7400 U/L 3500-9200 U/L 4300-11500 U/L
Conservación y estabilidad
Los componentes del kit almacenados a 2-8ºC, son estables hasta la fecha
de caducidad indicada en la etiqueta. El reactivo B una vez rehidratado es
estables 6 semanas si se conserva a 2-8º C. Mantener en la oscuridad.
Muestra
Suero, plasma con heparina o EDTA. La Colinesterasa en suero permanece
estable 7 días a 2 - 8º C.
Precauciones
El reactivo contiene Azida sódica al 0,09%, manipular con precaución. La
eliminación de residuos debe hacerse según la normativa legal vigente.
Técnica
Reactivo A
Muestra
Reactivo B
Macro
ml
3,00
0,02
0,10
Semimicro
ml
1,50
0,01
0,05
Mezclar,transferir a la cubeta de lectura.
Leer la extinción inicial, y volver a leer
exactamente a los 30, 60 y 90 segundos.
2.Temperatura 37ºC.
Reactivo A
Muestra (1+1 con salina )
Reactivo B
Thiocholine + DTNB*
Tiocolina + Butirato
2-Nitro-mercapto-benzoate
* Dithiobis-nitrobenzoate.
La Colinesterasa hidroliza la butiriltiocolina para dar tiocolina y butirato.
La reacción que se produce entre la tiocolina y el DTNB* da lugar a un
compuesto amarillo cuantificable a 405 nm.
1.Temperatura 25º-30ºC.
Colinesterase
Butyrylthiocholine + H2O
Tiocolina + Butirato
Macro
ml
3,00
0,02
0,10
Semimicro
ml
1,50
0,01
0,05
* Mujeres (18 - 41 años, embarazadas o que tomen
anticonceptivos orales).
2400-6000 U/L 3000-7000 U/L 3700 - 9300 U/L
Prestaciones. Características de funcionamiento.
Linealidad: Hasta ΔE/30 seg. de 0,200. Con actividades superiores
diluir la muestra 1/5, (0,1 ml. muestra + 0,4 ml. NaCl 0,9%) y repetir la
determinación.
Multiplicar el resultado final por 5.
Las características de funcionamiento del producto dependen tanto del
reactivo como del sistema de lectura manual o automático empleados. Los
siguientes datos se han obtenido de forma manual:
Reagents
Kit 5 x 25 ml.(Ref. 99 08 92). Contents:
A. 5 x 25 ml. Buffer / chromogen.
B. 5 x 1 ml. Freeze-dried substrate.
U/L (25º/30ºC) = 23460 x ΔE405 nm/ 30 sec.
U/L (37º C) = 46920 x ΔE405 nm/ 30 sec.
Normal values
25º C
30º C
37º C
* Children, men of all ages and women over 40
years.
3500-8500 U/L 4300-10500 U/L 5400-13200 U/L
50 mM
0.26 mM
6 mM
* Women (18 - 39 years. not pregnant, not taking oral
contraceptives).
2800-7400 U/L 3500-9200 U/L 4300-11500 U/L
* Women (18 - 41 years, pregnant or taking oral
contraceptives).
2400-6000 U/L 3000-7000 U/L 3700 - 9300 U/L
Storage and stability
The components of the kit, stored at 2-8ºC, will remain stable until the
expiration date stated on the label. The rehydrated reagent B is stable 6
weeks at 2-8º C. Store in the dark.
Sample
Serum, plasma with heparine or EDTA. The Cholinesterase in serum is
stable for 7 days at 2 - 8º C.
Caution
The reagent contains Sodium azide at 0.09%. Handle with care. The
disposal of the residues has to be made according to legal local regulations.
Para trabajar como monorreactivo (en caso de autoanalizadores), se
pueden mezclar proporcionalmente los reactivos A y B. En este caso
la estabilidad de la mezcla reactiva es de 2 h. a temperatura ambiente
(15-25º C).
Reagent A
Sample
Reagent B
1.Temperature 25º-30ºC.
Macro
ml
3.00
0.02
0.10
Semimicro
ml
1.50
0.01
0.05
Mix, transfer to the measuring cuvette. Read
initial absorbance, and start the stopwatch.
Read again after 30, 60 and 90 sec.
2.Temperature 37ºC.
Bibliografía
Kendel, M., Bottger, R., (1967). Klin. Wschr., 45, 325-327.
Den Blawen, D.H.,Poppe, W.A., Trischler, W., (1983). J.Clin. Chem.
Biochem., 21, 381-386.
Determine the ΔE/30 sec. for every reading and find
the mean value.
Ref. 99 08 08
Ref. 99 05 62
The concentrations of the reagents solution are:
Phosphate buffer pH 7.4
DTNB*
Butyrylthiocholine iodide
Stabilizers and preservatives
Procedure
Control de calidad
Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) y Seriscann Anormal (Ref. 99 46 85).
Calculations
Working reagent
Reagent A: Ready-to-use.
Reagent B: Rehydrate one vial of substrate with 1 ml. of deionized water.
Coeficiente de Variación en la serie: 2,19%
Coeficiente de Variación entre series: 2,61%
Exactitud: 98,1 de porcentaje de recuperación.
Mezclar,transferir a la cubeta de lectura.
Leer la extinción inicial, y volver a leer
exactamente a los 30, 60 y 90 segundos.
Reagent A
Sample (1+1 with saline)
Reagent B
Macro
ml
3.00
0.02
0.10
Semimicro
ml
1.50
0.01
0.05
Performance Characteristics
Linearity: Up to ΔE/30 sec. 0.200. For higher values it is recommended to
dilute the sample 1/5, (0.1 ml. sample + 0.4 ml. NaCl 0.9%) and assay it
once again.
Multiply the final result by 5.
The analytical performance characteristics of the product depend both of
the reagent and the reading system used, manual or automatic. The
following data have been obtained manually.
Intraseries Variation Coefficient: 2.19%
Interseries Variation Coefficient: 2.61%
Recovery: 98.1 %.
For working as a single reagent (autoanalyzers), the working reagent can
be prepared by mixing reagent A and B proportionally. It is stable for 2
hours at room temperature. (15-25º C).
Quality control
Seriscann Normal (Normal Control Serum) (Ref. 99 41 48) and Seriscann
Anormal (Abnormal Control Serum) (Ref. 99 46 85).
References
Kendel, M., Bottger, R., (1967). Klin. Wschr., 45, 325-327.
Den Blawen, D.H.,Poppe, W.A., Trischler, W., (1983). J.Clin. Chem.
Biochem., 21, 381-386.
Mix, transfer to the measuring cuvette. Read
initial absorbance, and start the stopwatch.
Read again after 30, 60 and 90 sec.
Lectura
Longitud de onda: Hg 405 nm; 405 nm.
Blanco: medida frente a aire.
Cubeta: Termostatizada, 1 cm. paso de luz.
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: Octubre 2011
The Cholinesterase hydrolyzes butyrylthiocholine to give thiocholine and
butyrate. The reaction between thiocholine and DTNB* produces 2–nitro–
5-mercaptobenzoate, a yellow compound which can be measured at 405
nm.
Reading
Wavelength: Hg 405 nm; 405 nm.
Blank: measure against air.
Cuvette: Thermostatized, 1 cm. light-path.
PRO4_REG9_CHE
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
ISO 9001 / ISO 13485 Certified Company
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revision: October 2011
PRO4_REG9_CHE
CHOLINESTÉRASE
SUBSTRAT BUTYRYLTHIOCHOLINE
Pour la détermination in vitro de la cholinestérase dans le sérum ou le plasma
Principe
Colinestérase
Butyrylthiocholine + H2O
Thiocholine + DTNB*
Thiocholine + Butyrate
2-nitro-mercapto-benzoate
* Dithiobis-nitrobenzoate.
Calculs
La cholinestérase hydrolyse la butyrylthiocholine en thiocholine et butyrate.
La réaction qui se produit entre la thiocholine et le DTNB* conduit à la
formation d’un composé jaune quantifiable à 405 nm.
Réactifs
Kit 5 x 25 ml (Réf. 99 08 92). Contenu:
A. 5 x 25 ml Tampon/chromogène.
B. 5 x 1 ml Substrat lyophilisé.
Déterminer la valeur ΔE/30 secondes obtenue à
chaque lecture, ainsi que la valeur moyenne.
U/l (25 à 30 ºC) = 23 460 x ΔE 405 nm/30 sec.
Réf. 99 08 08
Réf. 99 05 62
U/l (37 ºC)
Valeurs normales
25 ºC
30 ºC
37 ºC
* Enfants, hommes de tout âge et femmes à partir
de 40 ans.
3500–8500 U/l 4300–10500 U/l 5400 –13200 U/l
Réactif de travail
Réactif A: réactif prêt à l’emploi.
Réactif B: réhydrater le contenu de la fiole de substrat à l’aide d’un ml d’eau
déionisée.
Les concentrations dans la solution réactive sont les suivantes:
Tampon phosphate pH 7,4
DTNB*
Iodure de butyrylthiocholine
Conservateurs et stabilisants
* Femmes (âgées de 18 à 39 ans, n’étant ni enceintes
ni sous contraceptifs oraux).
2800–7400 U/l 3500-9200 U/l
4300-11500 U/l
50 mM
0,26 mM
6 mM
* Femmes (âgées de 18 à 41 ans, enceintes ou sous
contraceptifs oraux).
2400–6000 U/l 3000–7000 U/l 3700 –9300 U/l
Conservation et stabilité
Conservés à une température comprise entre 2 et 8 ºC, les composants du
kit sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette. Après
réhydratation, le réactif B est stable pendant six semaines entre 2 et 8 ºC.
À conserver à l’abri de la lumière.
Échantillon
Sérum, plasma hépariné ou sur EDTA. La cholinestérase est stable dans le
sérum pendant sept jours entre 2 et 8 ºC.
Technique
1. Température 25 à 30 ºC.
Réactif A
Échantillon
Réactif B
Macro
ml
3,00
0,02
0,10
Semi-micro
ml
1,50
0,01
0,05
Mélanger puis transférer à la cuvette de lecture.
Lire l’extinction initiale. Effectuer une nouvelle
lecture exactement au bout de 30, 60 et 90 se
condes.
2. Température 37 ºC.
Macro
ml
Réactif A
3,00
Échant. (1+1 avec sol. saline) 0,02
Réactif B
0,10
Semi-micro
ml
1,50
0,01
0,05
Mélanger puis transférer à la cuvette de lecture.
Lire l’extinction initiale. Effectuer une nouvelle
lecture exactement au bout de 30, 60 et 90 se
condes
Lecture
Longueur d’onde: Hg 405 nm; 405 nm.
Blanc: lecture contre l’air.
Cuvette: thermostatée de 1 cm de trajet optique.
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Entreprise certifiée ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Révision: Octubre 2011
= 46 920 x ΔE 405 nm/30 sec.
Précautions d’emploi
Le réactif contient de l’azide de sodium à 0,09 %. Manipuler avec
précaution. L’élimination des déchets doit être effectuée conformément
aux normes en vigueur.
Fonctionnement et caractéristiques de performance du dispositif.
Linéarité: jusqu’à la valeur ΔE/30 secondes de 0,200. En cas d’activités
supérieures, diluer l’échantillon au 1/5 (0,1 ml d’échantillon + 0,4 ml de
NaCl 0,9 %) et répéter la détermination.
Multiplier le résultat final par 5.
Le fonctionnement du produit dépend tant du réactif que du système de
lecture manuel ou automatique utilisé. Une technique manuelle a permis
d’obtenir les données suivantes:
Coefficient de variation dans la série: 2,19 %
Coefficient de variation entre les séries: 2,61 %
Exactitude: le pourcentage de récupération est de 98,1 %.
Pour travailler en mode monoréactif (en cas d’analyseurs automatiques),
mélanger proportionnellement les réactifs A et B. Dans ce cas, la stabilité
du mélange réactif est de 2 heures à température ambiante (15 à 25 ºC).
Contrôle de qualité
Seriscann normal (Réf. 99 41 48) et Seriscann anormal (Réf. 99 46 85).
Bibliographie
Kendel, M., Bottger, R., (1967). Klin. Wschr., 45, 325-327.
Den Blawen, D.H.,Poppe, W.A., Trischler, W., (1983). J. Clin. Chem.
Biochem., 21, 381-386.
PRO4_REG9_CHE
958 412 886
629 636 705
http://www.cromakit.es/
Calle Tucumán 8 Nave B 18200 Maracena (Granada)