( lymphokines, monokines).
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( lymphokines, monokines).
exploration biochimique d'un syndrome inflammatoire 1.- Mécanismes moléculaires de la réaction inflammatoir - médiateurs locaux de l'inflammation - Cytokines -protéines de la réaction inflammatoire (PRI) 2- Exploration biochimique d’un syndrome inflammatoir - électrophorèse des protéines - protéines de l’inflammation - (profil protéique) 3- conclusions sur l’ exploration de l'inflammation 1- Mécanismes moléculaires de La réaction inflammatoire stimulus inflammatoire I ) initiation cascades complément coagulation Activation cellulaire II) amplification cytokines eicosanoides histamine PAF-acéther Agrégation plaquettaire radicaux libres protéases Afflux cellulaire lymphocytes, phagocytes médiateurs locaux Dégradés rapidement Dérivés d ’acides aminés : histamine … - les médiateurs lipidiques Issus des phospholipides membranaires Eicosanoides, PAF acéther -kinines, protéases…….. -cytokines Cytokines ( lymphokines, monokines) Durée de vie plus longue : effet local + effet à long terme Interleukine 1 (IL1β) role dans l ’amplification : chimiotactique et stimulant role dans la fièvre Tumor necrosis factor (TNFα, cachectine) meme role dans l ’amplification role cytotoxique : antiviral, antitumoral Interleukine 6 (IL6) - récepteur hépatocytaire : induit la synthèse des protéines de la réaction inflammatoire - sécrétées par les cellules du foyer inflammatoire - transportées dans le sang -augmentent la transcription des PRI en synergie II) amplification plaquettes, mastocytes, lymphocytes, phagocytes cytokines eicosanoides PAF-acéther Afflux cellulaire histamine radicaux libres protéases réactions systémiques III) stabilisation acquisition d'un état immun, fièvre phagocytose nettoyage inhibition des médiateurs protéines de la réaction inflammatoire protéines de la réaction inflammatoire (Synthétisées par le foie) Foie 1) protéines dont la concentration sérique est diminuée : PRI-albumine : diminution de la synthèse hépatique - transferrine : augmentation du catabolisme synthèse peu modifiée 2) protéines dont la concentration sérique est augmentée : augmentation de la synthèse hépatique (par les cytokines) = PRI+ IL1, IL6, TNF Foyer local protéines de l ’inflammation Protéine C réactive : CRP taux normal <5mg/l -Augmentation précoce (qq heures) demi vie brève : diminution rapide - très grande amplitude (Xqq100!) : marqueur sensible de l ’inflammation aigue Intérêt : - surveillance des poussées inflammatoires - spécificité dans les infections bactériennes: néonatologie Changement de concentration plasmatique (g/l ou mg C reactive protéin ( CRP) Serum Amyloid A protein Temps après un stimulus inflammatoire Changement de concentration plasmatique (% α1 antitrypsine haptoglobine orosomucoide Temps après un stimulus inflammatoire valeur normale : 0,5g/L orosomucoide X2 à 3 fois dans l ’inflammation aigue retour lent à la normale α1 antitrypsine valeur normale : 2-4g/l , X par 1,5 à 2 protéine tardive système des antiprotéases valeur normale : 1g/l; cinétique lente, haptoglobine X5 : marqueur sensible, forme un complexe avec l ’hémoglobine diminue dans l ’hémolyse intravasculaire inflammation + hémolyse :taux normal amplification de la réaction inflammatoire résolution de la réaction inflammatoire antiprotéases PRI IL1 TNF IL6 haptoglobine céruléoplasmine Cholestérol phospholipides SAA 2- Exploration Biochimique d’un syndrome inflammatoire 2.1- Electrophorèse des protéines sériques Support :agarose Dépôt de sérum acétate de cellulose Tampon pH 8,6 - + Coloration, scan densitométrique et intégration (Protéinogramme ou protidogramme) Immunoglobulines G &Mm albumine α1 orosomucoïde Transferrine& & α1 antitrypsine β2 microglobuline α2 macroglobuline& haptoglobine Résultat : 5 pics exprimés en % des protéines totale transformés en g/l (protidémie) Protéinogramme normal (« à peu près » pour s’en souvenir) après coloration/quantification % g/l Albumine 70 35-45 α1 globulines 3 1-4 α2 globulines 6 6-10 β globulines 9 6-13 γ globulines 12 7-15 protidémie 70 g/l Un examen d’orientation diagnostique (« dépistage ») • • Anomalies multiples MAIS différentes dans des pathologiques multiples Exemples; dénutrition, syndromes inflammatoires aigus et chroniques, « fuites » protéiques digestive ou urinaire, myélomes (prolifération plasmocytaire), insuffisance hépato-cellulaire, hémolyse,….. Inflammation aigue augmentation α1, α2, Alb : 46% α1 : 7,5% α2 : 17,4% β : 19,9% γ : 15% Haptoglobine & α2 mcroglobuline orosomucoid Inflammation chronique Alb : 40% α1 α2 β γ : 6,5% : 15% : 14% : 25% Inflammation subaigue et chronique: augmentation α1, α2, Et augmentation « polyclonale » des immunoglobulines 2.2- Dosages spécifiques des protéines de l’inflammation (immunologiques) Techniques sensibles, rapides, mais chères La plus utilisée : CRP dosage de plusieurs protéines de l’inflammation Miniprofil inflammatoire : CRP+ OM+ HP: peu utilisé, mais permettrait de suivre les poussées inflammatoires dans les pathologies chroniques Profil protéique complet : CRP interet diagnostic? cher Albumine alpha 1 antitrypsine orosomucoide haptoglobine céruléoplasmine α2 macroglobuline (fibrinogène) Ig G Ig A Ig M alb A1T OM Hp Cer A2M Conclusion sur l’ Exploration d’une réaction inflammatoire - vitesse de sédimentation ( VS) non spécifique, se normalise très rapidement (pas augmentée dans les inflammations subaigues) -Médiateurs locaux, Cytokines : mesure complexe taux circulant ou urinaire variable et inconstant -Électrophorèse des protéines : Facile, pas chère mais pas sensible, pas spécifique -CRP ++++ : dosage spécifique, rapide, très utilisé -Fibrinogène + Nouveaux marqueurs? PCT: intérêt à démontrer Un marqueur idéal serait : -sensible -cinétique rapide, mais prolongée -Spécifique -Dépistage des poussées inflammatoires -pas cher