Robustesse d`un spectromètre de masse triple quadripôle Agilent
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Robustesse d`un spectromètre de masse triple quadripôle Agilent
Robustesse d'un spectromètre de masse triple quadripôle Agilent 6470 pour l'analyse de produits pharmaceutiques dans des matrices plasmatiques Note d’application Auteurs Introduction Craig P. Love, Behrooz Zekavat La recherche de nouveaux médicaments pharmaceutiques requiert de nombreuses analyses in vitro et in vivo afin de sélectionner les composés synthétiques potentiellement actifs qui seront destinés à un développement ultérieur. L'identification et la quantification in vivo de métabolites sont particulièrement complexes en raison de la présence de composants de matrice (plasma, urine, etc.). Par ailleurs, le dépistage à cadence élevée de médicaments potentiels nécessite l’utilisation de techniques d'analyse sensibles et robustes. L'approche analytique la plus courante repose sur l'utilisation d'un spectromètre de masse triple quadripôle en mode surveillance de réactions multiples (selected reaction monitoring) (MRM). Cependant, les performances analytiques de ces systèmes peuvent se détériorer dans le temps du fait de l’accumulation de composés non volatils (présents dans la matrice des échantillons) dans la source d’ionisation ainsi que dans les éléments optiques impliqués dans le transfert d’ions. Par conséquent, il peut être nécessaire de nettoyer régulièrement ces éléments afin de maintenir des performances optimales. Les systèmes de spectrométrie de masse (MS) triple quadripôle Agilent 6470 sont équipés de quelques innovations clés permettant à la fois une quantification sensible, précise et robuste d'analytes cibles sur une gamme dynamique linéaire (GDL) étendue, et ce même avec des matrices d'échantillons complexes. Ces innovations de conception comprennent : et Patty Sun Agilent Technologies, Inc. Santa Clara, CA, États-Unis • L'optimisation de la géométrie de l'optique ionique et du pré-filtre, ce qui accroît la transmission ionique et réduit au minimum la contamination • Une cellule de collision à hexapôle courbée et conique pour une grande efficacité de la fragmentation MS/MS et de la transmission d'ions • Un détecteur d'ions muni d'une dynode de conversion haute énergie avec un faible bruit de fond, ce qui permet une détection efficace d'ions positifs et négatifs sur une plage m/z étendue Cette note d'application démontre les avantages de l'utilisation d'un spectromètre de masse triple quadripôle Agilent 6470 couplé à un système MS à cadence élevée Agilent RapidFire 365 (HTMS) pour l'analyse rapide et robuste de produits pharmaceutiques dans du plasma. Les paramètres du système RapidFire 365 HTMS ont été optimisés pour les conditions de méthode RapidFire suivantes : Solvant de rinçage 1 (Tampon A, débit 1,50 mL/min) eau + 2 mM acétate d'ammonium + 0,1 % acide formique Solvant de rinçage 2 (Tampon B, débit 1,25 mL/min) acétonitrile 20 % (dans de l'eau) + 10 mM acétate d'ammonium + 0,1 % acide formique Les analytes ont ensuite été élués des cartouches Agilent de type A (C4) à l'aide d'un solvant d'élution (Tampon C, acétate d’éthyle 75 % dans du méthanol) à un débit de 1,25 mL/min. L'analyse des médicaments plasmatiques s'est déroulée pendant cinq jours consécutifs avec une cadence d'environ 15 secondes par échantillon (2 000 injections/jour). Les paramètres optimisés utilisés dans cette étude pour les systèmes MS et pour la source du système triple quadripôle 6470 sont résumés dans les tableaux 1 et 2. Paramètre Valeur Température du gaz de séchage 325 °C Débit du gaz de séchage 7 L/min Pression du nébuliseur 50 psi Température du gaz de gainage 300 °C Débit du gaz de gainage 12 L/min Tension capillaire 4 000 V Tension de la buse 500 V Tableau 2. Paramètres du système Agilent 6470 multiple reaction monitoring à triple quadripôle. Composé Q1 Q3 CE Alprazolam 309,1 281,1 20 Clozapine 327,1 270,1 24 Alprazolam-D5 (étalon interne) 314,1 286,1 20 Clozapine-D4 (étalon interne) 331,1 272,2 24 La figure 1 présente les rapports des surfaces de pics pour l'alprazolam (A) et la clozapine (B) pour une injection de 50 picogrammes de chaque analyte en fonction du nombre d'injections du système RapidFire (au total 10 000 injections). Rapport des surfaces de pics La robustesse analytique d'un spectromètre de masse 6470 à triple quadripôle couplé à un système HTMS RapidFire 365 a été évaluée à l'aide d'un mélange d'alprazolam et de clozapine, ainsi que de leurs étalons internes respectifs (alprazolam-D5 et clozapine-D4), dopés dans du plasma porcin précipité, à une concentration de 5 ng/mL (chacun). Le plasma porcin a été précipité en utilisant de l'acétonitrile à un rapport de 1:3 (volume) puis centrifugé à 13 500 tpm pendant 5 minutes. Le surnageant a ensuite été dilué dans de l'eau (1:10) avant d’y ajouter les analytes et les étalons internes. L'échantillon de plasma dopé a été transféré dans des plaques de microtitration à 96 puits fermées à l'aide d'une feuille adhésive Agilent PlateLoc Thermal Microplate Sealer avant d'être analysé par RapidFire/MS. Tableau 1. Paramètres de la source Agilent Jet Stream. Les rapports des surfaces de pics se sont montrés stables sur l'ensemble des 10 000 injections, démontrant ainsi la robustesse des performances analytiques du système triple quadripôle MS 6470. A Alprazolam 50 picogrammes 3 RSD = 8,3 % 2 1 0 Étalon interne : Alprazolam-D5 1 000 2 000 3 000 4 000 5 000 6 000 7 000 8 000 9 000 10 000 Nombre d'injections 0 3 Rapport des surfaces de pics Évaluation de la robustesse d'un spectromètre de masse triple quadripôle Agilent 6470 B Clozapine 50 picogrammes 2 RSD = 3,7 % 1 Étalon interne : Clozapine-D4 0 0 1 000 2 000 3 000 4 000 5 000 6 000 7 000 8 000 9 000 10 000 Nombre d'injections Figure 1. Rapports des surfaces de pics pour l'alprazolam (A) et la clozapine (B) pour 10 000 injections. 2 Alprazolam 309,1 & 281,1 4 500 Surface de pic10 000 = 1,1 Surface de pic1 3 000 1 500 0 Conclusion 5,6 5,65 5,70 Temps (min) B 30 000 Signal Grâce au design novateur des éléments optiques de transfert d'ions qui réduit au minimum les effets néfastes de l'accumulation d'échantillons, le spectromètre de masse triple quadripôle Agilent 6470 constitue une plateforme analytique robuste pour une grande cadence analytique de composés synthétiques cibles potentiellement actifs dans des échantillons de plasma précipités. Injection 1 Injection 10 000 A 6 000 Signal La figure 2 présente une superposition des chromatogrammes MRM pour l'alprazolam (A) et la clozapine (B) obtenus au début et à la fin des 10 000 échantillons injectés. La figure 2 montre que la forme et la surface (hauteur) de pics pour l'alprazolam et la clozapine restent inchangées après 10 000 injections. 5,75 Injection 1 Injection 10 000 Clozapine 327,1 & 270,1 Surface de pic10 000 Surface de pic1 20 000 = 0,94 10 000 0 5,6 5,65 Temps (min) 5,70 5,75 Figure 2. Superposition des chromatogrammes MRM pour l'alprazolam (A) et la clozapine (B) obtenus au début et à la fin des 10 000 injections. 3 www.agilent.com/chem Ces informations peuvent être modifiées sans préavis. © Agilent Technologies, Inc. 2015 Publié aux États-Unis, le 9 juin 2015 5991-5953FR