tpl4-dosage-du-glucose-serique-cephalorgachidien

Techniques et procédures de laboratoires
Biochemical Techniques
Dosage du glucose sérique, céphalorgachidien et urinaire
Antoine Pierson (BiolTrop)
Etapes pré-analytiques
Mode opératoire
Les spécimens peuvent être du sérum, de l'urine (confirmation du résultat d'une bandelette urinaire)
ou du liquide céphalo-rachidien.
Lorsque l'on dose une glycorachie, il est conseillé de doser la glycémie en parallèle.
Remarque : Sur un prélèvement sanguin, le glucose doit être dosé rapidement (dans les 2 heures qui
suivent le prélèvement). En effet, les hématies consomment le glucose sérique et celui-ci peut
diminuer de façon importante au cours de la conservation. A défaut, séparer le sérum dans un tube
secondaire et le placer au réfrigérateur en attendant le dosage.
Méthodes d'analyse
Etalons et contrôles peuvent être préparés au laboratoire :
En dissolvant une quantité déterminéede glucose anhydre dans de l’eau distillée.
En diluant du sérum glucosé injectable de façon à obtenir la concentration
souhaitée.
Les concentrations recherchées seront de :
3, 5 ou 10 g / l selon le domaine de linéarité de la méthode, pour l'étalon.
1 et / ou 2 g / l pour le contrôle de qualité.
Dans tous les cas, les mesures de masse et de volume doivent être effectuées avec la plus grande
précision possible.
Exemple :
1. Peser 1 g de glucose pur anhydre.
2. Le placer dans une fiole jaugée de 100 ml.
3. Compléter jusqu’au trait de jauge avec de l’eau distillée.
Méthodes de dosage enzymatique
Ces méthodes utilisent l'action d’enzymes sur le glucose pour aboutir à la formation d'un composé
coloré. Elles font appel à des kits commerciaux et sont considérées comme les méthodes de
référence.
Se reporter à la notice de ces kits pour la mise en œuvre du dosage.
Méthode à l’orthotoluidine
Matériel
Spectrophotomètre
Pour le dosage :
Bleuet butagaz
Casserole
Version 1.0 : 1 novembre 2008
1/3
Pour l'étalon de glucose :
1 petit flacon en verre brun de 100 ml
Mode opératoire
1. Préparer tout d'abord un petit bain marie bouillant.
2. Diluer ensuite l'étalon au 1/5 en mélangeant 50 m l d'étalon à 10 g / l
avec 200 ml d'eau distillée.
Gamme d'etalonnage
Blanc
Spécimen
Spécimen ou étalon 10 g/l
1 g/l
2 g/l
4 g/l
30 µl
Etalon 2 g/l
12 µl
15 g/l
NaCl 0.9%
30 µl
Réactif orthotoluidine
3 ml
30 g/l
15 g/l
3 ml
3 ml
18 g/l
3 ml
3 ml
3. Boucher, mélanger et porter exactement 8 minutes au bain-marie
bouillant.
4. Refroidir à l'eau 5 minutes.
5. Photomètrer à 630 nm en faisant le zéro sur le blanc. La coloration verte
obtenue est stable 1 heure.
6. Construire la droite d'étalonnage de type : concentration = f
(absorbance).
7. Reporter les absorbances obtenues pour les tubes patients et lire les
concentrations.
8. Domaine de mesure : 0.2–5 g / l. Diluer au quart avec du sérum
physiologique si › 5g / l.
On considère la gamme d'étalonnage stable une vingtaine de jours, on passera éventuellement le
point 2 g / l comme contrôle lors de dosages répétés pendant ces 20 jours.
Préparation des réactifs
Solution d'orthotoluidine :
Réactifs corrosifs : utiliser gants et masque
Thiourée pure : 0.15 gramme
Acide acétique pur : 94 ml
Orthotoluidine pure : 6 ml
Dissoudre la thiourée dans l'acide acétique tiède (bain-marie) puis refroidir et ajouter
l'orthotoluidine.
Le réactif se conserve 2 mois en petits flacons bruns bouchés placés au réfrigérateur.
Remarques importantes : Il est à noter que la méthode à l'orthotoluidine utilise des réactifs toxiques
et carcinogènes. De plus cette méthode est relativement chère. Certains kits à la glucose oxydase
(bioMérieux, Sigma, Biotrol...) sont moins chers, plus précis et à péremption longue. Lorsque l'on a
accès à ces distributeurs, l'utilisation de ces kits est conseillée.
Version 1.0 : 1 novembre 2008
2/3
Valeurs normales
Glycémie : 0.8–1.2 g / l
Glycorachie : les 2/3 de la glycémie au même moment soit 0.55–0.8 g / l pour
une glycémie normale
Glycosurie : 0 g / l
Conversion en unités internationales : 1 g / l = 5,55 mmol / l
Version 1.0 : 1 novembre 2008
3/3