NEFA-HR(2) - Wako Chemicals GmbH

NEFA-HR(2)
NEFA-HR(2)
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HP434-91795
434-91795
HP
1014D2
D3
0709
Méthode ACS-ACOD
Méthode ACS-ACOD
Pour le dosage quantitatif des Acides Gras Non Estérifiés (NEFA) dans le Sérum
Pour le dosage quantitatif des Acides Gras Non Estériés (NEFA) dans le Sérum
Utilisation
Réactifs
Le coffret Wako NEFA-HR(2) utilise une méthode enzymatique en colorimétrie pour le
dosage quantitatif in vitro des acides gras non estérifiés (NEFA) dans le sérum.
Composition et conditions de conservation
R1 Set :
R1a :
R1 :
R2a :
R2 :
R2 Set :
Résumé du test
Les acides gras non estérifiés (NEFA), en se combinant à l’albumine du sérum,
constituent une importante source d’énergie pour les tissus périphériques. La quantité
de NEFA dans le sérum dépend de l’équilibre entre les apports venant du foie et des
tissus périphériques, et la restitution à partir des tissus adipeux. La quantité de NEFA
diminue sous l’effet de l’exercice physique, augmente en cas de sous-alimentation, de
rhume, de peur ou de tabagisme. C’est ainsi qu’on observe des élévations et des
diminutions des NEFA dans le diabète, les affections hépatiques et les maladies
endocriniennes.
Les techniques de dosage des NEFA utilisaient une méthode d’extraction par solvant
organique, difficile à mettre en oeuvre. La méthode enzymatique utilisant l’Acyl-CoA
oxydase (ACOD) s’est largement répandue en raison de son excellente spécificité et de
son mode opératoire concis. Le coffret NEFA-HR(2) pour le dosage des NEFA repose
sur la méthode enzymatique utilisant la 3-Méthyl-N-Ethyl-N-(β-Hydroxyéthyl)-Aniline
(MEHA) comme agent coloré en violet. Ce dosage donne des résultats fiables, sans
interférences de la bilirubine ou de l’acide ascorbique.
Ingrédients
R1 Set :
R1a : Colorant A
R1: Solvant A
R2 Set :
R2a : Colorant B
Principe de la méthode
Sous l’action de l’Acyl-CoA synthétase, et en présence de coenzyme A et de sel
trisodique d’adénosine 5-triphosphate (ATP), les acides gras non estérifiés de
l’échantillon sont transformés en Acyl-CoA, AMP et acide pyrophosphorique (PPI).
Grâce à l’Acyl-CoA oxydase (ACOD), l’Acyl-CoA obtenu est oxydé et libère du
2,3-trans-Enoyl-CoA et du peroxyde d’hydrogène. En présence de peroxydase (POD),
le peroxyde d’hydrogène libéré conduit à la formation d’un pigment bleu violet par
condensation oxydative avec la 3-Méthyl-N-Ethyl-N-(β-Hydroxyéthyl)-Aniline (MEHA) et
la 4-amino-antipyrine (4-AA).
La concentration en acides gras non estérifiés (NEFA) s’obtient par la mesure de
l’absorbance du composé coloré en bleu violet.
R2 : Solvant B
ACS
ACOD
Acyl-CoA + O2
H3 C
0,53 U/ml
0,31 mmol/l
4,3 mmol/l
1,5 mmol/l
2,6 U/ml
0,062%
(0,8%)
50 mmol/l
0,05%
(après reconstitution)
ACOD
POD
12 U/ml
14 U/ml
MEHA
2,4 mmol/l
H3 C
C
N
C
N
C
Le sérum peut être utilisé comme échantillon.
Effectuer le dosage sur les échantillons immédiatement après le prélèvement, car les
enzymes comme la lipoprotéine lipase, la phospholipase etc. hydrolysent les lipides et
forment des acides gras. Pour conserver le sérum, congeler l’échantillon.
Conservation : 2 jours à 4°C.1
Acyl-CoA + AMP + PPi
2,3-trans-Enoyl-CoA + H2O2
CH3
NH2
+
O
N
La prise d’héparine in vivo donne des valeurs faussement augmentées. Du fait de la
stimulation de la lipoprotéine lipase dans les échantillons de patients sous traitement
hépariné, il est possible d’utiliser le sang total pour ce dosage, mais uniquement après
un traitement préalable approprié.2
C2 H5
C2 H4OH
Mode opératoire standard
Température : 37°C (Hitachi®737)
4-aminoantipyrine
4-amino-antipyrine
0
CH 3
H 3C
H 3C
C
N
C
N
C
N
N
+
C 2H 4OH
O
Echantillon/Blanc È
OH- + 3H2O
3
Ï
R2: 150 µl
Ï Echantillon: 7 µl
R1: 300 µl
C 2H 5
Mesure
7,5 (min)
Longueur d’onde
Principale : 546 nm
Seconde : 660 nm
(méthode finale 2 points)
Calibrateur : Wako NEFA Standard (disponible séparément.)
Calcul de la concentration en acides gras non estérifiés
Calculer la concentration en acides gras non estérifiés à partir de la courbe de
calibration établie en fonction de l’absorbance du calibrateur.
Pigment
bleu violet
Blue purple
pigme nt
Signes physiques ou chimiques d’instabilité
Facteurs de conversion: mg/dl = mmol/l x 28,2
(calculé pour l’acide oléique, MW = 282)
mmol/l (mval/l = mEq/l) = mg/dl x 0,035
La présence de précipités dans les réactifs ou des valeurs de sérums de contrôle en
dehors des limites de confiance peuvent être le signe d’une instabilité du réactif.
Instruments
Résultats
Le réactif doit être utilisé sur les analyseurs automatiques présents sur le marché.
Consulter le manuel d’instruction pour la description du mode opératoire et les
spécifications de l’appareil. Il est indispensable que l’utilisateur procède à une
validation dans son laboratoire en pratiquant un nombre suffisant de mesures sur des
échantillons appropriés de sérums de contrôle ou de patients.
Les résultats finals sont calculés de façon automatique et imprimés. Les résultats
donnent la concentration en mEq/l. Utiliser toujours la même unité pour le calibrateur.
3
Valeurs usuelles
Hommes :
Femmes :
Adaptation aux analyseurs automatiques
Entrer les paramètres de mesure conformément au manuel de l’appareil. Des notices
d’application adaptées aux systèmes automatisés sont disponibles sur demande.
0,1 - 0,60 mmol/l (28 - 169 mg/l)
0,1 - 0,45 mmol/l (28 - 127 mg/l)
Plusieurs facteurs comme l’âge, le sexe, l’alimentation, la situation géographique ou
d’autres ayant une incidence sur les valeurs usuelles, il est recommandé à chaque
laboratoire d’établir ses propres valeurs pour ce dosage.
Fabriqué par :
Fabriqué par :
FR
FR
(après reconstitution)
ACS
CoA
ATP
4-AA
AOD
Azide de sodium
(Colorant A lyophilisé)
Tampon Phosphate , pH 7.0
Azide de sodium
R1 : Préparer le réactif R1 en mélangeant un flacon de Colorant A et un flacon de
solvant A. Après préparation, conserver le réactif R1 entre 2 - 10°C et l’utiliser
dans 1 moins.
R2 : Préparer le réactif R2 en mélangeant un flacon de Colorant B et un flacon de
solvant B. Après préparation, conserver le réactif R2 entre 2 - 10°C et l’utiliser
dans 1 moins.
MEHA
POD
Conserver entre 2 - 10°C
Recueil et préparation des échantillons
RCOOH + ATP + CoA
+
Conserver entre 2 - 10°C
Préparation du réactif
Réactions
2 H2O2
Colorant A
Solvant A
Colorant B
Solvant B
1
1
Wako Chemicals GmbH
Wako Chemicals GmbH
Fuggerstraße 12, D-41468 Neuss
Fuggerstraße 12, D-41468 Neuss
Telephon(e): +49-2131-311-0
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Facsimile:
+49-2131-311-100
Facsimile:
+49-2131-311-100
URL: www.wako-chemicals.de
URL: www.wako-chemicals.de
FR 1014 D3
FR 0709 D2
NEFA-HR(2)
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HP 434-91795
1014 D3
Méthode
Méthode ACS-ACOD
ACS-ACOD
Pour
Pour le
le dosage
dosage quantitatif
quantitatif des
des Acides
Acides Gras
Gras Non
Non Estérifiés
Estériés (NEFA)
(NEFA) dans
dans le
le Sérum
Sérum
Performances
(1) Exactitude
Lors de la mesure d’un sérum de contrôle de concentration connue, la valeur
obtenue se situe dans l’intervalle de ± 15% de la concentration connue.
(2) Sensibilité
a) Le dosage d’eau purifiée
donne uneACS-ACOD
absorbance d’au maximum 0,140.
Méthode
b) Le dosage d’un standard de concentration donnée (acide oléique 1 mEq/l)
Pour
le
dosage
donne une absorbance de 0,100 - 0,380, quantitatif des Acides Gras
(3) Précision
Lors d’un dosage répété au moins 5 fois dans une série, le CV de l’absorbance
reste inférieur à 1,5%,
Performances
(4) Domaine de mesure
(1) Exactitude
La concentration en acides gras non estérifiés est de 0,01 - 4,00 mEq/l.
Lors de la mesure d’un sérum de contrôle de concentration connue, la valeur
(En mode opératoire standard)
obtenue se situe dans l’intervalle de ± 15% de la concentration connue.
(2) Sensibilité
Corrélation
a) Le dosage d’eau purifiée donne une absorbance d’au maximum 0,140.
b) Le dosage d’un standard
de concentration donnée (acide oléique 1 mEq/l)
Spécimen
Sérum
donne une absorbance de 0,100 - 0,380,
Coefficient
de corrélation
r = 0,997 (n = 50)
(3)
Précision
d’un dosage répété au
dans une série, le CV de l’absorbance
DroiteLors
de régression
y =moins
1,013 5x -fois
0,043
reste inférieur à 1,5%,
y Domaine de mesure
Wako NEFA-HR(2) (méthode ACS - ACOD, mEq/l)
(4)
La concentration en acides gras non estérifiés est de 0,01 - 4,00 mEq/l.
x (En mode opératoire standard)
Wako NEFA C (méthode ACS - ACOD, mEq/l)
NEFA-HR(2)
Interférences
Corrélation
a) La bilirubine présente une légère influence négative sur le dosage.
Spécimen
Sérum
b) L’acide ascorbique et l’hémolyse n’ont pas d’influence significative sur le dosage.
Coefficient
de
corrélation
r
(n =de
50)sodium, utilisés aux concentrations
c) Le citrate, l’oxalate, l’EDTA et=le0,997
fluorure
habituelles, n’ont pas d’influence significative sur le dosage.
Droite de régression
y = 1,013 x - 0,043
y
Wako NEFA-HR(2)
(méthode ACS - ACOD, mEq/l)
Avertissements
et précautions
d’emploi
FR
• x Utilisation exclusive pour diagnostic
in vitro.
Wako NEFA
C (méthode ACS - ACOD, mEq/l)
•
L’utilisation et l’adaptation de ce dosage sont réservées aux professionnels. Se
référer à la législation en vigueur et aux réglementations locales ou nationales.
• Interférences
Ne doit pas être utilisé in vivo chez l’homme ou l’animal.
La pas
bilirubine
une pour
légèred’autres
influence
négative sur
dosage.
• a) Ne
utiliserprésente
les réactifs
applications
quelecelles
décrites dans la
performance
ne peut être
si les réactifs
sont sur
utilisés
selon
b) notice.
L’acideLa
ascorbique
et l’hémolyse
n’ontassurée
pas d’influence
significative
le dosage.
procédés.
c) d’autres
Le citrate,
l’oxalate, l’EDTA et le fluorure de sodium, utilisés aux concentrations
•
Le
fonctionnement
desd’influence
analyseurssignificative
doit se fairesur
dans
les conditions appropriées et
habituelles,
n’ont pas
le dosage.
selon les instructions du manuel de l’appareil.
•
Conserver les réactifs selon les conditions indiquées. Ne pas utiliser les réactifs
Avertissements
et précautions d’emploi
au-delà de la date de péremption mentionnée sur l’étiquette de chaque emballage.
•
Utilisation exclusive pour diagnostic in vitro.
•
Ne pas utiliser de réactifs congelés par inadvertance. De tels réactifs peuvent
•
L’utilisation et l’adaptation de ce dosage sont réservées aux professionnels. Se
donner des résultats erronés.
référer à la législation en vigueur et aux réglementations locales ou nationales.
•
Après ouverture, il est recommandé d’utiliser les réactifs immédiatement. Pour
•
Ne doit pas être utilisé in vivo chez l’homme ou l’animal.
conserver les réactifs après ouverture, boucher les flacons et garder les selon les
•
Ne pas utiliser les réactifs pour d’autres applications que celles décrites dans la
conditions indiquées.
notice. La performance ne peut être assurée si les réactifs sont utilisés selon
•
Ne pas utiliser les emballages et les autres matériels du coffret pour un
d’autres procédés.
quelconque usage autre que celui ici décrit.
•
Le fonctionnement des analyseurs doit se faire dans les conditions appropriées et
•
Le flacon est bouché sous pression réduite. Enlever le bouchon délicatement afin
selon les instructions du manuel de l’appareil.
de ne pas perdre de poudre.
•
Conserver les réactifs selon les conditions indiquées. Ne pas utiliser les réactifs
•
Lorsque le réactif pour les acides gras non estérifiés est utilisé en même temps
au-delà de la date de péremption mentionnée sur l’étiquette de chaque emballage.
que le réactif pour le cholestérol et les triglycérides, la cholestérol estérase et la
•
Ne pas utiliser de réactifs congelés par inadvertance. De tels réactifs peuvent
lipoprotéine lipase du réactif sont adsorbées sur les parois des cuvettes et
donner des résultats erronés.
peuvent interférer sur la mesure des NEFA.
•
Après ouverture, il est recommandé d’utiliser les réactifs immédiatement. Pour
•
Utiliser le standard NEFA pour la calibration.
conserver les réactifs après ouverture, boucher les flacons et garder les selon les
•
Ce dosage ne doit pas être utilisé comme facteur déterminant unique d’un
conditions indiquées.
diagnostic clinique.
•
Ne pas utiliser les emballages et les autres matériels du coffret pour un
•
En cas de contact avec la bouche, les yeux ou la peau, laver immédiatement et
quelconque usage autre que celui ici décrit.
abondamment avec de l’eau.
•
Le flacon est bouché sous pression réduite. Enlever le bouchon délicatement afin
•
Veiller à ne pas vous couper avec l’opercule en aluminium lors de l’ouverture du
de ne pas perdre de poudre.
flacon.
•
Lorsque le réactif pour les acides gras non estérifiés est utilisé en même temps
•
L’élimination des réactifs doit se faire selon les exigences réglementaires
que le réactif pour le cholestérol et les triglycérides, la cholestérol estérase et la
nationales ou régionales en vigueur. Le solvant A contient 3 mg/l de ferrocyanure
lipoprotéine lipase du réactif sont adsorbées sur les parois des cuvettes et
de potassium (1 mg/l de cyanure).
peuvent interférer sur la mesure des NEFA.
•
Tous les dispositifs, y compris les réactifs et les flacons de réactifs en contact avec
•
Utiliser le standard NEFA pour la calibration.
les échantillons doivent être considérés comme potentiellement infectieux.
•
Ce dosage ne doit pas être utilisé comme facteur déterminant unique d’un
•
L’azide de sodium peut réagir avec les conduites en plomb ou en cuivre et former
diagnostic clinique.
des composés explosifs. Bien que le réactif contienne d’infimes quantités d’azide
•
En cas de contact avec la bouche, les yeux ou la peau, laver immédiatement et
de sodium, les canalisations doivent être nettoyées à grande eau, lors de
abondamment avec de l’eau.
l’élimination des réactifs.
•
Veiller à ne pas vous couper avec l’opercule en aluminium lors de l’ouverture du
•
Colorant
flacon. A (R1a) contient des composants classés comme suit selon le règlement
n° 1272/2008.
• (CE)
L’élimination
des réactifs doit se faire selon les exigences réglementaires
nationales ou régionales en vigueur. Le solvant A contient 3 mg/l de ferrocyanure
de potassium (1 mg/l de cyanure).
•
Tous les dispositifs, y compris les réactifs et les flacons de réactifs en contact avec
les échantillons doivent être considérés comme potentiellement infectieux.
Fabriqué
par
•
L’azide
de ::sodium peut réagir avec les conduites en plomb ou en cuivre et former
Fabriqué
par
des composés explosifs. Bien que le réactif contienne d’infimes quantités d’azide
de sodium, les canalisations doivent être nettoyées à grande eau, lors de
l’élimination des réactifs.
•
Colorant A (R1a) contient des composants classés comme suit selon le règlement
22
(CE) n° 1272/2008.
Pictogrammes de danger
Lire soigneusement cette notice avant utilisation.
Attention
Non Estériés (NEFA) dans le Sérum
Composants dangereux déterminants pour l‘étiquetage:
4-amino-2,3-diméthyl-1-phényl-3-pyrazoline-5-one
Azide de sodium
Mentions de danger
– Nocif en cas d’ingestion ou de contact cutané.
– Nocif pour les organismes aquatiques, entraîne des effets néfastes à long
terme.
Conseils de prudence
Contrôle
de qualité
– Ne pas respirer les poussières/fumées/gaz/brouillards/vapeurs/aérosols.
Un programme de contrôle de qualité est recommandé pour tout laboratoire de biologie
– Utiliser l‘équipement de protection individuel requis.
clinique.
– Éviter le rejet dans l‘environnement.
– EN CAS D‘INGESTION: rincer la bouche. NE PAS faire vomir.
Références
– EN CAS DE CONTACT AVEC LA PEAU (ou les cheveux): enlever
1.
Rogiers V, Stability
of the longcontaminés.
chain non-esterified
fatty acid
pattern in plasma
immédiatement
les vêtements
Rincer la peau
à l‘eau/se
and blood during different storage conditions. Clin Chim Acta. 84, 49-54 (1978).
doucher.
2.
Krebs, M. et al., Prevention of in Vitro Lipolysis by Tetrahydrolipstatin. Clin.
– Consulter un médecin en cas de malaise.
Chem. 46 (7), 950 - 954 (2000).
3.
Aufenanger, J. and Kattermann, R. Klinisch-chemische Meßgröße: Freie
Contrôle
qualité
Fettsäurende
(FFS),
S. 319 - 320 in Greiling / Greßner: Lehrbuch der Klinischen
Un programme
dePathobiochemie,
contrôle de qualité
est recommandé
tout laboratoire de biologie
Chemie und
3. edition,
Schattauerpour
(1995).
clinique.
Présentation
Références
Référence
Produit
Conditionnement
1.
Rogiers V, Stability of the long chain non-esterified fatty acid pattern in plasma
434-91795
NEFA-HR(2)
Set conditions. ClinR1a:
x pour
50 (1978).
ml
and blood during
differentR1storage
Chim Acta.4 84,
49-54
2.
Krebs, M. et al., Prevention of in Vitro Lipolysis
Clin.
R1:by Tetrahydrolipstatin.
4 x 50 ml
Chem. 46 (7),
950 - 954 R2
(2000).
436-91995
NEFA-HR(2)
Set
R2a:
4 x pour 25 ml
3.
Aufenanger, J. and Kattermann, R. Klinisch-chemische
Freie
R2:
4 xMeßgröße:
25 ml
Fettsäuren (FFS), S. 319 - 320 in Greiling / Greßner: Lehrbuch der Klinischen
CAL:
270-77000
Standard 3. edition, Schattauer
Chemie undNEFA
Pathobiochemie,
(1995). 2 x 10 ml
Présentation
Référence
Produit
Conditionnement
434-91795
NEFA-HR(2) R1 Set
R1a:
R1:
4 x pour 50 ml
4 x 50 ml
436-91995
NEFA-HR(2) R2 Set
R2a:
R2:
4 x pour 25 ml
4 x 25 ml
270-77000
NEFA Standard
CAL:
2 x 10 ml
Wako
Wako Chemicals
Chemicals GmbH
GmbH
Fuggerstraße
Fuggerstraße 12,
12, D-41468
D-41468 Neuss
Neuss
Telephon(e):
Telephon(e): +49-2131-311-0
+49-2131-311-0
Facsimile:
+49-2131-311-100
Facsimile:
+49-2131-311-100
URL:
URL: www.wako-chemicals.de
www.wako-chemicals.de
FR
FR 1014
0709 D3
D2