Polyclonal Rabbit Anti-Human Protein S Code A0384

Determination of total protein S by rocket immunoelectrophoresis: Antibody: 1 µL per cm2 gel area. Standard: pooled human
plasma 1+0 3+1 1+1 1+3. Dilution of samples: Human plasma 3+1. Standard and sample volume: 10 µL.
Buffer for agarose gel and electrode vessels: Tris/barbitone, 5 mmol/L Na2EDTA, pH 8.6, ionic strength 0.02.
Field strength in the gel: 2 V/cm.
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Protein S
Code A0384
FRANÇAIS
Intérêt
Pour diagnostic in vitro.
ENGLISH
Intended use
Polyclonal Rabbit Anti-Human Protein S, code A0384, est destiné pour la détermination de la protéine S en
immunoprécipitation sur gel (1) et ELISA (1)
For in vitro diagnostic use.
Comme l'a décrit Woodhams (1), les taux plasmatiques de protéine S totale et libre peuvent être déterminés par immunoélectrophorèse de type « rocket » et par ELISA. La concentration totale en protéine S (libre plus forme liée) est déterminée
en utilisant le plasma comme échantillon, alors que la protéine S libre est mesurée séparément après extraction du plasma
de la forme liée par une simple étape de précipitation par polyéthylène glycol (PEG).
Polyclonal Rabbit Anti-Human Protein S, Code A0384, is intended for the determination of protein S in gel
immunoprecipitation techniques (1) and ELISA (1).
As described by Woodhams (1), total as well as free plasma protein S can be determined by rocket immunoelectrophoresis
and ELISA. The total concentration of protein S (free plus complexed form) is determined when using plasma as sample,
whereas free protein S is measured separately after removal of the complexed form from plasma by a simple polyethylene
glycol (PEG) precipitation step.
L'interprétation des résultats ne doit être entreprise par un professionnel certifié dans le contexte de l’histoire clinique
du patient et des autres examens diagnostics.
Introduction
La protéine S est une protéine vitamine K dépendante qui sert de cofacteur à la protéine C activée et c'est un inhibiteur
important de la coagulation. Dans le plasma normal, 40 % environ de la protéine S se présente sous forme libre
fonctionnellement active alors que 60 % environ est inactive et liée à la protéine de complément C4b-Binding protein.
Les patients présentant un déficit en protéine S ont souvent des taux plasmatiques normaux ou légèrement diminués
seulement de protéine S totale, mais peu ou pas du tout de protéine S libre. La détection et la classification des sujets
présentant un déficit en protéine S impliquent donc une détermination immunochimique de la protéine S liée aussi bien
que libre (2, 3) en plus des dosages fonctionnels.
Réactif fourni
Fraction de l'immunoglobuline purifiée de l'antisérum de lapin à l’état liquide dans NaCl 0,1 mol/l, l NaN3 15 mmol/.
Interpretation of results must be made within the context of the patient’s clinical history and other diagnostic tests by a
certified professional.
Introduction
Protein S is a vitamin-K-dependent protein, which acts as a cofactor to activated protein C and is an important inhibitor
of coagulation. In normal plasma about 40% of protein S is in a functionally active free form, whereas about 60% is
inactive and bound to C4b-binding protein. Patients deficient in protein S often have normal or only mildly reduced total
plasma protein S levels, but little or no free protein S. The detection and classification of protein S-deficient individuals
therefore involves, beside functional assays, an immunochemical assessment of both bound and free protein S (2, 3).
Concentration protéinique, g/l : :Voir l'étiquette sur le flacon de l’échantillon.
Reagent provided
Purified immunoglobulin fraction of rabbit antiserum provided in liquid form. In 0.1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3.
Le taux de variation du titre de lots variés de A 0384 est inférieur à 10 %, obtenu en ajustant le titre de chaque lot particulier
afin d’apparier le titre de la préparation du témoin de l'anticorps conservé à -80 °C.
Protein concentration g/L: See label on vial.
The titre variation between different lots of A 0384 is less than 10%. This is achieved by adjusting the titre of each individual
lot to match the titre of an antibody reference preparation kept at -80 °C.
Immunogène
Protéine S isolée du plasma humain.
Immunogen
Free protein S isolated from human plasma.
Spécificité
L'anticorps montre une réaction à la protéine S. Les traces d'anticorps contaminants ont été éliminées par absorption à
l’état solide avec les protéines de plasma humain.
Specificity
The antibody reacts with free and complexed protein S. Traces of contaminating antibodies have been removed by
solid-phase absorption with human plasma proteins.
Immuno-électrophorèse croisée : Lorsque 12,5 µl de A0384 est utilisé par cm2 de surface du gel pour 2 µl de plasma
humain, deux précipités apparaissent qui correspondent à la protéine S et au complexe protéine S/protéine C4b en
migration lente. Lorsque 1,25 µl de A0384 est utilisé par cm2 de surface du gel pour 20 µl de plasma précipité par PEG, un
seul précipité apparaît qui correspond à la protéine S libre.
Crossed immunoelectrophoresis: When using 12.5 µL A0384 per cm2 gel area against 2 µL human plasma two precipitates
are seen corresponding to free protein S and the slowly migrating protein S/C4b-binding protein complex. When using
1.25 µL A0384 per cm2 gel area against 20 µL PEG precipitated plasma only one precipitate is seen corresponding to free
protein S.
ELISA: No significant reaction is seen in double antibody sandwich ELISA using A0384 as catching antibody, human
plasma depleted of protein S as sample, and Dako Peroxidase-Conjugated Rabbit Anti-Human Protein S, Code P0419, for
visualization.
Precautions
ELISA : : On ne constate aucune réaction significative en double sandwich ELISA lorsqu'on utilise A0384 comme anticorps
capteur, du plasma humain dépourvu de protéine S comme échantillon et Dako Peroxidase-Conjugated Rabbit Anti-Human
Protein S, code P0419, pour la révélation
Précautions d’emploi
2. Ce produit contient de l’azide de sodium (NaN3) un produit chimique hautement toxique à l’état pur. Aux
concentrations du produit, bien qu’il ne soit pas classé comme étant nuisible, l’azide de sodium peut réagir avec la
tuyauterie en plomb et en cuivre pour former des dépôts hautement explosifs d’azides métallisés. Lors de l'élimination
du produit, laisser couler l’eau à flot pour éviter toute l'accumulation d'azide métallisé dans la tuyauterie.
1. For professional users.
2. This product contains sodium azide (NaN3), a chemical highly toxic in pure form. At product concentrations, though
not classified as hazardous, sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build-ups
of metal azides. Upon disposal, flush with large volumes of water to prevent metal azide build-up in plumbing.
3. Comme pour tout dérivé biologique dangereux à manipuler, une précision s’impose.
3. As with any product derived from biological sources, proper handling procedures should be used.
4. Ce produit peut être utilisé dans des techniques variées et en combinaison avec des échantillons et matériaux
variés, par conséquent, chaque laboratoire particulier doit valider le système d’analyse choisi.
4. The product may be used in different techniques and in combination with different sample types and materials,
therefore each individual laboratory should validate the test system applied.
Storage
Store at 2-8 °C. Do not use after expiration date stamped on vial. If reagents are stored under any conditions other than
those specified, the user must verify the conditions. There are no obvious signs to indicate instability of this product.
Therefore, relevant controls should be run simultaneously with patient specimens. If unexpected results are observed
which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected,
contact our Technical Services.
Dilution guidelines
Determination of free protein S by rocket immunoelectrophoresis: Antibody: 0.35 µL per cm2 gel area. Standard*: 1+0 3+1
1+1 1+3. Dilution of samples**: 3+1. Standard and sample volume: 10 µL.
Buffer for agarose gel and electrode vessels: Tris/barbitone, 5 mmol/L Na2EDTA, pH 8.6, ionic strength 0.02.
Stockage
Stocker entre 2 et 8°C. Ne pas utiliser après la date de péremption mentionnée sur le flacon. Dans le cas où les
réactifs sont conservés sous d’autres conditions que celles spécifiées, les conditions doivent être vérifiées par
l’utilisateur. Il n’existe pas de signe particulier pour indiquer l’instabilité de ce produit. Par conséquent, les contrôles
doivent être opérés simultanément avec les échantillons du patient. En cas de résultats imprévus qui ne peuvent pas
être expliqués par des changements de procédures de laboratoire et qu’un problème avec le produit est suspecté,
contactez nos Services Techniques.
GEL IMMUNOPRECIPITATION
IMMUNOPRECIPITATION SUR GEL
Recommandations de
dilution
Field strength in the gel: 2 V/cm.
* The standard is prepared as follows:
1.
340 µL of pooled normal plasma is placed in a microcentrifuge tube and warmed to 37 °C (5 min).
2.
60 µL of 25% W/V PEG 6 000 is added slowly while constantly mixing by gentle agitation, then the tube is placed on
ice for 30 min.
3.
The tube is centrifuged and the supernatant, which is the 100% standard, is transferred to a fresh tube.
**
1. Pour utilisateurs professionnels
Détermination de la protéine S free par immuno-électrophorèse de type « rocket » (RIA) : Anticorps : 0,35 µl par cm2 de
surface du gel. Contrôle*: 1+0 3+1 1+1 1+3. Dilution des échantillons**: 3+1. Volume de contrôle et de l’échantillon:
10 µl.
Tampon pour le gel d'agarose et les étuves d’électrophorèse: Tris/barbitone, 5 mmol/l Na2EDTA, pH 8,6, force ionique
0,02.
Intensité du champ dans le gel: 2 V/cm.
* Préparation du contrôle:
1.
Placer 340 µl de mélange de plasma normal dans un tube pour microcentrifugation et chauffer à 37 °C (5 min).
2.
Ajouter lentement 60 µl de 25 % (W/V) PEG 6 000 en remuant constamment et doucement, puis placer le tube sur
de la glace pendant 30 min.
3.
Centrifuger le tube et transférer le surnageant, c'est-à-dire le contrôle 100 %, dans un tube propre.
The plasma sample is prepared as described for the standard.
**
(102283-002)
Dako Denmark A/S
A0384/EFG/MER/01.12.02 p. 1/4
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
(102283-002)
Dako Denmark A/S
L'échantillon de plasma se prépare de la même manière que le contrôle.
A0384/EFG/MER/01.12.02 p. 2/4
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Détermination de la protéine S free par immuno-électrophorèse de type "rocket" (RIA): Anticorps: 1 µl par cm2 de surface du
gel. Contrôle : mélange de plasma humain 1+0 3+1 1+1 1+3. Dilution des échantillons: Plasma humain 3+1. Volume du
contrôle et de l'échantillon: 10 µl.
Tampon pour le gel d'agarose et les étuves d'électrophorèse: Tris/barbitone, Na2EDTA 5 mmol/l, pH 8,6, force ionique
0,02.
Intensité du champ dans le gel: 2 V/cm.
2.
60 µl 25%ige W/V-PEG 6 000 wird unter ständigem Vermischen durch leichtes Schütteln langsam beigefügt,
anschließend wird das Röhrchen 30 Min lang auf Eis gelegt.
3.
Das Röhrchen wird zentrifugiert und der Überstand, bei dem es sich um den 100%igen Standard handelt, wird in ein
frisches Röhrchen umgefüllt.
**
Die Plasmaprobe wird wie für die Standardlösung beschrieben hergestellt.
Bestimmung des Gesamt-Protein S durch Rocket-Immunelektrophorese: Antikörper: 1 µl je cm2 Gelfläche. Standard:
Gepooltes Humanplasma, 1+0 3+1 1+1 1+3. Verdünnung der Proben: Humanplasma 3+1. Standard- und Probenvolumen:
10 µl.
DEUTSCH
Puffer für Agarose-Gel und Elektrodengefäße: Tris/Barbiton, 5 mmol/l Na2EDTA, pH 8,6, Ionenstärke 0,02.
Feldstärke im Gel: 2 V/cm.
Zweckbestimmung
Zur Verwendung für In-vitro-Untersuchungen.
Polyclonal Rabbit Anti-Human Protein S, Code-Nr. A0384, ist für die Erhebung von humanem Protein S anhand der
Verfahren der Gelimmunpräzipitation (1) und des ELISA (1) vorgesehen.
Wie von Woodhams (1) beschrieben, kann sowohl das gesamte als auch das freie Plasmaprotein S durch RocketImmunelektrophorese und ELISA bestimmt werden. Die Gesamtkonzentration von Protein S (freie und komplexe Form)
wird durch Verwendung von Plasma als Probe bestimmt, während freies Protein S separat nach Entfernung der komplexen
Form aus dem Plasma durch einen einfachen Polyethylenglykol-(PEG)-Präzipitationsschritt gemessen wird.
References/ Références/ Literatur
1.
Die Befunde müssen unter Berücksichtigung der klinischen Anamnese des Patienten und im Kontext weiterer
diagnostischer Verfahren von einem zertifizierten Facharzt interpretiert werden.
Einleitung
Protein S ist ein Vitamin-K-abhängiges Protein, das als Kofaktor für aktiviertes Protein C fungiert und als wichtiger
Koagulationsinhibitor wirkt. In normalem Plasma liegen etwa 40 % des Proteins S in einer funktional aktiven freien
Form vor, während etwa 60 % inaktiv und an C4b-bindendes Protein gebunden sind Patienten mit Protein-S-Mangel
weisen oft normale oder nur leicht reduzierte Gesamt-Plasmaspiegel an Protein S auf, dagegen wenig oder gar kein
freies Protein S. Für den Nachweis und die Einstufung von unter Protein-S-Mangel leidenden Personen ist neben
funktionalen Tests eine immunchemische Untersuchung sowohl des gebundenen als auch des freien Protein S
erforderlich (2, 3).
Geliefertes Reagenz
Woodhams BJ. The simultaneous measurement of total and free protein S by ELISA. Thromb Res 1988;50:21320.
2.
Schafer Al. Hypercoaguable states: molecular genetics to clinical practice (review). Lancet 1994;334: 1739-42.
3.
Comp PC, Doray D, Patton D, Esmon CT. An abnormal plasma distribution of protein S occurs in functional protein
S deficiency. Blood1986;67:504-8.
Explanation of symbols/ Légende des symboles/ Erläuterung der Symbole
In flüssiger Form vorliegende gereinigte Immunglobulinfraktion des Kaninchen-Antiserums. In 0,1 mol/l NaCl, 15 mmol/l
NaN3.
Catalogue number
Référence du catalogue
Temperature limitation
Limites de température
Manufacturer
Fabricant
Bestellnummer
Zulässiger Temperaturbereich
Hersteller
In vitro diagnostic medical device
Dispositif médical de diagnostic
in vitro
Protein-Konzentration g/l: Siehe Produktetikett.
Titervariationen zwischen verschiedenen Chargen von A0384 betragen weniger als 10 %. Dies wird durch Einstellen des
Titers jeder einzelnen Charge auf die Übereinstimmung mit dem Titer einer bei –80 °C aufbewahrten Anti körperReferenzubereitung erreicht.
Consult instructions for use
Immunogen
Aus humanem Plasma isoliertes freies Protein S.
Consulter les instructions
d’utilisation
Gebrauchsanweisung beachten
Spezifität
Der Antikörper reagiert mit freiem und komplexem Protein S. Durch die Festphasenabsorption mit humanen
Plasmaproteinen wurden Spuren verunreinigender Antikörper entfernt.
In-Vitro-Diagnostikum
Batch code
Code du Lot
Chargenbezeichnung
Use by
Utiliser jusque
Verwendbar bis
Kreuzimmunelektrophorese: Bei Verwendung von 12,5 µl A0384 pro cm2 Gelfläche gegen 2 µl humanes Plasma werden
zwei Präzipitate sichtbar, die mit dem freien Protein S und dem langsam migrierenden Protein-S/C4b-bindenden
Proteinkomplex korrespondieren. Bei Verwendung von 12,5 µl A0384 pro cm2 Gelfläche gegen 20 µl PEG-präzipitiertes
Plasma ist nur ein einziges, freiem Protein S entsprechendes Präzipitat sichtbar.
ELISA: Keine signifikante Reaktion wurde im Doppelantikörper-Sandwich-ELISA festgestellt bei Verwendung von A0384
als „catching antibody“, bei Einsatz von Protein S-Depletion unterzogenem humanem Plasma als Probe und bei Nutzung
von Dako Peroxidase-Conjugated Polyclonal Rabbit Anti-Human Protein S, Code-Nr. P0419 für die Visualisierung.
Hinweise und
1. Für geschultes Fachpersonal.
Vorsichtsmaßnahmen
2. Dieses Produkt enthält Natriumazid (NaN3), eine in reiner Form hochtoxische chemische Verbindung. Bei den in
diesem Produkt verwendeten Konzentrationen kann Natrium-Azid, obwohl nicht als gefährlich klassifiziert, mit in
Wasserleitungen vorhandenem Blei oder Kupfer reagieren und zur Bildung von hochexplosiven Metall-AzidAnreicherungen führen. Nach der Entsorgung muss mit reichlich Wasser nachgespült werden, um Metall-AzidAnreicherung zu vermeiden.
3. Dieses Produkt enthält Material tierischer Herkunft, und es kann nicht ausgeschlossen werden, dass infolge der
Herstellungsabläufe Spuren menschlichen Materials vorhanden sein könnten. Daher sollte dieses Produkt als potentiell
infektiös behandelt werden.
4. Das Produkt kann bei anderen Techniken und in Kombination mit unterschiedlichen Probenarten und Materialien
eingesetzt werden. Folglich ist das spezifisch genutzte Testsystem vom jeweiligen Labor zu validieren.
Lagerung
Bei 2 – 8 °C lagern. Nicht nach dem auf dem Fläsch chen angegebenen Verfallsdatum verwenden. Sollten die
Reagenzien unter anderen Bedingungen als den beschriebenen aufbewahrt worden sein, so müssen diese vom
Anwender verifiziert werden. Es gibt keine offensichtlichen Anhaltspunkte für die mögliche Instabilität dieses
Produktes. Es sollten daher die relevanten Kontrollen gleichzeitig mit den Patientenproben mitgeführt werden. Wenn
unerwartete Resultate beobachtet werden, welche durch Änderungen in den Labormethoden nicht erklärt werden
können und falls Verdacht auf ein Problem mit dem Antikörper besteht, ist bitte Kontakt mit unserem technischen
Kundendienst aufzunehmen.
Richtwerte für die
Verdünnung
Bestimmung von freiem Protein S durch Rocket-Immunelektrophorese: Antikörper: 0,35 µl je cm2 Gelfläche. Standard:
1+0 3+1 1+1 1+3. Verdünnung der Proben**: 3+1. Standard- und Probenvolumen: 10 µl.
GELIMMUNPRÄZIPITATION
Puffer für Agarose-Gel und Elektrodengefäße: Tris/Barbiton, 5 mmol/l Na2EDTA, pH 8,6, Ionenstärke 0,02.
Feldstärke im Gel: 2 V/cm.
* Die Standardlösung wird folgendermaßen angesetzt:
1.
(102283-002)
Dako Denmark A/S
340 µl gepooltes Normalplasma wird in ein Mikrozentrifugenröhrchen gegeben und auf 37 °C erwärmt (5 Min).
A0384/EFG/MER/01.12.02 p. 3/4
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
(102283-002)
Dako Denmark A/S
A0384/EFG/MER/01.12.02 p. 4/4
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17