Imagerie microscopie confocale BAT
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Imagerie microscopie confocale BAT
nouvelle méthode d’investigation la microscopie confocale à balayage laser un examen complémentaire d'avenir ? La microscopie optique à balayage laser est une méthode non invasive d'imagerie tomographique à l'échelle cellulaire, avec une résolution proche de celle obtenue avec l’histologie. Connaître le principe et l’intérêt de la microsopie confocale en dermatologie. Image bidimensionnelle de microscopie confocale. - À 15-20 µm de profondeur se trouve le stratum granulosum, formé de deux à quatre couches de cellules granuleuses. - Elles ont une taille de 25 à 35 µm et un noyau central, qui apparaît noir (flèches blanches), entouré d’un cytoplasme granuleux et plus lumineux (Barre = 25 µm). taire non invasif en dermatologie chez l'Homme [1, 3]. L'architecture histologique de la peau est visualisée en trois dimensions, de façon dynamique. La résolution est proche de celle de l'histologie standard (0,5-1,0 µm de résolution latérale, 4 à 5 µm de résolution axiale), jusqu'à une profondeur de 300 à 400 µm. Cette limite d'exploration est due à la faible pénétration des ondes proches de l'infrarouge dans la peau. Chez l'homme, comme chez les animaux, l'épiderme, la jonction dermo-épidermique et le derme papillaire peuvent ainsi être détaillés [2, 4]. En pratique, un anneau est posé sur la région d'intérêt pour la fixer. Cette zone est ensuite mise en contact mécanique avec la lentille de l'objectif du microscope, par l'intermédiaire d'un liquide d'immersion (eau ou gel). L'opérateur visualise des coupes de la peau dans les plans horizontal et vertical en parallèle. Après un examen global de la région étudiée, il peut ensuite zoomer sur la zone à caractériser. Les images sont stockées sous format D.I.C.O.M. (photo), et des vidéos peuvent être enregistrées, puis exportées [5]. CONCLUSION QUEL EST SON INTÉRÊT ? Le 1er prix éditorial 2007 Essentiel La microscopie confocale, technique très avancée en microscopie optique, présente l’avantage de pouvoir acquérir des images du tissu analysé in vivo, sans l’endommager. Références 1. Gonzalez S, Swindells K, Rajadhyaksha M, coll. Changing paradigms in dermatology: confocal microscopy in clinical and surgical dermatology. Clin Dermatol. 2003;21:359-69. 2. Marghoob AA, Charles CA, Busam KJ, coll. In vivo confocal scanning laser microscopy of a series of congenital melanocytic nevi suggestive of having developed malignant melanoma. Arch Dermatol. 2005;141(11):1401-12. 3. Pellacani G, Cesinaro AM, Seidenari S. In vivo assessment of melanocytic nests in nevi and melanomas by reflectance confocal microscopy. Mod Pathol. 2005;18:469-74. 4. Rajadhyaksha M, González S, Zavislan JM, coll. In vivo confocal scanning laser microscopy of human skin II: advances in instrumentation and comparison with histology. J Invest Dermatol. 1999;113(3):293-303. 5. http://www.olympusconfocal.com /theory/confocalintro.html accédé en ligne le 05/07/2008. La microscopie confocale à balayage laser est actuellement de plus en plus utilisée chez l’homme en pratique courante. Cette technique est une piste prometteuse pour la dermatologie chez les animaux.¿ Crédit Formation Continue : Remerciements 0,05 CFC par article La microscopie confocale est une technique d'imagerie “cellulaire” non invasive, elle permet de réaliser un examen histologique de la peau in vivo et en temps réel. Cette technique est de plus en plus utilisée comme moyen d'investigation complémen 1 Unité A.C.S.A.I. (Anatomie, Chirurgie, Soins Intensifs, Anesthésiologie et Imagerie) UPSP 2007.03.135 RTI2B 2 Unité de Dermatologie UPSP 2007.03.135 RTI2B École Nationale Vétérinaire de Lyon 1, avenue Bourgelat 69280 Marcy l’Étoile Objectif pédagogique LE PRINCIPE DE CETTE TECHNIQUE Les images des tissus obtenues par microscopie confocale in vivo ressemblent à celles obtenues ex vivo en microscopie optique classique. La façon dont elles sont générées est cependant totalement différente, et réalisable in vivo. Le principe physique de la microscopie confocale a été décrit pour la 1re fois par Marvin Lee Minsky, dans le milieu des années 1950. Ce n'est qu'à la fin des années 1980 que cette technique a commencé à être utilisée pour l'analyse des tissus biologiques. Le plus souvent, un rayon laser est utilisé comme source de lumière. L’appareil est un microscope confocal à balayage laser, ou M.C.B.L. (C.L.S.M. en anglais pour Confocal Laser Scanning Microscope). Les tissus ne sont pas directement observés par l'utilisateur. Les images sont recomposées par un ordinateur. La microscopie confocale peut être considérée comme une tomographie à l'échelle cellulaire. L’opérateur visualise des sections horizontales (ou sections “optiques”) du tissu. Une série de sections optiques est ensuite obtenue, par le déplacement du plan focal de l’objectif à différentes profondeurs du tissu. Une fois la tomographie obtenue, en réunissant les différentes images, comme pour le scanner à rayon X, l'ordinateur peut reconstruire par stéréoscopie une vue en trois dimensions du tissu, ou une vue en deux dimensions, nette en tout point de la zone imagée. Caroline Boulocher1 Didier Pin2 à MAVIG GmbH pour l’image de microscopie confocale. 59 LE NOUVEAU PRATICIEN VÉTÉRINAIRE canine-féline vol 8 / n°41 JUIN 2009 - 523