technique de microscopie electronique a transmission

TECHNIQUE DE MICROSCOPIE ELECTRONIQUE A
TRANSMISSION
DIVERSES ETAPES
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Fixation
Déshydratation
Inclusion
Microtomisation
Coloration
Observation
FIXATION
• Immédiate (artéfacts +++ si délai)
• Blocs de 1 mm de côté (+++)
• Double fixation:
– Glutaraldéhyde 2h (ou plus…)
– Tétroxide d’osmium 2h
• Tampons, pH, Osmolarité contrôlés
– à +4°
DESHYDRATATION
• Dans des bains d’alcool
• Alcool absolu
• Oxyde de propylène
INCLUSION
• Dans une résine époxy: l’épon
• Prélèvement mis dans un moule,
• Polymérisation à chaud (37, 45, 60°)
MICROTOMISATION
• Confection d’une pyramide (pyramitome),
• Coupe de 1µ (semi-fine), colorée au bleu
de toluidine
• Choix de la zone d’intérêt
• Taille de la pyramide ( 0,2 mm2)
• Coupe fine : 500 à 800 Angstroms
COLORATION OU
IMPREGNATION
• Double coloration:
– Acétate d’uranyl (acides nucléiques)
– Citrate de plomb (membranes)
MICROSCOPIE ELECTRONIQUE
A BALAYAGE