Encart EBV DOT
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SÉROLOGIE VIRALE Pour le dépisttage de l’EBV Po BV, co com mmee po p ur cel e ui u d’aut u rees maalaadiees innfeect ctie i usees, BM MD vouus offfre touute une gaamm me de techn h iquuess ett dee cooffrrets tss adapt p és à vos o bes esoi oins n et de ser s r vicces qu qui fonnt réf éféér érence. Mode opératoire 1 2 3 4 5 PRÉPARATION Préchauffer la station de travail (56°C). Identifier chaque bandelette. Préparer 4 cuves de réaction en plaçant 2 ml de diluant dans , 2 ml d’activateur dans et 2 ml de conjugué dans . Laisser incuber 10 mn. DÉPÔT DES SÉRUMS Ajouter 10 μl de sérum échantillon dans . Sérologie spécifique de l’EBV par technique Dot-Blot (IgG / IgM) PRÉPARATION 1 DÉPÔT DES SÉRUMS INCUBATION BANDELETTE 3 Trempage 1 1 2 3 LAVAGE 10 sec. 5 ACTIVATEUR Lavage 10 sec. G G G G 1 2 10 fois G G G G 3 7 SÉCHAGE ET LECTURE Éliminer l’eau résiduelle (papier absorbant). Bien laisser sécher avant d’interpréter le résultat. Pour un résultat positif, le spot doit être distinct avec un cercle bien délimité (surface colorée plus ou moins intense). 8 10 fois G G G G 1 2 3 4 2 3 30 mn 4 5 mn SÉCHAGE ET LECTURE S é ro Lavage 10 sec. Contrôle Négatif Blot logie E BV par technique Dot- Coffrets Immunodot EBV Contrôle Positif 5 mn MONO G ET MONO M L’EBV PAR TECHNIQUE IMMUNODOT... UNE EXCLUSIVITÉ BMD ! ImmunoDot EBV Mono G : Coffret de 50 tests : .................................................................. Réf. GB 6085 ImmunoDot EBV Mono M : Coffret de 50 tests : .................................................................. Réf. GB 6585 Tous les tests ImmunoDot EBV Mono G et Mono M sont CE DM 01 - 08/06 8 RÉVÉLATEUR Plonger la bandelette dans , bien homogénéiser, puis laisser incuber 5 mn. Procéder à un lavage. RÉVÉLATEUR Révélateur 2 ml Lavage 10 sec. 4 1 7 4 CONJUGUÉ 6 10 fois G G G G ACTIVATEUR Plonger la bandelette dans , bien homogénéiser, puis laisser incuber 5 mn. Procéder à un lavage. CONJUGUÉ Plonger la bandelette dans , bien homogénéiser, puis laisser incuber 30 mn. Mettre 2 ml de réactif 4 dans . Procéder à un lavage, puis laisser incuber 5 mn dans la solution de lavage. 3 60 mn 30 sec. 10 mn 4 2 4 5 mn 6 10 fois G G G G INCUBATION DE LA BANDELETTE Avant de lancer la technique, immerger la bandelette 30 secondes dans l’eau distillée (flacon de lavage). Plonger la bandelette dans , bien homogénéiser (agiter 10 fois de bas en haut), puis laisser incuber 60 mn. LAVAGE Laver la bandelette en agitant 10 secondes de gauche à droite. Éliminer l’eau résiduelle (papier absorbant). 2 Diluant Activateur Conjugué 2 ml 2 ml 2 ml POUR IDENTIFIER LES ANTICORPS EBV, immédiatement et au coup par coup. BIOMEDICAL DIAGNOSTICS ACTIPOLE 25 • 4 - 6, BD DE BEAUBOURG • CROISSY-BEAUBOURG 77435 MARNE LA VALLÉE CEDEX 2 TÉL : 01.64.62.10.12 • FAX : 01.64.62.09.66 E-mail : [email protected] • www.bmd-net.com IIm mmunnoD oDoott EBVV M Moon onnoo G & M Moonnoo M : Au plluss prèès dee laa Nomenclatturre.... et une réponsee à tooutes voss atttentes ! 90% de la population adulte est infectée par l'EBV. Le diagnostic Contrôle positif repose sur l'interprétation du profil sérologique. Contrôle Hétérophiles (niveau 1) Contrôle Hétérophiles (niveau 2) M L'EPSTEIN-BARR VIRUS : EBV-VCA IgM Contrôle CMV IgM Contrôle Négatif RAPPEL DES ASPECTS CLINIQUES. Elle peut conduire à des pathologies malignes, comme les lymphomes du sujet immunodéprimé, le carcinome indifférencié du nasopharynx, la leucoplasie orale chevelue, ou le lymphome de Burkitt. DANS LE LES ESS FOR FORRME MESS CCL M CLI LINNIIQUES ATYPIQUES ES, LEE DIA IAG AGGNO NOSTIC PEEUT S’AVÉRER AVÉÉRER REER DIF IFFFICCILE LE. En effet, d’autres agents infectieux (tels les virus CMV, HSV, VIH, ou Toxoplasma gondii) sont responsables de syndromes mononucléosiques dont l’étiologie doit être recherchée. Les tests ImmunoDot EBV Mono G & Mono M permettent de détecter spécifiquement les anticorps anti-EBV EBNA IgG, VCA IgG et VCA IgM. Infection passée EBV VCA IgG + EBNA IgG regroupés sur 1 même test. Contrôle positif VCA IgG EFFICACITÉ : Détection de tous les marqueurs de l’EBV permettant de dater l’infection EBV-VCA IgG EBV-EBNA IgG Contrôle CMV IgG ContrôleToxoplasma gondii (IgG) Anticorps hétérophiles EBNA IgG Contrôle négatif Recherche des IgM vrais, neutralisation des FR. VCA IgM 0 UNE NE RÉA RÉA ÉACT CTI TIVAT VATION IONN DU VIRUS EBV PEUT SURV RVEENIR CHEZ L’IIM MMUNNO NOD ODDÉPR ÉPPRIM IMÉ MÉ. Phase de convalescence Taux des anticorps Dûe au virus d’EpsteinBarr (EBV), la MNI est un syndrome lymphoprolifératif transitoire, aigu, fébrile, d’évolution bénigne. Des formes asymptomatiques sont fréquentes chez l’enfant. Cette infection est très largement répandue (95% des adultes), avec persistance du virus à l’état latent dans les Lymphocytes B. Infection primaire G Période d’incubation LA MONONUUCLÉÉOOSE INFE FECTIIEEUUSSE (MNI). 1 2 4 6 TECHNOLOGIE : Technique EIA sur support membranaire 8 14 26 53 semaines LES ANTICORPS APPARAISSENT AU COURS DE LA PRIMO-INFECTION SELON LA CINÉTIQUE SUIVANTE : Le diagnostic sérologique de l’infection à l’EBV est assuré par la détection conjointe des anticorps IgM et IgG (EBNA IgG, VCA IgG, VCA IgM). Les EA IgM n'apparaissent que de façon inconstante (70% des MNI). ImmunoDot Mono G ImmunoDot Mono M VCA IgG EBNA IgG ACs* MNI VCA IgM - - - - Le diagnostic sérologique de l’EBV au coup par coup ImmunoDot EBV Mono G & Mono M ont été conçus pour une détection spécifique des anticorps anti-EBV EBNA IgG, VCA IgG et VCA IgM. Ces tests sont réalisables patient par patient, grâce à une technique Dot-Blot alliant immunologie de pointe et très grande souplesse d’utilisation afin d’apporter à vos cliniciens la réponse immédiatement opérationnelle qu’ils attendent. FLEXIBILITÉ Une réponse à J-zéro et au coup par coup Technique unitaire, coûts parfaitement maitrisés ImmunoDot EBV Mono G & Mono M est une exclusivité BMD. Interprétation Stade de l’infection EBV ÉVALUATION DE LA TECHNIQUE IMMUNODOT EBV MONO M (RÉSUMÉ) Sujet séronégatif (non infecté) - - -/+ + Infection primaire (phase très précoce) + - -/+ + Infection primaire + -/+ - + Fin d’infection primaire (phase transitoire) + + - - Infection ancienne (95 % de la population adulte) * ACs : Anticorps hétérophiles L’INTERPRÉTATION EST LA SUIVANTE : La présence d’anticorps anti-VCA IgG et anti- EBNA IgG, en l’absence d’anticorps anti-VCA IgM, signe une infection ancienne. La recherche des VCA-IgM permet le diagnostic d’une infection récente ou évolutive. BRENGEL-PESCE K, BUISSON M, SEIGNEURIN J-M. Laboratoire de Virologie, CHU de Grenoble. 100 sérums ont été testés. Le choix des sérums s’est fait selon plusieurs types de profils sérologiques obtenus en IF : - 14 individus séronégatifs, - 20 infections anciennes (sérologie positive normale), - 39 primo-infections à l’EBV (MNI, le plus souvent), - 27 patients présentant une infection aigüe (dûe à un autre virus). ImmunoDot EBV Mono M versus IF. Résultats : CA-IgM : - Sensibilité : 97,6 % - Spécificité : 96,3 % - Reproductibilité inter-essais : 100 % “La reproductibilité du coffret est excellente puisque 15 sérums sur 15 testés présentent un résultat identique à celui de la première détermination.”