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PCR Látex
Método turbidimétrico
Fabricante: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí
IVD
PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO
CONSERVAR A 2 - 8º C
Volumen
Tampón
200-300 µL
LEER LAS INSTRUCCIONES ANTES DEL USO
REF
Referencias:
GN 020704:
GN 020714:
PROCEDIMIENTO:
El reactivo látex debe ser agitado suavemente (invertir el recipiente 34 veces) antes de cada uso.
Mezclar el tampón y el látex, añadir la muestra y realizar la primera
lectura.
Realizar la segunda lectura a los 5-7 minutos.
Volumen
Látex
40-75 µL
Volumen
Muestra
3-6 µL
Cont.
Presentaciones:
5 mL látex + 25 mL tampón
23 mL látex + 120 mL tampón
Existen adaptaciones disponibles para los principales autoanalizadores.
PRINCIPIO DEL METODO:
El método está basado en la reacción de la PCR la muestra con partículas de
látex a las que se ha ligado anticuerpos anti-PCR. Al producirse la reacción,
las partículas de látex se aglutinan, provocando una variación en la
absorbancia que es detectada por el analizador. La magnitud de esta
variación es directamente proporcional a la concentración de PCR en la
muestra.
SIGNIFICACIÓN CLINICA:
La proteína C reactiva (PCR) es una de las proteínas de la fase aguda,
sintetizada por los hepatocitos. La concentración de PCR en suero
incrementa durante las fases agudas de diversas enfermedades asociadas
con la inflamación y la lesión de tejidos. Aparece un valor elevado de PCR en
casi todas las infecciones bacterianas y fúngicas en neoplasias y
enfermedades reumáticas y también en grandes cirugías.
La utilidad diagnóstica de PCR se basa en la velocidad y la magnitud de
incremento. Las concentraciones en suero aumentan a las pocas horas de la
aparición de la enfermedad y el incremento puede llegar a ser de 2000
veces el valor normal. Una rápida caída de los niveles de PCR indica
recuperación.
REACTIVO:
Se encuentran listos para el uso.
Tampón:
Tampón TRIS (pH: 8.2), Azida sódica < 0,09% (conservante).
Reactivo látex:
Particulas de poliestireno recubiertas con anti PCR humana de cabra en
tampón de glicina (0.1M, pH: 8.2), con NaCl (0.15 M) y BSA (0.5%). Azida
sódica 0.075% (conservante).
CONSERVACIÓN:
Agitar el reactivo látex suavemente antes de dispensarlo. Los reactivos son
estables hasta fecha de caducidad indicada en la etiqueta si se almacenan a
2-8ºC. Tapar las botellas inmediatamente después de su uso. No congelar.
El tampón de PCR suele ser claro e incoloro. Cualquier turbidez puede ser
señal de deterioro, por lo que no debe utilizarse el reactivo.
El reactivo de PCR debe ser blanco. Cualquier turbidez por aglutinación o
precipitación puede ser signo de deterioro, por lo que no debe utilizarse el
reactivo.
PRECAUCIONES EN EL MANEJO:
El reactivo contiene azida sódica. Evítese cualquier contacto con piel y
membranas. No ingerir. Todos los reactivos que contengan componentes
derivados de sangre humana deben manipularse con las precauciones
necesarias dado que no existe ningún método analítico que permita
descartar completamente su potencial infeccioso.
Deben seguirse las disposiciones locales para la gestión de residuos.
MUESTRA:
Suero fresco o congelado. La PCR se mantiene estable durante 8 días a 2-8º C.
Si el test debe realizarse más tarde, se recomienda congelar el suero. Evitar
congelar y descongelar repetidamente. Descartar muestras hemolizadas o
contaminadas. Las muestras muy lipémicas y turbias deben tratarse con un
agente aclarante de lípidos y analizarse en el menor tiempo posible.
CALCULO:
Los analizadores turbidimétricos calculan automáticamente la
concentración de PCR de cada muestra, interpolando el valor de
absorbancia en la curva de calibración.
Es posible calibrar frente a un único punto de calibración,
disminuyendo así la linealidad del método.
CALIBRADORES Y CONTROLES:
Se recomienda calibrar contra curva para lo que se debe emplear los
calibradores de Gernon (GN 000206 y GN 000219).
Para controlar se recomienda emplear los controles de Gernon
Turbitrol 1 (GN 000230) y Turbitrol 2 (GN 000231).
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO:
Linealidad:
La técnica es lineal hasta 100 mg/L si se emplea una curva de
calibración. Para valores superiores, se diluye la muestra en solución
salina en proporción 1:10 y se multiplica el resultado por un factor de
10.
Rango de medida:
Pueden determinarse concentraciones de PCR entre 0.4 y 100 mg/L.
Especificidad / Interferencias:
No se han observado interferencias por hemoglobina (hasta 10 g/L),
bilirrubina (hasta 440 umol/L) o lípidos (hasta 0.5%).
Efecto Prozona:
No existe efecto prozona hasta al menos 200 mg/L.
Sensibilidad / Límite de detección:
El límite inferior de detección es 0.18 mg/L.
Imprecisión intra ensayo (n=10):
Los CVs varían entre 1.7 y 2.5% para tres muestras de 5-60 mg/L.
Imprecisión inter ensayo (n=10):
Los CVs varían entre 3.17 y 5.5% para tres muestras de 5-60 mg/L.
Comparación con otros métodos:
Se han analizado 94 muestras utilizando el reactivo de Gernon (y) y
otro de un fabricante de la competencia (x).
La correlación ha sido: r= 0.986
La relación ha sido: y = 1.07x + 1.6
VALORES NORMALES:
Valores normales máximos hasta 6-8 mg/L.
Cada laboratorio debe establecer su propio rango de referencia.
BIBLIOGRAFÍA:
Hokama Y, Nakamura RM. C-Reactive protein: current status and
future perspectives. J Clin Lab Anal 1987; 1: 15-27
Hessian PA, Palmer DG. The presence and possible significance of CReactive protein in rheumatoid inflammation. J Rheumatol 1985 1985;
12: 871-5.
Okamura JM, Miyagi JM, Terada K, Hokama Y. Potential clinical
applications of C-reactive protein. J Clin Lab Anal 1990; 4: 231-5.
Müller M, Mierau R, Wohltmann D. Interference of IgM rheumatoid
factor with nephelometric C-reactive protein determinations. J
Immunol Methods 1985; 80: 77-90.
Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Test. 5th Edition,
AACC Press, 2000.
Sonderdruck aus DG Klinische Chemie Mitteilungen 1995; 26: 207 –
224.
IU/GN/020704/R0/0410
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com
CRP Latex
Turbidimetric Method
Manufacturer: RAL, TÉCNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí – Barcelona (SPAIN)
IVD
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC
STORE AT 2-8ºC
READ INSTRUCTIONS
REF
Reference:
GN 020704:
GN 020714:
PROCEDURE:
Latex reagent should be gently shaken (invert the recipient 3-4 times)
before each use.
Volume of Buffer
reagent
Volume of Latex
reagent
Volume of
sample
200-300 µL
40-75 µL
3-6 µL
Mix buffer and latex reagents, add sample, mix and then read.
After 5-7 minutes, read again.
Applications sheets for automated systems are available on request.
Cont.
Package:
5 mL latex + 25 mL buffer
23 mL latex + 120 mL buffer
PRINCIPLE:
Gernon CRP latex test is based on the reaction between C Reactive Protein
(CRP) in the sample and latex-covalently bound antibodies against human
CRP. A variation of the absorbance is detected by the analyzer. CRP values
are determined turbimetrically with sample blank correction.
SUMMARY:
C-Reactive Protein (CRP) is one of the acute phase proteins being
synthesised by hepatocytes. The serum concentration of CRP increases
during acute stages of diverse diseases associated with inflammation and
tissue injury. Elevated CRP has been demonstrated in nearly all bacterial and
fungal infections. In addition, it has been shown to be increased in other
diseases as neoplasia, and rheumatic diseases as well as in major surgery.
The diagnosis usefulness of CRP is based on the speed and on the
magnitude of its increase. Serum concentrations are raised within hours of
disease onset and the increase can be as much 2000-fold. A rapid fall of
CRP levels indicates recovery.
REAGENTS:
Reagents are ready to use.
Buffer:
TRIS Buffer (pH: 8.2), Sodium Azide < 0.09% (preservative).
Latex reagent:
Polystyrene particles coated with goat antibodies anti-human-CRP in glycine
buffer (0.1 M, pH: 8.2), containing NaCl (0.15 M) and bovine serum albumin
(0.5%). Sodium Azide 0,075% (preservative).
STORAGE:
Reagents are ready to use. Shake the latex reagent gently before dispensing
its content. Reagents in the original bottle are stable to the expiration date
indicated on the label when capped and stored at 2-8ºC. Recap immediately
the bottles after the use. Do not freeze.
The CRP buffer reagent should have a white, turbid appearance free of
granular particles. Visible agglutination or precipitation may be a sign of
deterioration, and the reagent should be discarded.
The CRP latex reagent should have a white, turbid appearance free of
granular particles. Visible agglutination or precipitation may be a sign of
deterioration, and the reagent should be discarded.
WARNINGS AND PRECAUTIONS:
Reagents containing Sodium Azide must be handled with precaution. Avoid
any contact with skin and mucous membranes. Handle it with precaution
using established good laboratory practices. All reagents containing human
blood derivatives should be handled with precaution as no analytical
procedure guarantees that they are not potentially infectious.
Disposal of all waste material should be in accordance with local guidelines.
SPECIMEN:
Fresh or deep frozen serum. Serum remains stable for 8 days at 2-8 ºC. If
the test should be performed later, it is recommended to freeze the serum.
Avoid successive freezing and thawing. Discard haemolysed or contaminated
samples.
Heavily lipaemic and turbid frozen serum samples must be cleared with a
delipidating agent. Delipidation of samples does not affect the results of CRP
in serum samples. The cleared patient serum sample must be used on the
same day, as turbidity may reoccur.
CALCULATION:
The turbidimetric analysers automatically calculate the CRP
concentration of each sample by interpolating the absorbance value in
the calibration curve.
It is possible to use a single point calibration but then method linearity
is shorter.
CALIBRATORS AND CONTROLS:
It is recommended to calibrate against curve. Gernon calibrators (GN
000206 and GN 000219) are suitable for this purpose.
It is recommended to control with Gernon controls Turbitrol I (GN
000230) and Turbitrol II (GN 000231).
PERFORMANCE CHARACTERISTICS:
Linearity:
The linearity of the test is 100 mg/L if a calibration curve is employed.
For higher values, sample should be diluted 1:10 in saline solution and
then the result should be multiplied by 10.
Measurement range:
The test has been developed to determine CRP concentrations within a
measuring range from 0.4-100 mg/L.
Specificity / Interferences:
No interferences were observed by haemoglobin (up to 10 g/L),
bilirubin (up to 440 umol/L) or lipids (up to 0.5%).
Prozone effect:
There is no prozone effect up to 200 mg/L.
Sensitivity / Limit of detection:
The lower limit of detection is 0.18 mg/L.
Imprecision intra assay (n=10):
CVs fall within 1.7 - 2.5% range for three samples (5-60 mg/L).
Imprecision inter assay (n=10):
CVs fall within 3.17 - 5.5% range for three samples (5-60 mg/L).
Method comparison:
A comparison between Gernon (y) and a commercially available test
(x) using 94 samples gave following results.
r= 0.986
y = 1.07x + 1.6
REFERENCE VALUES:
Normal maximum values up to 6-8 mg/L.
Each laboratory should establish its own reference range.
LITERATURE:
Hokama Y, Nakamura RM. C-Reactive protein: current status and
future perspectives. J Clin Lab Anal 1987; 1: 15-27
Hessian PA, Palmer DG. The presence and possible significance of CReactive protein in rheumatoid inflammation. J Rheumatol 1985 1985;
12:871-5.
Okamura JM, Miyagi JM, Terada K, Hokama Y. Potential clinical
applications of C-reactive protein. J Clin Lab Anal 1990; 4:231-5.
Müller M, Mierau R, Wohltmann D. Interference of IgM rheumatoid
factor with nephelometric C-reactive protein determinations. J
Immunol Methods 1985; 80: 77-90.
Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Test. 5th Edition,
AACC Press, 2000.
Sonderdruck aus DG Klinische Chemie Mitteilungen 1995; 26: 207 –
224.
IU/GN/020704/R0/0410/EA
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com
CRP Latex
Méthode turbidimétrique
MODE OPÉRATOIRE:
Le réactif latex doit être agité doucement (inversion du flacon 3-4 fois)
avant de son utilisation.
Mélanger le tampon et le latex, ajouter l’échantillon et faire la
première lecture.
Faire la deuxième lecture 5-7 minutes après.
Fabricant: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelone) - Espagne
IVD
POUR LE DIAGNOSTIC IN VITRO
CONSERVÉ À 2 - 8º C
Volume
Tampon
200-300 µL
LIRE LES NOTICES
REF
Référence:
GN 020704:
GN 020714:
Volume
Latex
40-75 µL
Volume
Échantillon
3-6 µL
Cont.
Emballage:
5 mL latex + 25 mL tampon
23 mL latex + 120 mL tampon
Des notices d’application adaptées aux systèmes automatisés sont
disponibles sur demande.
PRINCIPE:
La méthode est basée sur la réaction de la Protéine C-réactive (CRP) de
l’échantillon avec des particules de latex liées aux anti-corps anti-CRP.
Quand la réaction a lieu, les particules de latex agglutinent et provoquent
une variation de l’absorbance qui est détectée par l’analyseur. La mesure de
cette variation est directement proportionnelle à la concentration de CRP
dans l’échantillon.
INTÉRÊT CLINIQUE:
La Protéine C-réactive (CRP) est une des protéines de la phase aiguë,
synthétisées par les hépatocytes. La concentration de CRP dans le sérum
augmente pendant les phases aiguës de différentes maladies associées avec
des pathologies inflammatoires et des lésions tissulaires. La valeur de la CRP
est élevée dans presque toutes les infections bactériennes et fongicides en
néoplasie et des maladies rhumatismales et dans les états post-opératoires.
L’utilité diagnostique de la CRP est basée sur la vitesse et la magnitude de
l’augmentation. Les concentrations dans le sérum augmentent dans les
premières heures d’apparition de la maladie et l’augmentation peut arriver
jusqu’à 2000 fois la valeur normale. Une rapide chute des niveaux de CRP
montrent guérison.
CALCUL:
Les analyseurs turbidimétriques calculent automatiquement la
concentration de la CRP pour chaque échantillon, en interpolant la
valeur de l’absorbance sur la courbe de calibration.
C’est possible de calibrer à un point de calibration, en diminuant la
linéarité de la méthode.
CALIBRANTS ET CONTRÔLES:
C’est recommandé de calibrer contre courbe. Pour cela il faut utiliser
les calibrants de Gernon (GN 000206 et GN 000219).
Pour contrôler, c’est recommandé d’utiliser les contrôles de Gernon
Turbitrol 1 (GN 000230) et Turbitrol 2 (GN 000231).
PERFORMANCES:
Linéarité:
La méthode est linéale jusqu’à 100 mg/L si une courbe de calibration
est utilisée. Pour des valeurs supérieurs, il faut diluer l’échantillon avec
de la solution saline en proportion 1:10 et multiplier le résultat par 10.
Domaine de mesure:
On peut déterminer des concentrations de CRP entre 0.4 et 100 mg/L.
Spécificité / Interférences:
RÉACTIFS:
Ils sont prêts à l’emploi.
Tampon:
Tampon TRIS (pH: 8.2), Azide de sodium < 0,09% (conservateur).
Réactif latex:
Particules de Polystyrène couverts par anti-CRP humaine de chèvre dans
tampon de glycine (0.1 M, pH: 8.2), NaCl (0.15 M) et BSA (0.5%). Azide de
sodium 0.075% (conservateur).
Aucune perturbation n’a été observée par la présence d’hémoglobine
(jusqu’à 10 g/L), de bilirubine (jusqu’à 440 umol/L) ou de lipides
(jusqu’à 0.5%).
CONSERVATION:
Agiter le réactif latex doucement avant de son dosage. Les réactifs sont
stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette si conservés à
2-8ºC. Fermer les flacons immédiatement après son usage. Ne pas congeler.
Le tampon de CRP doit être clair et incolore. Quelque turbidité peut être
signal de détérioration, raison pour laquelle il faut refuser le réactif.
Le réactif de CRP doit être blanc. Quelque turbidité par agglutination ou
précipitation peut être signal de détérioration, raison pour laquelle il faut
refuser le réactif.
Les CV’s varient entre 1.7 et 2.5% pour trois échantillons de 5-60
mg/L.
AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS D’EMPLOI:
Le réactif contient de l’azide de sodium. Éviter le contact avec la peau et les
muqueuses. Ne pas avaler. Tous les réactifs qui contiennent des composants
dérivés du sang humain doivent être manipulés avec les précautions
nécessaires car il n’existe aucune méthode analytique qui permet rejeter
complètement son potentiel infectieux.
Se référer aux exigences légales nationales pour l’élimination des déchets.
SPÉCIMEN:
Sérum frais ou congelé. La CRP est stable pendant 8 jours à 2-8ºC. Si le test
ne se fait immédiatement, il est recommandé congeler le sérum. Éviter
congeler et décongeler plusieurs fois. Rejeter des échantillons hémolysés ou
contaminés. Les échantillons lipémiques et turbides doivent être traités avec un
composant éclaircissant de lipides et les analyser le plus tôt possible.
Effet Prozone:
Il n’existe pas du effet prozone minimum jusqu’à 200 mg/L.
Sensibilité / Limite de détection:
La limite inférieure de détection est de 0.18 mg/L.
Imprécision intra-série (n=10):
Imprécision inter-série (n=10):
Los CV’s varient entre 3.17 et 5.5% pour trois échantillons de 5-60
mg/L.
Comparaison avec autres méthodes:
Une comparaison entre le réactif CRP de Gernon (y) et un autre
fabricant (x), réalisée sur 94 échantillons, a donné les résultats
suivants:
r= 0.986; y = 1.07x + 1.6
VALEURS USUELLES:
Valeurs normales maximales jusqu’à 6-8 mg/L.
Chaque laboratoire doit établir son propre range de travail.
RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES:
Hokama Y, Nakamura RM. C-Reactive protein: current status and
future perspectives. J Clin Lab Anal 1987; 1: 15-27
Hessian PA, Palmer DG. The presence and possible significance of CReactive protein in rheumatoid inflammation. J Rheumatol 1985 1985;
12: 871-5.
Okamura JM, Miyagi JM, Terada K, Hokama Y. Potential clinical
applications of C-reactive protein. J Clin Lab Anal 1990; 4: 231-5.
Müller M, Mierau R, Wohltmann D. Interference of IgM rheumatoid
factor with nephelometric C-reactive protein determinations. J
Immunol Methods 1985; 80: 77-90.
Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Test. 5th Edition,
AACC Press, 2000.
Sonderdruck aus DG Klinische Chemie Mitteilungen 1995; 26: 207 –
224.
IU/GN/020704/R0/0410/EF
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com