BCR FISH DNA Probe, Split Signal Code Y5403

Storage
BCR FISH DNA Probe, Split Signal
Code Y5403
FRANÇAIS
ENGLISH
Intended use
Intérêt
For in vitro diagnostic use.
Interpretation of results must be made within the context of the patient’s clinical history and other diagnostic tests by a
certified professional.
Introduction
The human BCR (breakpoint cluster region) gene consists of 23 exons spanning 135 kb on chromosome 22 band q11
(1, 2). The BCR protein contains a unique serine/threonine kinase activity and at least two SH2 binding sites encoded
by the first exon of the gene and a C-terminal domain that functions as a GTPase-activating protein for p21rac (1, 3).
The BCR translocation has been identified with different chromosome partners (4). The two DNA probes used for splitsignal FISH detection of translocations involving the BCR gene are designed to hybridize upstream and downstream of
the common breakpoint cluster region. Co-localization of the probes results in a yellow signal, whereas translocation
events in the region will split the signal in separate green (fluorescein) and red (Texas Red) signals.
Target (red)
The Texas Red-labeled DNA-probe (BCR-TR) anneals to a 333 kb area centromeric to the BCR breakpoint cluster
region on chromosome 22q11.
Target (green)
The fluorescein-labeled DNA-probe (BCR-Flu) anneals to a 408 kb area telomeric to the BCR breakpoint cluster region
on chromosome 22q11.
Probe gap
The gap between BCR-TR and BCR-Flu is 155 kb.
Reagent provided
BCR FISH DNA Probe, Split Signal, is a mixture of two fluorochrome-labeled DNA probes and unlabeled PNA blocking
probes. The DNA probes in the mixture consist of a fluorescein-labeled probe (BCR-Flu) and a Texas Red-labeled
probe (BCR-TR), and should be used in combination with Dako Cytology FISH Accessory Kit, code K5499, on cytology
specimens. The reagent is provided in liquid form in hybridization solution containing 45% formamide, 10% dextran
sulphate, 300 mmol/L NaCl, 5 mmol/L phosphate, and blocking agent. Each vial contains 200 µL corresponding to 20
tests (10 µL per test).
Specificity
98.8%. Defined as the mean of 6 independent countings of 1050 cells from normal peripheral blood.
Sensitivity
97.3% Defined as the mean of 6 independent countings of 1050 cells in a translocation-positive cell line BV173 (5).
Cut-off value
When counting 50 cells, specimens with more than 4 split signal events should be considered BCR translocation
positive. Based on the specificity and sensitivity of the probe, this will ensure that 99% of all specimens containing less
than 2% cells with split signal events will be characterized as translocation negative, while 99% of all specimens
containing more than 12% cells with split signal events will be characterized as translocation positive. In case of doubt,
the specimen should be re-counted.
Introduction
Le gène humain BCR (breakpoint cluster region) se compose de 23 exons qui s'étendent sur 135 kb sur la bande q11
du chromosome 22 (1, 2). La protéine BCR a une activité sérine/thréonine kinase unique et au moins deux sites se
liant au domaine SH2 codés par le premier exon du gène et un domaine C-terminal qui fonctionne comme une protéine
d'activation de la GTPase pour p21rac (1, 3). La translocation du gène BCR a été identifiée avec différents
chromosomes partenaires (4). Les deux sondes ADN utilisées pour la détection du signal FISH dédoublé des
translocations impliquant le gène BCR sont conçues pour une hybridation en amont et en aval de la région BCR
commune. La colocalisation des sondes donne un signal jaune alors que les événements de translocation dans la
région dédoublent le signal en un signal vert (fluorescéine) et un signal rouge (Texas Red).
Cible (rouge)
La sonde ADN marquée par le Texas Red (BCR-TR) entoure une zone centromérique de 333 kb de la région BCR du
gène BCR sur la bande q11 du chromosome 22.
Cible (vert)
La sonde ADN marquée par la fluorescéine (BCR-Flu) entoure un segment télomérique de 408 kb de la région BCR du
gène BCR sur la bande q11 du chromosome 22.
Ecart-type (entre les sondes) L’écart entre BCR-TR et BCR-Flu est de 155 kb.
Réactif fourni
La solution BCR FISH DNA Probe, Split Signal, est un mélange de deux sondes ADN marquées au fluorochrome et de
sondes de blocage des PNA non marquées. Les sondes ADN dans le mélange se composent d'une sonde marquée à
la fluorescéine (BCR-Flu) et d'une sonde marquée au Texas Red (BCR-TR), et elles doivent être utilisées en
association avec la trousse Dako Cytology FISH Accessory Kit, code K5499 sur des échantillons cytologiques. Le
réactif est fourni sous forme liquide dans une solution d'hybridation contenant 45 % de formamide, 10 % de sulfate de
dextran, 300 mmol/L de NaCl, 5 mmol/L de phosphate et un agent de blocage. Chaque flacon contient 200 µL
correspondant à 20 tests (10 µL par test).
Spécificité
98,8 %. Définie comme étant la moyenne de 6 comptages indépendants de 1050 cellules du sang périphérique normal.
Sensibilité
97,3%. Définie comme étant la moyenne de 6 comptages indépendants de 1050 cellules dans une lignée BV173
translocation-positive (5).
Valeur de coupure
Dans un comptage de 50 cellules, les échantillons avec plus de 4 signaux dédoublés doivent être considérés comme
étant translocation BCR positifs. Sur la base de la spécificité et de la sensibilité de la sonde, cela assure la
caractérisation de 99 % de tous les échantillons contenant moins de 2 % de cellules avec des signaux dédoublés
comme étant translocation-négatifs, alors que 99 % de tous les échantillons contenant plus de 12 % de cellules avec
des signaux dédoublés seront caractérisés comme étant translocation-positifs. En cas de doute, l'échantillon doit être
recompté.
Précautions d'emploi
1. Pour utilisateurs professionnels.
1. For professional users.
2. The reagent contains ≥25-<50% formamide and ≥1-<3% sodium chloride. The reagent is labeled:
Danger
H360D
P201
P280
P308 + P313
P405
P501
(128376-001)
2. Le réactif contient ≥25 - <50% formamide et ≥1 - <3% chlorure de sodium. Le réactif est étiqueté:
May damage the unborn child.
Obtain special instructions before use.
Wear protective gloves. Wear eye or face protection. Wear protective clothing.
IF exposed or concerned: Get medical attention.
Store locked up.
Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, national and
international regulations.
P04172EFG_01_Y540329-2/2015.10 p. 1/4
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Pour diagnostic in vitro.
BCR FISH DNA Probe, Split Signal, est destiné à la détection des translocations impliquant le gène BCR sur le
chromosome 22q11 par hybridation in situ fluorescente (FISH). Quand la sonde est utilisée sur des échantillons
cytologiques, il est recommandé d'utiliser la trousse Dako Cytology FISH Accessory Kit, code K5499.
L'interprétation des résultats doit être entreprise par un professionnel certifié dans le contexte de l’histoire clinique
et des autres examens diagnostics du patient.
BCR FISH DNA Probe, Split Signal, is intended for the detection of translocations involving the BCR gene at
chromosome 22q11 by fluorescence in situ hybridization (FISH). When the probe is used on cytology specimens the
Dako Cytology FISH Accessory Kit, code K5499, is recommended.
Precautions
Store in the dark at 2-8 °C. Do not use after expiration date stamped on vial. If reagents are stored under any
conditions other than those specified, the conditions must be verifyed by the user. There are no obvious signs to
indicate instability of this product. Therefore, positive and negative controls should be run simultaneously with patient
specimens. If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a
problem with the product is suspected, contact Dako Technical Services.
Danger
(128376-001)
P04172EFG_01_Y540329-2/2015.10 p. 2/4
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
H360D
P201
P280
P308 + P313
P405
P501
Stockage
Peut nuire au foetus.
Se procurer les instructions avant utilisation.
Porter des gants de protection. Porter un équipement de protection des yeux ou du visage.
Porter des vêtements de protection.
EN CAS d’exposition prouvée ou suspectée: Consulter un médecin.
Garder sous clef.
Éliminer le contenu et le récipient en conformité avec toutes réglementations locales,
régionales, nationales, et internationales.
Conserver à l'obscurité à 2-8°C. Ne pas utiliser après la date de péremption indiquée sur le flacon. Si les réactifs sont
conservés dans des conditions autres que celles indiquées, celles-ci doivent être validées par l’utilisateur. Il n’y a
aucun signe évident indiquant l’instabilité de ce produit. Par conséquent, des contrôles positifs et négatifs doivent être
testés en même temps que les échantillons de patient. Si une coloration inattendue est observée, qui ne peut être
expliquée par un changement des procédures du laboratoire, et en cas de suspicion d’un problème lié à l’anticorps,
contacter l’assistance technique de Dako.
und Vorsichtsmassnahmen
Gefahr
H360D
P201
P280
P308 + P313
P405
P501
Lagerung
Zur Verwendung für In-vitro-Untersuchungen.
BCR FISH DNA Probe, Split Signal, ist für den Nachweis von Translokationen bestimmt, von denen das BCR-Gen auf
Chromosom 22q11 betroffen ist. Hierzu wird das Verfahren der Fluoreszenz-In-situ-Hybridisierung (FISH) eingesetzt.
Bei Verwendung der Sonde für Zytologieproben wird der Einsatz des Dako Cytology FISH Accessory Kit, Code-Nr.
K5499, empfohlen. Die Befunde müssen unter Berücksichtigung der klinischen Anamnese des Patienten und im
Kontext weiterer diagnostischer Verfahren von einem zertifizierten Facharzt interpretiert werden.
Einleitung
Kann das Kind im Mutterleib schädigen.
Vor Gebrauch besondere Anweisungen einholen.
Schutzhandschuhe tragen. Augenschutz oder Gesichtsschutz tragen. Schutzkleidung tragen.
BEI Exposition oder falls betroffen Ärztliche Hilfe anfordern.
Unter Verschluss aufbewahren.
Inhalt und Behälter in Übereinstimmung mit allen lokalen, regionalen, nationalen und
internationalen Gesetzen entsorgen.
Im Dunkeln bei 2-8 °C lagern. Nach Ablauf des auf dem Fläschchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr
verwenden. Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt, müssen diese
Bedingungen vom Benutzer validiert werden. Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen für eine eventuelle
Produktinstabilität. Positiv- und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet
werden. Falls es zu einer unerwarteten Färbung kommt, die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erklären
lässt und auf ein Problem mit dem Antikörper hindeutet, ist der technische Kundendienst von Dako zu verständigen.
DEUTSCH
Zweckbestimmung
2. Das Reagenz enthält ≥25-<50% Formamid und ≥1-<3% Natriumchlorid. Das Reagenz ist wie folgt gekennzeichnet:
References/ Références/ Literatur
1. Chissoe SL, Bodenteich A, Wang YF, Wang YP, Burian D, Clifton SW, et al. Sequence and analysis of the human
ABL gene, the BCR gene, and regions Involved in the Philadelphia chromosomal translocation. Genomics
1995;27:67-82.
Das humane BCR-Gen (breakpoint cluster region) besteht aus 23 Exonen, die auf Chromosom 22, Bande q11, eine
Sequenz von 135 Kilobasenpaaren umspannen (1, 2). Das BCR-Protein ist durch einzigartige Serin-/ThreoninkinaseAktivität gekennzeichnet und umfasst mindestens zwei SH2-Bindungsorte, die durch das erste Exon des Gens codiert
werden sowie eine C-terminale Domäne, die als ein GTPase-aktivierendes Protein für p21rac fungiert (1, 3). Die BCRTranslokation wurde mit unterschiedlichen Chromosomenpartnern identifiziert (4). Die zwei DNA-Sonden, die für den
FISH-Nachweis der das BCR-Gen betreffenden Translokationen anhand des „split“-Signals eingesetzt werden, wurden
für die Anlagerung ober- und unterhalb (upstream und downstream) der gemeinsamen bcr-Region (breakpoint cluster
region) konzipiert. Kolokalisation der Sonden resultiert in einem gelben Signal, während in der Region ablaufende
Translokationssreignisse das Signal in gesonderte grüne (Fluorescein) und rote (Texas Red) Signale aufteilen.
2. Prakash O, Yunis JJ. High resolution chromosomes of the t(9;22) positive leukemias. Cancer Genet Cytogenet
1984;11:361-7.
3. Diekmann D, Brill S, Garrett MD, Totty N, Hsuan J, Monfries C, et al. Bcr encodes a GTPase-activating protein for
p21rac. Nature 1991;351:400-402.
4. van der Burg M, Poulsen TS, Hunger SP, Beverloo HB, Smit EME, Vang-Nielsen K, et al. Split-signal FISH for
detection of chromosome aberrations in acute lymphoblastic leukemia using a new PNA-based blocking method.
Leukemia 2004;18:895-908.
5. Cell line BV173 provided by DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braunschweig,
Germany.
Explanation of symbols/ Légende des symboles/ Erläuterung der Symbole
Ziel (rot)
Die Texas Red-markierte DNA-Sonde (BCR-TR) lagert sich (Annealing-Schritt) an ein 333-kbp-Segment an, das
centromerisch zur BCR--bcr-Region auf Chromosom 22q11 lokalisiert ist.
Ziel (grün)
Die Fluorescein-markierte DNA-Sonde (BCR-Flu) lagert sich (Annealing-Schritt) an ein 408-kbp-Segment an, das
telomerisch zur BCR-bcr-Region auf Chromosom 22q11 lokalisiert ist.
Sonden-Abstand
Der Abstand zwischen BCR-TR und BCR-Flu beträgt 155 kb.
Geliefertes Reagenz
Die BCR FISH DNA Probe, Split Signal, liegt vor als Mischung aus zwei Fluorochrom-markierten DNA-Sonden und
nicht markierten PNA blockierenden Sonden. Die DNA-Sonden in der Mischung bestehen aus einer Fluoresceinmarkierten Sonde (BCR-Flu) und einer Texas Red-markierten Sonde (BCR-TR) und sind für die Verwendung
zusammen mit dem Dako Cytology FISH Accessory Kit, Code-Nr. K5499 bei Zytologieproben vorgesehen. Das
Reagenz liegt in flüssiger Form in einer Hybridisierungslösung vor mit 45 % Formamid, 10 % Dextransulfat,
300 mmol/L NaCl, 5 mmol/L Phosphat und Blockierungsreagenz. Jede Flasche enthält 200 µL Lösung und ist für
20 Tests ausreichend (10 µL pro Test).
Spezifität
98,8 %. Definiert als der Mittelwert von 6 unabhängigen Auszählungen von 1050 Zellen aus normalem peripherem Blut.
Sensitivität
97,3%. Definiert als der Mittelwert von 6 unabhängigen Auszählungen von 1050 Zellen in einer Translokation-positiven
Zelllinie, BV173 (5).
Cut-off-Wert
Beim Auszählen von 50 Zellen sind Proben mit mehr als 4 Fällen eines „split“-Signal-Ereignisses als für die BCRTranslokation positiv anzusehen. Basierend auf der Spezifizität und Sensitivität der Sonde wird dies sicherstellen, dass
99 % aller Proben mit weniger als 2 % Zellen mit „split“-Signal-Ereignissen als für die Translokation negativ eingestuft
werden, wohingegen 99 % aller Proben mit mehr als 12 % Zellen mit „split“-Signal-Ereignissen als für die Translokation
positiv charakterisiert werden. Im Zweifelsfall ist eine erneute Auszählung der Probe vorzunehmen.
Hinweise
1. Für geschultes Fachpersonal.
(128376-001)
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In vi tro d iag nostic medi cal d evice
Disp ositif médi cal de di ag nostic in
vitro
In -Vitro-Di agn ostikum
Kee p awa y from sun lig ht
(co nsul t storage se ction)
Protég er de la l umiè re du sol eil
(vo ir secti on stockag e)
Li chtge sch ützt la gern (si ehe
Absch ni tt zu r L age rung )
Ma nufacture r
Fab rican t
H ersteller
Con sult instructio ns fo r u se
Con sulter le s instruction s
d’u ti lisa tion
Ge brau chsan wei sung b each te n
Batch cod e
Co de d u l ot
Ch arg enbe zeich nun g
GHS ha zard pi cto gram
(co nsul t pre cautio ns section)
Picto grammes de d an ger SGH (vo ir
l a section Pré caution s d 'emp loi )
GHS-Gefah rensymbo l (sieh e
Ab schnitt zu d en
Sich erhe itshin wei sen)
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