Test CEDIA® Opiacés 2K Assay - Fisher Scientific

Test CEDIA® Opiacés 2K Assay
In Vitro Diagnosticum
100090 (Coffret de 3 x 17 mL)
100099 (Coffret de 65 mL)
1815296 (Coffret de 495 mL)
Application
Le Test CEDIA® Opiacés 2K a été conçu pour la détermination qualitative des opiacés dans de
l’urine humaine (à une concentration seuil de 2000 ng/mL).1
Le test ne fournit qu’un résultat analytique préliminaire. Une autre méthode chimique plus
spécifique doit être utilisée pour confirmer le résultat analytique. La chromatographie en
phase gazeuse/spectrométrie de base (CPG/SM) est la meilleure méthode de confirmation. 2
L’interprétation des résultats d’un test de dosage de drogues toxicomanogènes doit tenir
compte des considérations cliniques et du jugement professionnel, en particulier lorsqu’il
s’agit de résultats positifs préliminaires.
Résumé et description du test Sensitivtät
L’opium est prélevé des capsules non mûres du pavot Papaver somniferum.3,4 La morphine et
la codéïne sont des alcaloïdes naturels de l’opium.3,5 Ces deux drogues ont utilisées dans de
nombreuses préparations médicales, en particulier en tant qu’analgésiques; cependant, ces
drogues présentent un risque de toxicomanie.3-7 L’héroïne est un composé synthétisé à partir de
la morphine et est l’opiacé consommé par le plus grand nombre de toxicomanes.8
Les opiacés sont rapidement métabolisés par le corps et le site principal du métabolisme
est le foie.5,6,9 La morphine est excrétée dans l’urine sous forme de morphine conjuguée,
de morphine libre et d’autres métabolites à l’état de traces.4,5,9 La codéïne est excrétée
dans l’urine sous forme de codéïne libre et conjuguée et sous forme de morphine libre et
conjugée.4,5 Après la prise de codéïne, il se peut que la codéïne totale soit éliminée plus
rapidement que la morphine totale et que les échantillons urinaires prélevés chez certains
drogués ne révèlent ainsi que la présence de morphine totale ou un rapport morphine totale/
codéïne totale supérieur à un.4,6,8 L’héroïne est rapidement métabolisée dans le sang total en
6-monoacétylmorphine qui est alors hydrolysée en morphine conjuguée dans le foie.4,7 Elle est
excrétée dans l’urine principalement sous forme de morphine conjuguée mais aussi, en plus
petites quantités, sous forme de morphine libre et de 6-monoacétylmorphine.4,7 La codéïne n’est
pas un métabolite de l’héroïne ne de la morphine, contrairement à ce que pensaient certains
chercheurs.4,7 Cependant, on a trouvé de la codéïne dans certaines préparations d’héroïne sous
forme d’impureté, ce qui explique ainsi sa présence dans l’urine de certains consommateurs
d’héroïne.3,5,7 Selon la dose consommée et la sensibilité de la méthode analytique utilisée, la
morphine totale peut être détectée dans l’urine jusqu’à 72 heures suivant la dernière prise de
morphine, codéïne ou héroïne.4,6,8,9
Le test CEDIA Opiacés 2K, dosage immuno-enzymatique en phase homogène, fait appel à la
technologie de l’ADN recombinant (Brevet américain N° 4708929).24 Le test se base sur l’enzyme
bactérienne -galactosidase qui a été scindée en deux fragments inactifs par génie génétique.
Ces fragments se réassocient spontanément pour former une enzyme pleinement active qui, lors
de la réaction, fragmente un substrat, produisant ainsi un changement de coloration que l’on
peut mesurer par spectrophotométrie.
Au cours du test, la drogue contenue dans l’échantillon entre en compétition avec la drogue
conjuguée à un des fragments inactifs de la -galactosidase pour se fixer sur les sites de liaison
des anticorps. Si la drogue est présente dans l’échantillon, elle se fixe sur les anticorps, laissant
ainsi les fragments inactifs de l’enzyme former une enzyme active. Si l’échantillon ne contient
pas de drogue, les anticorps se lient à la drogue conjuguée du segment inactif, entravant la
réassociation des fragments inactifs de b-galactosidase, ce qui empêche la formation d’une
enzyme active. La quantité d’enzyme active formée et la variation d’absorbance qui en découle
sont proportionnelles à la quantité de drogue présente dans l’échantillon.24
Réactifs
1 Tampon de reconstitution de l’Enzyme Accepteur (EA): Contient 13 µg/mL anticorps
monoclonaux anti-opiacés, sels tampons et conservateur.
1a Réactif Enzyme Accepteur (EA): Contient 0.171 g/L enzyme accepteur, sels tampons,
détergent et conservateur.
2 Tampon de reconstitution de l’Enzyme Donneur (ED): Contient tampon phosphate.
2a Réactif Enzyme Donneur (ED): Contient 23.3 µg/L enzyme donneur conjugué à un dérivé
de la morphine, 1.67 g/L rouge de chlorophénol- -D-galactopyranoside, stabilisant et
conservateur.
Matériel supplémentaire: Étiquettes de code à barres alternatives (Nos Réf. 100090 et 100099
uniquement. Pour le mode opératoire, se référer à la fiche technique spécifique à l’analyseur.).
Flacon d’analyseur vide pour verser la solution ED (No Réf. 1815296 uniquement).
Matériel nécessaire (mais non fourni) :
Calibrateur CEDIA Multidrogues, Seuils Primaires
Avertissments et mises en garde
Les réactifs contiennent de l’azide de sodium. Éviter le contact avec la peau et les muqueuses.
En cas de contact, rincer immédiatement et abondamment avec de l’eau. En cas de contact
oculaire ou d’ingestion, consulter un médecin. L’azide de sodium peut réagir avec le plomb et
le cuivre des canalisations et former des azides métalliques potentiellement explosifs. Lors de
l’évacuation de réactifs dans les canalisations, faire couler l’eau abondamment pour éviter
toute accumulation d’azide. Nettoyer les surfaces métalliques exposées avec une solution de
soude à 10%.
Préparation et conservation des réactifs
Voir les instructions données ci-dessous pour la préparation des solutions pour les analyseurs
Hitachi. Pour tous les autres analyseurs, se référer à la fiche technique spécifique à l’analyseur.
Retirer le coffret du compartiment réfrigéré (entre 2 et 8°C), immédiatement avant la préparation
des solutions.
Préparer les solutions dans l’ordre suivant pour minimiser le risque de contamination possible.
R2 Solution Enzyme Donneur: Relier un flacon 2a (Réactif ED) à un flacon 2 (tampon de
reconstitution ED) à l’aide d’un des raccords contenus dans le coffret. Dissoudre le contenu du
flacon 2a par retournements successifs et verser cette solution dans le flacon 2 sans perte de
Iyophilisat. Éviter la formation de mousse. Détacher le flacon 2a et le raccord du flacon 2 et les
jeter. Fermer le flacon 2 et le laisser reposer à température ambiante (entre 15 et 25°C) env. 5
min. Mélanger de nouveau et noter la date de reconstitution sur l’étiquette.
R1 Solution Enzyme Accepteur: Relier un flacon 1a (Réactif EA) à un flacon 1 (tampon de
reconstitution EA) à l’aide d’un des raccords contenus dans le coffret. Dissoudre le contenu du
flacon 1a par retournements successifs et verser cette solution dans le flacon 1 sans perte de
Iyophilisat. Éviter la formation de mousse. Détacher le flacon 1a et le raccord du flacon 1 et les
jeter. Fermer le flacon 1 et le laisser reposer à température ambiante (entre 15 et 25°C) env. 5
min. Mélanger de nouveau et noter la date de reconstitution sur l’étiquette.
Réf. 100099 - Analyseur Hitachi 717, 911, 912 ou 914: transférer les réactifs reconstitueés dans
les flacons vides R1 st R2 de 100 mL correspondants fournis aves le nécessaire. Analyseur
Hitachi 917/Système P d’analyses modularies: utiliser les réactifs reconstitués sans transfert
de flacons. Jeter les flacons de 100 mL vides.
Réf. 1815296 - Analyseur Hitachi 747/Système D d’analyses modularies: Verser, à l’aide des
entonnoirs fournis, une partie de la solution R2 dans le flacon étiqueté R2 vides fournis.
REMARQUE 1: Les composants fournis dans ce jeu sont destinés à être utilisés ensemble. Ne
jamais mélanger les composants de différents lots.
REMARQUE 2: Afin d’éviter la contamination des réactifs, ne pas intervertir les bouchons des
flacons de réactifs. La solution R2 doit être d’une couleur jaune orangée. En cas de coloration
rouge foncée à violette, la solution est contaminée et doit être jetée.
REMARQUE 3: Avant emploi, amener les solutions R1 et R2 à la température du compartiment de
conservation des réactifs de l’analyseur. Voir la fiche technique spécifique à l’analyseur pour
obtenir de plus amples informations.
REMARQUE 4: Pour assurer la stabilité du réactifs AE reconstitué, ne pas l’exposer de façon
prolongée ou continue à une forte lumière.
Conserver les réactifs entre 2 et 8°C. NE PAS LES CONGELER. Pour connaître la stabilité des
composants non ouverts, se référer aux étiquettes de la boîte ou des flacons pour la date de
péremption.
Solution R1: 60 jours si elle est conservée dans le compartiment réfrigéré de l’analyseur ou
entre 2 et 8°C.
Solution R2: 60 jours si elle est conservée dans le compartiment réfrigéré de l’analyseur ou
entre 2 et 8°C.
Prélèvement et manipulation des échantillons
Recueillir les échantillons d’urine dans des récipients propres en verre ou en plastique. Les
échantillons présentant une forte turbidité doivent être centrifugés avant d’être analysés.
Manipuler tous les échantillons d’urine humaine comme potentiellement infectieux. Obtenir un
autre échantillon pour le test si l’on soupçonne que l’échantillon a été adultéré. L’adultération
des échantillons d’urine peut fausser les résultats du test.
Les échantillons qui ne sont pas soumis à l’analyse dans les 7 jours suivant leur arrivée au
laboratoire doivent être conservés dans des réfrigérateurs fermés à clé (The Mandatory
Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs; Final Guidelines; Notice).11
Analyse
Pour réaliser ce test, on peut utiliser un analyseur chimique capable de maintenir une
température constante, de prélever des échantillons à la pipette, de mélanger des réactifs, de
mesurer des taux enzymatiques et d’assurer le minutage de la réaction. Les fiches techniques
avec les paramètres spécifiques des instruments sont disponibles auprès de Microgenics, une
division de Thermo Fisher Scientific.
Contrôle de qualité et calibration12
Spécificité
Les composés parents et les métabolites suivants ont été testés avec le test CEDIA Opiacés 2K
et ont donné des résultats de réactivité croisée suivants:
Utiliser le calibrateur Multidrogues, Seuils primaires, pour l’analyse des résultats. Pour les
analyseurs Hitachi, le calibrateur correspondant au seuil sélectionné est placé dans une
position standard appropriée (S1). Pour tous les autres analyseurs, se référer à la fiche
technique spécifique à l’analyseur.
La bonne pratique de laboratoire prévoit la vérification quotidienne des échantillons de patients
et de la calibration effectuée à l’aide d’échantillons de contrôle. Il est recommandé d’effectuer
deux contrôles; l’un 25% au-dessus du seuil sélectionné et l’autre 25% au-dessous du seuil
sélectionné. Les valeurs obtenues par les contrôles doivent se situer dans un domaine de
contrôle défini. En cas de tendance à la hausse ou à la baisse ou de déviation soudaine dans
les valeurs de contrôle, tous les paramètres de l’analyse doivent être revus. Pour plus de
renseignements s’adresser au service technique. Toutes les exigences de contrôle qualité
doivent être appliquées conformément aux règlements locaux, régionaux et nationaux ou aux
conditions d’agrément.
Résultats et valeurs théoriques
Substance
Concentration
testée (ng/mL)
Morphine
2000
100
Codéine
1600
107
Diacétylmorphine
2000
65
Dihydrocodéine
2000
89
Hydrocodone
2000
77
Hydromorphone
2000
79
Imipramine
Le calibrateur seuil 2000 ng/mL est utilisé comme référence pour distinguer entre des
échantillons positifs ou négatifs. Les échantillons dont le résultat est supérieur ou égal à la
valeur de réponse du calibrateur sont considérés comme positifs. Les échantillons dont le
résultat est inférieur à celui du calibrateur sont considérés comme négatifs. Pour les autres
analyseurs, se procurer les modes opératoires respectifs pour plus de renseignements.
Les résultats de ce test permettent de distinguer les échantillons positifs (> 2000 ng/mL) des
échantillons négatifs uniquement. La concentration de la drogue contenue dans un échantillon
positif ne peut être évaluée.
90 000
2,3
Morphine-3-glucuronide
2000
64
Morphine-6-glucuronide
3500
57
6-Monoacétylmorphine
2500
80
1 000 000
0,2
100 000
2,4
64 000
3,9
Mépéridine
Oxymorphone
Oxycodone
Limitations
1. Un résultat positif ne fait qu’indiquer la présence d’opiacés mais ne peut reconnaître ou
mesurer une intoxication.
2. Le graines de coquelicot peuvent contenir des opiacés. L’ingestion d’aliments contenant
des graines de coquelicot peut conduire à un résultat positif.13
3. La présence dans l’échantillon d’autres substances non énumérées de même que les
erreurs techniques ou de manipulation peuvent conduire à des résultats erronés.
% Reactivité Croisée
Des composés à structure non apparentée ont été testés avec le test CEDIA Opiacés 2K et ont
donné un résultat négatif pour les concentrations indiquées ci-dessous:
Performances spécifiques
Les données de performances typiques obtenues sur l’appareil sont indiquées ci-dessous.13 Les
données obtenues peuvent varier d’un laboratoire à un autre.
Précision
Des études mesurant la précision à l’aide de réactifs, calibrateurs et contrôles fournis dans le
coffret, ont donné les résultats suivants en mA/mn avec un analyseur Hitachi 717 suivant une
expérience de réplication modifiée NCCLS.
Précision Inter- série (n=21)
Substance
ng/mL
Substance
ng/mL
Acétaminophéne
500 000
Ibuprofen
50 000
Acide acétylsalicylique
500 000
Lévothyroxine
50 000
Acide salicylurique
500 000
Méthadone
500 000
Amoxicilline
100 000
Méthamphétamine
500 000
Amphétamine
500 000
Nifédipine
500 000
Benzoylecgonine
500 000
Phencyclidine
500 000
Captopril
500 000
Phénobarbital
500 000
Chlordiazépoxide
100 000
Propoxyphéne
500 000
Énchantillon
­­x̄
SD
%VC
Cimétidine
500 000
Ranitidine
500 000
Contrôle bas
247.6
3.01
1.2
Diazépam
500 000
Secobarbital
500 000
Calibrateur seuil
301.6
3.37
1.1
Digoxine
100 000
11-nor-∆ -THC-COOH
Contrôle haut
362.2
4.73
1.3
Enalapril
500 000
Verapamil
Fluoxétine
500 000
Precision Intra-série (n=61)
­­x̄
SD
%VC
Contrôle bas
247.9
10.62
4.3
Calibrateur seuil
301.6
13.09
4.3
Substance
Contrôle haut
365.1
15.47
4.2
Exactitude
Deux cents échantillons cliniques d’urine et vingt échantillons auxquels avait été ajoutée de
la morphine jusqu’à ±25% du seuil de 2000 ng/mL du dosage ont été testés avec le test CEDIA
Opiacés 2K sur l’analyseur Hitachi 717 en utilisant le dosage CEDIA Opiacés comme référence.
Les résultats obtenus ont été les suivants:
Test CEDIA
Opiacés 2K
+
Test CEDIA
Opiacés
84
35*
-
0
101
10 000
500 000
Le test CEDIA Opiacés 2K n’a pas montré d’interférences avec les substances suivantes
rajoutées aux concentrations endogènes normales de l’urine:
Énchantillon
+
9
Concentration
Substance
Concentration
Acétone
< 1,0 g/dL
Galactose
< 10 mg/dL
Acide ascorbique
< 1,5 g/dL
Acide oxalique
< 0,1 g/dL
Glucose
< 3,0 g/dL
Albumine sérique humaine
< 0,5 g/dL
Hémoglobine
< 0,3 g/dL
Chlorure de sodium
< 6,0 g/dL
Riboflavine
Créatinine
< 0,5 g/dL
Uree
Ethanol
< 1,0 g/dL
-globuline
< 0,5 g/dL
< 7,5 mg/dL
< 5,0 g/dL
Sensibilité
La sensibilité du test, ou sa limite de détection (LOD), représente la concentration la plus basse
d’opiacés qui peut être distinguée du calibrateur négatif et est de 60,8 ng/mL.
* Les 35 échantillons ont été testés avec CPG/SM et ont révélé un contenu de 172-1899 ng/mL de morphine.
2
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14.Data on file at Microgenics Corporation, une division de Thermo Fisher Scientific.
Microgenics Corporation
46360 Fremont Blvd.
Fremont, CA 94538-6406 États-Unis
Soutien client et technique
aux États-Unis :
1-800-232-3342
Pour des mises à jour de la notice, consulter:
www.thermoscientific.com
Autres pays:
Contacter le représentant local Thermo Fisher Scientific.
CEDIA - Marque déposée de la Société Roche Diagnotics.
10006525-1
2011 01
3
Microgenics GmbH
Spitalhofstrasse 94
D-94032 Passau Germany
Tel: +49 (0) 851-88 68 90
Fax: +49 (0) 851-88 68 910