CR QUAL IMMUN 3 - 141 (version finale

Transcription

Compte rendu 141
Auto-immunité : QUAL-IMMUN 3
Centre Toulousain
pour le Contrôle de qualité
en Biologie clinique
Association déclarée à la Préfecture de la Haute-Garonne le 30 Octobre 1973
et enregistrée sous le n° W313002633
CTCB - 33 route de Bayonne - 31300 TOULOUSE
℡ : 05 34 51 49 80 – Fax : 01 57 67 25 90
Email : [email protected] – site Internet : www.ctcb.com
Siret : 428 789 853 000 28 – APE : 8559A
Statut du document : Définitif
1 - PRESENTATION DU PROGRAMME D’INTERCOMPARAISON
Expert du programme et Coordonnateur : Stéphanie Albarède, CTCB, [email protected]
Expert du programme : Mme Fortenfant, Laboratoire d’Immunologie, [email protected]
Un large panel vous est proposé en auto-immunité en collaboration avec la société THERADIAG.
THERADIAG apporte ainsi son savoir-faire dans la fabrication d’échantillon et le CTCB son
expérience et son indépendance pour le traitement des données.
Fréquence de passage (pour chaque programme d’auto-immunité) :
2 enquêtes par an, avec 3 échantillons (400 - 600 µl de niveaux différents)
Présentation du programme :
L’ensemble des échantillons est adressé en une seule fois par la société THERADIAG. Le programme
proposé est réparti de la façon suivante :
aPL
Anticorps anti-phospholipides IgG, IgM (APL, ACL et B2GP1)
FII
Anticorps anti-prothrombine IgG et IgM
ANCA Anticorps anti-cytoplasme des polynucléaires neutrophiles
Dépistage et typage (MPO et/ou PR3)
MBG Anticorps anti-membrane basale glomérulaire
2 - DETERMINATION DE LA NOTATION DU LABORATOIRE
Le système de notation qualitatif repose sur l’échelle d'évaluation suivante :
• A = Réponse attendue
• B = Réponse acceptable
• C = Réponse à analyser par le laboratoire
• D = Réponse erronée
Le résultat attendu est la valeur assignée qualitative transmise par le fournisseur lorsque les
résultats des participants sont cohérents en inter-réactifs. Des différences par groupe de pairs
peuvent amener l’Expert à moduler cette valeur, le fournisseur ne pouvant pas tester tous les
dispositifs médicaux de diagnostic in vitro (DMDIV) présents sur le marché. En effet, dans le
domaine de l’auto-immunité, de nombreux facteurs dont la nature et la présentation de
l’antigène, peuvent induire des discordances de résultats entre deux techniques voire deux
réactifs d’une même technique. Ceci explique que les valeurs indicatives disponibles sur le
site internet à la date de clôture puissent différer de la valeur attendue.
Etant donné les faibles effectifs et la dispersion des résultats, les données quantitatives ne
sont pas exploitées (pas d’évaluation des résultats quantitatifs).
3 - TRAITEMENT STATISTIQUE QUANTITATIF
Le traitement statistique quantitatif est réalisé selon les protocoles suivants :
- Pour les résultats rendus en inverse de dilution :
Détermination de l’effectif (N) après élimination des résultats rendu avec un signe < ou >, de la
Médiane, Min et Max.
- Pour les résultats rendus en unité internationale :
Détermination de l’effectif (N), effectif après troncature (N*), moyenne après exclusion des valeurs
aberrantes par la médiane +/-50%, écart type (ET), coefficient de variation (CV), valeur minimum et
maximum (Min, Max) avant troncature.
-
Critères de rendus des résultats : si l’effectif est supérieur ou égal à 3.
Compte rendu 141 / Auto-immunité : QUAL-IMMUN 3
Campagne 2014
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Emis le 06 Octobre 2014
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4 - ANALYSE DES REPONSES ET COMMENTAIRES
I.
Matériel et méthode
A. Recherche d’anticorps anti phospholipide
Ce contrôle permet de réaliser :
La détection globale des anticorps anti-phospholipides (réactifs ne permettant pas de définir la
spécificité de l’anticorps anti-phopholipides)
Et/ou la recherche des anticorps anti-cardiolipine
Et/ou la recherche des anticorps anti Béta2GP1
Et/ou la recherche des anticorps anti-prothrombine
Pour chacun de ces tests, les laboratoires pouvaient opter pour des réactifs recherchant des IgG ou
des IgM.
a) Détection globale des anticorps anti-phospholipides
Le nombre de laboratoires ayant réalisé cette détection globale d’anticorps anti-phospholipides est de
5 pour l’isotype IgG et de 3 pour l’isotype IgM.
Les réactifs utilisés relèvent tous d’une technique immuno-enzymatique.
b) Recherche des anticorps anti-cardiolipines
On dénombre 46 participants pour la recherche des IgG cardiolipines et 36 pour la recherche des IgM.
La technique la plus utilisée est l’immuno-enzymologie (figures 1 et 2).
4%
13%
Chimiluminescence
Immunoenzymologie
83%
X-MAP
Figure 1. Répartition des techniques : recherche d’IgG anti-Cardiolipine.
5%
14%
Chimiluminescence
Immunoenzymologie
81%
X-MAP
Figure 2. Répartition des techniques : recherche d’IgM anti-Cardiolipine.
c) Recherche des anticorps anti bêta 2 glycoprotéine (β2GP1)
La recherche d’IgG anti- β2GP1 a été réalisée par 41 laboratoires et des IgM par 29 laboratoires avec
une majorité de réactifs relevant de la technique d’immuno-enzymologie (figures 3 et 4).
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2%
15%
Chimiluminescence
Immunoenzymologie
83%
X-MAP
Figure 3. Répartition des techniques : recherche d’IgG anti-β2GP1.
4%
17%
Chimiluminescence
Immunoenzymologie
79%
X-MAP
Figure 4. Répartition des techniques : recherche d’IgM anti-β2GP1.
d) Recherche des anticorps anti-prothrombine
5 laboratoires ont réalisé la recherche d’IgG anti-prothrombine et 3 laboratoires la recherche d’IgM.
Deux laboratoires utilisent des réactifs relevant d’une technique d’immuno-enzymologie et les trois
autres d’une technique X-MAP.
B. ANCA/Anti MBG
Ce contrôle permet de réaliser le dépistage des anticorps anti-cytoplasme des polynucléaires
neutrophiles en IFI et l’identification des anticorps anti-MPO, anti-PR3 et anti-MBG.
a)
Dépistage des ANCA (Immunofluorescence indirecte)
Le nombre de laboratoires ayant réalisé le dépistage des anticorps anti-cytoplasme des
polynucléaires neutrophiles est de 44.
La majorité des laboratoires (86%) utilisent une dilution de dépistage au 1/20 (tableau I).
La lecture se fait au grossissement 40 dans 82% des laboratoires (tableau II).
L’origine des lames utilisées est reportée dans le tableau III.
Nombre d’utilisateurs par dilution de dépistage
10
20
40
80
Total général
Effectif
3
38
2
1
44
Tableau I. Nombre d’utilisateurs par dilution de dépistage.
Nombre d’utilisateurs par grossissement
Non renseigné
20
40
50
60
63
100
Total général
Effectif
2
2
36
1
1
1
1
44
Tableau II. Nombre d’utilisateurs par grossissement.
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Réactifs IFI
BIO ADVANCE Granulocytes fixés à l'éthanol (réf : 1200-10xx)
BIO ADVANCE Granulocytes fixés éthanol/formol (réf : 1201-10xx-2)
BIO ADVANCE Granulocytes fixés éthanol/formol/foie/HEp2 (réf : 1201-10xx-3)
BIO-RAD Lames ANCA COMBI éthanol/Formol (réf : 29419)
BIO-RAD Lames ANCA éthanol (réf : 29417 / 29416)
BMD Test de détection des ANCA - éthanol (réf : IMM 1140)
EUROBIO/ IMMUNO CONCEPTS ANCA éthanol
INGEN ImmuGlo Comvi ANCA IFA (éthanol + formol)
INOVA Lames de neutrophiles fixées à l'éthanol
INOVA NOVA Lite ANCA
MENARINI ANCA fixé à l'éthanol (lame 6 ou 12 puits)
MENARINI ANCA fixé éthanol + formol
Total général
Effectif
2
8
1
1
7
1
1
1
15
5
1
1
44
Tableau III. Réactifs IFI pour le dépistage des ANCA.
b) Identification des spécificités MPO/PR3
L’identification des anticorps anti-MPO et anti-PR3 a été réalisée par 43 laboratoires. La technique la
plus utilisée est l’immuno-enzymologie (figure 5).
5%
9%
16%
Chimiluminescence
ImmunoDot
Immunoenzymologie
X-MAP
70%
Figure 5. Répartition des techniques : Identification des Ac anti-MPO- Ac anti-PR3.
c) Identification des anticorps anti-membrane basale glomérulaire
Pour l’identification des anticorps anti-MBG, la technique la plus utilisée est l’immunodot (44% des
laboratoires). La répartition des techniques est représentée en figure 6. Cette analyse a été réalisée
par 27 participants.
4%
4%
7%
Chimiluminescence
IFI
41%
44%
ImmunoDot
Immunoenzymologie
X-MAP
Figure 6. Répartition des techniques : Identification des Ac anti-MBG.
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II.
Echantillon 1411
A. Composition de l’échantillon
-
Présence d’anticorps IgG anti-cardiolipine, anti- β2GP1 et d’IgM anti- β2GP1.
Présence d’anticorps anti-cytoplasme des polynucléaires de type anti-MPO.
Présence d’anticorps anti-MBG.
B. Recherche d’anticorps anti-phospholipide
On observe 100% de bonnes réponses qualitatives pour l’isotype IgG et une réponse faussement
négative pour l’isotype IgM obtenue avec le réactif d’ORGENTEC Alegria (tableau IV).
Dosage des anticorps anti-phospholipides- Echantillon 1411
Marqueur IgG
BMD/THERADIAG PHOSPHO-LISA
ORGENTEC Anti‐Phospholipid Screen IgG/IgM (réf : ORG 529)
ORGENTEC Anti‐Phospholipid Screen IgG Alegria (réf : ORG 229G)
Total général
Marqueur IgM
ORGENTEC Anti‐Phospholipid Screen IgM Alegria (réf : ORG 229M)
Total général
Positif
3
1
1
5
Négatif
Positif
2
1
1
2
Tableau IV. Tests globaux de recherche des anticorps anti-phospholipides – Echantillon 1411.
L’ensemble des participants a mis en évidence la présence d’anticorps IgG anti-cardiolipines.
Pour l’isotype IgM, les réponses se répartissent en 50% de résultats négatifs, 36% de résultats positifs
et 14% de résultats douteux (tableau V). Cependant, pour le réactif PHADIA, au vu des résultats
rendus de 14 à 27 U/ml pour un seuil de positivité à 40 U/mL, l’ensemble des utilisateurs de ce réactif
aurait dû rendre un résultat négatif. Ce qui fait une répartition des résultats en 64% de résultats
négatifs, 30,5% de résultats positifs et 5,5% de résultats douteux.
Dosage des IgM anti-cardiolipines - Echantillon 1411
Marqueur IgM
Négatif Douteux Positif
Chimiluminescence
1
1
DIASORIN LIAISON Cardiolipin IgM
1
MENARINI ZENIT RA Cardiolipin IgM
1
Immuno-enzymologie
13
4
12
Autre
1
BIOADVANCE ELISA anti-cardiolipide IgM
2
BIORAD Anti-Cardiolipin IgM EIA
1
BMD/THERADIAG Cardio Chorus IgM
1
1
BMD/THERADIAG Cardio LISA IgM
2
INOVA QUANTA Lite ACA IgM III
4
ORGENTEC Anti-Cardiolipin IgM Alégria (réf : ORG 215M)
9
PHADIA EliACardiolipin IgM
3
3
2
X-MAP
5
BIORAD BioPlex 2200 APLS IgM
3
BMD/THERADIAG FIDIS APS IgM
2
Total général
18
5
13
Tableau V .Résultat qualitatif de la recherche des IgM anti-cardiolipine - Echantillon 1411.
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Les résultats quantitatifs du dosage des IgG anti-cardiolipine sont présentés dans le tableau VI.
Réactif
BMD/THERADIAG FIDIS APS IgG
INOVA QUANTA Lite ACA IgG III
ORGENTEC Anti-Cardiolipin IgG Alégria (réf : ORG 215G)
PHADIA EliA Cardiolipin IgG
N N* Moyenne
ET
3 3
180,00
45,03
5 5
140,02
11,02
4 4
97,13
22,48
12 12
326,75
37,74
CV
25,02
7,87
23,15
11,55
Min Max
134 224
127 149
68,6 120*
269 404
Tableau VI. Dosage des IgG anti-cardiolipine (U/ml) - Echantillon 1411.
*En plus des 4 laboratoires, 6 laboratoires ont rendu un résultat « > 120 »
Titres rendus en IgM pour information : tableau VII
Réactif
N N*
4
9
8
4
9
8
Seuil
Min
Max
20
7
40
24
3,4
14
36
6
27
Tableau VII. Dosage des IgM anti-cardiolipine (U/ml) - Echantillon 1411.
Pour l’isotype IgG, on observe un résultat faussement négatif sur 41 résultats rendus (tableau VIII), ce
résultat ayant été obtenu sur automate Chorus (le titre observé est bien inférieur au seuil de la
technique).
Pour l’isotype IgM (tableau IX), on observe 19 résultats négatifs, 1 douteux et 9 positifs.
Concernant les résultats quantitatifs, on observe des bons CV% pour l’isotype IgG, tous inférieurs à
20% (tableau X).
Le tableau XI présente les résultats quantitatifs pour l’isotype IgM anti-β2GP1.
Dosage des anticorps IgG anti-β2GP1 - Echantillon 1411
Marqueur IgG
Chimiluminescence
MENARINI ZENIT RA Β2 GLYCOPROTEIN I IgG
Immuno-enzymologie
Autre
BIOADVANCE ELISA Anti-B2GP1 IgG
BIORAD anti-B2 Glycoprotein I IgG EIA Kit
BMD/THERADIAG B2GP1 LISA IgG
BMD/THERADIAG Chorus LISA IgG
INOVA QUANTA Lite B2 GPI IgG
ORGENTEC anti-B2 Glycoprotein I IgG Alégria (réf : ORG 221G)
ORGENTEC anti-B2 Glycoprotein IgG/IgM (réf ORG : 521)
PHADIA EliA B2 Glycoprotein I IgG
PHADIA Varelisa B2 Glycoprotein I (IgG) antibodies
X-MAP
BIORAD BioPlex 2200 APLS IgG
Total général
Négatif Positif
1
1
1
33
1
2
1
1
1
1
3
9
1
13
1
6
3
3
1
40
Tableau VIII .Résultat qualitatif de la recherche des anticorps IgG anti-β2GP1 - Echantillon 1411.
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Dosage des anticorps IgM anti-β2GP1 - Echantillon 1411
Marqueur IgM
Négatif
Chimiluminescence
MENARINI ZENIT RA Β2 GLYCOPROTEIN I IgM
Immuno-enzymologie
19
Autre
1
BIOADVANCE ELISA Anti-B2GP1 IgM
BIORAD anti-B2 Glycoprotein I IgM EIA Kit
BMD/THERADIAG B2GP1 LISA IgM
BMD/THERADIAG Chorus LISA IgM
1
INOVA QUANTA Lite B2 GPI IgM
2
ORGENTEC anti-B2 Glycoprotein I IgM Alégria (réf : ORG 221M)
4
1
PHADIA EliA B2 Glycoprotein I IgM
9
PHADIA Varelisa B2 Glycoprotein I (IgM) antibodies
1
X-MAP
Total général
19
Douteux
1
1
Positif
4
2
1
1
5
3
2
9
1
Tableau IX .Résultat qualitatif de la recherche des anticorps IgM anti-β2GP1 - Echantillon 1411.
Réactif
N N* Moyenne
ET
CV
Min Max
3 3
131,33
9,45 7,20 124
142
3 3
92,57
8,70 9,40
83
100
9 5
14,76
2,03 13,76 12,1 175,8
13 13
104,44
14,76 14,13 76,7 127
Tableau X. Dosage des IgG anti-β2GP1 (U/ml) - Echantillon 1411.
Réactif
N
N*
Moyenne
ET
CV
Min Max
3
3
28,27
2,11
7,47
28
30,5
4
4
-
-
-
1,9
4,1
8
6
-
-
-
1
3,5
Tableau XI. Dosage des IgM anti-β2GP1 (U/ml) - Echantillon 1411.
Parmi les 5 laboratoires ayant recherché les IgG anti-prothrombine (tableau XII), on observe 3
réponses douteuses, une réponse négative et une positive. Trois laboratoires ont réalisé la recherche
d’IgM et l’ont rendu négative.
Dosage des anticorps anti-prothrombine - Echantillon 1411
Marqueur IgG
Négatif Douteux
Immuno-enzymologie
1
1
INGEN AESKULISA prothrombin-GM
1
ORGENTEC Anti-Prothrombin IgG Alégria (réf : ORG 241G)
1
X-MAP
2
2
Total général
1
3
Marqueur IgM
Immuno-enzymologie
X-MAP
Total général
Positif
1
1
1
Négatif
1
1
2
2
3
Tableau XII. Résultat qualitatif de la recherche des anticorps anti-prothrombine - Echantillon 1411
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C. ANCA/Anti MBG
a) Dépistage des ANCA (Immunofluorescence indirecte)
Parmi les 44 participants, on observe un faux négatif, 41 laboratoires (93%) ont mis en évidence une
fluorescence périnucléaire P-ANCA (réponse attendue) et 2 laboratoires (5%) ont rendu une
fluorescence cytoplasmique C-ANCA dont un est du à inversion d’échantillon 1411 et 1413 (tableau
XIII).
La répartition des titres observés est représentée dans la figure 7 : la médiane est à 1/160 avec des
titres allant de 1/20 à 1/320.
Aspect de la fluorescence
Aucun aspect
Aspect cytoplasmique
Aspect périnucléaire
Total général
Ininterprétable
1
1
Négatif
1
Positif
2
40
42
1
Tableau XIII. Résultat qualitatif du dépistage des ANCA selon les aspects de la fluorescence Echantillon 1411.
Répartition des titres en inverse de dilution pour
l'aspect pANCA
médiane = 160
Nombre de réponse
14
12
10
8
6
4
2
0
Total
20
3
>20
4
40
3
50
1
60
1
80
4
160
12
>160
1
320
5
Figure 7. Titrage des ANCA sur échantillon 1411.
Réactif
N
Médiane Min Max
6
120
20
160
3
160
160
160
10
160
20
320
3
80
60
320
Tableau XIV. Résultats quantitatifs 1411 - IFI (Aspect périnucléaire).
Réponses à la question « Est-il nécessaire de rechercher des AAN sur HEp2 ou de réaliser la
recherche d’ANCA sur formol ? » :
-27 réponses « Non »
-17 réponses « Oui » dont 10 laboratoires qui ont conclu « Présence d’anticorps anti-nucléaires
associés à des anticorps P-ANCA» et un laboratoire a conclu « Ininterprétable » (il a rendu le
dépistage ANCA positif avec une fluorescence P-ANCA).
Remarque :
-le laboratoire ayant rendu au dépistage ANCA négatif a répondu oui à la recherche d’AAN et a conclu
à la « Présence d’anticorps anti-nucléaires associés à des anticorps P-ANCA».
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-Un des 2 laboratoires ayant rendu au dépistage des ANCA positif avec une fluorescence c-ANCA, a
répondu oui à la recherche d’AAN et a conclu à la « Présence d’anticorps anti-nucléaires associés à
des anticorps P-ANCA».
Le laboratoire ayant rendu au dépistage ANCA « ininterprétable avec une fluorescence P-ANCA a
répondu oui à la recherche d’AAN et a conclu à la « Présence d’anticorps anti-nucléaires associés à
des anticorps P-ANCA».
La présence d’anticorps anti-MPO, a été mise en évidence par 42 laboratoires sur 43. Le seul résultat
faussement négatif est dû à une inversion d’échantillon 1411 – 1413 (tableau XV).
Pour les anticorps anti-PR3, on observe un seul résultat faussement positif qui est dû à une inversion
d’échantillon 1411-1413 (tableau XVI).
Les résultats quantitatifs des anticorps anti-MPO sont présentés dans le tableau XVII.
Négatif
Chimiluminescence
INOVA QUANTA Flash MPO
MENARINI ZENIT RA MPO
ImmunoDot
BIO ADVANCE EUROLINE MPO + PR3 + GBM (réf : DL 1200-1601-3 G)
BMD ANCA MBG DOT (réf : HM025)
D-Tek BlueDot ANCA+GBM (MPO/PR3/GBM)
EUROBIO ANCA DOT
GENERIC ASSAYS GmbH ANCA Dot
INGEN ANCA-Goodpasture (MPO/PR3/GBM)
Immuno-enzymologie
BIO ADVANCE ELISA ANTI-MPO IgG (réf : EA 1211-9601 G)
INOVA QUANTA Lite MPO IgG
INOVA QUANTA Lite MPO SC
ORGENTEC ANCAcombi (réf : ORG 530)
ORGENTEC Anti-MPO (p-ANCA) (réf : ORG 519)
ORGENTEC Anti-MPO (p-ANCA) Alégria (réf : ORG 219)
PHADIA / THERMO FISCHER EliA MPOS Well
X-MAP
BIORAD BioPlex 2200 Vasculitis
BMD FIDIS VASCULITIS (réf : MX007)
Total général
1
1
1
Positif
2
1
1
7
1
2
1
1
1
1
30
2
4
1
1
1
9
12
3
1
2
42
Tableau XV. Résultat qualitatif de la recherche d’anticorps anti-MPO - Echantillon 1411.
Campagne 2014
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Négatif
2
1
1
7
1
2
1
1
1
1
30
2
4
1
1
6
2
2
11
1
3
1
2
42
Chimiluminescence
INOVA QUANTA Flash PR3
MENARINI ZENIT RA PR3
ImmunoDot
EUROBIO ANCA DOT
Immuno-enzymologie
BIO ADVANCE ELISA Anti-PR3 hn hr IgG (réf : EA 1201-9601-2 G)
INOVA QUANTA Lite PR3
INOVA QUANTA Lite PR3 SC
ORGENTEC Anti-PR3 (c-ANCA) Alégria (réf : ORG 218)
ORGENTEC Anti-PR3 hs (réf : ORG 618)
ORGENTEC Anti-PR3 hs Alégria (réf : ORG 318)
PHADIA / THERMO FISCHER EliA PR3S Well
PHADIA / THERMO FISCHER VARELISA PR3 ANCA
X-MAP
Total général
Positif
1
1
1
Tableau XVI. Résultat qualitatif de la recherche d’anticorps anti-PR3 - Echantillon 1411.
Réactif
N
N*
Moyenne
ET
CV
Min
Max
4
4
44,75
10,86
24,26
28,8
52
9
9
11,61
2,15
18,56
7,2
14,1
12 11
32,09
5,07
15,79
27
47,1
Tableau XVII. Dosage des Ac anti-MPO (U/ml) - Echantillon 1411.
L’ensemble des participants a rendu la réponse attendue c’est-à-dire positive.
Les résultats quantitatifs sont présentés dans le tableau XVIII.
Réactif
N N*
Moyenne
ET
CV
Min
Max
ORGENTEC anti-GBM Alégria (réf ORG 250)
5
5
161,58
41,43
25,64
102,3
200
PHADIA / THERMO FISCHER EliA GBM Well
5
5
62,80
10,16
16,18
48
73
Tableau XVIII. Dosage des Ac anti-MBG (U/ml) - Echantillon 1411.
D.
Commentaires
Concernant les anticorps anti-phospholipides, l’échantillon a été préparé, notamment dilué, pour avoir
le profil suivant : présence d’anticorps IgG anti-cardiolipine, anti- β2GP1 et d’IgM anti- β2GP1.
En raison de ce mode de préparation, les différences de sensibilité des réactifs, les différents seuils
de positivité utilisés par les laboratoires font que pour certains paramètres (IgM anti cardiolipines et
anti- β2GP1) les résultats sont très dispersés : la notation des résultats individuels dans un tel cas se
fait par réactif (consensus des laboratoires participants utilisant un même réactif pris en compte).
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III.
Echantillon 1412
-
Présence d’anticorps IgG et IgM anti –Cardiolipines, anti-β2GP1.
Présence d’anticorps IgM anti-prothrombine.
Absence d’anticorps anti-cytoplasme des polynucléaires, présence d’anticorps anti-nucléaires.
Absence d’anticorps anti-MBG
Pour l’isotype IgG, on note la présence d’une réponse négative obtenue avec le réactif
BMD/THERADIAG PHOSPHO-LISA (titre rendu 12 pour un seuil à 15) et quatre réponses positives.
L’ensemble des participants ont mis en évidence la présence d’anticorps IgM anti-phospholipides
(tableau XIX).
Marqueur IgG
Total général
Marqueur IgM
Total général
Négatif
1
1
Positif
2
1
1
4
Positif
2
1
3
Tableau XIX. Tests globaux de recherche des anticorps anti-phospholipides – Echantillon 1412.
Pour l’isotype IgG, on observe 52% de réponses positives, 7% de réponses douteuses et 41% de
réponses négatives (tableau XX).
L’ensemble des laboratoires a mis en évidence la présence des IgM.
Les résultats quantitatifs sont présentés dans les tableaux XXI et XXII.
Dosage des IgG anti-cardiolipines - Echantillon 1412
Marqueur IgG
Négatif
Chimiluminescence
DIASORIN LIAISON Cardiolipin IgG
MENARINI ZENIT RA Cardiolipin IgG
Immuno-enzymologie
18
Autre
BIOADVANCE ELISA anti-cardiolipide IgG
1
BIORAD Anti-Cardiolipin IgG EIA
BMD/THERADIAG Cardio Chorus IgG
1
BMD/THERADIAG Cardio LISA IgG
IBL Cardiolipin IgG ELISA (réf : RE75011)
3
1
12
X-MAP
1
1
Total général
19
Douteux
2
1
1
1
1
3
Positif
2
1
1
18
1
3
1
2
1
1
9
4
3
1
24
Tableau XX. Résultat qualitatif de la recherche des IgG. anti-cardiolipines - Echantillon 1412.
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Réactif
BIORAD Anti-Cardiolipin IgG EIA
N N* Moyenne
3 3
26,33
3 3
37,87
5 4
13,24
10 8
22,74
10 10
5,97
ET
5,03
0,64
3,21
4,77
0,98
CV
Min
Max
19,11
21
31
1,68 37,5 38,6
24,25 10,96 26
20,98
7
38,6
16,34 4,8
8
Tableau XXI. Dosage des IgG anti-cardiolipine (U/ml) - Echantillon 1412.
Réactif
N N* Moyenne
ET
CV
Min
3 3
114,03
0,59 0,51 113,6
4 4
99,61
19,73 19,81 77,42
8 8
60,59
10,81 17,84
41
8 8
131,63
12,48 9,48
114
Max
114,7
123
80
154
Tableau XXII. Dosage des IgM anti-cardiolipine (U/ml) - Echantillon 1412.
On observe 41,5% de réponses positives, 5% de réponses douteuses et 53,5% de réponses
négatives pour la recherche d’anticorps IgG anti- β2GP1 (tableau XXIII).
Pour l’isotype IgM, deux réponses douteuses ont été rendues contre 27 résultats positifs (tableau
XXIV).
Les résultats quantitatifs sont présentés dans les tableaux XXV et XXVI.
Dosage des IgG anti-β2GP1 - Echantillon 1412
Marqueur IgG
Chimiluminescence
MENARINI ZENIT RA Β2 GLYCOPROTEIN I IgG
Immuno-enzymologie
Autre
BIOADVANCE ELISA Anti-B2GP1 IgG
BIORAD anti-B2 Glycoprotein I IgG EIA Kit
BMD/THERADIAG B2GP1 LISA IgG
BMD/THERADIAG Chorus LISA IgG
PHADIA Varelisa B2 Glycoprotein I (IgG) antibodies
X-MAP
Total général
Négatif
Douteux
22
2
2
1
1
2
3
2
7
1
13
1
22
2
Tableau XXIII. Résultat qualitatif de la recherche des IgG anti-β2GP1 - Echantillon 1412.
Dosage des IgM anti-β2GP1 - Echantillon 1412
Marqueur IgM
Chimiluminescence
MENARINI ZENIT RA Β2 GLYCOPROTEIN I IgM
Immuno-enzymologie
Autre
BIOADVANCE ELISA Anti-B2GP1 IgM
BIORAD anti-B2 Glycoprotein I IgM EIA Kit
BMD/THERADIAG B2GP1 LISA IgM
BMD/THERADIAG Chorus LISA IgM
INOVA QUANTA Lite B2 GPI IgM
PHADIA Varelisa B2 Glycoprotein I (IgM) antibodies
X-MAP
Total général
Positif
1
1
10
1
Douteux
2
Positif
1
1
21
1
2
1
1
1
1
2
2
3
1
9
1
5
3
2
27
Tableau XXIV. Résultat qualitatif de la recherche des IgM anti-β2GP1 - Echantillon 1412.
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6
3
3
17
Réactif
N N*
3 3
3 3
9 7
12 11
Moyenne
92,97
20,67
9,09
4,38
ET
19,28
4,51
2,78
0,90
CV
Min
20,74 77,9
21,82 16
30,64 6,2
20,59
3
Max
114,7
25
97,9
10
Tableau XXV. Dosage des IgG anti-β2GP1 (U/ml) - Echantillon 1412.
Réactif
N N*
9 9
Moyenne
97,78
ET
16,72
CV
17,10
Min
76
Max
127
Tableau XXVI. Dosage des IgM anti-β2GP1 (U/ml) - Echantillon 1412.
On observe 100% de bonnes réponses qualitatives (négatives) pour l’isotype IgG, et une réponse
faussement négative pour l'isotype IgM (tableau XXVII).
Dosage des anticorps anti-prothrombine - Echantillon 1412
Marqueur IgG
Négatif
Immuno-enzymologie
2
1
ORGENTEC Anti-Prothrombin IgG Alégria (réf : ORG 241G)
1
X-MAP
3
3
Total général
5
Marqueur IgM
Immuno-enzymologie
X-MAP
Total général
Négatif Positif
1
1
2
2
1
2
Tableau XXVII. Résultat qualitatif de la recherche des anticorps anti-prothrombine - Echantillon 1412.
C. ANCA/Anti MBG
La répartition des réponses qualitatives sur cet échantillon qui ne contenait pas d’ANCA mais des
AAN est la suivante (tableau XXIII) :
39% de réponses « positives »
25% de réponses « négatives »
36% de réponses « ininterprétable ».
Ce taux de « faux positifs » est vraisemblablement lié à une mécompréhension du masque de saisie.
Celui-ci prévoit 2 paragraphes :
Un paragraphe permettant de rendre les résultats du dépistage des ANCA,
Un paragraphe permettant de signaler la suspicion de la présence d’AAN et de rendre le
résultat de leur dépistage sur Hep2.
De ce fait, en cas de présence uniquement d’anticorps antinucléaires, la présence de ces anticorps ne
doit pas être signalée au niveau du dépistage des ANCA par le choix de la réponse « positive ». Une
réponse « ininterprétable » est prévue à cet effet. La présence d’AAN sera confirmée dans le
paragraphe permettant de rendre les conclusions de la recherche des AAN sur HEp2 et/ou de la
recherche d’ANCA sur formol.
Aucun aspect
Autre aspect atypique
Total général
Ininterprétable
1
6
9
16
Négatif Positif
6
3
2
5
3
9
11
17
Tableau XXIII. Résultat qualitatif du dépistage des ANCA selon les aspects de la fluorescence
- Echantillon 1412.
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La majorité des laboratoires (38) a jugé nécessaire de rechercher des AAN ou ANCA sur formol dont :
- 26 laboratoires qui ont mis en évidence la présence d’AAN
- 1 laboratoire a mis en évidence la présence d’anticorps anti-nucléaires associés à des anticorps PANCA
- 6 laboratoires qui ont répondu « Ininterprétable »
- 5 laboratoires qui n’ont pas rendu de conclusion
Ces conclusions sont classées en fonction du résultat quantitatif du dépistage des ANCA (tableau
XXIX).
Résultat du dépistage ANCA
Ininterprétable
Négatif
Positif
Présence d’AAN
14
6
6
Conclusion
Présence d'AAN
Ininterprétable
associés à des
anticorps P-ANCA
2
4
Pas de
conclusion
1
5
Tableau XXIX. Conclusion rendue à la recherche des AAN selon le résultat qualitatif du dépistage des
ANCA- Echantillon 1412.
Six laboratoires ont répondu que la recherche d’AAN ou d’ANCA sur formol n’était pas utile.
Nous avons recensé 43 réponses pour ces deux anticorps. On observe 100% de bonnes réponses
(négatives) dans les deux cas.
On observe 100% de bonnes réponses (négatives). Un laboratoire n’a pas réalisé la recherche sur cet
échantillon.
D. Commentaires
Concernant les anticorps anti-phospholipides, la remarque pour l’échantillon 1411 page 10 sur
l’influence des modalités de préparation des échantillons sur la dispersion des résultats en intraréactifs du fait d’une sensibilité différente des réactifs est également valable pour cet échantillon 1412.
Concernant les anticorps anti-cytoplasmes des polynucléaires neutrophiles, les résultats sont bons si
on les analyse en tenant compte de la mécompréhension du masque de saisie. Celui-ci sera amélioré
pour palier à ce problème et ainsi faciliter le rendu des résultats ainsi que l’analyse des réponses.
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IV.
Echantillon 1413
-
Absence d’anticorps anti-phospholipides
Présence d’anticorps anti-cytoplasme des polynucléaires de type anti-PR3.
Présence d’anticorps anti-MBG
On observe un résultat faussement positif pour l’isotype IgG obtenu avec le réactif BMD/THERADIAG
PHOSPHO-LISA qui est probablement dû à une erreur de saisi car le titre rendu est de 1 U/ml et le seuil à 15
(tableau XXX).
Marqueur IgG
Total général
Marqueur IgM
Total général
Négatif
2
1
1
4
Positif
1
1
Négatif
2
1
3
Tableau XXX. Tests globaux de recherche des anticorps anti-phospholipides – Echantillon 1413.
b) Recherche des anticorps anti-cardiolipine
On observe 100% de bonnes réponses (négatives) quel que soit l’isotype.
L’ensemble des participants ont rendu la bonne réponse (négatives) quel que soit l’isotype.
On observe 100% de bonnes réponses qualitatives (négatives) quel que soit l’isotype étudié.
C. ANCA/Anti MBG
Parmi les 44 participants, 42 laboratoires ont mis en évidence la fluorescence attendue : fluorescence
cytoplasmique C-ANCA. Un laboratoire a mis en évidence une fluorescence périnucléaire P-ANCA.
On observe un résultat faussement négatif obtenu avec la BIO-RAD Lames ANCA COMBI
éthanol/Formol (tableau XXXI).
La répartition des titres observés est représentée dans la figure 8 : la médiane est à 1/80 avec des
titres allant de 1/20 à 1/320.
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Négatif
Positif
Aucun aspect
1
Aspect cytoplasmique
42
1
Total général
1
43
Tableau XXXI. Résultat qualitatif du dépistage des ANCA selon les aspects de la fluorescence
- Echantillon 1413.
Nombre de réponse
Répartition des titres en inverse de dilution
pour l'aspect cANCA
médiane = 80
15
10
5
0
Total
20
>20
23
40
50
80
160
320
6
5
1
4
1
12
4
2
Figure 8. Titrage des ANCA sur échantillon 1413.
Réactif
N Médiane Min Max
6
40
20
80
3
20
20
80
10
80
20 320
4
80
80 160
Tableau XXXII. Résultats quantitatifs 1413 - IFI (Aspect cytoplasmique).
-41 réponses « Non »
-3 réponses « Oui » dont un laboratoire qui a rendu ininterprétable (il a rendu le dépistage ANCA
positif avec une fluorescence C-ANCA).
Pour les anticorps anti-MPO, on observe un seul résultat faussement positif qui est dû à une inversion
d’échantillon 1411-1413 (tableau XXXIII).
La présence d’anticorps anti-PR3 a été mise en évidence par 42 laboratoires sur 43. Le résultat
faussement négatif est dû à une inversion d’échantillon 1411 – 1413 (tableau XXXIV).
Les résultats quantitatifs des anticorps anti-PR3 sont présentés dans le tableau XXXV.
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Négatif
2
2
14
2
4
2
2
2
2
23
5
2
6
10
3
1
2
42
Chimiluminescence
MENARINI ZENIT RA MPO
ImmunoDot
EUROBIO ANCA DOT
Immuno-enzymologie
X-MAP
Total général
Positif
1
1
1
Tableau XXXIII. Résultat qualitatif de la recherche d’anticorps anti-MPO - Echantillon 1413.
Négatif
Chimiluminescence
INOVA QUANTA Flash PR3
MENARINI ZENIT RA PR3
ImmunoDot
EUROBIO ANCA DOT
Immuno-enzymologie
BIO ADVANCE ELISA Anti-PR3 hn hr IgG (réf : EA 1201-9601-2 G)
INOVA QUANTA Lite PR3 SC
ORGENTEC Anti-PR3 hs (réf : ORG 618)
ORGENTEC Anti-PR3 hs Alégria (réf : ORG 318)
PHADIA / THERMO FISCHER VARELISA PR3 ANCA
X-MAP
Total général
Positif
2
1
1
7
1
2
1
1
1
1
30
2
4
1
1
6
2
2
11
1
3
1
2
42
1
1
1
Tableau XXXIV. Résultat qualitatif de la recherche d’anticorps anti-PR3 - Echantillon 1413.
Réactif
N N* Moyenne ET
CV
Min Max
4 3
82,70
6,32 7,64 32,4 90
6 5
41,64
6,05 14,53 35,7 79,1
11 11
44,29
7,19 16,24 32
54
Tableau XXXV. Dosage des Ac anti-PR3 (U/ml) - Echantillon 1413.
Les 26 participants ont tous mis en évidence l’anticorps anti membrane basale glomérulaire. Le
tableau XXXVI présente les résultats quantitatifs.
Réactif
ORGENTEC anti-GBM Alégria (réf ORG 250)
PHADIA / THERMO FISCHER EliA GBM Well
N
6
5
N*
6
5
Moyenne
87,00
26,60
ET
CV
19,39 22,28
3,05 11,46
Min
59,4
23
Max
113,7
31
Tableau XXXVI. Dosage des Ac anti-MBG (U/ml) - Echantillon 1413.
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D. Commentaires
Concernant les anticorps anti-phospholipides, les résultats sur cet échantillon négatif sont excellents
quelle que soit la spécificité et l’isotype de l’anticorps recherché.
Concernant les ANCA, on observe également de très bons résultats : les rares erreurs sont liées au
pré-analytique.
*****
Rédaction :
Dr S. ALBAREDE - [email protected]
Pharmacien Biologiste
Dr F. FORTENFANT - [email protected]
Laboratoire d’Immunologie - CHU de Toulouse - Hôpital Rangueil
Autorisation du rapport d’essai d’aptitude par le Coordonnateur des programmes :
Dr S. ALBAREDE - [email protected]
Pharmacien Biologiste
*****
PS : Ces documents doivent être archivés selon les recommandations du GBEA (Arrêté du 26 novembre 1999, paru au JO du
11 décembre 1999).
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Pour tout renseignement :
COORDONNATEUR et BIOLOGISTE : Stéphanie ALBAREDE - [email protected]
ADMINISTRATIF : Marie-Christine ONDERBEKE, Tél. : 05.34.51.49.80 - Fax : 01.57.67.25.90 - [email protected]
ADMINISTRATIF et TRAITEMENT STATISTIQUE : Delphine GARIMBAY, Tél. : 05.34.51.49.81 - [email protected]
ASSURANCE QUALITE : Erick SANCHEZ, Tél. : 05.34.51.49.82 - [email protected]
INFORMATIQUE : Philippe GONZALVO - [email protected]
Information :
Les essais d’homogénéité et de stabilité se sont avérés conformes aux modalités décrites dans la procédure de contrôle.
Les documents utilisés pour réaliser ce programme d’inter comparaison (préparation des objets d’essai, détermination des
valeurs indicatives et assignées, traitement statistique, …) sont disponibles sur demande auprès du CTCB.
L’interprétation de ces résultats ne doit pas se faire isolément et doit être rapprochée de ceux obtenus lors des autres
opérations de contrôle effectuées dans le cadre de l’évaluation interne et de l’évaluation externe du laboratoire.
Campagne 2014
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CR QUAL IMMUN 3 - 141 (version finale

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