DRI® General Oxidant-Detect® Test

DRI® General Oxidant-Detect® Test
Diagnostics in vitro
10018528 (kit 6 x 18 ml)
10009958 (kit 2 x 500 ml)
10009971 Kit d’étalons de détection des oxydants généraux (2 x 25 ml)
10009972 Kit de contrôle de détection des oxydants généraux (2 x 25 ml)
Utilisation prévue
En cas de déversement accidentel, nettoyer et éliminer le matériel conformément à la
procédure opérationnelle standardisée de votre laboratoire et aux réglementations locales,
régionales et nationales.
Résumé et explication du test
Si le colis est endommagé lors de la réception, contacter le représentant de votre service
d’assistance technique (les coordonnées du contact figurent au bas de cette notice).
Le test DRI® General Oxidant-Detect® (test de détection des oxydants généraux) est destiné à
détecter l’adultération d’urine par des composés oxydants.
Un programme de test de dépistage d’urine comprend généralement un prélèvement
d’échantillons, un dépistage initial avec dosage immunologique, suivi d’un test de confirmation
pour les échantillons positifs tel que la chromatographie en phase gazeuse couplée à une
spectrométrie de masse (GC/MS).1 De nombreux consommateurs de drogue tentent d’échapper
à la détection en adultérant l’échantillon afin de produire de faux résultats négatifs au cours
du dépistage initial avec dosage immunologique. Les méthodes d’adultération comprennent
notamment la dilution avec de l’eau, la substitution avec un liquide exempt de drogue, l’ajout
de substances que l’on trouve facilement dans une maison (vinaigre, bicarbonate de soude,
déboucheur de canalisations liquide, détergent, par exemple) ou l’altération avec certains
produits chimiques (l’Urine-Aid qui contient du glutaraldéhyde ou le Klear qui contient du
nitrite de potassium, par exemple). Les consommateurs de drogue peuvent par ailleurs altérer
leur pH urinaire (acidité ou alcalinité) pour faciliter et accélérer l’élimination de drogues (la
phencyclidine, les amphétamines, par exemple).
Plusieurs méthodes ont été utilisées pour détecter l’adultération d’urine. Elles comprennent
notamment la prise de la température, la mesure du PH, de la gravité spécifique et de la
concentration de créatinine dans l’échantillon. Les caractéristiques types suivantes doivent
se retrouver dans des urines normales fraîches : température comprise entre 32,5 °C
et 37,7 °C,1 pH compris entre 4,7 et 7,8,2,3 gravité spécifique comprise entre 1,003 g/ml et
1,035 g/ml2,4,5 et concentration de créatinine comprise entre 80 mg/dl et 200 mg/dl.5-8 Si l’un de
ces paramètres se trouve en dehors de la plage de valeurs indiquée, il y a des raisons de penser
que l’échantillon d'urine a été adultéré.
Plusieurs adultérants oxydants du commerce prétendent neutraliser tous les résultats positifs
de dépistage. Les adultérants oxydants les plus fréquemment utilisés sont le nitrite (KlearTM),
le chromate (Urine LuckTM), l’iode, les agents de blanchiment, la peroxydase de raifort/H2O2
(StealthTM). Quand ils sont ajoutés à l’urine, aucun changement significatif n’est constaté au
niveau de l’apparence, du pH, de la gravité spécifique ou de la concentration en créatinine. Au
cours d’un dépistage initial avec dosage immunologique, les échantillons de marijuana adultérés
avec des oxydants peuvent produire un résultat positif, en particulier pour le métabolite issu de
la marijuana (THC). Ils ne peuvent cependant pas être confirmés par GC/MS.9,10
Le test de détection des oxydants généraux peut être effectué sur tout analyseur de chimie
clinique automatique afin de détecter les oxydants. Cette méthode repose sur la réaction
entre le substrat de tétraméthylbenzidine (TMB) et l’oxydant dans l’échantillon, qui produit une
couleur pouvant se mesurer à 660 nm.
Matériau fourni
Réactif de détection des oxydants généraux : contient 2 x 500 ml de 3,31,5,51 tétraméthylbenzidine
dans une solution acide.
Produits supplémentaires nécessaires (vendus séparément) :
Kit d’étalons de détection des oxydants généraux : contient 1 x 25 ml d’étalon négatif et
1 x 25 ml de 200 µg/ml de nitrite dans une solution aqueuse.
Kit de contrôle de détection des oxydants généraux : contient 1 x 25 ml de contrôle négatif
(100 µg/ml de nitrite) et 1 x 25 ml de contrôle positif (300 µg/ml de nitrite) dans une solution
aqueuse.
Prélèvement et manipulation des échantillons
Recueillir les échantillons d’urine dans des récipients en verre ou en plastique. Il convient
d’utiliser des échantillons d'urine frais. Les directives Mandatory Guidelines for Federal
Workplace Drug Testing Programs : Final Guidelines : Notice recommandent de placer en
sûreté dans des unités de réfrigération les échantillons ne subissant pas de test initial dans
les 7 jours suivant leur arrivée au laboratoire. Il faut éviter la congélation et la décongélation
répétées d’un échantillon.
Manipuler tous les échantillons d'urine comme s’ils étaient potentiellement infectieux.12
Procédure de dosage
Pour effectuer ce dosage, il est possible d’utiliser des analyseurs capables de maintenir une
température constante, de pipeter des échantillons, de mélanger des réactifs, de mesurer des
vitesses à 660 nm et de chronométrer la réaction avec précision.
Avant d’effectuer le dosage, se reporter à la fiche de protocoles spécifique à l’analyseur qui
contient des paramètres et/ou des instructions supplémentaires.
Contrôle de la qualité et étalonnage
Il est recommandé aux laboratoires d’utiliser des échantillons de contrôle pour valider
l’étalonnage et pour garantir les performances correctes du dosage. Les contrôles de nitrite
de 100 µg/ml et de 300 µg/ml sont disponibles auprès de Microgenics à cet effet. S'assurer
que les résultats des contrôles s'inscrivent dans les plages spécifiées. Procéder à un nouvel
étalonnage lorsque de nouveaux réactifs sont utilisés ou que les valeurs des contrôles ne sont
pas comprises dans les plages spécifiées. Toutes les exigences de contrôle qualité doivent être
appliquées conformément aux règlements locaux, régionaux et nationaux, ou aux conditions
d’agrément.
Utiliser des étalons négatifs et des étalons de 200 µg/ml pour générer la courbe d'étalonnage.
Résultats
Un étalonnage linéaire est généré pour calibrer le dosage. La plupart des analyseurs de chimie
clinique possèdent un logiciel intégré capable de calculer automatiquement les concentrations
en oxydant sans recourir à des manipulations supplémentaires des données.
Valeurs attendues
Certains oxydants, comme le nitrite, peuvent être générés par le corps humain et excrétés via
l’urine au moyen d’une oxydation enzymatique de l’enzyme d’oxyde nitrique synthase (NOS°).
La plupart du nitrite formé est cependant transformé en nitrate par oxydation. Par conséquent,
la concentration de nitrate issue de l’activité du NOS est beaucoup plus importante que la
concentration de nitrite dans l’urine d’origine humaine. Moshage et. al.13 ont mené une étude
avec des volontaires en bonne santé. Ils ont relevé dans les urines une concentration moyenne
de 61 µg/ml de nitrate et de 0,2 µg/ml de nitrite.
AVERTISSEMENT : Le test General Oxidant-Detect DRI contient <0.2 % d’acide citrique.
Les patients atteints d’une infection urinaire ou qui en présentent les pathologies peuvent avoir
un taux de nitrite compris entre 100 µg/ml et 150 µg/ml.14 Il a été déterminé que les échantillons
d'urine dans lesquels du Klear avait été ajouté contenaient entre 1 900 µg/ml et 15 000 µg/ml de
nitrite.14 Par conséquent, une concentration de nitrite égale ou supérieure à 200 µg/ml dans les
urines est une preuve scientifiquement fondée et tout à fait irréfutable d’une adultération de
l’échantillon au moyen d'une substance contenant du nitrite.
Le réactif contient une solution acide. Porter un vêtement de protection approprié, des gants et
une protection pour les yeux/le visage.
Le chromate est également présent en très faible quantité dans le corps humain. Les
concentrations normales de chrome urinaire sont comprises entre 0,04 µg/ml et 1,0 µg/ml.
Ne pas utiliser le réactif, les étalons et les contrôles au-delà de leur date de péremption.
Limites
Précautions d’emploi et avertissement
Ce test est réservé aux diagnostics in vitro. Les réactifs sont dangereux en cas d’ingestion.
La couleur du réactif peut changer quand il est stocké sur le long terme.
Préparation et stockage des réactifs
Les réactifs sont prêts à l’emploi. Aucune préparation supplémentaire n’est nécessaire. Tous
les composants du dosage, ouverts ou non, sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée
sur leur étiquette lorsqu’ils sont stockés entre 2 °C et 8 °C.Ne pas utiliser les réactifs au-delà
de leur date de péremption.
Ce dosage est optimisé pour déterminer la quantité d’oxydants tels que le nitrite, le chromate
et les oxydants Stealth dans l’urine d’origine humaine. L’azoture de sodium peut provoquer des
interférences avec le dosage et ne doit pas être utilisé comme conservateur pour l’échantillon
d'urine.
Caractéristiques de performances types
Les données de performances types suivantes ont été générées avec un analyseur de chimie
clinique Hitachi 717 :15
Bibliographie
Précision
Les précisions en cours d’analyse et totale ont été évaluées en utilisant la méthode modifiée du
NCCLS. Les résultats suivants ont été obtenus :
En cours d’analyse (n = 120)
Étalon ou
Contrôle
Moyenne ± É-T
(μg/ml)
% VC
1. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs.National Institute
on Drug Abuse. Federal Register Vol. 53, No. 69,11979 (1988).
2. Schumann GB, and Schweitzer SC, 1989, Examination of Urine. In Clinical Chemistry:
Theory, Analysis and Correlation, 2nd Edition, Kaplan LA, and Pesce AJ (Eds.) pp 820-849.
3. Cody GT. Specimen Adulteration in Drug Urinalysis. forensic Science Review. 2, 63
(1990).
4. Tiez, NW, ed. Clinical Guide to Laboratory Test. Philadelphia: WB Sanders, 514 (1990).
5. Edwards C, Fyfe MJ, Liu RH and Walia AS. Evaluation of Common Urine Specimen
Adulteration Indicators. J Anal Toxicol 17, 251 (1993).
6. Murray RL, 1989. Creatinine. In Clinical Chemistry: Theory, Analysis and Correlation, 2nd
Edition, Kaplan LA and Pesce AJ (Eds.) pp 1015-1020.
7. Newkirk RE and Rawnsley HM, Creatinine Clearance, ASCP Check Sample Clinical
Chemistry, No. CC-110, Chicago, 1978, American Society of Clinical Pathologists.
8. Faulkner WR and King JW, Renal Function. In Tietz NW, Ed. Fundamentals of Clinical
Chemistry, 2nd Edition, Philadelphia, 1976, WB Saunders Co, pp 975-1014.
9. ElSohly MA, Femg S, Kopychki WJ, Murphy TP, Jones AB, Davis and D Carr. A Procedure
to Overcome Interference Caused by the Adulterant “Klear” in the GC/MS Analysis of
11-nor-∆9-THC-9-COOH. J Anal Toxicol 21, 240-242 (1997).
10.Fredrick DL. Improved Procedure for Overcoming Nitrite Interference in GC/MS
Procedures for Cannabinoids. J. Anal Toxicol 22, 255-256 (1998).
11.Green LC, Wagner DA, Glogowski J, Skipper PL, Wishnok JS, and SR Tannenenbaum.
Analysis of Nitrate, Nitrite and [15N]Nitrate in Biological Fluids. Anal Biochem 126,
131-138 (1982).
12.Centers for Disease Control/National Institutes of Health Manual Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories. 1988.
13. Moshage H, Kok B, Huizenga J and P Jansen. Nitrite and Nitrate Determinations in
Plasma: A Critical Evaluation. Clin Chem 41, 892-896 (1995).
14.Urry FM, Komaromy-Hiller G, Staley B, Crockett DK, Kushnit M, Nelson G and RE
Struempler. Nitrite Adulteration of Workplace Urine Drug-Testing Specimens I. Sources
and Associated Concentration of Nitrite in Urine and Distinction Between Natural
Sources and Adulteration. J Anal Toxicol 22, 89-95 (1998).
15.Données détenues par Microgenics Corporation, filiale de Thermo Fisher Scientific.
Précision totale (n = 120)
Moyenne ± É-T
(μg/ml)
% VC
100 μg/ml
84,8 ± 2,1
2,4
84,8 ± 2,7
3,2
200 μg/ml
199,3 ± 2,9
1,5
199,3 ± 3,6
1,8
300 μg/ml
322,1 ± 3,8
1,2
322,1 ± 5,8
1,8
Sensibilité
La sensibilité, définie comme étant la plus faible concentration de nitrite pouvant se différencier
de l’étalon négatif avec 95 % de confiance, est de 2,65 µg/ml.
Spécificité
La spécificité est définie comme étant la plus faible concentration d’oxydant qui produit
un résultat égal ou supérieur à 200 µg/ml de nitrite. Le tableau suivant dresse une liste des
oxydants et des concentrations qui produisent un résultat positif lors du dosage.
Oxydant
Concentration
Chrome
50 μg/ml
Agent de blanchiment
2%
Iode
0,2 %
Peroxydase
50 U/ml
Interférence
L’interférence des substances suivantes dans l’urine a été étudiée. Aucune interférence n’a été
observée quand les échantillons d'urine ont été enrichis avec les substances suivantes jusqu’à
la concentration indiquée.
Composé
Albumine
Acide ascorbique
Créatinine
Galactose
Glucose
Hémoglobine*
Riboflavine**
Urée
Concentration
500 mg/dl
5 mg/dl
250 mg/dl
10 mg/dl
3 000 mg/dl
300 mg/dl
7,5 mg/dl
6 000 mg/dl
* L ’hémoglobine provoque une interférence dans le dosage à 100 mg/dl en présence d’un agent de blanchiment ou
d’iode.
** La riboflavine provoque une interférence dans le dosage à 5 mg/dl en présence d’un agent de blanchiment.
Précision et corrélation
Au total, 93 échantillons d'urine adultérés avec des oxydants ont été testés grâce au test de
détection des oxydants généraux et à une méthode du commerce à titre de référence. Les
résultats comparatifs des deux méthodes ont montré une concordance de plus de 95 % avec
la méthode de référence.
Microgenics Corporation
46500 Kato Road
Fremont, CA 94538 USA
Service clientèle et assistance
technique américains :
1-800-232-3342
Microgenics GmbH
Spitalhofstrasse 94
D-94032 Passau, Germany
Tel: +49 (0) 851 886 89 0
Fax: +49 (0) 851 886 89 10
Pour obtenir des mises à jour concernant cette notice, consulter le site Web :
www.thermoscientific.com/diagnostics
10009957-5-FR
2015 10
2