psp / tfd premium

PSP / TFD PREMIUM
INACTIVATION PAR UN NOUVEAU NETTOYANT ALCALIN (TFD PREMIUM)
SELON LE PROTOCOLE STANDARD PRIONS EN VIGUEUR
Sommaire
1. INTRODUCTION ..................................................................................................... 2
2. MATERIELS & METHODES .................................................................................... 3
3. RESULTATS ............................................................................................................ 3
3.1. Evaluation in vitro du TFD Premium selon le PSP en vigueur .............................. 3
3.2. Evaluation in vivo du TFD Premium selon le PSP en vigueur .............................. 4
4. CONCLUSION ......................................................................................................... 5
5. REFERENCES ........................................................................................................ 6
nombre de pages dont celle-ci : 6
Résumé
Le risque iatrogène associé à la maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ) est clairement
identifié depuis de très nombreuses années. Une liste de produits inactivants totaux
est proposée par l’Agence Nationale de Sécurité des Médicaments et produits de
santé (ANSM) depuis 2011 pour prévenir ce risque. Mais ce protocole a ses limites
avec la plupart des traitements qui ne sont que partiellement efficaces voire
inefficaces aussi bien sur la souche recommandée que sur les prions humains. Par
ailleurs, celui-ci ne prend pas en compte l’évolution des connaissances sur d’une
part les techniques ultrasensibles de détection et d’autre part sur les amyloïdoses où
un nouveau risque de transmission secondaire inter-humaine n’est pas exclu. Nous
avons appliqué le protocole en vigueur. Notre produit, le TFD Premium, utilisable en
laveur désinfecteur d’instruments (1% 10 minutes 55°C) répond à celui-ci.
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1. INTRODUCTION
À ce jour, même si le nombre de cas cliniques de la forme variante de la maladie de
Creutzfeldt-Jakob (vMCJ) reste faible au regard de l’exposition de la population
humaine à l’agent de l’encéphalopathie spongiforme bovine, l'existence de nombreux
cas asymptomatiques est fortement suspectée et l'infectiosité associée avec le sang
et d'autres tissus périphériques justifie la recherche de nouvelles formulations
et procédés
compatibles
capables
d'éradiquer
le
risque
de
transmission
secondaire des prions via les dispositifs médicaux et la transfusion sanguine (Gill et
al., 2013 ; Chen et al., 2014). Les risques avérés de transmission iatrogène de la
MCJ sporadique et l’absence de diagnostic ante-mortem de cette maladie imposent
également des contraintes de décontamination des dispositifs médicaux en milieu
hospitalier. Les autorités françaises de santé publique sous l’égide de l’ANSM ont
établi une liste de produits inactivant totaux vis-à-vis des prions, répondant au
Protocole
Standard
Prions (PSP).
Celui-ci
est
essentiellement
basé
sur
l’inactivation des prions 263K (souche de tremblante du mouton adaptée au
hamster). La littérature rapporte que l’efficacité des procédures d’inactivation dépend
du type de prion (ou souche) et de l’espèce hôte auxquelles elles s’adressent (Giles
et al., 2008). Par ailleurs, une étude très récente vient remettre en cause la liste des
produits publiée par l’ANSM : ceux-ci devraient pourtant revendiquer une inactivation
totale vis-à-vis des prions. En effet, 5 traitements chimiques sur 6 n’inhibent que
partiellement ou sont parfaitement inopérants vis-à-vis de l’amplification acellulaire
des prions humains (Belondrade et al., 2016).
Nous avons appliqué le protocole en vigueur (PSP) pour évaluer les performances
du TFD Premium à 1% pendant 10 minutes à 55°C d’une part et d’autre part
complété notre dossier par des études complémentaires sur des souches humaines
(cf rapports PCEA1 / TFD Premium, PCEA 2 / TFD Premium et Compatibilité / TFD
Premium).
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2. MATERIELS & METHODES
Afin d’évaluer les performances des produits et procédés revendiquant une activité
vis-à-vis des prions, un protocole de référence (PSP), a été mis au point puis publié
en novembre 2011, sous l’égide de la Direction Générale de la Santé et de l’ANSM
(protocole complet en ligne, ANSM 2011).
En résume, pour les études in vitro, il est demandé de valider les résultats sur la
souche 263K adsorbée sur une tige métallique d’une part et directement en
suspension d’autre part, et sur au moins une souche bovine ou humaine : nous
avons choisi la souche humaine vMCJ adaptée à la souris transgénique tg650
exprimant la PrP humaine (Beringue et al., 2008). Les deux traitements
comparateurs contrôles sont la soude (NaOH, 1N, 1h à 20°C) et l’hypochlorite de
sodium (NaOCl, 20 000 ppm, 1h à 20°C). Le traitement d’efficacité partielle est la
soude (NaOH, 0.1N, 15 min à 20°C).
Pour les études in vivo, la souche retenue est la tremblante adaptée au hamster
(263K) adsorbée sur une tige métallique. Une gamme de dilution sériée de 10 en 10
est préparée pour calculer la réduction logarithmique du titre infectieux apparent. Des
tiges contaminées avec la plus forte concentration de matériel infectieux sont traitées
soit par les traitements comparateurs à efficacité partielle (NaOH, 0.1 N, 15 min à
20°C) ou totale (NaOH, 1N, 1h à 20°C) soit par le TFD Premium (1%, 10 min à
55°C). Chaque tige est laissée à demeure chez le hamster receveur Les temps de
survie sont directement comparés à la gamme de référence.
3. RESULTATS
3.1. Evaluation in vitro du TFD Premium selon le PSP en vigueur
Selon l’algorithme proposé par le PSP, le test sur surface avec la souche 263K
traitée par le TFD Premium est efficace (absence de signal en western-blot tout
comme pour le traitement soude à efficacité totale). Un test en solution est ensuite
mené pour définir le mécanisme d’action de la dite formulation : le test en solution
avec la souche 263K traitée par le TFD Premium conduit à une élimination et à une
inactivation de la forme PK-résistante de la protéine prion pathologique (absence de
signal en western-blot tout comme pour le traitement soude à efficacité totale).
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Quant à la souche vMCJ/tg650, le test sur la surface traitée par le TFD Premium
conduit également à l’absence de signal en western-blot (tout comme pour le
traitement soude à efficacité totale). Un test en solution est ensuite mené pour définir
le mécanisme d’action de la dite formulation : le test en solution avec la souche
vMCJ traitée par le TFD Premium conduit à une élimination et à une inactivation de
la forme PK-résistante de la protéine prion pathologique (tout comme pour le
traitement soude à efficacité totale).
Le TFD Premium en conditions in vitro sur une souche de tremblante adaptée au
hamster (263K) et sur une souche humaine (vMCJ/tg650) a conduit à déterminer les
performances du dit-produit comme étant éliminant et inactivant par l’absence de
signal PrP détectable par la technique de western-blot. Dans ces conditions, le TFD
Premium (1%, 10 min, 55°C) est au moins aussi efficace que la soude (1N, 1h,
20°C).
3.2.
Evaluation in vivo du TFD Premium selon le PSP en vigueur
Les résultats à 350 jours post-implantation de la tige chez le hamster receveur sont
présentés dans le tableau suivant.
Tableau : temps de survie des hamsters sensibles à la souche 263K implantés par des tiges
préalablement contaminées et traitées selon le PSP en vigueur.
Nombre
Période
Taux de
Facteur de
d’animaux
d’incubation ±
transmission
réduction
morts / total
écart-type (jours)
de la maladie
(log10)
d’animaux
Gamme contrôle estimée
10
-1
4/4
112 ±
7
100%
10
-2
4/4
110 ±
4
100%
10
-3
4/4
133 ± 47
100%
10
-4
7/8
165 ± 35
88%
10
-5
2/8
219 ± 124
25%
10
-6
2/7
232 ± 129
29%
10
-7
0/5
301 - 350*
0%
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Traitements comparateurs
NaOH 1N 20°C 1h
0/10
85-350*
0%
> 6.40
NaOH 0.1N 20°C 15 min
6/11
277 ± 78
55%
5.34
0/22
211-350*
0%
> 6.40
Tige homogénat sain
0/4
296-350*
0%
-
Sans tige
0/1
337
0%
-
Formule à tester :
TFD PREMIUM
1% 10 min 55°C
Témoins négatifs
*en l’absence de signes cliniques et de PrP
res
dans le cerveau des animaux analysés, les temps de
survie lors de l’euthanasie sont indiqués.
Les tiges métalliques contaminées par la souche 263K puis traitées par le TFD
Premium ne permettent plus la transmission de la maladie aux animaux. Le TFD
Premium est au moins aussi efficace que le traitement soude 1N.
4. CONCLUSION
Le TFD Premium utilisable en laveur-désinfecteur à 1%, pendant 10 minutes et à
55°C répond à l’algorithme proposé et peut ainsi prétendre à revendiquer le
caractère d’inactivant total selon le PSP en vigueur.
Pour les autorités françaises, le dossier du TFD Premium a été déposé à l’ANSM.
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5. REFERENCES
http://ansm.sante.fr/Dossiers/Creutzfeldt-Jakob-et-produits-de-sante/ProtocoleStandard-Prion-lutte-contre-les-infections-liees-aux-soins/(offset)/0
Belondrade M, Nicot S, Béringue V, Coste J, Lehmann S, Bougard D. (2016). Rapid
and Highly Sensitive Detection of Variant Creutzfeldt - Jakob Disease
Abnormal Prion Protein on Steel Surfaces by Protein Misfolding Cyclic
Amplification: Application to Prion Decontamination Studies. PLoS
One.;11(1):e0146833.
Beringue, V., Le Dur, A., Tixador, P., Reine, F., Lepourry, L., Perret-Liaudet, A., Haik,
S., Vilotte, J. L., Fontes, M. and Laude, H. (2008). Prominent and persistent
extraneural infection in human PrP transgenic mice infected with variant CJD.
PLoS One, 3, e1419.
Chen CC, Wang YH. (2014). Estimation of the exposure of the UK population to the
bovine spongiform encephalopathy agent through dietary intake during the
period 1980 to 1996. PLoS One.;9(4):e94020.
Gill ON, Spencer Y, Richard-Loendt A, Kelly C, Dabaghian R, Boyes L, Linehan J,
Simmons M, Webb P, Bellerby P, Andrews N, Hilton DA, Ironside JW, Beck J,
Poulter M, Mead S, Brandner S. Prevalent abnormal prion protein in human
appendixes after bovine spongiform encephalopathy epizootic: large scale
survey. BMJ. 2013 Oct 15;347:f5675.
Les travaux ont été réalisés dans les laboratoires de l’UR892 Virologie
Immunologie Moléculaires, à l’INRA de Jouy-en-Josas, France et à l’INIA de
Madrid, Espagne.
Guillaume Fichet, PhD
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