syphagen TPHA AUTO REC plus

Transcription

READ HIGHLIGHTED CHANGES
Indirect hemagglutination test for the detection of specific antibodies to
Treponema pallidum in human serum or plasma using the OLYMPUS
R
PK7200 .
Summary
Syphilis, one of the most important sexually transmitted diseases worldwide, is caused by the Treponema pallidum infection.
However, it can also be transmitted congenitally by transplacental passage of T. pallidum to the foetus and by blood
transfusion. The serological diagnosis of syphilis is performed demonstrating the presence of specific antibodies to T. pallidum.
TPHA, the hemaglutination treponemal test par excellence has the advantage of the higher sensitivity but the antigenic
similarity between T. pallidum and other non pathogenic treponemes can give some cross reactions to the test that will be
reported as false positive results. For the screening of a high number of samples it is necessary to use a test with a good level
of specificity in order to reduce the number of non productive tests (samples that give positive result with the screening test and
negative with the confirmatory test).
The antigens used until now to manufacture the treponemal tests have been obtained from testicular rabbit tissue culture and
were a mixture of treponemal antigens and tissue debris that occasionally produce non-specific results. The syphagen TPHA
AUTO REC plus reagent uses a combination of recombinant antigens that give high specificity to the test since cross reactions
due to others saprophytic or pathogen treponemes can be removed without decreasing the sensitivity of the test.
Principle
The syphagen TPHA AUTO REC plus is a TPHA test for detection of antibodies to T. pallidum. The reagent is a suspension of
stabilized chicken erythrocytes coated with p15, p17 and p47 T. pallidum antigens obtained from cellular culture of recombinant
Escherichia coli and subsequent purification. In combination with these three antigens, another recombinant protein
(patent pending) has been added to increase the sensitivity of the test.
Components
REF 3000-5709.
a)
b)
c)
d)
Antigen reagent: 5 x 40 ml.
Suspension of sensitized chicken erythrocytes. Ready to use.
Diluent solution: 5 x 500 ml.
Phosphate buffered saline solution containing soluble components of T. Reiter and stabilizing agents.
Positive control: 1 x 15 ml.
Immune rabbit serum.
Negative control: 1 x 15 ml.
Diluted normal human serum.
All reagents contain < 0.1% sodium azide.
Precautions
syphagen TPHA AUTO REC plus is intended for IN VITRO diagnostic use.
The reagents contain sodium azide as a preservative. Sodium azide may react with lead or copper pipes and plumbing creating
highly explosive metal azides. Flush drains with water thoroughly after disposing of the remains of reagents.
Do not interchange reagents from different lots.
The microplates must be cleaned before use following manufacturer instructions.
All human source material used in the preparation of this product was found to be negative for the presence of HIV -1/HIV2 and HCV antibodies, as well as for the hepatitis B surface antigen, using a method approved by the Food and Drug
Administration (USA).
WARNING: POTENTIALLY BIOHAZARDOUS MATERIAL.
Because no test method can offer complete assurance of the absence of infectious agents, this product should be handled
with caution.
Dispose all used materials in a suitable biohazardous waste container.
BIOKIT, S.A. - www.biokit.com
Can Malé s/n - 08186 Lliçà d'Amunt - Barcelona - Spain
3800-3588
R01 04/15
20
Hazard class
Not classified.
Hazard statements
None.
Precautionary statements
P280: Wear protective gloves/protective clothing/eye protection/face protection.
P305+351+338: IF IN EYES rinse cautiously with water for several minutes. Remove contact lenses, if present and easy to do.
Continue rinsing.
1
Storage
References
The reagents will remain stable until the expiration date shown on the label if stored between 2-8°C. Do not freeze.
1.
Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. CDC/NIH manual, 5th Edition, 2007.
Material required not provided
2.
Garner MF, Backhouse JL, Daskalopoulos G, Walsh JL. The Treponema pallidum Haemagglutination (TPHA) in Biological
False Positive and Leprosy Sera. J Clin Path 26: 258-260, 1973.
-
3.
Hagedorn HJ, Naumann P. Moderne Serodiagnostik der Syphilis. Dtsch med Wschr 104: 209-214, 1979.
4.
Larsen SA, Hambie EA, Pettit DE, Perryman MW, Kraus SJ. Specificity, Sensitivity, and Reproducibility Among the
Fluorescent Treponemal Antibody-Absorption Test, the Microhemagglutination Assay for Treponema pallidum Antibodies,
and the Hemagglutination Treponemal Test for Syphilis. J Clin Microbiol 14: 441-445, 1981.
5.
Mathieu-Nafissi S, Kacenelen R, Aymard J-P, Muller M-C, Krebs G, Specht D. Choix d’un Réactif TPHA pour usage sur
PK 7200 d’Olympus. La Gazette de la Transfusion 133: 67-69, 1997.
Although serum is the specimen of choice for all tests for syphilis, for screening purposes in blood banks, EDTA plasma
samples may be used. Other anticoagulants should be evaluated before use. Plasma can be stored at 2-8°C for 8 days.
6.
Rathlev T. Haemagglutination Test Utilizing Pathogenic Treponema pallidum for the Sero-diagnosis of Syphilis.
Brit J Vener Dis 43: 181-185, 1967.
Serum:
7.
Sequeira PJL, Eldridge AE. Treponemal Haemagglutination Test. Brit J Vener Dis 49: 242-248, 1973.
Use fresh serum. Serum can be stored at 2-8°C for 8 days. For longer periods serum samples should be frozen
(-20°C).
8.
Tomizawa T. Hemagglutination Tests for Diagnosis of Syphilis. A preliminary report. Jap J Med Sci Biol 19: 305-308, 1966.
9.
Tomizawa T, Kasamatsu S, Yamaya S. Usefulness of the Hemagglutination Test Using Treponema pallidum Antigen
(TPHA) for the Serodiagnosis of Syphilis. Jap J Med Sci Biol 22: 341-350, 1969.
OLYMPUS «green» type microplates.
OLYMPUS PK7200 automated pretransfusion blood testing system.
Automatic pipettes.
Sample collection
Plasma:
PROCEDURE
Quality control:
Allow reagents to reach room temperature. Ensure that antigen reagent is thoroughly resuspended.
Include the positive and negative controls in each series of samples. The positive control shou ld give a weak positive
reaction. If expected results are not obtained, do not use the kit.
OLYMPUS PK7200 is a trademark of the Olympus Corporation.
R
Directions for use
The PK7200 analyzer is a programmable instrument whose operations are controlled by the Test Parameter Files
defined and established by the user. Validated parameters may be incorporated with routine operating files or defined
in a separate file. For complete details on the set up and operations of the OLYMPUS PK7200, please refer to the
Operator’s Manual.
Olympus PK7200 Application:
Dispensing condition
1st Reagent volume
Sample
Diluent
Sample/Diluent ratio
Diluted sample volume
Plate well
Reaction time
Reaction temperature
Dynamic range set
Thresholds
Threshold set
Limit set
LIA selection
Decision logic number
Decision logic
Panel set
Decision logit set
P
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
6
3
1 POS +
2 NEG 3 IND ?
Plasma
Diluent
35 µl
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
97/1000
15 µl
16 µm
60 minutes
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
Low 0 - 999 High
Low 12 - 13 High
(+) Limit 23 - 17 (-) Limit
(+) Limit 205 - 75 (-) Limit
Middle
Ratio
97
1000
Volume
35 µl
360 µl
The most important parameter resulting from the image analysis system is SPC.
2
19
Interpretação dos resultados
Interpretation of the results
Os resultados vêm determinados pelos umbrais dos parâmetros previamente definidos no Olympus PK7200. A decisão lógica
usada pelo Olympus PK7200 para a interpretação dos resultados é a seguinte:
Results are determined by the threshold parameters defined previously in the Olympus PK7200. The decision logic used for the
Olympus PK7200 for the interpretation of the results is the following:
Resultados
Positivos
Negativos
Indeterminados
SPC
P/C
LIA
Results
SPC
P/C
LIA
+
+ ou ?
+ ou ?
Positive
+
+ or ?
+ or ?
-
- ou ?
- ou ?
Negative
-
- or ?
- or ?
+
-
-
+
-
-
+
-
+
+
-
+
+
+
-
+
+
-
-
+
+
-
+
+
-
+
-
-
+
-
Indeterminate
-
-
+
-
-
+
?
+, -, ou ?
+, -, ou ?
?
+, -, or ?
+, -, or ?
Se uma amostra de plasma é positiva ou indeterminada no screening inicial, a prova deve repetir-se usando uma amostra de
soro e, se se obtém o mesmo resultado, a amostra deve se considerar positiva de anticorpos anti-T. pallidum e deve se
confirmar utilizando um teste confirmatório. Se a amostra repetida é negativa, deve se considerar negativa de anticorpos antiT. pallidum (ver limitações do procedimento).
If a plasma specimen is positive or indeterminate on initial screening, the test should be repeated using a serum specimen and
if same result is obtained the sample should be considered positive for antibodies to T. pallidum and should be confirmed by
using a confirmatory test. If repeated sample is negative it should be considered negative for antibodies to T. pallidum (see
limitations of the procedure).
Um resultado positivo indica a presença de anticorpos anti-T. pallidum, que resultam de uma infecção passada ou presente. Um
resultado negativo indica a ausência de anticorpos anti-T. pallidum (ver as limitações do procedimento).
A positive result indicates the presence of antibodies to T. pallidum, resulting from a past or present infection. A negative result
indicates the absence of antibodies to T. pallidum (see limitations of the procedure).
Limitações do procedimento
Limitations of the procedure
-
-
-
Se bem que o soro é a amostra geralmente escolhida para todos os testes de sífilis, também podem ser utilizadas
amostras de plasma EDTA para screening em bancos de sangue. Não obstante e, dado que se observa uma relativa
incidência de reações falsamente positivas, deve-se repetir o teste daquelas amostras que, inicialmente, derem resultado
positivo ou indeterminado, utilizando, neste caso, o soro do paciente, assim como para qualquer prova confirmatória
posterior.
Os anticorpos específicos podem persistir durante um longo período de tempo, inclusive após o tratamento da doença.
Para avaliar a resposta ao tratamento, recomenda-se utilizar testes reagínicos (RPR reditest).
A técnica TPHA pode apresentar reações cruzadas com outras formas de infecções treponêmicas e apresentar reações
falsamente positivas com amostras de pacientes afetados por mononucleose, lepra e doenças auto-imunes, além de
indivíduos adictos às drogas.
Ocasionalmente, nos estados iniciais da sífilis, os anticorpos específicos não podem ser detectados pela técnica de TPHA.
Características funcionais
3593 amostras de plasma de doadores de banco de sangue previamente caracterizadas como negativas, se
comprovaram com o syphagen TPHA AUTO REC plus num Olympus PK7200. A especificidade inicial foi de 99,44%,
5 amostras foram classificadas como positivas e 15 amostras como indeterminadas. Uma vez repetidas estas amostras,
a especificidade foi de 99,89%.
-
Although serum is the specimen of choice for all tests for syphilis, for screening purposes in blood banks, EDTA plasma
samples may be used. However, some incidence of false positive reactions has been reported. Therefore, serum must be
used for all repeat testing of initial positive or indeterminate results obtained from plasma samples and for any further
confirmatory testing.
Specific antibodies may persist for a long period of time, even after successful treatment of the disease. In order to assess
the response to treatment, the use of a reagin test (e.g. RPR reditest) is recommended.
The TPHA technique can give cross reactions with other forms of treponemal infections and false positive reactions with
samples from patients with infectious mononucleosis, leprosy, autoimmune diseases and drug addiction.
Occasionally, in early primary syphilis, the specific antibodies could not be detected by the TPHA technique.
Performance characteristics
3593 negative plasma samples from blood bank donors previously characterized were tested on the Olympus PK7200 with
the syphagen TPHA AUTO REC plus. The initial specificity found was 99.44%, 5 samples were reported as positive and
15 samples as indeterminate. Once repeated these samples, the specificity found was 99.89%.
References
See "References" at the end of the package insert.
Bibliografia
Veja "References" no fim deste folheto.
18
3
LEER CAMBIOS SOMBREADOS
Conservação
Test de hemaglutinación pasiva para la detección de anticuerpos
específicos anti-Treponema pallidum en suero o plasma humano utilizando
R
el OLYMPUS PK7200 .
Material necessário não incluído
Sumario
La sífilis, una de las enfermedades de transmisión sexual más importantes en todo el mundo, está causada por la infección
por Treponema pallidum. Sin embargo, el T. pallidum puede también transmitirse congénitamente al feto a través de la
placenta y por transfusión sanguínea. El diagnóstico serológico de la sífilis se realiza demostrando la presencia de anticuerpos
específicos anti-T. pallidum.
El TPHA, el test treponémico de hemaglutinación por excelencia, tiene como ventaja su alta sensibilidad, pero la similitud
antigénica entre el T. pallidum y otros treponemas no patógenos puede producir algunas reacciones cruzadas que se
informarán como resultados falsos positivos. Para el screening de un gran número de muestras es necesario utilizar una
prueba con un buen nivel de especificidad para reducir el número de tests no productivos (muestras que dan resultado falso
positivo con el test de screening y negativo con el test confirmatorio).
Los antígenos usados hasta ahora para fabricar los tests treponémicos se han obtenido de cultivo en tejido testicular de
conejo y eran una mezcla de antígenos treponémicos y de restos de tejidos que ocasionalmente producían resultados
inespecíficos. El syphagen TPHA AUTO REC plus utiliza una combinación de antígenos recombinantes que dan al test una
gran especificidad, ya que las reacciones cruzadas debidas a otros treponemas saprofitos o patógenos son eliminadas sin
reducir la sensibilidad del mismo.
Principio
El syphagen TPHA AUTO REC plus es un test de TPHA para la detección de anticuerpos anti-T. pallidum. El reactivo es una
suspensión de hematíes de pollo estabilizados y sensibilizados con los antígenos p15, p17 y p47 del T. pallidum, obtenidos de
cultivo celular de Escherichia coli recombinante y subsiguiente purificación. En combinación con estos tres antígenos, se ha
añadido otra proteína recombinante (patente pendiente) para aumentar la sensibilidad del test.
Componentes
Os reativos permanecem estáveis até a data de validade indicada na etiqueta, se forem conservados entre 2-8°C. Não congelar.
-
Microplacas OLYMPUS de tipo «verde».
Sistema automatizado de análise de sangue pré-transfusão OLYMPUS PK7200.
Pipetas automáticas.
Coleta da amostra
Plasma:
Se bem que o soro é a amostra geralmente escolhida para todos os testes de sífilis, também podem ser utilizadas amostras
de plasma EDTA para screening em bancos de sangue. Outros tipos de anticoagulantes devem ser testados antes de serem
usados. O plasma pode ser conservado por 8 dias entre 2-8°C.
Soro:
Utilizar soro fresco. O soro pode ser conservado por 8 dias entre 2-8°C. Para guardar por um período mais longo os soros
devem ser congelados (-20°C).
PROCEDIMENTO
Controle de qualidade:
Deixar que os reativos alcancem a temperatura ambiente. Comprovar que o reativo antígeno esteja bem ressuspendido.
Incluir o controle positivo e o controle negativo em cada uma das séries de amostras. O controle positivo deveria dar uma reação
positiva débil. Se os resultados esperados não são obtidos, não utilizar o kit.
Indicações de uso
O analisador PK7200 é um instrumento programável cujas operações são controladas pelos ficheiros de parâmetros de teste
que o usuário definiu e estabeleceu anteriormente. Os parâmetros validados podem se incorporar aos ficheiros de operações
rotineiras ou definirem-se num ficheiro independente. Se deseja mais informação sobre a configuração e o funcionamento do
OLYMPUS PK7200, consulte o manual do fabricante.
Aplicação OLYMPUS PK7200:
REF 3000-5709.
Todos los reactivos contienen < 0,1% de azida sódica.
1st Reagent volume
Sample
Diluent
Plate well
Reaction time
Precauciones
Dynamic range set
a)
b)
c)
d)
Reactivo antígeno: 5 x 40 ml.
Suspensión de hematíes de pollo sensibilizados. Listos para su uso.
Solución diluyente: 5 x 500 ml.
Tampón fosfato salino que contiene componentes solubles de T. Reiter y agentes estabilizadores.
Control positivo: 1 x 15 ml.
Suero de conejo inmune.
Control negativo: 1 x 15 ml.
Suero humano negativo diluido.
syphagen TPHA AUTO REC plus es sólo para el diagnóstico IN VITRO.
Los reactivos contienen azida sódica como conservante. La azida sódica puede reaccionar con tuberías y desagües de plomo
o cobre dando lugar a azidas metálicas altamente explosivas. Al desechar los restos de reactivos, deje correr agua abundante.
No intercambiar reactivos de lotes diferentes.
Limpiar las microplacas antes de usarlas siguiendo las instrucciones del fabricante.
Todo el material de origen humano utilizado en la preparación de este producto ha sido encontrado negativo a la presencia de
anticuerpos de los virus HIV-1/HIV-2 y HCV, así como a la del antígeno de superficie de la hepatitis B, utilizando un método
aprobado por la Food and Drug Administration (USA).
ATENCIÓN: MATERIAL DE RIESGO BIOLÓGICO.
Ya que ningún método puede ofrecer la total seguridad de la ausencia de agentes infecciosos, este producto debe manejarse
con precaución.
Depositar todos los materiales usados en recipientes adecuados para material biocontaminante.
Clase de peligro
No clasificado.
Indicaciones de peligro
Ninguna.
Consejos de prudencia
P280: Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección.
P305+351+338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar cuidadosamente con agua durante varios minutos.
Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando.
4
Thresholds
Threshold set
Limit set
LIA selection
Decision logic
Panel set
Decision logit set
P
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
6
3
1 POS +
2 NEG 3 IND ?
Plasma
Diluent
35 µl
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
97/1000
15 µl
16 µm
60 minutes
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
Low 0 - 999 High
Low 12 - 13 High
(+) Limit 23 - 17 (-) Limit
(+) Limit 205 - 75 (-) Limit
Middle
Ratio
97
1000
Volume
35 µl
360 µl
O SPC é o parâmetro mais importante que provém do sistema de análise de imagens.
17
LER ALTERAÇÕES DESTACADAS
Conservación
Teste de hemaglutinação passiva para a detecção de anticorpos específicos
anti-Treponema pallidum no soro ou plasma humano utilizando OLYMPUS
R
PK7200 .
Material necesario no incluido
Sumário
A sífilis, uma das doenças de transmissão sexual mais importantes em todo o mundo, é causada pela infeção pelo Treponema
pallidum. No entanto, o T. pallidum pode também transmitir-se congenitamente ao feto através da placenta e por transfusão
sangüínea. O diagnóstico sorológico da sífilis se realiza demonstrando a presença de anticorpos específicos anti-T. pallidum.
O TPHA, o teste treponêmico de hemaglutinação por excelência, tem como vantagem sua alta sensibilidade, mas a similitude
antigênica entre o T. pallidum e outros treponemas não patógenos pode produzir algumas reações cruzadas que se informarão
como resultados falsos positivos. Para o screening de um grande número de amostras é necessário utilizar uma prova com
um bom nível de especificidade para reduzir o número de testes não produtivos (amostras que dão resultado falso positivo
com o teste de screening e negativo com o teste confirmatório).
Os antígenos usados até agora para fabricar os testes treponêmicos se obtiveram de cultivo em tecido testicular de coelho e
eram uma mescla de antígenos treponêmicos e de restos de tecidos que ocasionalmente produziam resultados inespecíficos.
O syphagen TPHA AUTO REC plus utiliza uma combinação de antígenos recombinantes que dão ao teste uma grande
especificidade, já que as reações cruzadas devidas a outros treponemas saprófitos ou patógenos são eliminadas sem reduzir
a sensibilidade do mesmo.
Princípio
O syphagen TPHA AUTO REC plus é um teste de TPHA para a detecção de anticorpos anti-T. pallidum. O reativo é uma
suspensão de hemácias de frango estabilizadas e sensibilizadas com os antígenos p15, p17 e p47 do T. pallidum, obtidos de
cultivo celular de Escherichia coli recombinante e subsequente purificação. Em combinação com estes três antígenos, se
juntou outra proteína recombinante (patente pendente) para aumentar a sensibilidade do teste.
Componentes
REF 3000-5709.
a)
b)
c)
d)
Los reactivos permanecerán inalterados hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, si se conservan entre 2- 8°C. No congelar.
-
Microplacas OLYMPUS de tipo «verde».
Sistema automatizado de análisis pre-transfusión de sangre OLYMPUS PK7200.
Pipetas automáticas.
Recolección de la muestra
Plasma:
Aunque el suero es la muestra de elección para todos los tests de sífilis, pueden utilizarse muestras de plasma EDTA para
screening en bancos de sangre. Otros anticoagulantes deben ser comprobados antes de utilizarse. El plasma puede ser
conservado durante 8 días entre 2-8°C.
Suero:
Usar suero fresco. El suero puede ser conservado durante 8 días entre 2-8°C. Si es por un período de tiempo más largo los
sueros deben ser congelados (-20°C).
PROCEDIMIENTO
Control de calidad:
Dejar que los reactivos alcancen la temperatura ambiente. Asegurarse de que el reactivo antígeno esté bien resuspendido.
Incluir el control positivo y el negativo en cada serie de muestras. El control positivo debe dar una reacción positiva débil. Si no se
obtienen los resultados esperados, no utilizar el kit.
Indicaciones de uso
El analizador PK7200 es un instrumento programable cuyas operaciones están controladas por los ficheros de parámetros del
test que el usuario ha definido y establecido anteriormente. Los parámetros validados pueden incorporarse a los ficheros de
operaciones de rutina o definirse en un fichero independiente. Para más información sobre la configuración y el
funcionamiento del OLYMPUS PK7200, remitirse al manual del fabricante.
Aplicación Olympus PK7200:
Reativo antígeno: 5 x 40 ml.
Suspensão de hemácias de frango sensibilizadas. Pronto para usar.
Solução diluente: 5 x 500 ml.
Tampão fosfato salino que contém componentes solúveis de T. Reiter e agentes estabilizadores.
Controle positivo: 1 x 15 ml.
Soro imune de coelho.
Controle negativo: 1 x 15 ml.
Soro humano normal diluído.
Todos os reativos contêm < 0,1% de azida sódica.
Precauções
syphagen TPHA AUTO REC plus é para o diagnóstico IN VITRO.
Os reativos deste kit contêm azida sódica como conservante. A azida sódica pode reagir com os encanamentos e ralos de
chumbo ou cobre, originando azidas metálicas altamente explosivas. Ao descartar os restos de reativos, fazê-lo em abundante
volume de água.
Não intercambiar reativos de lotes diferentes.
Limpar as microplacas antes de usá-las seguindo as instruções do fabricante.
Todos os materiais de origem humana utilizados na preparação deste produto foram testados e apresentaram resultados negativos
em relação a presença de anticorpos contra os vírus HIV-1/HIV-2 e HCV, assim como para o antígeno de superfície da hepatite B,
utilizando um método aprovado pela Food and Drug Administration (USA).
ATENÇÃO: MATERIAL DE RISCO BIOLÓGICO.
Dado que nenhum método pode oferecer a total segurança da ausência de agentes infecciosos, este produto deve
ser manipulado com precaução.
Descartar todos os materiais usados em recipientes adequados para material bio-contaminante.
Classe de perigo
Não classificado.
Advertências de perigo
Nenhuma.
Recomendações de prudência
P280: Usar luvas de proteção/vestuário de proteção/proteção ocular/proteção facial.
P305+351+338: SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com água durante vários
minutos. Se usar lentes de contato, retire-as, se tal lhe for possível. Continuar a enxaguar.
16
1st Reagent volume
Sample
Diluent
Plate well
Reaction time
Dynamic range set
Thresholds
Threshold set
Limit set
LIA selection
Decision logic
Panel set
Decision logit set
P
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
6
3
1 POS +
2 NEG 3 IND ?
Plasma
Diluent
35 µl
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
97/1000
15 µl
16 µm
60 minutes
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
Low 0 - 999 High
Low 12 - 13 High
(+) Limit 23 - 17 (-) Limit
(+) Limit 205 - 75 (-) Limit
Middle
Ratio
97
1000
Volume
35 µl
360 µl
El SPC es el parámetro más importante que resulta del sistema de análisis de imágenes.
5
Interpretación de los resultados
Interpretazione dei risultati
Los resultados vienen determinados por los umbrales de los parámetros previamente definidos en el Olympus PK7200. La
decisión lógica usada por el Olympus PK7200 para la interpretación de los resultados es la siguiente:
I risultati sono determinati dalle soglie dei parametri previamente definiti nell'Olympus PK7200. La decisione logica utilizzata
dall'Olympus PK7200 per l'interpretazione dei risultati è la seguente:
Resultados
Positivos
Negativos
Indeterminados
SPC
P/C
LIA
Risultati
SPC
P/C
LIA
+
+o?
+o?
Positivi
+
+o?
+o?
-
-o?
-o?
Negativi
-
-o?
-o?
+
-
-
+
-
-
+
-
+
+
-
+
+
+
-
+
+
-
-
+
+
-
+
+
-
+
-
-
+
-
Indeterminati
-
-
+
-
-
+
?
+, -, o ?
+, -, o ?
?
+, -, o ?
+, -, o ?
Si una muestra de plasma es positiva o indeterminada en el screening inicial, la prueba debe repetirse usando una muestra de
suero y si se obtiene el mismo resultado, la muestra debe considerarse positiva de anticuerpos anti-T. pallidum y debe
confirmarse utilizando un test confirmatorio. Si la muestra repetida es negativa, debe considerarse negativa de anticuerpos
anti-T. pallidum (ver limitaciones del procedimiento).
Se un campione di plasma è positivo o indeterminato nello screening iniziale, il test va ripetuto con un campione di siero, e se
si ottiene lo stesso risultato il campione deve essere considerato positivo agli anticorpi anti-T. pallidum e va confermato con un
test di conferma. Se anche il campione ripetuto dà risultato negativo, va considerato negativo agli anticorpi anti-T. pallidum
(vedere le limitazioni della procedura).
Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos anti-T. pallidum, que resultan de una infección pasada o presente. Un
resultado negativo indica la ausencia de anticuerpos anti-T. pallidum (ver limitaciones del procedimiento).
Un risultato positivo indica la presenza di anticorpi anti-T. pallidum, dovuti ad una passata o presente infezione. Un risultato negativo
indica l’assenza di anticorpi anti-T. pallidum (Vedere le limitazioni della procedura).
Limitaciones del procedimiento
Limitazioni della procedura
-
-
-
Aunque el suero es la muestra de elección para todos los tests de sífilis, pueden utilizarse muestras de plasma EDTA
para screening en bancos de sangre. Sin embargo, y puesto que se ha descrito una relativa incidencia de reacciones
falsamente positivas, deberá repetirse el test de aquellas muestras inicialmente positivas o indeterminadas utilizando el
suero del paciente, así como para cualquier prueba confimatoria posterior.
Los anticuerpos específicos pueden persistir durante un largo período de tiempo, incluso después de haberse tratado la
enfermedad. Para evaluar la respuesta al tratamiento, se recomienda hacer uso de los tests reagínicos (RPR reditest).
La técnica TPHA puede dar lugar a reacciones cruzadas con otras formas de infecciones treponémicas y a reacciones
falsamente positivas con muestras de pacientes afectos de mononucleosis, lepra, drogadictos o enfermedades
autoinmunes.
Ocasionalmente, en estados iniciales de sífilis, los anticuerpos específicos no pueden ser detectados por la técnica de
TPHA.
Características funcionales
3593 muestras de plasma de donantes de banco de sangre previamente caracterizadas como negativas, se comprobaron
con el syphagen TPHA AUTO REC plus en un Olympus PK7200. La especificidad inicial fue del 99,44%, 5 muestras
fueron clasificadas como positivas y 15 muestras como indeterminadas. Una vez repetidas estas muestras, la
especificidad fue del 99,89%.
Bibliografía
-
Il siero è il materiale preferito per tutti i test della sifilide, ma può anche essere usato plasma con EDTA per lo screening
nelle emoteche. Nonostante ciò, sono state riscontrate alcune reazioni falsamente positive. I test risultati positivi o
indeterminati effettuati su plasma devono essere ripetuti su siero, e così pure ogni altra prova di conferma successiva.
Anticorpi specifici possono persistere per un lungo periodo di tempo, anche dopo un efficace trattamento farmacologico
contro tale patologia. Per valutare la risposta al trattamento, è raccomandato l’uso di un test reaginico (RPR reditest).
La tecnica TPHA può dare origine a reazioni crociate con altre forme di infezione da Treponema, e reazioni falsamente
positive con campioni provenienti da pazienti affetti da mononucleosi, lebbra, malattie autoimmuni e tossicomani.
Occasionalmente, nello stadio iniziale della patologia, gli anticorpi specifici possono non essere individuati con la tecnica
TPHA.
Caratteristiche di funzionalità
3593 campioni di plasma di donatori di banca del sangue previamente caratterizzati come negativi sono stati verificati con
il syphagen TPHA AUTO REC in un Olympus PK7200. La specificità iniziale è stata del 99,44%, 5 campioni sono stati
classificati come positivi e 15 campioni come indeterminati. Dopo aver ripetuto l'analisi di questi campioni, la specificità è
stata del 99,89%.
Bibliografia
Vedi "References" alla fine del prospetto.
Ver "References" al final del folleto.
6
15
HERVORGEHOBENE ÄNDERUNGEN LESEN
Conservazione
Tutti i reagenti sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta, se conservati a 2-8°C. Non congelare.
Indirekter Hämagglutinationstest zum Nachweis spezifischer Antikörper
gegen Treponema pallidum in Humanserum und –plasma zum
R
automatisierten Einsatz auf den OLYMPUS-Systemen PK7200 .
Materiale necessario non incluso
-
Micropiastre OLYMPUS tipo «verde».
Sistema automatizzato di analisi del sangue prima della trasfusione OLYMPUS PK7200.
Pipette automatiche.
Zusammenfassung
Raccolta dei campioni
Plasma:
Il siero è la matrice preferita per tutti i test della sifilide, ma può essere anche usato plasma con EDTA per lo screening nelle
emoteche. Altri anticoagulanti dovranno essere valutati prima dell’uso. Il plasma può essere conservato a 2-8°C per non più di
8 giorni.
Siero:
Usare siero fresco. Il siero può essere conservato a 2-8°C per non più di 8 giorni; per tempi più lunghi deve essere congelato
(-20°C).
PROCEDURA
Controllo di qualità:
Portare tutti i reattivi a temperatura ambiente. Assicurarsi che il reattivo antigene sia opportunamente risospeso.
Includere il controllo positivo e il controllo negativo in ogni serie di campione. Il controllo positivo deve dare una reazione positiva
debole. Se non si ottengono i risultati sperati, scartare il kit.
Indicazioni per l'uso
Il analizzatore PK7200 è un strumento programmabile le cui operazioni sono controllate dai file dei parametri dei test definiti e
stabiliti precedentemente dall'utente. I parametri convalidati possono essere incorporati ai file di operazioni di routine o essere
definiti in un file indipendente. Per ulteriori informazioni sulla configurazione e sul funzionamento dell'OLYMPUS PK7200,
vedere il manuale del costruttore.
1st Reagent volume
Sample
Diluent
Plate well
Reaction time
Dynamic range set
Thresholds
Threshold set
Limit set
LIA selection
Decision logic
Panel set
Der TPHA, der Hämagglutionationstest für Treponema der Wahl, hat als Vorteil seine hohe Sensitivität, doch die antigene
Ähnlichkeit zwischen dem T. pallidum und anderen nicht pathogenen Treponemen kann einige Kreuzreaktionen hervorrufen,
die als falsch positive Ergebnisse ausgewiesen werden. Für das Screening einer großen Anzahl von Proben ist es erforderlich
einen Test auf einem hohen Niveau der Spezifität zu verwenden, um die Anzahl der unproduktiven Tests zu verringern (Proben,
die beim Screening-Test ein falsch positives Ergebnis bringen und bei dem Bestätigungstest ein negatives).
Die bislang für die Herstellung der Treponemen-Tests verwendeten Antigene wurden aus Hodengewebskulturen von
Kaninchen gewonnen und waren eine Mischung aus treponemischen Antigenen und Gewebsresten, die bisweilen
unspezifische Ergebnisse hervorriefen. Der syphagen TPHA AUTO REC plus benutzt eine Kombination aus rekombinanten
Antigenen, die dem Test eine große Spezifität verleihen, da die durch andere saprophyte oder pathogene Treponemen
zurückzuführenden Kreuzreaktionen beseitigt werden, ohne die Sensitivität desselben zu mindern.
Prinzip
Der syphagen TPHA AUTO REC plus ist ein TPHA-Test zum Nachweis von Antikörpern gegen T. pallidum. Das Reagenz ist
eine Suspension aus Hühnererythrozyten, die mit den Antigenen p15, p17 und p47 des T. pallidum stabilisiert und sensibilisiert
sind, die aus einer Zellkultur rekombinanter und anschließend gereinigter Escherichia coli gewonnen wurden. In Kombination
mit diesen drei Antigenen ist ein weiteres rekombinantes Protein (Patent angemeldet) hinzugefügt worden, um die Sensitivität
des Tests zu erhöhen.
Bestandteile
Applicazione Olympus PK7200:
Die Syphilis, eine der weltweit bedeutendsten durch Geschlechtsverkehr übertragenen Krankheiten, wird durch die Infektion mit
Treponema pallidum verursacht. Allerdings kann das T. pallidum auch erblich über die Plazenta auf den Fötus und durch
Bluttransfusion übertragen werden. Die serologische Diagnose der Syphilis wird durch den Nachweis des Vorhandenseins von
spezifischen Antikörpern gegen T. pallidum gestellt.
Decision logit set
P
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
6
3
1 POS +
2 NEG 3 IND ?
Plasma
Diluent
REF 3000-5709.
35 µl
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
97/1000
15 µl
16 µm
60 minutes
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
a)
b)
c)
d)
Alle Reagenzien enthalten < 0,1% Natriumazid.
Vorsichtsmassnahmen
Low 0 - 999 High
Low 12 - 13 High
(+) Limit 23 - 17 (-) Limit
(+) Limit 205 - 75 (-) Limit
Middle
Ratio
97
1000
Antigenreagenz: 5 x 40 ml.
Suspension aus sensibilisierte Kükenerythrozyten. Gebrauchsfertig.
Diluent: 5 x 500 ml.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung mit löslichen Komponenten von T. Reiter und Stabilisatoren.
Positive Kontrolle: 1 x 15 ml.
Immunreaktives Kaninchenserum.
Negative Kontrolle: 1 x 15 ml.
Verdünntes, negatives Humanserum.
syphagen TPHA AUTO REC plus ist ausschliesslich für die IN VITRO-Diagnostik bestimmt.
Die Reagenzien enthalten Natriumazid als Konservierungsmittel. Natriumazid kann auf Blei- oder Kupfer-Rohrleitungen und
-Abflüsse reagieren und zu hochexplosiven Metallaziden führen. Beim Entfernen der Reagenzreste muss mit genügend Wasser
nachgespült werden.
Komponenten verschiedener Chargennummern nicht zusammen verwenden.
Die Mikrotiterplatten müssen vor der Verwendung unter Beachtung der Anweisungen des Herstellers gereinigt werden.
Das gesamte zur Herstellung dieser Reagenzien verwendete Humanmaterial wurde mit einer von der FDA anerkannten
Methode auf HBsAg, HIV 1/2 und HCV Antikörper untersucht und für negativ befunden.
ACHTUNG: BIOLOGISCH GEFÄHRLICHES MATERIAL.
Da kein Nachweisverfahren die Abwesenheit von infektiösen Agenzien garantieren kann, ist dieses Produkt mit entsprechenden
Vorsichtsmassnahmen zu handhaben.
Alle benutzten Materialien sind separat in Behältern für biologische Abfälle zu entsorgen.
Volume
35 µl
360 µl
Il parametro SPC è il più importante che emerge dal sistema di analisi per immagini.
14
Gefahrenklasse
Nicht eingestuft.
Gefahrenhinweise
Keine.
Sicherheitshinweise
P280: Schutzhandschuhe / Schutzkleidung / Augenschutz / Gesichtsschutz tragen.
P305+351+338: BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang behutsam mit Wasser spülen. Vorhandene
Kontaktlinsen nach Möglichkeit entfernen. Weiter spülen.
7
VEDI CAMBI RISALTATI
Lagerung
Bei einer Lagerungstemperatur von 2-8°C bleiben die Reagenzien bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar.
Nicht einfrieren.
Erforderliches, nicht mitgeliefertes Material
-
OLYMPUS Mikrotiterplatten («Grüne Markierung»).
OLYMPUS PK7200 automatische Bluttestsysteme.
Hubkolbenpipetten.
Test di emoagglutinazione indiretta per la determinazione di anticorpi
specifici anti-Treponema pallidum, nel siero o plasma umano utilizzando
R
l'OLYMPUS PK7200 .
Sommario
Probenmaterial
Plasma:
Obgleich Serum das Probenmaterial der Wahl für alle Syphilistestungen ist, kann zu Screening-Zwecken in Blutbanken
EDTA-Plasma verwendet werden. Andere Antikoagulantien müssen zuvor evaluiert werden. Bei Lagerung zwischen 2-8°C
kann das Plasma 8 Tage verwendet werden.
Serum:
Frisches Serum benutzen. Bei Lagerung zwischen 2-8°C kann das Serum 8 Tage verwendet werden. Bei längerer Lagerung
sollten die Proben eingefroren werden (-20°C).
DURCHFÜHRUNG
Qualitätskontrolle:
Vor Gebrauch sind die Reagenzien auf Raumtemperatur zu bringen und das Antigenreagenz muss gründlich resuspendiert werden.
Vor der Probenanalyse ist die Qualität der Reagenzien mit den beiden, in der Packung enthaltenen Kontrollen zu überprüfen. Die
positive Kontrolle muss eine schwach positive Reaktion ergeben. Sollten die erwarteten Werte nicht erreicht werden, ist die
Packung nicht zu verwenden.
La causa della sifilide, una delle malattie a trasmissione sessuale più importanti del mondo, è un'infezione da Treponema
pallidum. Tuttavia, il T. pallidum può anche essere trasmesso al feto per via congenita attraverso la placenta, e per
emotrasfusione. La diagnosi sierologica della sifilide si esegue riscontrando la presenza di anticorpi specifici anti-T. pallidum.
Il TPHA, test treponemico di emoagglutinazione per eccellenza, ha il vantaggio di avere un'alta sensibilità, ma la somiglianza
antigenica tra il T. pallidum e altri treponemi non patogeni può produrre reazioni crociate che daranno risultati falsi positivi. Per
lo screening di un gran numero di campioni è necessario utilizzare un test dal buon livello di specificità, in modo da ridurre il
numero di tests non produttivi (campioni che danno risultato falso positivo con il test di screening e negativo con il test di
conferma).
Gli antigeni utilizzati finora per fabbricare i tests treponemici venivano ottenuti dalla coltura in tessuto testicolare di coniglio, ed
erano una miscela di antigeni treponemici e di resti di tessuti che occasionalmente davano risultati non specifici. Il syphagen
TPHA AUTO REC plus utilizza una combinazione di antigeni ricombinanti che danno al test una grande specificità, poiché le
reazioni crociate determinate da altri treponemi saprofiti o patogeni vengono eliminate senza ridurre la sensibilità del test.
Principio
Testdurchführung
Il syphagen TPHA AUTO REC plus è un test TPHA per il rilevamento di anticorpi anti-T. pallidum. Il reagente è una
sospensione di globuli rossi di pollo stabilizzati e sensibilizzati con gli antigeni p15, p17 e p47 del T. pallidum, ottenuti tramite
coltura cellulare di Escherichia coli ricombinante e successiva purificazione. In combinazione con questi tre antigeni, è stata
aggiunta un'altra proteina ricombinante (brevetto in sospeso) per aumentare la sensibilità del test.
Die Testparameter der OLYMPUS PK7200-Systeme sind folgendermaßen zu programmieren. Zur genauen Vorgehensweise
der Geräteprogrammierung sei auf das jeweilige Bedienerhandbuch verwiesen.
Componenti
REF 3000-5709.
Applikation Olympus PK7200:
1st Reagent volume
Sample
Diluent
Plate well
Reaction time
Dynamic range set
Thresholds
Threshold set
Limit set
LIA selection
Decision logic
Panel set
Decision logit set
P
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
6
3
1 POS +
2 NEG 3 IND ?
Plasma
Diluent
a)
35 µl
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
97/1000
15 µl
16 µm
60 minutes
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
b)
c)
d)
Tutti i reagenti contengono < 0,1% di sodio azide.
Precauzioni
syphagen TPHA AUTO REC plus è per uso diagnostico IN VITRO.
I reattivi di questo kit contengono sodio azide come conservante. La sodio azide può reagire a contatto con tubature e scarichi
di piombo o in rame, formando azidi metalliche molto esplosive. Far scorrere acqua in abbondanza quando si gettano i residui
dei reagenti.
Non mischiare reattivi di partite diverse.
Pulire le micropiastre prima di usarle, seguendo le istruzioni della fabbrica.
Tutto il materiale di origine umana utilizzato nella preparazione di questo prodotto è risultato negativo per anticorpi dei
virus HIV-1/HIV-2 come pure per l'antigene di superficie dell'epatite B, usando metodi approvati dalla Food and Drug
Administration (USA).
ATTENZIONE: MATERIALE POTENZIALMENTE BIOPERICOLOSO.
Poiché nessun metodo può offrire la totale sicurezza dell’assenza di agenti infettivi, questo prodotto deve essere manipolato
con precauzione.
Depositare tutti i materiali utilizzati in recipienti idonei per materiale biocontaminante.
Low 0 - 999 High
Low 12 - 13 High
(+) Limit 23 - 17 (-) Limit
(+) Limit 205 - 75 (-) Limit
Middle
Ratio
97
1000
Reattivo antigene: 5 x 40 ml.
Sospensione di emazie di pollo sensibilizzate. Pronto all’uso.
Soluzione diluente: 5 x 500 ml.
Tampone fosfato salino, contenente componente solubili di T. Reiter ed agente stabilizzanti.
Controllo positivo: 1 x 15 ml.
Siero di coniglio immune.
Controllo negativo: 1 x 15 ml.
Siero umano negativo diluito
Classe di pericolo
Non classificato.
Indicazioni di pericolo
Nessuna.
Consigli di prudenza
P280: Indossare guanti/indumenti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso.
P305+351+338: IN CASO DI CONTATTO CON GLI OCCHI: sciacquare accuratamente per parecchi minuti. Togliere le
eventuali lenti a contatto se è agevole farlo. Continuare a sciacquare.
Volume
35 µl
360 µl
SPC ist der wichtigste Parameter, der sich aus dem System der Bildanalyse ergibt.
8
13
Interprétation des résultats
Auswertung der Ergebnisse
Les résultats sont déterminés par les seuils des paramètres préalablement définis sur l’Olympus PK7200. La décision logique
utilisée par l’Olympus PK7200 pour l’interprétation des résultats est la suivante :
Die Ergebnisse werden durch die Schwellenwerte der vorab an dem Olympus PK7200 definierten Parameter bestimmt. Die
von dem Olympus PK7200 bei der Auslegung der Befunde benutzte logische Entscheidung ist folgende:
Résultats
Positifs
Négatifs
Indéterminés
SPC
P/C
LIA
+
+ ou ?
+ ou ?
Ergebnissen
Positiven
-
- ou ?
- ou ?
Negativen
+
-
-
+
-
+
+
+
-
-
+
+
-
+
-
Unbestimmten
SPC
P/C
LIA
+
+ oder ?
+ oder ?
-
- oder ?
- oder ?
+
-
-
+
-
+
+
+
-
-
+
+
-
+
-
-
-
+
-
-
+
?
+, -, ou ?
+, -, ou ?
?
+, -, oder ?
+, -, oder ?
Si un échantillon de plasma est positif ou indéterminé dans le screening initial, il faut répéter le test en utilisant un échantillon
de sérum et si on obtient le même résultat, l’échantillon doit être considéré comme positif aux anticorps anti-T. pallidum et doit
être confirmé en utilisant un test confirmatoire. Si l’échantillon répété est négatif, il faut le considérer comme négatif aux
anticorps anti-T. pallidum (voir les limites de la procédure).
Wenn eine Plasmaprobe beim Anfangsscreening positiv oder unbestimmt ist, muss der Test unter Verwendung einer
Serumprobe wiederholt werden und wenn sich dasselbe Ergebnis ergibt, muss die Probe als positiv auf Antikörper gegen
T. pallidum angesehen und muss unter Einsatz eines Bestätigungstests bestätigt werden. Wenn die wiederholte Probe negativ
ausfällt, muss sie als negativ auf Antikörper gegen T. pallidum betrachtet werden (siehe Begrenzung der Methode).
Un résultat positif indique la présence d’anticorps anti-T. pallidum résultant d’une infection passée ou présente. Un résultat
négatif indique l’absence d’anticorps anti-T. pallidum (voir limites de la procédure).
Ein positives Testergebnis zeigt die Anwesenheit von Antikörpern gegen T. pallidum an, was auf eine akute oder
zurückliegende Infektion zurückzuführen ist. Ein negatives Ergebnis schliesst die Anwesenheit entsprechender Antikörper im
Blut aus (siehe Begrenzung der Methode).
Limites de la procédure
-
-
Bien que le sérum soit l’échantillon type pour tous les tests de syphilis, des échantillons de plasma EDTA peuvent être utilisés
pour screening dans les banques de sang. Cependant, certaines réactions peuvent s’avérer faussement positives. Dans ce
cas, on devra renouveler l’expérience avec du sérum sur tous les tests initialement positifs ou indéterminés et pour tous les
tests de confirmation.
Les anticorps spécifiques peuvent persister pendant une longue période, même après un traitement réussi de la maladie.
Afin d’estimer la réponse au traitement, l’emploi d’un test réagine (RPR reditest) est recommandé.
La technique TPHA peut donner des réactions croisées avec d’autres formes d’infections à tréponèmes et des réactions
faussement positives avec des échantillons de patients atteints de la mononucléose infectieuse, de la lèpre, toxicomanes ou de
maladies auto-immunes.
Occasionnellement, dans certains cas de syphilis primaires précoces, les anticorps spécifiques ne pourront pas être détectés
par la technique TPHA.
Caractéristiques fonctionnelles
3593 échantillons de plasma de donneurs d’une banque de sang préalablement caractérisés comme négatifs, ont été
testés avec le syphagen TPHA AUTO REC plus sur un Olympus PK7200. La spécificité initiale a été de 99,44%,
5 échantillons ont été classés comme positifs et 15 échantillons comme indéterminés. Après la répétition du test sur ces
échantillons, la spécificité a été de 99,89%.
Bibliographie
Begrenzung der Methode
-
-
Obgleich Serum das Probenmaterial der Wahl für alle Syphilis-Testungen ist, kann zu Screening-Zwecken in Blutbanken
EDTA-Plasma verwendet werden. In wenigen Fällen wurden falsch positive Ergebnisse gefunden. Daher muss Serum für
alle Bestätigungsuntersuchungen, falsch positive und grenzwertige Ergebnisse aus Plasmaproben verwendet werden,
ebenso bei allen ggf. nachfolgenden Bestätigungsuntersuchungen.
Spezifische Antikörper können auch nach erfolgreich behandelter Infektion lange Zeit im Blut persistieren. Zur Kontrolle
des Behandlungserfolgs empfiehlt sich die Durchführung eines Reagin-Tests (RPR reditest).
Bei der TPHA-Methode kann es zu Kreuzreaktivitäten bei anderen Treponemen-Infektionen und zu falsch positiven
Ergebnissen bei Patienten mit infektiöser Mononukleose, Lepra, Autoimmunerkrankungen und Drogenabhängigkeit
kommen.
Im Frühstadium einer Syphilis-Infektion kann es vorkommen, dass die spezifischen Antikörper mit der TPHA-Technik nicht
detektiert werden.
Charakteristika des Tests
3593 Plasmaproben von Spendern an Blutbanken, die vorher als negativ eingestuft worden waren, wurden mit dem
syphagen TPHA AUTO REC plus an einem Olympus PK7200 überprüft. Die anfängliche Spezifität betrug 99,44%,
5 Proben wurden als positiv eingestuft und 15 Proben als unbestimmt. Nach der Wiederholung dieser Proben, lag die
Spezifität bei 99,89%.
Literatur
Voir "References" à la fin du prospectus.
Siehe "References" am Ende des Prospekts.
12
9
LIRE LES CHANGEMENTS SURLIGNÉS
Conservation
Test d’hémagglutination indirecte pour la détection des anticorps
spécifiques anti-Treponema pallidum dans le sérum ou le plasma humain
R
utilisant l'OLYMPUS PK7200 .
Matériel nécessaire non fourni
Sommaire
Les réactifs resteront stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette, à condition d’être conservés à 2-8°C. Ne
pas congeler.
-
Microplaques type «verte» OLYMPUS.
OLYMPUS PK7200 système automatisé pour l’analyse prétransfusionnelle du sang.
Pipettes automatiques.
La syphilis, l’une des plus importantes maladies sexuellement transmissibles du monde, est causée par l’infection par le Treponema
pallidum. Cependant le T. pallidum peut également être transmis congénitalement au fœtus par le placenta et par transfusion sanguine.
Le diagnostic sérologique de la syphilis se réalise en démontrant la présence d’anticorps spécifiques anti-T. pallidum.
Prélèvement de l’échantillon
Le principal avantage du TPHA, le test tréponémique d’hémagglutination par excellence, est sa grande sensibilité mais la
similitude antigénique entre le T. pallidum et d’autres tréponèmes non pathogènes peut produire des réactions croisées qui
donneront des résultats faux positifs. Pour le screening d’un grand nombre d’échantillons, il faut utiliser un test ayant un bon
niveau de spécificité pour réduire le nombre de tests non productifs (échantillons qui donne un résultat faux positif avec le test
de screening et négatif avec le test confirmatoire).
Bien que le sérum soit l’échantillon type pour tous les tests de syphilis, des échantillons de plasma EDTA peuvent être utilisés
pour screening dans les banques de sang. Autres anticoagulants doivent être évalués avant leur utilisation. Le plasma peut
être conservé à 2-8°C pendant 8 jours.
Les antigènes utilisés jusqu’à présent pour fabriquer les tests tréponémiques ont été obtenus de culture en tissu testiculaire de
lapin et étaient un mélange d’antigènes tréponémiques et de restes de tissus qui, occasionnellement, produisaient des
résultats non spécifiques. Le syphagen TPHA AUTO REC plus utilise une combinaison d’antigènes recombinants qui
confèrent au test une grande spécificité, car les réactions croisées dues aux autres tréponèmes saprophytes ou pathogènes
sont éliminées sans pour cela en réduire la sensibilité.
Principe
Le syphagen TPHA AUTO REC plus est un test de TPHA pour la détection des anticorps anti-T. pallidum. Le réactif est une
suspension d’hématies de poulet stabilisées et sensibilisées avec les antigènes p15, p17 et p47 du T. pallidum, obtenus par
culture cellulaire d’Escherichia coli recombinant et la purification subséquente. En combinaison avec ces trois antigènes, il a
été ajouté une autre protéine recombinante (brevet en attente) pour augmenter la sensibilité du test.
Composants
REF 3000-5709.
a)
b)
c)
d)
Plasma:
Sérum:
Utiliser du sérum frais. Le sérum peut être conservé à 2-8°C pendant 8 jours. Pour des périodes plus longues, les sérums
doivent être congelés (-20°C).
PROCÉDURE
Contrôle de qualité:
Laisser les réactifs revenir à température ambiante. S’assurer que le réactif antigène soit bien en suspension.
Inclure le contrôle positif et négatif dans chaque série d’échantillons. Le contrôle positif doit donner une faible réaction positive.
Si les résultats attendus ne sont pas obtenus, ne pas utiliser le coffret.
Méthode
L’analyseur PK7200 est un instrument programmable dont les opérations sont contrôlées par la table des paramètres définie et
établie par l’utilisateur. Les paramètres validés doivent être introduits avec les dossiers de routine ou définis dans un dossier
séparé. Pour des informations complètes sur l’OLYMPUS PK7200, se référer au manuel d’utilisation.
Application Olympus PK7200:
Réactif antigène: 5 x 40 ml.
Suspension des hématies de poulet sensibilisées. Prêt à l’emploi.
Solution diluant: 5 x 500 ml.
Solution tampon phosphate contenant des composants solubles de T. Reiter et des agents stabilisateurs.
Contrôle positif: 1 x 15 ml.
Sérum de lapin immunisé.
Contrôle négatif: 1 x 15 ml.
Sérum humain négatif dilué.
Tous les réactifs contiennent < 0,1% d’azide de sodium.
Précautions
syphagen TPHA AUTO REC plus est destiné à un usage diagnostique IN VITRO.
Les réactifs contiennent de l’azide sodique comme conservateur. L’azide sodique peut réagir au contact de tuyauteries et de
bouches d’écoulement des eaux en plomb ou en cuivre. Cette réaction donne lieu à des azides métalliques hautement
explosives. Lorsque vous jetez les restes de réactifs, veuillez laisser couler l’eau abondamment.
Ne pas interchanger des réactifs de lots différents.
Les microplaques doivent être nettoyées avant utilisation suivant le protocole du fabricant.
Tout le matériel d’origine humaine utilisé dans le cadre de la préparation de ce produit a donné des résultats négatifs quant à
la présence d’anticorps aux virus HIV-1/HIV-2 et HCV, de même qu’à celle de l’antigène de surface de l’hépatite B. La
méthode utilisée est agréée par la Food and Drug Administration (USA).
ATTENTION: MATÉRIEL À RISQUE BIOLOGIQUE.
Compte tenu du fait qu’aucune méthode n’est capable d’offrir une garantie absolue de l’absence d’agents infectieux, ce
produit doit être manipulé avec précaution.
Déposer tout le matériel utilisé dans des récipients conçus pour le matériel bio-contaminant.
Classe de danger
Non classifié.
Mentions de danger
Aucune.
Conseils de prudence
P280 : Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement de protection des yeux/ du visage.
P305+351+338 : EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX : rincer avec précaution à l’eau pendant plusieurs minutes. Enlever les
lentilles de contact si la victime en porte et si elles peuvent être facilement enlevées. Continuer à rincer.
10
1st Reagent volume
Sample
Diluent
Plate well
Reaction time
Dynamic range set
Thresholds
Threshold set
Limit set
LIA selection
Decision logic
Panel set
Decision logit set
P
C
LIA
SPC
P/C
LIA
BG/C
6
3
1 POS +
2 NEG 3 IND ?
Plasma
Diluent
35 µl
1 (Plasma)
TPHA Dil. Sol.
97/1000
15 µl
16 µm
60 minutes
30°C
Low 1 - 99 High
Low 1 - 99 High
Low 0 - 999 High
Low 12 - 13 High
(+) Limit 23 - 17 (-) Limit
(+) Limit 205 - 75 (-) Limit
Middle
Ratio
97
1000
Volume
35 µl
360 µl
Le paramètre fondamental du système d’analyse d’images est SPC.
11

syphagen TPHA AUTO REC plus

Transcription

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