BBL Mueller Hinton Broth

BBL Mueller Hinton Broth
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8806691 • Rév. 02 • Juin 2012
PROCEDURES DE CONTROLE DE QUALITE
I
INTRODUCTION
Le Mueller Hinton Broth (bouillon de Mueller Hinton) est un milieu polyvalent servant à la culture d'un grand nombre de
microorganismes exigeants et non exigeants.
II
MODE OPERATOIRE DU TEST
1. Ensemencer des échantillons représentatifs avec les cultures répertoriées ci-dessous.
a. Ensemencer=1 µL (0,001 mL) à partir d’une culture de 4 – 5 h de Trypticase Soy Broth dilué à 106 – 107 UFC/mL.
b. Incuber à 36 ± 1°C en conditions atmosphériques adéquates.
2. Examiner les tubes après 18 – 24 h afin de contrôler la croissance.
Résultats attendus
Microorganismes=
ATCC=
Récupération
*Escherichia coli
*Enterococcus faecalis
*Staphylococcus aureus=
25922
29212
25923
Croissance modérée à importante
Croissance modérée à importante
Croissance modérée à importante
*Souche de microorganisme recommandée pour le contrôle de qualité par l’utilisateur.
III
CONTROLE DE QUALITE SUPPLEMENTAIRE
1. Examiner les tubes comme décrit à la rubrique " Détérioration du produit ".
2. Inspecter visuellement des tubes représentatifs pour s’assurer qu’aucun défaut physique ne peut interférer avec leur
utilisation.
3. Mesurer le pH par potentiométrie à température ambiante et s’assurer qu’il est conforme à la spécification de 7,3 ± 0,2.
4. Incuber des tubes représentatifs non ensemencés à 33 – 37 °C et 20 – 25 °C et les examiner après 72 h pour déceler une
contamination microbienne éventuelle.
INFORMATIONS SUR LE PRODUIT
IV
APPLICATION
Le Mueller Hinton Broth (bouillon de Mueller Hinton) est un milieu polyvalent servant à la culture d'un grand nombre de
microorganismes exigeants et non exigeants. Dans cette formulation, les concentrations en ions calcium et magnésium n'ont
pas été ajustées pour adapter le milieu aux méthodes quantitatives de test de sensibilité aux agents antimicrobiens.
V
RESUME ET EXPLICATION
La gélose de Mueller Hinton a été formulée à l’origine comme un milieu gélosé transparent simple, servant à la culture des
Neisseria pathogènes.1 D’autres milieux de culture des Neisseria pathogènes se sont substitués depuis à la gélose de Mueller
Hinton, mais celle-ci est aujourd’hui largement utilisée pour tester la résistance des gonocoques et d’autres microorganismes
aux sulfamides. Elle est à présent recommandée comme milieu de test de sensibilité aux agents antimicrobiens.2-3
Non ajusté, le Mueller Hinton Broth, dont la formulation est similaire à celle du milieu solide, mais sans gélose, s’utilise
lorsqu’un milieu liquide est préférable. Il peut servir de milieu de culture polyvalent des bactéries.
VI
PRINCIPES DE LA METHODE
L’hydrolysat acide de caséine et l’extrait de bœuf apportent les acides aminés et d’autres composés azotés, minéraux,
certaines vitamines, ainsi que d’autres nutriments nécessaires à la croissance des microorganismes. L’amidon agit comme
colloïde protecteur contre les substances toxiques éventuellement présentes dans le milieu. L’hydrolyse de l’amidon lors de la
stérilisation à l’autoclave produit une petite quantité de dextrose, qui est une source d’énergie.
VII
REACTIFS
Mueller Hinton Broth
Formule approximative* par litre d’eau purifiée
Hydrolysat acide de caséine ..................................................................17,5 g
Extrait de boeuf........................................................................................3,0 g
Amidon .....................................................................................................1,5 g
*Ajustée et/ou complétée en fonction des critères de performance imposés.
Avertissements et précautions : Pour le diagnostic in vitro.
Ouvrir avec précaution les tubes et les flacons étroitement bouchés pour ne pas risquer d’être blessé par un bris de verre.
Respecter les techniques d’asepsie et prendre les précautions en vigueur contre les dangers microbiologiques. Après
utilisation, stériliser à l’autoclave les tubes préparés, les récipients ayant contenu des échantillons et tout autre matériel
contaminé avant de les éliminer.
Instructions pour la conservation : Dès réception, conserver les tubes et les flacons dans l'obscurité entre 2 et 25 °C. Ne
pas les congeler ni les surchauffer. Ne pas les ouvrir prématurément. Les maintenir à l’abri de la lumière. Conservés comme
indiqué sur l’étiquette, les milieux en tube et en flacons peuvent être ensemencés jusqu’à la date de péremption et incubés
pendant les durées d’incubation recommandées. Laisser le milieu s’équilibrer à température ambiante avant de l’ensemencer.
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Détérioration du produit : Ne pas utiliser les tubes ou les flacons s’ils présentent des signes de contamination microbienne,
évaporation, précipitation ou d’autres signes de détérioration.
VIII PRELEVEMENT ET PREPARATION DES ECHANTILLONS
Ce milieu ne convient pas pour réaliser une culture directe d’échantillons ou d'autres sources contenant un mélange de flores
microbiennes, excepté comme bouillon d’enrichissement « auxiliaire » en complément des milieux d’étalement primaires.
Consulter les publications citées en référence pour plus d’informations.4-6
IX
METHODE
Matériaux fournis : Mueller Hinton Broth
Matériaux requis mais non fournis : Milieux de culture auxiliaires, réactifs, souches de contrôle de qualité et matériel de
laboratoire requis.
Mode opératoire du test : Respecter les techniques d’asepsie et prendre les précautions en vigueur contre les dangers
microbiologiques.
Les microorganismes à repiquer doivent tout d’abord être isolés en culture pure sur un milieu solide adapté. Transférer de la
croissance bactérienne prélevée sur le milieu d’isolement dans le Mueller Hinton Broth en employant les techniques
bactériologiques standard.5-7
A des fins d’enrichissement, ensemencer les milieux primaires puis le bouillon avec l’échantillon, en respectant les méthodes
recommandées.
Incuber les tubes et les flacons à 35 °C dans des conditions adaptées au microorganisme à cultiver.
Contrôle de qualité par l’utilisateur : Voir " Procédures de contrôle de qualité ".
Effectuer les contrôles de qualité conformément aux réglementations nationales et/ou internationales, aux exigences des
organismes d’homologation concernés et aux procédures de contrôle de qualité en vigueur dans l’établissement. Il est
recommandé à l’utilisateur de consulter les directives CLSI et la réglementation CLIA correspondantes pour plus d’informations
sur les modalités de contrôle de qualité.
X
RESULTATS
La croissance en milieu à base de bouillon est mise en évidence par l’apparition d’une turbidité comparativement au milieu de
contrôle non ensemencé.
XI
LIMITES DE LA METHODE
Les bouillons d’enrichissement ne doivent pas être utilisés comme seul milieu d’isolement. Ils doivent être utilisés
conjointement avec des milieux d’étalement sélectifs et non sélectifs pour accroître la probabilité d’isoler des pathogènes,
notamment lorsqu’ils sont faiblement représentés.
Pour procéder à l’identification, les micro-organismes doivent se trouver en culture pure. L’identification définitive nécessite
des tests morphologiques, biochimiques et/ou sérologiques. Consulter les publications citées en référence pour plus
d’informations.4-7
XII
CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES
Les caractéristiques de performances de tous les lots de Mueller Hinton Broth sont testées en usine. Des échantillons
représentatifs du lot sont ensemencés avec des suspensions d’Enterococcus faecalis ATCC 29212, d’Escherichia coli ATCC
25922 et de Staphylococcus aureus ATCC 25923, diluées avec du sérum physiologique à une concentration finale de
103 à 104 UFC par tube de bouillon. Les tubes sont incubés, avec les bouchons desserrés, à 35 ± 2°C pendant 1 jour, en
atmosphère aérobie. Tous les microorganismes présentent une croissance.
XIII DISPONIBILITE
N° réf.
Description
296164
BBL Mueller Hinton Broth, 2 mL, carton de 100 tubes de taille K
XIV REFERENCES
1. Mueller, J.H., and J. Hinton. 1941. A protein-free medium for primary isolation of the gonococcus and meningooccus. Proc.
Soc. Exp. Biol. Med. 48:330-333.
2. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2009. Approved standard M7-A8. Methods for dilution antimicrobial
susceptibility tests for bacteria that grow aerobically, 8th ed. CLSI, Wayne, Pa.
3. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2009. Approved standard M2-A10. Performance standards for antimicrobial
disk susceptibility tests, 10th ed. CLSI, Wayne, Pa.
4. Washington, J.A. (ed.). 1985. Laboratory procedures in clinical microbiology, 2nd ed. Springer-Verlag, New York.
5. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 1998. Bailey & Scott’s diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby, Inc.,
St. Louis.
6. Murray, P.R., E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.). 1995. Manual of clinical microbiology, 6th ed.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
7. Holt, J.G., N.R. Krieg, P.H.A. Sneath, J.T. Staley, and S.T. Williams (ed.). 1994. Bergey’s Manual™ of determinative
bacteriology, 9th ed. Williams & Wilkins, Baltimore.
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Becton,
Dickinson and Company
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 Benex Limited
7 Loveton Circle
Rineanna House
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