methodes instrumentales d`analyse et de caracterisation
Transcription
methodes instrumentales d`analyse et de caracterisation
Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE METHODES INSTRUMENTALES D'ANALYSE ET DE CARACTERISATION CHROMATOGRAPHIE IONIQUE Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE DES MINES SOMMAIRE CHROMATOGRAPHIE IONIQUE SAINT-ETIENNE 1. I-) INTRODUCTION :.......................................................................................................................... 3 1.1. 1.1 HISTORIQUE................................................................................................................................ 3 2. -II-) LES COLONNES DE SEPARATION :........................................................................................ 4 2.1. 2.1 GRANDEURS CARACTÉRISANT LES COLONNES : ............................................................................. 4 2.1.1. 2.1 a Exemples de colonnes DIONEX....................................................................................... 4 2.1.2. 2.1.b Résolution ....................................................................................................................... 5 2.1.3. 2.1.c Facteur de capacité ......................................................................................................... 5 2.1.4. 2.1.d Sélectivité........................................................................................................................ 5 2.1.5. 2.1.e Efficacité ......................................................................................................................... 5 2.2. 2.2 LES RÉSINES ÉCHANGEUSES D’IONS : ............................................................................................ 7 2.2.1. 2.2.1 Les groupements fonctionnels.......................................................................................... 7 2.2.2. La structure de l’échangeur. .................................................................................................... 7 3. -III-) MODES DE DETECTION :........................................................................................................ 8 3.1. 3.1 LE CONDUCTIMÈTRE. .................................................................................................................. 9 3.1.1. 3.1.a Définition ........................................................................................................................ 9 3.1.2. 3.1.b Principe de mesure :.......................................................................................................10 3.2. 3.2 LE SPECTROPHOTOMÈTRE UV-VISIBLE. .......................................................................................11 3.2.1. 3.2.a Détection directe :..........................................................................................................11 3.2.2. 3.2.b Mesure indirecte ............................................................................................................11 3.2.3. 3.2.c Détection d'un complexe coloré......................................................................................12 3.3. 3.3 LES DÉTECTEURS ÉLECTROCHIMIQUES.........................................................................................13 3.3.1. 3.3.a Caractéristiques .............................................................................................................13 3.3.2. 3.3.b Principe de mesure.........................................................................................................13 4. LA CHROMATOGRAPHIE ANIONIQUE : .....................................................................................15 4.1. 4.1 DÉTECTION CONDUCTIMÉTRIQUE, AVEC SUPPRESSEUR. ................................................................15 4.1.1. 4.1.a L'appareillage ................................................................................................................16 4.1.2. 4.1.c L'unité de suppression ....................................................................................................18 4.2. 4.2 DÉTECTION SPECTROPHOTOMÉTRIQUE. .......................................................................................21 4.2.1. 4.2.a En mesure directe...........................................................................................................21 5. -V-) LA CHROMATOGRAPHIE CATIONIQUE : ...........................................................................24 5.1. 5.1 SUPPRESSION ET DÉTECTION CONDUCTIMÉTRIQUE. ......................................................................24 5.1.1. 5.1.a Séparation des cations monovalents ...............................................................................24 5.1.2. 5.1.b Séparation des cations bivalents.....................................................................................24 5.1.3. 5.1.c Utilisation d'un suppresseur à sulfate .............................................................................25 5.1.4. 5.1.d Méthode sans suppresseur ..............................................................................................25 5.2. 5.2 MÉTHODES SANS SUPPRESSEUR ET DÉTECTION SPECTROPHOTOMÉTRIQUE. ....................................27 5.2.1. 5.2.a Détection indirecte .........................................................................................................27 5.2.2. 5.2.b Formation d'un complexe coloré ....................................................................................27 5.3. 5.3 SÉPARATION AVEC DÉTECTION ÉLECTROCHIMIQUE. .....................................................................29 6. CONCLUSIONS : ................................................................................................................................30 Page 2 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne 1. Introduction ECOLE DES MINES 1.1. SAINT-ETIENNE Historique. Cette technique récente est apparue dans les années 70 grâce à Small, Stevens et Bauman (DOW CHEMICAL) et le terme "chromatographie ionique" désignait alors la séparation d'ions inorganiques par une détection conductimétrique. A l'heure actuelle, ce terme regroupe toutes les méthodes de dosage d'ions (organiques ou pas) par chromatographie en phase liquide, quel que soit le mode de séparation et de détection. REPERES HISTORIQUES POUR LA CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE 1903 Tswett : Invention et développement de la chromatographie 1941 Martin Synge : Chromatographie de séparation (prix nobel de chimie pour leurs travaux) 1948 Stern et More : Séparation d’acides aminés par chromatographie d’échange ionique. 1952 Martin et James : Chromatographie en phase gazeuse. 1953 Weaton et Bauman : Observation du principe d’exclusion. 1959 Porath et Flodin : Chromatographie par perméation sur gel 1962 More : Perméation sur gel (gel de polystyrène liquide) 1965 More : Les premiers chromatographes à phase liquide haute pression sont brevetés. REPERES HISTORIQUES POUR LA CHROMATOGRAPHIE IONIQUE 1971 Première utilisation pour la chromatographie ionique 1972 Première utilisation de la chromatographie ionique chez Dow Chemical 1972 Premier prototype de chromatographie ionique utilisant une cellule de conductivité 1975 Le premier rapport de recherche en chromatographie ionique et publié « par Small, Stevens et Bauman dans » Analytical Chemistry. 1975 Dionex Corporation est crée sous la licence Dow. 1975 Premier chromatographe ionique commercialisé. 1977 Premier symposium EPA sur l’analyse par chromatographie ionique pollution de l’environnement. 1977 Small, Stevens et Bauman reçoivent le prix de la Conférence de Pittsburgh pour l’avance la plus significative en chimie analytique appliquée. 1.2 Définition de la chromatographie ionique. C’est une technique analytique qui permet l’analyse qualitative (par séparation des espèces présentes) et quantitative des espèces ioniques présentes dans un échantillon liquide dépourvu de matières en suspension. Page 3 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE D'un point de vue analytique, cette technique est devenue intéressante grâce aux progrès réalisés que l'on peut regrouper en 4 catégories : - meilleurs composants chromatographiques, - résines échangeuses de plus grande efficacité, - échantillons de faible volume, - détection automatique. De part les très nombreuses configurations possibles, la chromatographie ionique désigne plus un ensemble de méthodes de dosage des espèces ioniques qu'une séparation seule. Mais la configuration la plus fréquente demeure la détection des anions couplée à une détection conductimétrique. Néanmoins, nous verrons que d'autres moyens de séparation et de détection sont possibles, en sachant que pour un appareil donné, on ne peut trouver plusieurs configurations simultanées. 2. Les colonnes de separation 2.1. Grandeurs caractérisant les colonnes 2.1.1. Exemples de colonnes DIONEX Colonne HPIC-AS1 Commentaires Séparation des anions « standards » HPIC-AS2 - Retient NO3 très fortement. - Sépare les anions qui sont élués très rapidement. HPIC-AS3 HPIC-AS4 HPIC-AS4A HPIC-AS5 HPIC-AS6 a) HPIC-AS7 b) - haute performance - Séparation des anions « standards » - Sépare les ions sulfate et oxalate - haute performance Eluant type 0.3 M NaHCO3 0,0024 M Na2CO3 0.3 M Na2CO3 0,2 M NaOH 5 % V/V acetonitrile 0.00071 M 4 - cyanophénol 0,0028 M NaHCO3 0,0022 M Na2CO3 0,0028 M NaHCO3 0,0022 M Na2CO3 - haute performance 0,00075 M NaHCO3 0,0022 M Na2CO3 Force éluante importante 2 % V/V acetolnitrile 0,0008 M 4-cyanophenol Stable à pH élevé pour séparer les sucres, 0,16 M NaOH alcools et saccharines. sépare les anions polyvalents comme 0,06 M HNO3 NTA, EDTA et les polyphosphates Légendes : a) utilisation d’une détection ampérométrique pulsée b) utilisation d’un réacteur post-colonne, détecteur UV à 330 nm Page 4 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne 2.1.2. Résolution ECOLE DES Le but de chaque séparation est d'obtenir la meilleure résolution possible, c'est-àdire la capacité de séparer deux composés 1 et 2 quelconques : V2 V1 R= 1 V 2 − V1 / 2 (W1 + W2 ) } } W1 W2 2.1.3. Facteur de capacité Il se définit, pour un composé donné, dans un système chromatographique donné, par la relation : t - t ' k = R m tm avec tR : temps de rétention du composé tm : temps mort ou temps de rétention d'un composé non retenu sur la colonne. 2.1.4. Sélectivité Ce facteur se définit comme le rapport des facteurs de capacité du composé le plus retenu et du composé le moins retenu : k' t − tm α = 2 = R2 k ' 1 t R 1 − tm 2.1.5. Efficacité Elle se définit par deux termes : - le nombre de plateaux théoriques N : tR N = 5,54 W1/2 2 Page 5 MINES SAINT-ETIENNE Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE - la hauteur équivalente à un plateau théorique H (HEPT) : l H= N l étant la longueur de la colonne. L'efficacité d'une colonne augmente avec la diminution de la taille des particules et avec l'homogénéisation à l'intérieur de la résine car en effet, plus celles-ci sont petites, plus le parcours de diffusion est faible, la figure ci-dessous en est la parfaite illustration : A Taille des particules non uniforme B Remplissage non uniforme Remplissage et taille des particules non-uniformes C Pour résumer ces propos, l'influence des paramètres (sélectivité, capacité et efficacité) sur la résolution est montrée sur la figure ci-dessous: CAPACITE I N I T I A L Vary K’ EFFICACITE Vary N SELECTIVITE Vary a Page 6 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne 2.2. Les résines échangeuses d’ions La séparation des composés est assurée, dans tout système chromatographique, par la phase stationnaire qui, dans le cas de la chromatographie ionique (CI), est une résine échangeuse d’ions. Cette phase stationnaire est un support solide comportant des groupes fonctionnels ionisés (positifs ou négatifs) permettant la rétention des espèces dont on désire obtenir la séparation. 2.2.1. Les groupements fonctionnels On les classe en deux catégories : les groupements chargés positivement et ceux chargés négativement. Dans chaque catégorie, le principal groupement utilisé est : 3 le groupement sulfonate : -SO3- pour les échanges de cations. 3 le groupement ammonium quaternaire : -NR3+ pour les échanges d’anions. Ces groupements sont dits « forts » car leur capacité d’échange est constante et indépendante du pH. D’autres groupements peuvent être utilisés mais sont dits « faibles » car à certains pH, ils ne sont pas ionisés et n’assurent donc pas leur rôle d’échangeur. 2.2.2. La structure de l’échangeur. Les résines échangeuses d’ions se sont beaucoup améliorées ces dernières années (d’où le développement de la technique) afin d’accroître l’efficacité des colonnes. La résistance au transfert de masse était le principal problème des colonnes et celle-ci a été atténuée par la réduction de la distance parcourue par les solutés ; ceci se concrétise en améliorant les deux caractéristiques suivantes : l diminution de la taille des particules pour les supports poreux ; l greffes de sites actifs à la surface d’un support imperméable (non-poreux). Ceci nous amène à décrire les trois principaux types de résines : 3 La structure gel : Page 7 ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE La matrice est constituée par un réseau macromoléculaire, le plus souvent à base du copolymère styrène/divinylbenzène sur lequel sont greffés les groupes fonctionnels. Cette répartition tridimensionnelle de la résine (support poreux) et donc des groupements fonctionnels confère à ce type de d’échangeur une grande capacité d échange. Cette propriété s’avère être un avantage lorsque le détecteur n’est pas très sensible et un inconvénient pour les composés fortement retenus (long temps d’analyse). Néanmoins, cette résine présente une très bonne efficacité si la taille des particules est faible et de distribution granulométrique étroite. De ce fait, une telle réalisation engendre un coût de fabrication élevé. Le principal handicap de ces colonnes demeure la médiocre résistance mécanique, qui oblige une utilisation à faible pression. 3 La structure pelliculaire : Les sites actifs sont greffés à la surface de la résine et plus dans le réseau du polymère, comme ce qui a été cité précédemment. L’avantage d’un tel échangeur est de pouvoir réaliser des séparations très « fines » e de très courts temps. Le fait de ne disposer de sites actifs qu’en surface diminue fortement la capacité d’échange, ce qui impose l’injection de faibles volumes et d’avoir une dilution très sensible. Par opposition à l’échangeur précédent (gel), celui-ci présente une excellente résistance mécanique et à la pression car les sites sont greffés sur un support compact et imperméable. 3 La structure en silice : Pour remédier aux inconvénients décrits ci-dessus, on peut utiliser un support constitué de macroparticules de silice. : on a alors un échangeur résistant à la pression (analyses rapides) de granularité fine et serrée (meilleure efficacité), possédant une grande surface de contact grâce à la structure poreuse de la silice (grande capacité d’échange). Le principal inconvénient est que ce type d’échangeur doit être utilisé avec un éluant dont le pH est compris entre 2 et 9. 3. Modes de detection Même si de nombreux détecteurs ont été développés ces dernières années, le plus courant reste le conductimètre car c'est un détecteur universel pour les substances ioniques. Mais il faut quand même citer et préciser le fonctionnement du détecteur Page 8 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne spectrophotométrique UV-visible (mesure directe en UV ou développement d'un complexe coloré) ainsi que la famille des détecteurs électrochimiques (ces 2 derniers étant des détecteurs sélectifs). ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE 3.1. Le conductimètre. Ce détecteur présente l'avantage de détecter n'importe quelle substance ionique mais par contre ne peut détecter la présence d'eau, de méthanol, d'acides faibles. 3.1.1. Définition Lorsqu’on applique une tension entre deux électrodes dans une solution aqueuse, un courant passe entre les deux électrodes et suit la loi d’Ohm : E = RI où E est la tension appliquée, I le courant mesuré entre les deux électrodes et R la résistance électrique. 1 G= La conductance se définit alors comme suit : en Siemens (S) R On relie alors conductance et conductivité par la relation : γ = KG où K est une constante fonction de la géométrie de la cellule. La conductivité (et donc la conductance) est directement reliée à la concentration de l’espèce présente (dans une certaine mesure) comme le montre la relation : G= ΛC 1000 K où : C est la concentration (équiv/l) K la constante de la cellule (en ½-1.cm-1) Λ la conductance équivalente qui est la somme des conductivités ioniques limites de chaque ion, affecté de son coefficient stoechiométrique. Le tableau ci-dessous donne les conductivités ioniques limites pour chaque ion, à 25°C et en ohm-1cm2equiv. -1. Page 9 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE λ198 54 71 45 55 41 36 32 66 80 72 74 85 69 101 111 Anions OHFNO3HCO3Formate Acetate Propionate Benzoate SCNSO42CO32C2O42CrO42PO43Fe(CN)63Fe(CN)64- λ+ 350 39 53 60 59 64 53 53 55 71 53 68 70 70 58 33 Cations H+ Li+ Mg2+ Ca2+ Sr2+ Ba2+ Zn2+ Hg2+ Cu2+ Pb2+ CO2+ Fe3+ La3+ Ce3+ CH3NH3+ N(Et)4+ 3.1.2. Principe de mesure : Si on applique un champ électrique à 2 électrodes plongeant dans un électrolyte, les ions vont se diriger vers l'électrode de charge opposée de manière à créer une résistance qui sera fonction du nombre d'ions ainsi que de leur mobilité (qui elle-même est fonction de la charge et de la taille de l'ion, de la température et de la nature de l'électrolyte). Le fait d'imposer un potentiel alternatif évite tout problème d'électrolyse à la surface des électrodes. La représentation d’un conductimètre figure ci-dessous : BRIDGE AND CURRENT SOURCE ELECTRODE - C+ C+ - C+ C+ - Double Layer Capacitance C+ + A- A- BU LK ELECTROLYTE + ELECTROLY SIS FARADAIC IMPEDANCE ELECTROLYSIS (FARADA IC IMPEDAN CE) Zr Double Layer Capacitance Figure 2.1 A- + A- + A- + Zr E l ec tr ol yt e R esi sta n ce Page 10 Double Layer Capacitance Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne 3.2. Le spectrophotomètre UV-visible. Il y a plusieurs façons d'utiliser un tel détecteur en chromatographie ionique mais ce procédé repose toujours sur la même loi, la loi de Beer-Lambert qui relie l'absorbance à la concentration : A = εlc où 1 : longueur : de la cellule ou trajet optique ε : coefficient d’absorptivité de l’espèce c : concentration de l’espèce en question. 3.2.1. Détection directe : Cette mesure est rendue possible par le fait que certains anions absorbent dans la région UV du spectre. La longueur d’onde généralement utilisée est 254 nm mais la gamme 190 à 220 nm apparaît plus utile pour détecter les anions suivants : bromates, iodures, iodates, nitrites, nitrates, sulfites (les autres n’absorbent pas). D’autre part, les complexes de chlorures métalliques absorbent aussi dans la région UV - visible comme le souligne le tableau suivant . Il reste alors à choisir la longueur d’onde de détection qui permettra de doser plusieurs ions avec une sensibilité suffisante : une détection à 225 nm semble un bon compromis pour détecter la plupart des ions qui figurent dans le tableau ci-dessous : Ion métallique λmax[nm] Aluminium (III) Antimoine (III) Arsenic (III) Cadmium (II) Calcium (II) Chrome (III) Chrome (VI) N 229 215 215 N 215 248 280 355 215 275 385 225 225 320 360 N Cobalt (II) Cuivre (II) Or (III) Fer (III) Lanthane (III) ∈max [l mole-1cm -1] 4 2,2 x 10 4,5 x 103 1,1 x 102 7,1 x 103 2,1 x 103 1,6 x 103 1,2 x 103 2,2 x 102 3,4 x 103 5,7 x 102 6,8 x 104 7,0 x 103 2,9 x 103 3,1 x 103 Ion métallique Magnésium (II) Manganèse (II) Mercure (II) Molybdène (VI) Nickel (II) Platine Potassium (I) Argent (I) Sodium (I) Thorium (IV) Titane (IV) Tungstène (VI) Uranium (VI) Zinc (II) Zirconium (IV) Lithium (I) Plomb (II) λ max [ nm] N 215 229 227 215 262 N 215 N N 215 I 236 N N N 271 3.2.2. Mesure indirecte Pour réaliser cette mesure, il faut deux conditions : n l’éluant doit absorber le rayonnement incident ; n les composés doivent être transparents à celui-ci. Page 11 ∈max [l mole-1cm -1] 1,4 x 102 2,7 x 104 5,7 x 103 1,5 x 102 2,7 x 104 1,5 x 104 9,6 x 102 3,4 x 103 1,1 x 104 ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE Ainsi, pour chaque élément élué, on mesure une variation d'absorbance de l'éluant, c'est-à-dire son taux de dilution. L'inconvénient de cette méthode est que l'on se heurte à des problèmes de non-linéarité (loi de Beer-Lambert) dans des zones extrêmes mais l'avantage est que l'on réalise ainsi un détecteur universel 3.2.3. Détection d'un complexe coloré Là-encore, il s'agit d'une détection spécifique car le complexe choisi ne réagira qu'avec un certain nombre de composés ; le tableau ci-dessous indique les éléments susceptibles de réagir avec trois complexants : le PAR (4- (2- pyridylazo) résorcinol) est le réactif choisit par les constructeurs en raison du grand nombre de composés détectables. Ion métallique Thorium (IV) Zirconium (IV) Aluminium (III) Chrome (III) Lanthane (III) Bismuth (III) Fer (III) Fer (II) Vanadium (IV) Manganèse (II) Cobalt (II) Nickel (II) Cuivre (II) Zinc (II) Cadmium (II) Mercure (II) Plomb (II) Magnesium (II) Calcium (II) Barium (II) Strontium (II) Arsenazo I Arsenazo III PAR X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X Pour la détection des anions inorganiques, une méthode de complexation par le perchlorate de fer a été mise au point et dont les conditions opératoires se trouvent dans le tableau ci-dessous : Page 12 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne Anion λ max (nm) Cr42SCNFe(CN)64- 305, 344 310 305 Fe(CN)63SO42CIP2O74IP3O105S2S2O32NO2PO43- 305 306 335 310 306, 350 310 < 300 308 372, 360 310 Detection b) Anion limit (nmol) 0,4 SO321,3 PO331,6 H2PO21,9 2,8 4,8 5,2 5,6 6,4 7,1 8,1 10,8 11,8 IO3CO32BrB4O72BrO3CNSiO32NO3FCIO3- λ max (nm) 308 < 300 < 300 Detection b) (nmol) 12,7 24,8 28,8 < 300 < 300 < 300 < 300 < 300 < 300 < 300 c) c) c) 73,7 141,3 144,3 206,4 931,7 392,2 285,7 - Légende : a) 0,8 MHCIO4, 0,05 M Fe(CIO4,)3 b) Limite de détection sans une colonne de séparation : λ = 340 nm c) Ne réagit pas. Néanmoins, cette détection de complexes colorés nécessite un appareillage spécifique : en sortie de colonne, il faut non seulement une chambre de mélange afin de former le complexe mais aussi une cellule de mesure où l’échantillon complexé sera traversé par un faisceau lumineux. 3.3. Les détecteurs électrochimiques. 3.3.1. Caractéristiques On trouve quatre groupes de détecteurs : ampérométriques, coulométriques, polarographiques et potentiométrique. Ce sont tous les quatre des détecteurs sélectifs car pour déclencher l'électrolyse, il faut appliquer un potentiel qui diffère selon les ions. Les avantages de ces détecteurs sont d'une part l'excellente sensibilité de mesure qui permet de doser des traces et d'autre part la gamme de mesure très étendue. Par contre, ces détecteurs sont sensibles au débit d'éluant, au pH et à des substances comme l'oxygène dissous qui peuvent, selon le potentiel appliqué, perturber la mesure. 3.3.2. Principe de mesure Afin de s'assurer que l'oxydo-réduction de l'espèce soit complète, on impose un potentiel variant de -1,5 V à +1,5 V, ce qui, dans le cas où l'électrode de travail est en argent, conduit à la réaction : Ag + X- → Ag X + eSelon le potentiel appliqué, on va donc recueillir un courant qui sera fonction de la concentration de l'espèce en solution (courant de diffusion) comme le montre la courbe intensité-potentiel ci-dessous : Page 13 ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE Potentiel de demi - vague i DES MINES Courant de diffusion SAINT-ETIENNE E (Réduction) - Potentiel de travail optimal Le principal facteur limitant est la réduction de l'oxygène dissout dans l'éluant et qui va générer un courant de base. En pratique, le détecteur doit être calé sur le plateau du courant de diffusion mais au potentiel le plus bas pour limiter la réalisation d'autres réactions. Les cellules électrochimiques sont régies par la loi de Faraday : Q=nF N Q : nombre de coulombs F : constante de Faraday N : nombre de moles électroactives n : nombre d'électron par réaction. Par unité de temps, on mesure le nombre de coulombs, on obtient l'intensité. La figure ci-dessous indique les électrodes de travail à choisir en fonction de l'application donnée. Electrode indicatrice Carbone vitreux Or Argent Platine Mercure Légende : a) 0,1 N KOH, b) 0,1 N HCIO 4 solution basique b)(volts) solution acide c)(volts) - 1,5 à 0,6 - 1,25 à 0,75 - 1,2 à 0,1 - 0,9 à 0,65 - 1,9 à 0,65 - 0,8 à 1,3 - 0,35 à 1,1 - 0,55 à 0,4 - 0,2 à 1,3 - 1,1 à 0,6 Page 14 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne Types d’électrodes de travail en fonction des ions Ions Phénols, catechols, catecholamines, aromatiques amines, acide fumarique, acide ascorbique, acide oxalique Ions inorganiques oxydable (comme arsénite et hydrazine) Hypochlorite cyanide, sulfite, sulfite, thiocyanate, thiosulfate. Aliphatique amines, acides aminés métaux réductibles, métaux formant des amalgames 4. Electrode Verre Platine Platine Argent Mercure Or, mercure Mercure La chromatographie anionique 4.1. Détection conductimétrique, avec suppresseur. Cette configuration est celle qui est la plus répandue et est commercialisée par DIONEX Corporation. Elle permet la détermination d'anions organiques et inorganiques, en reprenant les principes déjà vus précédemment : résine échangeuse d'anions et détection conductimétrique. Mais entre ces 2 éléments, on a besoin d'une unité que l'on détaillera dans ce chapitre : le suppresseur chimique. Page 15 ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne 4.1.1. L'appareillage ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE Cette figure nous montre les différents éléments que l'on retrouve sur le système DIONEX : 1. Réservoir d'éluant 2. Pompe à piston 3. Vanne d'injection, permettant d'isoler un volume d'échantillon précis et répétable (dans notre cas 120 µl) 4. Colonne de séparation avec précolonne 5. Unité de suppression chimique 6. Détecteur conductimétrique 4.1.2 La résine échangeuse Afin d'augmenter la rapidité de séparation des espèces, DIONEX prépare pour ses systèmes des colonnes de faible capacité avec des résines à surface agglomérées : le copolymère est le styrène- divisylbenzène sur lequel est déposée une fine couche de latex échangeur d'anions. La surface est recouverte alors de groupements d'acide sulfonique puis cette résine est transformée en échangeuse d'anions après traitement avec une substance quaternaire échangeuse d'anions (particules de polymère de 0,5 µm de diamètre). Page 16 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne Le produit final est donc formé d'un noyau (le copolymère), de la couche sulfonée et de la couche de particules échangeuses d'anions, représentée ci-dessous : ECOLE DES MINES Anion Latex Partic les. Sulfate Sulfonated Substrate SAINT-ETIENNE Actives Sites. Anion Pellicular L A T E X E D A N I O N E X C H A N G E P A R T I C L E O O R R N R3 N+ N S R O + N H CO 3 CO 2 - 3 R3 + R3 L'avantage de ces résines est de permettre un échange plus rapide, donc d'améliorer l'efficacité. D'autre part, ces colonnes sont très stables dans le temps et avec des éléments très basiques. D'un point de vue pratique, considérons (et telle est notre configuration) un 2système élué par un mélange Na+HCO3 et (Na+)2CO3 où on injecte un échantillon - 2- contenant Cl-, NO3 et SO4 (eaux de consommation par exemple). En symbolisant la résine échangeuse d'anions par R+, on a la réaction : R+HCO3 + Cl- → R+ Cl- + HCO3 Au bout d'un certain temps, l'éluant va libérer les ions de l'échantillon, remplacés par ceux de l'éluant : R+ Cl- + HCO3 → R+ HCO3 + Cl2- - Remarque : on retrouve les mêmes réactions en considérant CO3 en lieu et place de HCO3 - 2- (éluant) et en prenant NO3 ou SO4 à la place de Cl- (Echantillon). En un temps relativement court, on va séparer ces 3 espèces car le temps de résidence des composés sur les sites est propre à chaque espèce. Page 17 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne - ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE 2- 2- - En sortie de colonne, on a donc séparé Cl-, NO3 , SO4 dans un "bain" de HCO3 et CO3 (puisque l’éluant est pompé en continu). Cet éluant est gênant car il a une conductivité importante par rapport à celle des quelques anions de l'échantillon (importante différence de volume). Il va falloir le neutraliser et ceci va être réalisé dans l'unité de suppression. 4.1.2. L'unité de suppression Ce système a été inventé par Stevens, Davis et Small (DOW CHEMICAL) : c'est la membrane à fibre creuse, schématisée ci-dessous : Regene rant out Eluent in Eluent out Regenerant in C’est une membrane en polyéthylène sur laquelle ont été greffés des groupements sulfoniques SO3 . L’éluant et les espèces séparées qui proviennent de la colonne passent à l’intérieur de cette fibre alors qu’un courant d’acide sulfurique H2SO4 passe à l’extérieur. Ce dispositif est régit par la force d’équilibre de Donnan, qui permet le passage à travers la membrane aux seuls cations. On a ainsi la réaction, dans le cas commencé au paragraphe précédent : 2CO3 + 2H+ → H2CO3 ) → pour l’éluant : acide - HCO3 + H+ → H2CO3 → pour l’échantillon : 2- 2Na+ + SO4 → Na2SO4 CL- + H+ → HCl NO3 + H+ → HNO3 2- SO4 + H+ → H2SO4 Page 18 ) carbonique Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE A l’entrée du détecteur, on retrouve donc différents acides car les produits de réaction avec l’ion sulfate sont mis à l’égout. Le tableau des constantes d’ionisation kA (cidessous) des principaux acides qui sont susceptibles de passer dans le détecteur montre que tous ceux-ci ne sont pas au même stade de dissociation, donc n’ont pas la même conductivité : ACIDE Ka 1,74 x 10 -5 Acétique Arsenic 6,5 x 10 -3 K1 K2 1,3 x 10 -7 K3 3,2 x 10 -12 Benzoïque 6,3 x 10 -5 Borique 5,9 x 10 -10 Carbonique K1 4,3 x 10 -7 K2 4,8 x 10-11 1,70 x 10 -4 Formique Chlorhydrique a) Fluorhydrique 6,75 x 10 -4 Nitrique 5,1 x 10 -5 Oxalique Phosphorique K1 8,8 x 10 -2 K2 5,1 x 10 -5 K1 7,5 x 10 -3 K2 6,2 x 10 -8 K3 4,8 x 10 -13 1,34 x 10 -5 Propionique Sulfurique a) Légende : a) Non-défini car cet acide est ionisé à 100 %. Page 19 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE On voit ainsi que les anions de l'échantillon sont devenus des acides forts, partiellement voir complètement ionisés, qui ont donc une conductivité très importante alors que l'éluant est devenu un acide faible (acide carbonique H2CO3), très peu dissocié, qui a une conductivité négligeable. Le problème de la forte conductivité de l'éluant est résolu. Récemment, la membrane à fibre creuse a vu son efficacité s'accroître avec l'unité AMMS (Anion Micro Membrane Suppressor) qui associe deux membranes à un double contre-courant de régénérant. Eluent Flowpath in Micromembrane Suppressors Regenerant Screen Me nbrane Eluent Scree n Gasket Mat erial Menbrane Regenerant Screen Figure 6 - 4 A MMS Unit. (C our tesy of Di onex Corporat ion.) Un nouveau suppresseur chimique existe maintenant sur les derniers appareils commercialisés par Dionex : l’auto-suppresseur. Dans celui-ci, les H+ sont apportés par la recirculation des acides détectés : l’apport de H2SO4 devient inutile. Page 20 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne Une illustration de ces propos figure ci-dessous où avec le système décrit précédemment, on sépare 9 anions inorganiques avec une très bonne résolution et une bonne sensibilité: Formiate F − NO 2 HPO4 2 − Br SO4 2− − CI NO BrO 3 3 Injection 0 2 4 6 8 10 Minutes 4.1.d. Eluant et colonnes Le tableau ci-dessous permet de choisir l'éluant et de l'utiliser dans les conditions optimales. Eluant Na2B4O7 NaOH NaHCO3 NaHCO3 Na2CO3 Na2CO3 NaC6H5O 4.2. Concentration (M) 0,005 - 0,02 0,01 - 0,1 0,0015 0,003 0,024 0,006 Force éluante très faible faible faible Moyenne Produit formé H3BO3 H2 O H2CO3 H2CO3 Forte Forte H2CO3 C6H5OH Détection spectrophotométrique. 4.2.1. En mesure directe Comme on l'a déjà décrit précédemment, la mesure directe est certainement la plus facile mais aussi la plus limitée car peu d'espèces absorbent dans la gamme spectrale UVvisible. Néanmoins, on peut trouver certaines applications comme le montre le chromatogramme ci-dessous, qui permet de doser des acides carboxyliques en moins de 10 minutes. Page 21 ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne Tartarique ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE Malique UV 210 Lactique Acétique Citrique Succinique 0 2 4 6 8 4.2.b Mesure d'absorbance indirecte Le principe a déjà été expliqué dans le chapitre "Modes de détection" et l'application proposée permet la détection de traces d'anions minéraux par la mesure de diminution de l'absorbance de l'éluant (acide phtalique à pH = 8,9) à λ = 260 nm, c'est-àdire qu'à chaque passage d'espèces, l'éluant est dilué par un composé « transparent » et donc l'absorbance diminue. 0 à 1 6 5 3 4 7 8 3 9 2 minutes Pour conclure ce chapitre, voici le tableau des anions que l'on peut détecter en chromatographie ionique (attention, on ne peut pas tout détecter avec une configuration donnée) Page 22 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne INORGANIQUES ORGANIQUES Arséniate Nitrite Acétate Formiate Arsénite Nitrure Acides aminés Fumarate Bromate Perchlorate Acrylate Glutamate Bromure Periodate Adipate Glycérol Carbonate Phosphate Aldéhydes Glycolate Chlorate Pyrophosphate Alkyl-aryl-sulfates Hexoses Chlorite Rhénate Alkyl-phosphates Isocitrate Chlorure Séléniate Alkyl-Phosphonates Lactate Chromate Sélénite Alkyl-sulfates Malate Cyanure Silice Alkyl-sulfo-acétates Maléate Dithionate Sulfate Alkyl-sulfonates Malonate Dithiophosphate Sulfite Alpha-céto-glutarate Mercaptans Fluorure Sulfure Aryl-phosphates Méthanol Fluorophosphate Tétrafluoroborate Aryl-phosphonates N-acétyl-hexosamises Fluorosilicate Tétrapolyphosphate Aryl-sulfates N-acétyl-neuraminate Hypochlorite Tétrathionate Aryl-sulfonates Oligo-saccharides Hypophosphite Thiocyanate Ascorbate Oxalate Lodate Thiophosphate Benzoate Phénols Lodure Thiosulfate Butyl-phosphates Phtalate Molybdate Trimétaphosphate Butyne-diol Propionate Nitrate Tripolyphosphate Butyrate Pyrrolidone carboxylate Caproate Pyruvate Caprylate Quinate Céto-actanoate Saccharine Chloro-acétates Shikimate Chloro-phénols Succinate Citrate Tartrate Disfures Valériate EDTA Ethanol Page 23 ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE 5. La chromatographie cationique DES MINES SAINT-ETIENNE Comme pour la chromatographie anionique, on retrouve plusieurs méthodes de détection qui sont d'ailleurs sensiblement les mêmes qu'en chromatographie anionique: détection conductimétrique (avec ou sans suppresseur), détection spectrophotométrique et électrochimique. La différence la plus importante se situe au niveau de l'éluant et la colonne, car dans ce cas, c'est un acide qui doit passer à travers une résine échangeuse de cations. Ceci étant précisé, le schéma synoptique de l'appareillage reste le même. 5.1. Suppression et détection conductimétrique. En chromatographie cationique, l'unité de suppression va échanger les anions non désirés pour la détection. Cette unité de suppression va se comporter comme une résine échangeuse d’anions, régénérée par un contre-courant de soude NaOH. Par exemple, si l'éluant est l'acide nitrique HNO3 et l'échantillon un mélange de NaNO3 et KNO3, on a les réactions suivantes dans le suppresseur : → éluant : H+NO3- + R+OH- → R+NO3- + H2O → échantillon : K+NO3- + R+OH- → R+NO3- + K+OHNa+NO3- + R+OH- → R+NO3- + Na+OHIl ne reste plus qu'à mesurer la conductivité de K+OH- et Na+OH- dans l’eau qui possède une conductivité négligeable à côté des produits formés. 5.1.1. Séparation des cations monovalents Cette séparation se produit sans problème, avec un éluant comme l'acide nitrique ou l'acide perchlorique. Ceci est montré dans la figure ci-dessous. Li+ Na+ NH+4 K+ Rb+ 0 4 8 12 Temps en (minutes) 16 5.1.2. Séparation des cations bivalents Celle-ci est un peu plus délicate car les cations bivalents sont plus retenus sur la colonne. La solution pourrait être d'utiliser des éluants plus concentrés mais comme il s'agit d'acides forts, ils deviendraient trop corrosifs. L'éluant adapté est le m-phénylènediamine comme le montre la figure suivante. Page 24 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne (Li - Cs) ECOLE Mg 2+ DES MINES SAINT-ETIENNE Ca 2+ Sr 2+ Ba 2+ 0 4 8 12 Temps en minutes 16 Néanmoins, on est limité, avec cette méthode, aux ions figurants sur ces chromatogrammes car les autres cations métalliques forment, dans le suppresseur, des précipités insolubles. 5.1.3. Utilisation d'un suppresseur à sulfate L'éluant utilisé est soit Ba(NO3)2, soit BaCl2 ou Pb(NO3)2. On élimine les cations de l'éluant en formant des précipités de BaSO4 dans l'unité de suppression. 5.1.4. Méthode sans suppresseur Le principe de détection est basé sur la diminution de conductivité lorsqu'un cation de l'échantillon passe. Pour se faire, la conductance équivalente de l'éluant doit être plus forte que celle des anions à doser. 1.d.1. Séparation des cations monovalents : Réponse du détecteur T E M P S LI+ Na+ E N M I N U T E S NH4+ K+ Rb + Cs+ Ce chromatogramme a été volontairement renversé car le détecteur ne mesure que des pics négatifs. Il nous montre la très bonne sensibilité de la méthode pour une analyse qui dure moins de 10 minutes. Cette méthode est très utilisée pour le dosage des cations les plus courants (Na+, + K+, NH4 ) car ces 3 espèces-là sont séparées et détectées en 1 minute seulement. Page 25 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne LI+ ECOLE DES MINES Na+ SAINT-ETIENNE NH4+ K+ UNE MINUTE Par contre, avec cette méthode-là, on observe une dérive de la ligne de base car les échantillons contiennent souvent, en plus des métaux que l'on désire doser, des métaux bivalents (Mg2+, Ca2+) qui sont retenus sur la résine : ceci diminue la longueur effective de la colonne et donc les temps de rétention. La solution à ce problème est l'injection de 100 µl d'acide nitrique (0,1 M) qui va pousser Mg 2+ et Ca2+ en-dehors de la colonne. 1.d.2. Séparation des amines cationiques : T E M P S E N M I N U T E S INJECTION 0 CH3NH3+ 3 (CH3)2NH2+ 6 9 L'utilisation d'un acide fort (ex : HNO3) comme éluant permet l'ionisation des anions dans leur forme cationique et on peut ainsi les détecter avec une très bonne sensibilité. D'autres méthodes utilisant un éluant complexant et/ou un réactif complexant rajouté à l'échantillon permettent d'obtenir les chromatogrammes ci-dessous : Page 26 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne Lu R E P O N S E Zn (II) CO (II) ECOLE Tm DES MINES Mn (II) Ca (II) D U SAINT-ETIENNE R E P O N S E Cd D E T E C T E U R Sr (II) Pb (II) Ho D U D E T E C T E U R 0 3 6 9 12 15 Mg (II) R E P O N S E (a) (b) Sr (II) Gd Nd Ce La I N J E C T I O N 0 3 6 9 12 15 16 19 21 24 27 30 33 Temps de l’ élution en minutes Ca (II) D U D E T E C T E U R Pr Ca (II) Fe (II) Sr (II) 0 3 6 9 12 0 3 6 9 12 Temps (minutes) Temps (minutes) 5.2. Méthodes sans suppresseur et détection spectrophotométrique. On retrouve ici les 2 méthodes déjà expliquées en chromatographie anionique : → détection indirecte → détection d'un complexe coloré 5.2.1. Détection indirecte L'éluant choisit est le sulfate de cuivre CuSO4 qui absorbe dans l'UV alors que les cations n'absorbent pas. La séparation des cations de l'échantillon entraîne une diminution de la concentration de l'éluant et par conséquent, une diminution de l'absorbance de ce dernier. 5.2.2. Formation d'un complexe coloré L'appareillage utilisé est le suivant : Page 27 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne BASIC COMPONENTS OF AN IC WITH PRESSURIZED SINGLE REAGENT PCR ECOLE Eluent DES MINES Pump SAINT-ETIENNE Separator Column Pressure Reservoir Reagent Mixing Tee Reactor Detector Output Recorder/Integrator Ce qui permet d'obtenir: 0,010 Ca Sr Ba Mg 0,005 Injection 0 3 6 9 0 15 12 Temps de rétention en minutes Ce chromatogramme a été obtenu par formation de complexes métal-arsenazo (1), tout comme le chromatogramme ci-dessous mais qui a nécessité des conditions particulières (gradient de concentration de l'éluant). Ho 0020 Tb Dy Eu 0016 A B S O R B A N C E 0012 Nd Lu Er Pr Yb Gd Tm Ce La Sm 0008 0004 00 4 8 12 16 20 24 Temps de rétention en minutes Page 28 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne 5.3. Séparation avec détection électrochimique. ECOLE Ces méthodes ont été décrites pour la chromatographie anionique et elles restent valables pour la chromatographie cationique. Un excellent exemple est représenté ci-dessous et permet de mettre en évidence la très bonne sensibilité de mesure. C O U R A N T E L E C T R O L Y T I Q U E Hg Cu Zn Pb Ni Cd Co 0 10 20 30 Temps en minutes 40 De manière analogue à la chromatographie anionique, voici le tableau des cations que l'on peut doser à l'aide de ces méthodes: INORGANIQUES ORGANIQUES Aluminium Fer (II et III) Plomb Acétyl-choline Ethanol-amines Ammonium Gallium Potassium Acides aminés Ethylamines Argent (cyanure) Gadolinium Rubidium Alkyl-diamines Isopropanolamines Baryum Holmium Samarium Alkyl-pyridiniums Methylamines Cadmium Hydrazine Sodium Amino-guanidines Methyl-hydrazine Calcium Lithium Strontium Amino-méthyl-propanol Morpholine Césium Lutécium Terbium Benzalkoniums N-Méthyl-pyrrolidine Chrome (III, VI) Magnésium Uranium Benzyltriméthylamine Putrescine Cobalt Manganèse Vanadium(IV,V) Butylamines Tétrabutylammonium Cuivre Mercure Yttrium Cadavérine Tétraméthylammonium Dysprosium Nickel Ytterbium Choline Tétraéthylammonium Erbium Or (I et III) Zinc Cyclohexylamine Tétrapropylammonium Etain (II et IV) Palladium Platine Diméthylbutylamine Urée Page 29 DES MINES SAINT-ETIENNE Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne 6. Conclusions ECOLE DES MINES SAINT-ETIENNE Cet exposé a permis de voir le (ou plutôt les) principe (s) de la Chromatographie ionique et l’ensemble des configurations que l’on trouve le plus couramment. On aura pu mettre en évidence les avantages de cette technique récente qui a connu un important développement, concrétisé par les deux importantes listes d’anions et de cations détectables à l’aide de ces méthodes. On peut noter enfin que les systèmes commerciaux s’avèrent très fiables et très simples d’utilisation. Néanmoins, il faut quand même noter les deux inconvénients majeurs de cette technique : • Avec une configuration ionique donnée, on ne dose qu’un nombre limité de composés ioniques • Il faut faire attention à l’échantillon que l’on injecte. En effet, il est préférable de le diluer de manière importante car la saturation de la colonne impose de nombreux rinçages pour libérer les sites actifs (ceci diminue notablement la durée de vie de la colonne).Mais d’un autre côté, une dilution trop importante peut alors « masquer » la présence d’un ion minoritaire quelconque dans une matrice d’ions fortement concentrés. Ces deux points faibles (configuration spécifique à un nombre donné d’espèces, concentrations assez proches) nous amène à parler d’une technique encore plus récente et qui peut permettre de résoudre ces deux problèmes : l’électrophorèse capillaire. En effet, toutes les espèces ioniques sont détectées (anions et cations) par inversion du champ électrostatique et comme il n’y a pas de mécanisme chimique (c’est un capillaire inerte), on évite ainsi tout problème de saturation ou d’encrassement. Néanmoins, la chromatographie ionique reste la méthode de référence en matière de dosage des espèces ioniques car l’électrophorèse capillaire se heurte à quelques problèmes de développement, notamment en ce qui concerne l’analyse quantitative. Page 30