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 29 & 30 octobre 2015
SNT - Tours 2015
5e Symposium national « Niches Tumorales »
Clarion Hôtel Belmont
www.cancer-­‐niches-­‐cgo.fr www.micronit.fr c Premier congrès du GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales » 20-­‐22 January, 2016 (La Rochelle, France) lieu : MMV Le Domaine du Château*** www.mmv.fr/residence-­‐club-­‐la-­‐rochelle-­‐le-­‐domaine-­‐du-­‐chateau SNT – Tours 2015
Jeudi 29 et vendredi 30 octobre 2015
Berger Marc
CHU Clermont-Ferrand & EA 7283 CREaT
[email protected]
Blanchard Frédéric
INSERM UMR 957 - Equipe Labellisée Ligue Contre le Cancer 2012
[email protected]
Bonnin-Rouleux Florence
CNRS UMR 7292 - LNOx
Tours
[email protected]
Bourgeais Jérôme
CHU & CNRS UMR 7292 - LNOx
Tours
[email protected]
Coulouarn Cedric
INSERM UMR 991
Rennes
[email protected]
Corlu Anne
INSERM UMR 991
Rennes
[email protected]
Coronas Valérie
CNRS ERL 7368
Poitiers
[email protected]
Delhommeau François
APHP (St Antoine) & UPMC
Paris
[email protected]
Domenech Jorge
CHU & CNRS UMR 7292 - LNOx
Tours
[email protected]
Dumas Pierre-Yves
CHU & UMR CNRS 5164
Bordeaux
[email protected]
Eychene Alain
INSB-CRNS / ITMO cancer AVIESAN
INSERM U 1021 - CNRS UMR 3347, Institut Curie
Orsay
[email protected]
Formstecher Pierre
INSERM U837 - Université de Lille 2 - Centre de Recherche Jean-Pierre Aubert
Lille
[email protected]
Gardano Laura
INSERM UMR 978
Bobigny
[email protected]
Gouilleux Fabrice
CNRS UMR 7292 - LNOx
Tours
[email protected]
Guittat Lionel
INSERM UMR 978
Bobigny
[email protected]
Halty Christelle
CHU & CNRS UMR 7292 – LNOx
Tours
[email protected]
Herault Olivier
CHU & CNRS UMR 7292
Tours
[email protected]
Lazennec Gwendal
INSERM FRE 3690 Sys2Diag
Montpellier
[email protected]
Le Bousse-Kerdiles Marie-Caroline
INSERM 972 - Institut André Lwoff
Villejuif
[email protected]
Le Nail Louis-Romée
INSERM UMR 957 - Equipe Labellisée Ligue Contre le Cancer 2012
Nantes
[email protected]
Louache Fawzia
INSERM U1009 - Institut Gustave Roussy
Villejuif
[email protected]
Maguer-Satta Véronique
U1052- UMR 5286 - Centre de Recherche en Cancérologie de Lyon
Lyon
[email protected]
Mancini Stéphane
Inserm U1068 - CNRS UMR 7258 - Centre de Recherche en Cancérologie de
Marseille
[email protected]
Mazure Nathalie
CNRS UMR 7284 – INSERM U1081 – UNS – IRCAN
Nice
[email protected]
Mazurier Frederic
CNRS UMR 7292 - LNOx
Tours
[email protected]
Mechta-Grigoriou Fatima
INSERM U830 – laboratoire “Stress & cancer” – Institut Curie
Paris
[email protected]
Mourcin Frédéric
INSERM UMR U917 MiCa
Rennes
[email protected]
Pellat-Deceunynck Catherine
INSERM 892 - CNRS 6299
Nantes
[email protected]
Pflumio Françoise
Unité INSERM-Université Paris 7 et 11- UMR 967 - CEA
Fontenay-aux-Roses
[email protected]
Praloran Vincent
CHU & UMR CNRS 5164
Bordeaux
[email protected]
Rochet Nathalie
CNRS UMR 6235
Nice
[email protected]
Sola Brigitte
EA 4652 MILPAT
Caen
[email protected]
Suner Ludovic
APHP (St Antoine) & UPMC
Paris
[email protected]
Sunter Nicola
CNRS UMR 7292 – LNOx
Tours
[email protected]
Tarte Karin
UMR INSERM-Université Rennes 1-EFS UMR U917 MiCa
Rennes
[email protected]
Trichet Valérie
INSERM UMR 957 - Equipe Labellisée Ligue Contre le Cancer 2012 - Université de
Nantes
[email protected]
Uzan Benjamin
Unité INSERM-Université Paris 7 et 11- UMR 967 - CEA
Fontenay-aux-Roses
[email protected]
Zhang Yanyan
INSERM U1009 - Institut Gustave Roussy
Villejuif
[email protected]
SNT – Tours 2015
jeudi 29 et vendredi 30 octobre 2015
Programme
Jeudi 29 octobre
12h00
Déjeuner - buffet
14h15
Ouverture du symposium
Olivier Herault, CNRS & CHU, Tours
Structure de la niche
Modérateurs : Véronique Maguer-Satta & Marie-Caroline Le Bousse-Kerdiles
14h15
Nouveau mécanisme de contrôle qualité de la mitochondrie dans des conditions d'hypoxie.
Nathalie Mazure, CNRS, Nice
14h45
Les programmes de différenciation des cellules souches hématopoïétiques et des cellules B
précoces dépendent d'une unique niche périvaculaire multispécifique.
Stéphane Mancini, INSERM-CNRS, CRCM, Marseille
15h15
Approche des modifications du microenvironnement médullaire au cours de la leucémie
lymphoïde chronique et de la leucémie myéloîde chronique
Marc Berger, CHU, Clermont-Ferrand
15h45
Dormance tumorale du mélanome dans un modèle murin : implication de cellules
quiescentes de type souche et du contrôle de leur activation par le facteur de transcription
GILZ
Pierre Formstecher, INSERM, Lilles
16h15
Pause
Dynamique de l’interaction microenvironnement / tumeur (part. 1)
Modérateurs : Stéphane Mancini & Frédéric Mazurier
16h45
Des nouvelles du front leucémies aiguës lymphoblastiques T et microenvironnement
Benjamin Uzan, CEA-INSERM, Fontenay-aux-Roses
17h15
Dynamique de la beta-caténine dans le dialogue entre cellules B et leur microenvironnement
dans les syndromes lymphoprolifératifs CD5+
Laura Gardano, INSERM, Bobigny
17h45
PRIMA-1met cible le métabolisme oxydatif indépendamment de p53
Catherine Pellat-Deceunynck, INSERM-CNRS, CRCNA, Nantes
18h15
Les cellules souches mésenchymateuses augmentent la prolifération mais ne modifient pas
l'état de quiescence des cellules d'ostéosarcomes : implications avant et après résection
tumorale.
Valérie Trichet, INSERM, Nantes
20h00
Apéritif
20h30
Dîner
Vendredi 30 octobre
Dynamique de l’interaction microenvironnement / tumeur (part. 2)
Modérateurs : Fawzia Louache & Gwendal Lazennec
8h30
Role de la voie MEK dans l'oncogénèse ovarienne.
Fatima Mechta-Grigoriou, INSERM, Institut Curie, Paris
9h00
Boucle IL-4/CXCL12 dans le lymphome folliculaire : une histoire de niche.
Karin Tarte, INSERM & CHU, Rennes
9h30
Fonctions anti- et pro-oxydantes des protéines Stat5 dans les cellules leucémiques.
Fabrice Gouilleux, CNRS, Tours
Biomarqueurs, ciblage thérapeutique
Modérateurs : François Delhommeau & Jorge Domenech
10h00
Ciblage des cellules primaires de leucémies aiguës myéloïdes par un anticorps antiCXCR4 chez les souris NOD/SCID.
Yanyan Zhang, INSERM, Institut Gustave Roussy, Villejuif
10h30
ARN non-codants longs et voie du TGF-beta dans le cholangiocarcinome intrahépatique.
Cédric Coulouarn, INSERM, Rennes
Discussion générale - évolution du réseau
Modérateur : Olivier Herault
11h00
INCa & AAP "Hétérogénéité fonctionnelle des relations cellulaires des tumeurs dans leur
écosystème"
Alain Eychene, Institut Curie & ITMO Cancer AVIESAN
12h00
Déjeuner
14h00
Fin du symposium
Symposium organisé par l’Association Hématologie Biologique - CHRU de Tours - Pr Olivier Herault
ABSTRACTS
Nouveau mécanisme de contrôle qualité de la mitochondrie
dans des conditions d'hypoxie
M. Christiane Brahimi-Horn, Sandra Lacas-Gervais, Ricardo Adaixo, Karine Ilc, Matthieu
Rouleau, Annick Notte, Marc Dieu, Carine Michels, Thibault Voeltzel, Véronique MaguerSatta, Joffrey Pelletier, Marius Ilie, Paul Hofman, Bénédicte Manoury, Alexander Schmidt,
Sebastian Hiller, Jacques Pouysségur and Nathalie M. Mazure
Institute for Research on Cancer and Aging of Nice, CNRS-UMR 7284-Inserm U1081,
University of Nice Sophia-Antipolis, Centre Antoine Lacassagne, 33 Avenue de Valombrose,
06189 Nice, France; CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches
tumorales »
The oxygen-limiting microenvironment (hypoxia) of tumors induces metabolic
reprogramming and cell survival, but the underlying mechanisms implicating mitochondria
remain poorly understood. We previously demonstrated that the hypoxia-inducible factor-1
mediated hyperfusion of mitochondria, by inducing Bcl-2/adenovirus E1B 19-kDa interacting
protein 3, and post-translational truncation of the mitochondrial ATP transporter, the outermembrane voltage-dependent anion channel 1, in hypoxic cells. In addition, we showed that
truncation was associated with increased resistance to drug-induced apoptosis and was
indicative of increased patient chemoresistance. We now show that silencing of the tumor
suppressor TP53 decreased truncation and increased drug-induced apoptosis. We also show
that TP53 regulated truncation through induction of the mitochondrial protein Mieap. While
we found that truncation was independent of mitophagy we observed local microfusion
between mitochondria and endolysosomes in hypoxic cells in culture and in patient’s tumor
tissue. Since we found that the endolysosomal asparagine endopeptidase was responsible for
truncation, we propose that it is a readout of mitochondrial-endolysosomal microfusion in
hypoxia. These novel findings provide the framework for a better understanding of hypoxic
cell metabolism and cell survival through mitochondrial-endolysosomal microfusion
regulated by the hypoxia-inducible factor-1 and TP53.
Hematopoietic Stem Cell and early B cell differentiation programs
depend on a unique multispecific perivascular niche
M. Balzano1,2, M. De Grandis1, T.P. Vu Manh2, L. Chasson2, A. Boned2, A. CartierMichaud1, A.L. Bailly1, A. Sergé1, G. Bidaut1, M. Aurrand-Lions1, C. Schiff2, S.J. Mancini1,2,3
1
Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille (CRCM), 27 Bd Leï Roure, BP30059,
13273 Marseille Cedex 09 ; 2CIML, Parc Scientifique de Luminy, Case 906, 13288 Marseille
cedex 09 ; 3CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales »
Introduction: In the bone marrow, stromal cells influence the development of hematopoietic
stem cells (HSC) and early B cells. Many stromal cell niches specific for HSC have been
described but recent results show that CXCL12+ and Stem Cell Factor (SCF)+ perivascular
stromal cells are crucial for HSC maintenance. When committed to the B cell lineage,
progenitors localize close to CXCL12+ cells, before their migration toward IL7+ cells when
differentiating into pro-B cells. We have finally demonstrated that the following pre-B cells
are in contact with galectin-1+ stromal cells. While these data show the existence of numerous
niches, the level of heterogeneity of these cellular niches is still unclear. This heterogeneity
has been recently downscaled in a study showing that the CXCL12+ and the SCF+
perivascular stromal cells, described as both being HSC specific niches, were indeed the
same. Furthermore, the IL7+ pro-B cell niche that we have recently characterized is very
similar to this HSC niche in term of morphology, localization and expression of markers
described in the different studies. These results suggest that stromal cells could be
"multispecific" and therefore supply factors required for distinct hematopoietic cells.
Results: In the current study, we have compared the gene expression signatures of IL7-YFP+
with CXCL12-GFP+ and SCF-GFP+ stromal cells and found that they were indeed similar. In
addition, we purified this stromal subpopulation from wild type animals using specific
phenotypic markers and confirmed that SCF, CXCL12 and IL7 were co-expressed at the
single cell level. These results strongly support that, in opposition to what was thought before,
HSC and progenitor B cells depend on the same stromal cell niche. The interactome settled
specifically between the perivascular niche and HSC, pre-pro-B or pro-B cell has been
characterized and genes involved in adhesion were functionally tested.
Conclusion: These results clearly demonstrate that peri-sinusoidal stromal cells can support
differentiation programs of distinct hematopoietic cells by supplying specific factors to each
of them. This work paves the way to the analysis of stromal cell niches that could support the
growth of malignant hematopoietic cells. Molecules involved in the interaction between BAcute Lymphoblastic Leukemia and the bone marrow stromal cells have been identified and
their role in leukemic progression is under investigation.
Recent citations:
1. Mourcin F., Breton C., Tellier J., Narang P., Chasson L., Jorquera A., Coles M., Schiff C. and Mancini S.J.C.
Galectin-1 expressing stromal cells constitute a specific niche for pre-BII cell development in mouse bone
marrow. Blood (2011), 117:6552-6561
2. De Grandis M, Lhoumeau AC, Mancini SJ, Aurrand-Lions M. Adhesion receptors involved in HSC and earlyB cell interactions with bone marrow microenvironment. CMLS (2015), in press
Approche des modifications du microenvironnement médullaire
au cours de la leucémie lymphoïde chronique
et de la leucémie myéloïde chronique
Alexandre Janel, Juliette Berger, Céline Bourgne, Eric Hermet, Oliver Tournilhac, Marc Berger
EA7283 CREaT, Université d’Auvergne, Service d’Hématologie Biologique, CHU Estaing, 1 place
Lucie et Raymond Aubrac, 63003 Clermont-Ferrand cedex 1
Introduction : La Leucémie Lymphoïde Chronique (LLC) et la Leucémie Myéloïde Chronique
(LMC) sont deux hémopathies chroniques, l’une correspondant à la prolifération de cellules
lymphoïdes B CD19+ CD5+, l’autre correspondant à une prolifération myéloïde à partir d’une CSH
porteuse du chromosome Ph1. Ces deux hémopathies présentent initialement un envahissement
médullaire systématique, sont sensibles à des thérapies ciblées, mais une hétérogénéité intra-clonale
est responsable de la persistance d’une sous-population de cellules résistantes. Nous étudions
l’impact des clones leucémiques sur le microenvironnement tumoral, considéré comme protecteur à
l’égard des cellules résiduelles.
Méthode : Nous avons dans un premier temps analysé les cellules mésenchymateuses de moelle
osseuse, en particulier de la LLC. Puis, afin de se rapprocher autant que possible des conditions
physiopathologiques in vivo, nous nous avons étudié les agrégats cellulaires appelés hématons
Résultats : En utilisant les outils classiques d’identification des progéniteurs mésenchymateux, nous
avons montré que les CFU-F de moelle osseuse de LLC étaient nettement diminués voire absents.
Lorsqu’ils sont détectables, ils sont en majorité sénescents, remettant en question le dogme de la
protection du clone par les cellules mésenchymateuses à l’égard de la chimiothérapie. Dans la
LMC, la détection de CFU-F est possible dans la majorité des cas, avec des fréquences hétérogènes.
Dans une première étude de moelles osseuses normales, nous avons réuni des arguments
démontrant que la grande majorité (90%) des hématons contiennent les éléments de la niche
stromale et des cellules immatures y compris des LTC-IC, et représentent vraisemblablement une
unité élémentaire fonctionnelle complète de la moelle osseuse. Dans la LLC, le clone B désorganise
ces structures notamment par diminution voire disparition des progéniteurs mésenchymateux. Dans
la LMC, il semble que ces structures sont partiellement conservées mais pourraient être le siège de
modifications particulières.
Conclusion : Bien qu’envahissant toutes deux la moelle osseuse et évoluant sur plusieurs années, les
clones LLC et LMC ont un impact différent sur le microenvironnement, notamment sur les cellules
mésenchymateuses et les hématons. Les hématons apparaissent un modèle séduisant pour
comprendre les relations entre le clone malin et le microenvironnement « in vivo », et évaluer
l’efficacité de ciblage des nouvelles thérapies, en particulier les ITK dans la LMC.
Références :
- Janel A, Dubois-Galopin F, Bourgne C, Berger J, Tarte K, Boiret-Dupré N, Boisgard S, Verrelle P, Déchelotte P,
Tournilhac O, Berger MG. The Chronic Lymphocytic Leukemia Clone Disrupts the Bone Marrow Microenvironment.
Stem Cells Dev, 23(24), 2972-2982, 2014.
- Bourgne C, Bamdad M, Janel A, Libert F, Gagnieu MC, Rapatel C, Pigeon P, Pereira S, Hermet E, Guerci A,
Pereira B, Cony Makhoul P, Johnson Ansah A, Cahn JY, Guyotat D, Trouillier S, Berger J, Boiret-Dupré N,
Berger MG. Measurement of imatinib uptake by flow cytometry. Cytometry A, 81(11), 996-1004, 2012.
- Veyrat-Masson R, Boiret-Dupré N, Rapatel C, Descamps S, Guillouard L, Guérin J-J, Pigeon P, Boisgard S,
Chassagne J, Berger MG. Mesenchymal content of fresh bone marrow : a proposed quality control method for cell
therapy. British Journal of Haematology, 139(2), 312-320, 2007 (4.080).
- Boiret N, Rapatel C, Boisgard S, Charrier S, Tchirkov A, Bresson C, Camilleri L, Berger J, Guillouard L, Guérin J-J,
Pigeon P, Chassagne J, Berger MG. CD34(+)CDw90(Thy-1)(+) subset colocated with mesenchymal progenitors in
human normal bone marrow hematon units is enriched in colony-forming unit megakaryocytes and long-term cultureinitiating cells. Experimental Hematology, 31(12), 1275-1283, 2003.
Dormance tumorale du mélanome dans un modèle murin : implication de cellules
quiescentes de type souche et du contrôle de leur activation
par le facteur de transcription GILZ
Yasmine Touil1, Pascaline Ségard1, Séverine Begard1, Pauline Ostyn1, Caroline Aspord2,
Bernadette Masselot1, Raja El-Machhour1, Jerôme Vandomme1, Pilar Flamenco1, Thierry
Idziorek1, Martin Figeac3, Pierre Formstecher1,4, Bruno Quesnel1,4 and Renata Polakowska1,4
1
Inserm UMR-S1172 Centre de Recherche Jean Pierre Aubert (JPArc), Institut pour la
Recherche sur le Cancer de Lille (IRCL), 1 Place de Verdun, 59045 Lille, France ; 2Institut
A. Bonniot, Ontogenèse et Oncogenèse Moléculaires, UMR EFS-UJF-INSERM 823,
Immunobiology and Immunotherapy of Cancers, Grenoble, France ; 3Plateforme de
Génomique Fonctionnelle, IRCL, 59045 Lille, France ; 4CNRS GDR 3697 Micronit
« Microenvironnement des niches tumorales »
Les cancers métastatiques rechutent suite à la réactivation de cellules tumorales dormantes
disséminées. Les caractéristiques précises des cellules dormantes et les mécanismes impliqués
dans leur réactivation commencent seulement à être identifiés. Nous avons construit un
modèle syngénique de dormance tumorale du mélanome chez la souris utilisant la lignée
tumorale B16 et une approche par immunisation. Nous avons obtenu des lignées cellulaires
« dormantes » à partir de ce modèle. Nous avons montré que ces cellules dormantes
présentent des caractéristiques de cellules souches tumorales quiescentes. Elles expriment des
marqueurs membranaires de cellules souches tels que CD24 et CD133, forment davantage de
mélanosphères que les cellules B16F1 d’origine et sont plus tumorigènes que ces cellules
quand on les injecte à des animaux naïfs. Nous avons mis en évidence le rôle du facteur de
transcription « Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper (GILZ) dans la régulation de la
quiescence/activation in vitro de ces cellules dormantes et du délai d’apparition et de
croissance tumorale du mélanome après injection in vivo. L’expression de GILZ est faible
dans les cellules dormantes, une observation déjà faite dans un autre modèle de dormance
développé au laboratoire (1), tandis que sa réexpression régule négativement le facteur de
transcription Foxo3A et sa cible d’aval p21, responsable de la quiescence des cellules. La
downrégulation de GILZ retarde l’apparition et la croissance des tumeurs à partir des cellules
dormantes. Ces résultats ont été validés dans des cellules de mélanome humain. Nous avons
utilisé pour cela un système d’induction conditionnelle d’H2B-GFP permettant de tracer et
d’isoler les cellules tumorales quiescentes. La downrégulation transitoire de GILZ induit la
quiescence de cellules humaines de mélanome in vitro et retarde leur croissance tumorale
après xénogreffe à des souris immunodéprimées CB17-SCID, tout en conduisant à un
accroissement de leur tumorigénicité (passage de 20 à 60% de prise de tumeur). La croissance
tumorale s’accompagne d’une réexpression de GILZ.
Conclusion : les cellules dormantes de mélanome présentent des propriétés de cellules
souches quiescentes. Le facteur de transcription GILZ joue un rôle essentiel dans le contrôle
de leur passage de la quiescence à l’activation in vitro et de la dormance à la rechute in vivo.
Référence :
1. L Joha S, Nugues AL, Hétuin D, Berthon C, Dezitter X, Dauphin V, Mahon FX, Roche-Lestienne C,
Preudhomme C, Quesnel B, Idziorek T. GILZ inhibits the mTORC2/AKT pathway in BCR-ABL(+) cells.
Oncogene. 2012 Mar 15;31(11):1419-30.
Conséquences d’un environnement hypoxique sur la croissance et la chimiorésistance
des leucémies aiguës lymphoblastiques T
L Fahy ; J Calvo ; F Pflumio & B Uzan.
UMR967 Inserm, CEA, Laboratoire des cellules Souches Hématopoïétiques et Leucémiques,
Fontenay aux Roses ; CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches
tumorales »
Introduction : La leucémie aiguë lymphoblastique T (LAL-T) est une hémopathie maligne
caractérisée par une prolifération clonale de blastes, précurseurs lymphoïdes T indifférenciés
incapables d’achever leur maturation. Ces blastes sont retrouvés dans la moelle osseuse, le
sang, le thymus et/ou les ganglions. La prise en charge thérapeutique des LAL-T comporte
une chimiothérapie d'induction, qui chez l’enfant, donne lieu à la rémission complète dans
95% des cas. Néanmoins, les enfants présentant une rechute ont un pronostic très défavorable
de même que les traitements actuels ont des effets secondaires importants qu’il convient
idéalement de réduire. L’idée actuelle est donc de trouver des voies de traitements
complémentaires permettant une désescalade thérapeutique. Outre l'implication des voies
oncogéniques intracellulaires dans le développement leucémique, des signaux extracellulaires
délivrés par le microenvironnement participent aussi à l'apparition et à la progression des
LAL-T. Le microenvironnement médullaire, lieu de propagation et de maintien de la
leucémie, est hypoxique, avec des taux d’oxygène variant de 0.1% à 5%. Dans ce travail, nous
avons étudié les conséquences d’un environnement hypoxique sur le développement et la
chimiorésistance des LAL-T.
Méthodes : La croissance, l’apoptose, le cycle cellulaire, la chimiorésistance, et la capacité de
greffe en souris NSG de blastes de LAL-T humaines cultivés en normoxie (21% d’O2) ou en
conditions hypoxiques (3.5% et 1% d’O2), ont été quantifiés.
Résultats : Comparée à la condition normoxique, l’hypoxie inhibe la croissance des blastes en
freinant leur avancement dans le cycle cellulaire et en induisant leur apoptose. Toutefois, les
blastes incubés en hypoxie conservent leur capacité à propager la leucémie après
transplantation à des souris immunodéficientes. De plus, les blastes de LAL-T cultivés en
hypoxie et traités par la vincristine sont protégés de cette chimiothérapie et conservent
toujours, après l’arrêt du traitement, leur capacité à croître en culture et à initier des leucémies
in vivo.
Discussion : Ces résultats suggèrent que les niches hypoxiques pourraient jouer un rôle
majeur dans la chimiorésistance des leucémies. Par ailleurs, nous avons montré que les sites
adipocytaires de la moelle osseuse de souris induisent des phénomènes similaires en terme de
prolifération, d’apoptose et de chimiorésistance des blastes de LAL-T. Etablir un lien fort
entre la quantité d’adipocytes et des taux bas d’oxygène permettrait 1) une meilleure
caractérisation des zones les plus hypoxiques de la moelle osseuse et 2) d’améliorer la prise
en charge des patients en ciblant spécifiquement les blastes les plus susceptibles d’entraîner
une rechute.
Dynamique de la b-caténine dans le dialogue entre cellules B et leur
microenvironnement dans les syndromes lymphoprolifératifs CD5+
Gregory Lazarian, Kalyankumar Matti, Florence Cymbalista, Nadine Varin-Blank, Fanny
Baran-Marszak et Laura Gardano
INSERM U978- Université Paris 13-Labex Inflamex- rue Marcel Cachin- Bobigny 93017
Introduction : la leucémie lymphoïde chronique et le lymphome du manteau sont deux
pathologies caractérisées par l’accumulation de cellules B CD5+ au niveau du sang et organes
lymphoïdes secondaires. Cette accumulation, due à un défaut de l’apoptose et du contrôle de
prolifération, est aussi causée par une altération du dialogue des cellules B tumorales avec
leur microenvironnement. Au cours de notre étude des voies de signalisation impliquées dans
le dialogue des cellules B de LLC et du MCL avec leur microenvironnement, nous avons
concentré notre attention sur la voie Wnt/b-caténine. En effet, cette voie est connue pour être
altérée dans la LLC et dans le MCL ainsi que dans nombreuses tumeurs. L’activation de la
voie Wnt entraine la stabilisation de la ß-catènine qui transloque dans le noyau pour activer la
transcription de gènes qui contrôlent le cycle cellulaire et la prolifération.
Résultats : nous avons observé une augmentation de la protéine b-caténine suite à la coculture des cellules B-LLC et B-MCL. Ceci suggère une activation de la voie Wnt dans les
cellules B par le microenvironnement. De façon intéressante, nous avons aussi constaté que le
niveau de b-caténine augmente lorsque l’on stimule la voie de signalisation du BCR qui est la
voie fondamentale de survie des cellules B. Toutefois, la stabilisation de la b-caténine suite à
la stimulation du BCR n’entraine pas le même effet transcriptionnel que la stimulation via
Wnt. La voie du BCR pourrait réguler d’autres fonctions de la ß-caténine, notamment au
niveau de la membrane cellulaire.
PRIMA-1Met induit l’apoptose des cellules de myélome en dérégulant la balance
GSH/ROS indépendamment de p53 et de l’environnement
Benoît Tessoulin, Sylvanie Surget, Géraldine Descamps, Philippe Moreau, Sophie Maïga,
Laurence Lodé, Catherine Godon, Séverine Marionneau-Lambot, Thibauld Oullier, Steven Le
Gouill, Martine Amiot, Catherine Pellat-Deceunynck
CRCNA, INSERM892, CNRS6299, Université de Nantes, Service et Laboratoire
d’Hématologie, CHU Nantes, Plate-forme in vivo, Cancéropôle Grand Ouest, Nantes ; CNRS
GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales »
Introduction : Dans le Myélome Multiple (MM), tumeur plasmocytaire, l’hétérogénéité
oncogénomique (anomalies chromosomiques du locus 14q32, IGH) détermine la réponse aux
traitements. Indépendamment de ces anomalies primaires, la perte du bras court du
chromosme 17 (del17p) est associée à une forte résistance aux traitements et aucun traitement
actuel ne gomme ce mauvais pronostic. Les anomalies de TP53 (mutation ponctuelle, délétion
d’exons..) sont essentiellement voire exclusivement retrouvées dans les cellules del17p+. Le
but de travail était d’évaluer l’efficacité de molécules réactivatrices de p53 sauvage et/ou
mutée (Nutlin3a, RITA, PRIMA-1MET) dans des lignées et cellules primaires caractérisées
pour leur anomalie de TP53 et/ou del17p.
Méthodes : Cette étude repose sur l’analyse de 27 lignées de MM reproduisant la diversité
onco-génomique des patients, d’une vingtaine de cellules myélomateuses isoléess de patient
au diagnostic ou en rechute et sur un modèle de xénogreffe dans la souris Scid beige. Nous
avons évalué le rôle de la voie p53 et des ROS dans la réponse à PRIMA-1Met qui a été
initialement isolé et décrit comme un réactivateur de la protéine p53 mutante.
Résultats: Les lignées ont une sensibilité variable à PRIMA-1MET avec des DL50 variant de
4 µM à plus de 200 µM. Cette sensibilité n’est pas corrélée à l’hétérogénéité oncogénomique
ni aux anomalies de TP53, contrairement à la Nutlin3a, inhibiteur de l’E3ligase de p53
MDM2, qui n’induit l’apoptose que des lignées et cellules primaires p53 sauvage.
Contrairement à la nutlin3a, PRIMA-1MET ne réactive pas la voie p53, attestée par l’absence
l’induction de l’expression de gens cibles de p53 (DR5, p21). Cependant, PRIMA-1MET
induit une forte expression de Noxa mais de façon p53 indépendante. Contrairement à la
Nutlin3a, PRIMA-1MET induit la formation de ROS et la sensibilité des lignées est corrélée à
l’expression de la gluthation synthase (GSS). PRIMA-1MET, mais pas la nutlin3a, induit une
forte diminution du GSH et synergise avec le BSO, inhibiteur de la gamma-Glutamylcysteine
synthetase (enzyme de la synthèse du GSH). Dans les cellules primaires, PRIMA-1Met induit
la mort des cellules del17p+ ou del17p- et synergise avec le BSO. Les cellules stromales
protègent les cellules tumorales de la mort induite par PRIMA-1MET mais pas de celle
induite par PRIMA-1MET+BSO. Enfin, PRIMA-1MET+BSO induit une regression tumorale
dans la xénogreffe TP53neg JJN3.
Conclusion : PRIMA-1MET dérégule la balance ROS/GSH et induit efficacement l’apoptose
indépendamment de la voie p53 et de l’environnement stromal.
Tessoulin B, Descamps G, Moreau P, Maiga S, Lodé L, Godon C, Marionneau-Lambot S, Oullier T, Le Gouill
S, Amiot M, Pellat-Deceunynck C. PRIMA-1Met induces myeloma cell death independent of p53 by impairing
the GSH/ROS balance. Blood 2014;124:1626
Surget S, Descamps G, Brosseau C, Normant V, Gomez-Bougie P, Maiga S, Gouy-Colin N, Godon C, Béné
MC, Moreau P, Le Gouill S, Amiot M, Pellat-Deceunynck C. RITA (Reactivating p53 and Inducing Tumor
Apoptosis) is very efficient against TP53abnormal myeloma cells independently of the p53 pathway. BMC
Cancer. 2014;14:437.
Surget S, Chiron D, Descamps G, Gomez-Bougie P, Ménoret E, Moreau P, Bataille R, Le Gouill S, Amiot M,
Pellat-Deceunynck C. Cell death via DR5, but not DR4, is regulated by p53 in myeloma cells. Cancer Res.
2012;72:4562-73.
Les cellules souches mésenchymateuses augmentent la prolifération mais ne modifient
pas l'état de quiescence des cellules d'ostéosarcomes : implications
avant et après résection tumorale.
L-R Le Nail ; P Avril ; P Rosset ; P Layrolle ; D Heymann ; P Perrot ; G De Pinieux & V
Trichet.
INSERM UMR 957 Equipe Labellisée LIGUE 2012, Université de Nantes Laboratoire de
Physiopathologie de la Résorption Osseuse et Thérapie des Tumeurs Osseuses Primitives
Faculté de Médecine, Nantes ; Centre hospitalier universitaire service de Chirurgie Plastique
et des Brûlés, Nantes ; Centre hospitalier universitaire service de Chirurgie Orthopédique et
Traumatologique et service d'Anatomie Pathologique, Tours ; CNRS GDR 3697 Micronit
« Microenvironnement des niches tumorales »
Introduction : L’ostéosarcome (OS) est une tumeur osseuse primitive maligne qui atteint des
patients jeunes (âge médian 20 ans). Cette tumeur rare (150 cas par an en France) se distingue
par une forte résistance aux traitements conventionnels (30% de tumeurs résistantes) et par
une propension à métastaser aux poumons (20% de patients métastatiques au diagnostique).
La présence de cellules souches cancéreuses (CSC) dans ces tumeurs pourrait expliquer ces
résistances, mais aussi l’aspect histologique variable observé (prédominance ostéoblastique
associée à des zones fibroblastiques ou chondroblastiques). De telles CSC dériveraient de
cellules souches/stromales mésenchymateuses (CSM). Méthodes : A partir de pièces de
résection d’OS de patients, des cellules sont isolées et comparées aux CSM dérivées de la
moelle osseuse de ces patients ou d’individus sains. Les marqueurs membranaires des CSM
sont analysés par cytométrie en flux et la capacité de différenciation vers les lignages
ostéoblastique, chondroblastique et adipocytaire est testé. En relation avec une éventuelle
transformation tumorale sont testés leur capacité à former des sphères en milieu de culture
semi-solide, leur caryotype et enfin leur développement dans des souris immunodéficientes
(SCID). Lorsque ces cellules dérivées d’OS ne démontrent pas d’effet tumoral propre, elles
sont été co-injectées avec une lignée d’ostéosarcome humaine dans des souris nude pour
observer leur capacité à soutenir le développement d’ostéosarcome. L’effet de milieux
conditionnés de CSM sur le cycle cellulaire de cellules d’ostéosarcome en prolifération ou en
quiescence a été analysé. Résultats : Notre étude montre que les cellules dérivées
d’ostéosarcome après chimiothérapie expriment des marqueurs des CSM mais sont déjà
engagées dans une différenciation ostéoblastique. Elles présentent des caractéristiques de
CSC (formation de sphères, métabolisme oxydatif réduit) mais n’ont pas induit la formation
de tumeur in vivo. Par contre elles peuvent soutenir le développement d’ostéosarcome
primitif et le processus métastatique. Cet effet est au moins en partie du à des facteurs
solubles de haut poids moléculaires (>50kDa) puisque in vitro la prolifération est augmentée
de 150 à 180% par les milieux conditionnés de CSM. Cependant ces facteurs sécrétés par les
CSM n’étaient pas capables d’activer l’entrée en cycle cellulaire de cellules d’ostéosarcome
cultivées en sphère. Discussion : Nous n’avons pas isolé des CSC d’OS, mais des cellules
stromales associées à la tumeur. Elles présentent un métabolisme mitochondrial oxydatif
réduit et sont capables d’augmenter la prolifération des cellules d’OS en division in vitro et in
vivo. Par contre, ces facteurs sécrétés par les CSM n’ont pas montré d’effet sur la quiescence
des cellules d’ostéosarcome. Leur utilisation après la résection tumorale lors de reconstruction
osseuse ne représenterait pas un risque accru de récidive par l’activation de cellules tumorales
quiescentes.
Role of MEK pathway in ovarian tumorigenesis
V. Mieulet & F. Mechta-Grigoriou
“Stress and Cancer” laboratory, Institut Curie, Inserm U830, 26 rue d’Ulm, 75005 Paris,
France ; CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales »
Introduction: High-grade ovarian cancer (EOC) is the fifth most common cancer among
women in western countries and remains one of the deadliest gynaecologic malignancies.
Despite a first response to therapy, many patients relapse, become resistant and ultimately die.
To date, ovarian carcinomas have been mainly classified according to their histological
subtype, grade and stage. These observations underline the pressing need to better understand
the biology of EOC, in order to improve the current treatment protocols or potentially develop
more adapted care strategies.
Methods: Low-grade (20%) and high-grade (80%) EOC exhibit distinct genetic alterations,
molecular patterns, and clinical behaviours. KRAS/BRAF mutations are present in more than
70% of low-grade EOC and result invariably in constitutive activation of the downstream
kinase MEK. Based on these observations, MEK inhibitors have been included in clinical
trials for the treatment of low-grade serous ovarian cancer patients. By combining analyses on
EOC patient cohorts, ovarian cancer cells and patient-derived xenografts (PDX), we tested the
activation of MEK and the potential interest of MEK inhibitors in high-grade EOC,
representing 80% of EOC, still associated with a dismal prognosis.
Results: We provide new insights into the role of MAP3K8 (TPL-2/COT), the other wellknown MAP3K upstream MEK, in EOC tumorigenesis and identify this kinase as a new
prognostic marker for these tumours. We demonstrate that MAP3K8 pro-tumourigenic
properties are mainly mediated by MEK/ERK/p90RSK pathway. Furthermore, we identify
key regulators of the G1/S transition and adhesion dynamics – namely cyclin D1 and focal
adhesion kinase (FAK) – as MAP3K8 effectors. As there are no fully validated targetable
molecular markers currently available for this pathology, our data indicate that
MAP3K8/TPL-2/COT could be such a biomarker and define MEK inhibitors as a new
promising therapeutic option for HGSC patients, in combination with conventional therapy.
Discussion: Our data highlight key roles for MAP3K8 in high-grade EOC and indicate that
MEK inhibitors could be a useful treatment strategy, in combination with conventional
chemotherapy, for this disease. Anti-MEK treatments, currently tested in low-grade EOC due
to RAS/RAF mutations, could thus be interesting therapeutic avenues in high-grade EOC
accumulating MAP3K8 protein.
Recent citations:
MAP3K8/TPL-2/COT is a potential predictive marker for MEK inhibitor treatment in high-grade serous ovarian
carcinomas. Gruosso T, Garnier C, Abelanet S, Kieffer Y, Lemesre V, Bellanger D, Bieche I, Marangoni E,
Sastre-Garau X, Mieulet V* and Mechta-Grigoriou F*. (* Co-authors)
Nature Communications, 2015 Oct 12;6:8583. doi: 10.1038/ncomms9583.
Characterization of tumor-infiltrating stroma in follicular lymphoma : Identification of
a supportive IL-4/CXCL12 loop
S. Pandey1, F. Mourcin1, T. Marchand1, M. Coles2, J. Dulong1, F. Barone3, K. Tarte1*
1
INSERM U917, University of Rennes 1, Rennes, France ; 2University of York, UK ;
University of Birmingham, UK ; 4CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des
niches tumorales » ; *corresponding author
3
Introduction: Follicular lymphoma (FL) is the most frequent indolent lymphoma. Beside
recurrent genetic alterations, tumor microenvironment has been shown to play a key role in
FL development, progression, and drug resistance within invaded lymph nodes (LN) and bone
marrow (BM). Within FL niches, CD4pos T-cells, macrophages and stromal cells support
malignant B-cell growth. However, how infiltrating stromal cells acquire specific features in
situ has not been studied yet.
Results: We first highlighted an overexpression of transglutaminase-2 (TGM2), a marker of
fibroblastic reticular cells (FRC), combined to a loose of the follicular dendritic cell (FDC)marker CD21L within infiltrated follicles. In agreement with the crucial role of LTα1β2 in
FDC differentiation, FL B cells displayed a decreased expression of LTα and LTβ compared
to their normal counterpart. Moreover, stromal cells overexpressed CXCL12 in situ.
Interestingly, an ectopic lymphoid stroma developed within FL-invaded BM and is associated
with an up-regulation of CXCL12. Whereas malignant FL B cells induced expression of
CCL2 in stromal cells in a TNF-dependent manner, they did not contribute to CXCL12
induction. Conversely, IL-4 a cytokine strongly overexpressed by FL-infiltrating CD4pos T
cells, showed positive correlation with CXCL12 expression. Moreover, based on our in vitro
model of adipose derived stromal cells (ADSC) differentiation into lymphoid stroma, we
demonstrated that IL-4 triggered CXCL12 expression in stromal cells. Such IL-4 dependent
CXCL12 regulation is more pronounced in ADSC committed towards FRC like cells owing to
an increased STAT6 activation. By utilizing ectopic lymphoid stroma mice model, we also
demonstrate that increased CXCL12 induction is related to IL-4 expression. Finally, CXCL12
efficiently affected FL B cell migration, adhesion and B-cell receptor (BCR) signaling.
Discussion: Altogether, these data reinforce our understanding of the "ménage-à-trois"
between stromal cells, T cells, and malignant B cells within FL cell niche and highlight the
IL-4/CXCL12 loop as a potential therapeutic target in this still fatal malignancy.
Fonctions anti- et pro-oxydantes des protéines Stat5 dans les cellules leucémiques
Jérome Bourgeais1, Nicole Ishac1, Laura Desbourdes1, Valerie Gouilleux-Gruart1,2, Emmanuel
Pecnard1, Florence Rouleux-Bonnin1, Emmanuel Gyan1,3, Jorge Domenech1,4, Frederic
Mazurier1, Olivier Herault1,4,5,6 and Fabrice Gouilleux1*
1
CNRS UMR 7292, GICC, Université F Rabelais, Tours, France; 2CHRU de Tours,
Laboratoire d’Immunologie, Tours, France ; 3CHRU de Tours, Service d’Hématologie
Clinique et Thérapie Cellulaire, Tours, France; 4CHRU de Tours, Service d’Hématologie
Biologique, Tours, France; 5FHU GOAL « Grand-Ouest Acute Leukemia »; 6CNRS GDR
3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales »
Les facteurs de transcription STAT5A et B jouent un rôle important dans l'hématopoïèse
normale et leucémique. Ce sont en effet des effecteurs essentiels d’oncogènes à activité
tyrosine kinase, tels que BCR-ABL ou JAK2V617F, responsables de la genèse d’hémopathies
malignes. Ces oncogènes régulent la production de ROS (Reactive Oxygen Species) via
l’activation de différentes voies de signalisation impliquées dans la prolifération et la survie
cellulaire. Nos travaux indiquent que l’activation oncogénique de STAT5, induite par BCRABL, favorise le stress oxydatif via la répression d’expression des enzymes anti-oxydantes
catalase et glutaredoxine-1. Nous montrons également, pour la première fois, que l’effet prooxydant de STAT5 est régulé par la phosphorylation sur tyrosine de ces protéines et que les
formes non phosphorylées et transcriptionnellement inactives exercent un effet anti-oxydant
et protecteur contre le stress oxydatif via des mécanismes non canoniques. Cette dualité de
fonction est illustrée in vivo chez la souris ainsi que dans un modèle de co-culture de cellules
de LMC et de cellules stromales médullaires que nous avons développé dans le laboratoire
afin de mimer le microenvironnement médullaire des cellules leucémiques. Dans ce modèle,
nous montrons que le contact avec les cellules stromales permet d’inactiver STAT5 dans les
cellules leucémiques et donc de promouvoir son activité anti-oxydante. Nous observons
également un arrêt de prolifération et une entrée en phase G0 du cycle cellulaire des cellules
leucémiques au contact des cellules stromales ainsi qu’une résistance accrue de ces cellules à
l’Imatinib, un inhibiteur de BCR-ABL. Ces données suggèrent un lien important entre activité
anti-oxydante de STAT5, quiescence et chimio résistance des cellules leucémiques
Targeting acute myeloid leukemia
with a new CXCR4 antagonist IgG1 antibody (PF-06747143) in NOD/SCID mice
Yanyan Zhang, PhD1*, Erika Saavedra, MD1*, Ruoping Tang2*, Shu-Hui Liu3*, Tod Smeal4*,
Valeria Fantin, PhD4*, Stephane De Botton, MD, PhD5*, Ollivier Legrand, MD, PhD6,
William Vainchenker, MD, PhD1,7,8, Flavia Pernasetti4* and Fawzia Louache, PhD1,9,10*
1
Gustave Roussy, Inserm 1170, Villejuif, France; 2Service d'Hématologie et Thérapie
cellulaire, Hôpital St Antoine, Paris, France; 3Oncology-Rinat R&D, Pfizer Worldwide
Research and Development, La Jolla, CA; 4Oncology Research Unit, Pfizer Worldwide
Research and Development, San Diego, CA; 5Gustave Roussy, Service d'hématologie,
Villejuif, France; 6Hopital Saint Antoine, APHP, Hematology Dpt, Paris, France; 7LABEX
GR-Ex, Paris, France; 8Université Paris 11, Orsay, France ; 10CNRS GDR 3697 Micronit
« Microenvironnement des niches tumorales »
Introduction: Chemoresistance represents a considerable barrier to improving outcomes for
patients with acute myeloid leukemia (AML) and therapeutic approaches using multiple lines
of therapy have been unsuccessful as cancer cells acquire resistance to the chemotherapeutic
agents to which they are exposed. This vulnerable patient group needs individualizing
therapy through careful selection of appropriate agents based on specific signaling pathways.
The chemokine receptor CXCR4 mediates cell anchorage in the bone marrow
microenvironment, is highly expressed in 25-30% of patients with AML and its expression is
correlated with poor prognosis and drug resistance.
Objective: The purpose of this study was to investigate a new humanized monoclonal IgG1
antibody to CXCR4 (PF-06747143) and its effects as a monotherapy in AML primary patient
samples and in chemotherapy resistant patient-derived xenotransplantation (PDX) models.
This antibody was previously shown to be able to induce cell death through its effector
function (CDC and ADCC) and to be efficacious in cell-based xenograft models of AML,
NHL, CLL and MM.
Results: Here we have shown that PF-06747143 binds strongly and specifically to AML cell
lines and to AML primary cells, by flow cytometry. Of 16 samples evaluated, 7 displayed low
CXCR4 expression (CXCR4neg/low) whereas 9 displayed high expression (CXCR4high). A good
correlation was observed between 12G5, a commercially available CXCR4 Ab, and PF06747143 staining, indicating that PF-06747143 can be used to stratify AML patients.
Chemotaxis in response to CXCL12 was significantly inhibited in all AML patient primary
samples analyzed. Administration of PF-06747143 to mice engrafted with AML patient cells
(PDX models) induced rapid malignant cell mobilization into the peripheral blood at 4 hrs
after a single antibody dose, with mobilized cell levels going back down to baseline at 24 hrs
post-dose. This is in line with the ability of the antibody to block malignant cell homing to the
bone marrow, inducing cell mobilization, as well as induction of cell death through effector
function. To characterize the effects of PF-06747143 on leukemia progression, we used two
different models: 1) P15 model characterized by high CXCR4 expression, inducing
aggressive disease, with rapid progression of leukemia and widespread dissemination and
chemoresistance; 2) P17 model characterized by a low CXCR4 expression, a less aggressive
disease and limited dissemination. Weekly administration of PF-06747143 to leukemic mice
previously engrafted with P17 or P15 malignant cells induced a sharp reduction of leukemia
cells in the bone marrow, spleen and blood leading to increased survival of leukemic mice in
both models. Activity of the antibody as monotherapy was superior to daunorubicin in the
P15 chemoresistant model. Secondary transplantation of bone marrow cells from PF06747143-treated or IgG1 control-treated animals showed that leukemic progenitors were also
targeted by PF-06747143 treatment, with slower tumor growth in mice transplanted with PF06747143-treated cells.
Discussion: In summary, PF-06747143, a CXCR4 IgG1 antibody, is significantly efficacious
as a monotherapy and superior to daunorubicin in AML chemoresistant PDX models. These
findings support evaluation of this antibody in AML therapy, with particular appeal to
patients resistant to chemotherapy and to unfit patients, unable to tolerate intensive
chemotherapy.
Recent reference:
Zhang Y, et al. CXCR4 inhibitors selectively eliminate CXCR4-expressing human acute myeloid leukemia cells
in NOG mouse model. Cell Death Dis. 2012, Oct 4;3:e396. doi: 10.1038/cddis. 2012.137.
ARN non-codants longs et voie TGF-beta dans le cholangiocarcinome intrahépatique
A Merdrignac, C Allain, G Angenard, C Père, A Fautrel , D Bergeat, B Turlin, K Boudjema,
L Sulpice, B Clément & C Coulouarn
Inserm UMR991 « Foie, Métabolismes et Cancer », Hôpital Pontchaillou, Univ. de Rennes 1,
Rennes ; CNRS GDR 3697 Micronit « Microenvironnement des niches tumorales »
Projet « Emergence 2014-2015 » soutenu par le Cancéropole Grand-Ouest
Porteur: [email protected]
Présentation des résultats à 10 mois.
Introduction : La voie du Transforming Growth Factor beta (TGFβ) est fréquemment
dérégulée dans le cancer. Cependant son rôle est complexe car en fonction du stade tumoral
elle exerce soit des effets onco-suppressifs (action cytostatique à un stade précoce), soit des
effets oncogéniques (action pro-métastatique à un stade tardif). Les mécanismes à l’origine de
cette dualité fonctionnelle ne sont pas clairement identifiés. Récemment, nous avons démontré
que l’expression du TGFβ dans la niche des cholangiocarcinomes intrahépatiques (CCI) est
associée à un mauvais pronostique et corrélée à l’expression de plusieurs ARN non-codants
longs (lncRNA). En s’appuyant sur la découverte récente d’un lncRNA capable d’induire les
effets pro-métastatiques du TGFβ, nous émettons l’hypothèse que les lncRNA contribuent à
propager et à moduler l’activité de la voie TGFβ dans les cellules cancéreuses.
Méthodes : Le projet repose sur i) l’analyse supervisée de T-LINC (TGFβ-induced lncRNA),
un lncRNA induit par le TGFβ récemment découvert par notre équipe et ii) l’identification
non supervisée de lncRNA régulateurs de la voie TGFβ basée sur la construction de lignées
senseur de la voie TGFβ et le criblage d’une banque de siRNA dirigés contre des lncRNA.
Résultats préliminaires: Des signatures d’expression génique dépendantes du TGFβ ont été
établies dans 2 lignées de CCI, HuCCT1 et Huh28. La dérégulation de plusieurs gènes cibles
de la voie TGFβ (e.g. SMAD7, SNAI1) a été validée par RT-PCR, dont T-LINC, un lncRNA
de fonction inconnue. Nous rapportons que T-LINC est induit par le TGFβ dans plusieurs
lignées tumorales hépatiques et extra-hépatiques ainsi que dans des cellules du stroma. In
vivo, l’étude du profil d’expression de CCI humains a montré que T-LINC est surexprimé
dans les cholangiocytes tumoraux et le stroma. Une analyse par hybridation in situ a mis en
évidence une expression nucléaire et cytoplasmique de T-LINC. Les premiers résultats
obtenus après gain et perte de fonction suggèrent que T-LINC pourrait contribuer à propager
les fonctions pro-fibrotiques du TGFβ, notamment en modulant l’expression de l’IL8.
Parallèlement, des lignées stables de CCI senseur d’activité de la voie TGFβ ont été établies
et validées. Les conditions de transfection pour le criblage d’une banque de siRNA dirigés
contre >2000 lncRNA sont actuellement en cours de mise au point.
Conclusion : L’étude est la première à identifier un lncRNA dont l’expression est contrôlée
par le TGFβ et qui pourrait contrôler ses effets dans le CCI. Le projet a pour ambition
d’apporter un éclairage nouveau sur les mécanismes moléculaires responsables de la dualité
fonctionnelle du TGFβ dans le cancer et de fournir un rationnel pour des traitements ciblés.
Recent citations:
1. Coulouarn C. Modulating the activation of hepatic stellate cells: a cunning way for metastatic cells to create a
permissive soil for seeding in the liver? Hepatology. 2015 Jan;61(1):37-40.
2. Sulpice L, Rayar M, Desille M, Turlin B, Fautrel A, Boucher E, Llamas-Gutierrez F, Meunier B, Boudjema
K, Clément B, Coulouarn C. Molecular profiling of stroma identifies osteopontin as an independent predictor of
poor prognosis in intrahepatic cholangiocarcinoma. Hepatology. 2013 Dec;58(6):1992-2000.
NOTES