Fiche Prestation - IPAM

Fiche Prestation
Imagerie intravitale
multi-photonique
Référence : PRE-E-03
Version n°03
Mise à jour le 20/05/2016
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POSSIBILITÉS D'UTILISATION
 Prestation en accès libre
 Prestation de service
 Collaboration
L’utilisateur après avoir reçu une
formation par la plateforme est
autonome.
La plateforme réalise le projet
demandé par l’utilisateur du début
jusqu’à la fin.
La plateforme et l'utilisateur réalisent
un projet en commun.
1. ÉQUIPEMENT CONCERNÉ

Système multi-photonique Zeiss LSM 710mp
Microscope zeiss Examiner
Objectif x20 à 2 cm de distance de travail (Mitutoyo)
 Accessoires, modules complémentaires:
Lampe mercure + filtres épifluorescence (GFP, Rhodamine)
Laser Chameleon avec module de pré-compensation (Coherent)
2PMT NDD déscannés (Zeiss)
Loupe binoculaire accolée au microscope pour dissection préalable si nécessaire de l’animal (Zeiss)
Couverture chauffante (WPI)
Respirateur et système d’anesthésie isoflurane (TEM)
Système de mesure de la saturation en Oxygène et électrocardiogramme (mouse Ox, ADInstruments)
Micromanipulateurs
Appareil de mesure de la tension en oxygène dans les tissus (oxymeter, Unisense)
Système d’acquisition : PC Windows Vista
Logiciel d’acquisition : Zen (Zeiss)
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2. PRINCIPE ET APPLICATIONS
2.1. Principe général de l’imagerie intravitale multi-photonique
Notre système est composé d'un microscope accolé à une loupe binoculaire permettant ainsi de faire une
dissection sous anesthésie gazeuse puis d’imager le tissu en microscopie multi-photonique.
Ce système permet une imagerie intégrative haute résolution (<1µm) chez le petit animal anesthésié.
L’utilisation d’objectifs à très grande distance de travail permet une imagerie en profondeur dans l’animal et la
mise en place d’un système de perfusion indispensable au maintien de l’intégrité des tissus et de
micromanipulateurs (injections, mesures d’activités électriques,…) à la surface du tissu d'intérêt (image à épifluorescence). L'excitation 2-photon dans l'infrarouge permet une forte pénétrance dans les tissus (jusqu'à
plusieurs centaines de µm de profondeur dans les tissus les moins denses).
Avantages :
Excitation point focal
 Faible photo blanchiment
 Résolution confocale
Infrarouges peu énergétiques
 Faible toxicité
 Grande pénétrance dans les tissus
2.2. Domaines d'applications
L’acquisition de signaux fluorescents sur nos systèmes d’imagerie permet en particulier de travailler en
dynamique (activité calcique, suivi de molécules, suivi de cellules,…) avec une résolution confocale (cinétiques de
diffusion,…).
Ces systèmes d’imagerie sont également adaptés à l’imagerie in vitro (cuve thermostatée) sur tranches de
tissu frais.
3. GESTION DU PROJET
3.1. Prérequis
1. L’ensemble des protocoles d’expérimentation in vivo doit avoir été déclaré et justifié avant leur mise en
œuvre auprès du préfet par l'expérimentateur titulaire d'une attestation de formation à l’expérimentation
animale. Il faut donc fournir les autorisations relatives à l’étude au responsable de l’animalerie où est réalisée
l’expérimentation : l'hébergement des souris a lieu au sein de l'animalerie de l'IGF.
2. Les consommables de bases nécessaires à la mise en œuvre de la prestation (anesthésique, sérum
physiologique, EPI...) sont fournis par la plateforme et sont inclus dans le coût de la prestation.
Les consommables et produits biologiques spécifiques à un projet particulier devront être fournis par
l'utilisateur. La qualité des produits fournis sont de la responsabilité de l'utilisateur. Dans le cas contraire, la
plateforme ne saurait être tenue responsable de résultats non-conformes. Le mode d'administration et les
éventuelles informations spécifiques associées à ces produits (toxicité, ...) devront être indiqués au personnel de la
plateforme.
3. L’utilisateur peut faire signer un accord de confidentialité au personnel IPAM s’il le souhaite.
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3.2. Descriptif des étapes d’un projet
Vous pourrez suivre l’avancement du projet auprès du responsable technique du plateau concerné. Tout
au long de la prestation, les différentes étapes seront validées au fur et à mesure par l’opérateur
correspondant.
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3.3. Restitution des résultats
Les résultats sont disponibles sous forme de fichiers aux formats : ".lsm", via un serveur sftp protégé par
mot de passe (modalités d’accès communiquées par mail une fois les résultats disponibles).
3.4. Condition et durée de conservation des résultats
Afin d’éviter tout risque de perte des données brutes, dès leur acquisition et avant tout traitement
informatique, ces dernières sont conservées sur un serveur de stockage. L’accès au serveur de stockage est
protégé par un mot de passe et limité au personnel de la plateforme.
La plateforme s’engage à sauvegarder les résultats, images et données obtenus sur la plateforme pendant
1 an après la fin du projet. Passé ce délai, toutes ces informations seront supprimées.
4. CONDITIONS AMBIANTES

L'enregistrement des signaux fluorescents est réalisé en obscurité totale : une lumière extérieure
spécifique indique si une expérimentation est en cours de réalisation.

La température pouvant influencer l’alignement du laser, un enregistreur de température est présent dans
la pièce d’expérimentation afin de suivre les fluctuations de températures et d’intervenir éventuellement sur
le système de climatisation/chauffage:
 Si les températures descendent au-dessous de 18°C ou dépassent 23°C
 Si la fluctuation de température dépasse 2°C en 1 heure

Pour limiter la poussière et protéger l’équipement, un « tapis de propreté autocollant » est installé à l’entrée
de la pièce d’expérimentation et le nettoyage de la pièce est assuré par le responsable de l’équipement.
5. CONTROLES QUALITÉS
5.1. Contrôles qualité des équipements
- Les filtres à charbon de l’appareil d'anesthésie sont pesés tous les 2 mois et changés si nécessaire par le
responsable du système.
- La lampe de fluorescence est changée par le responsable technique au bout de 1000h d'utilisation.
- L'alignement du laser est vérifié sur une lame standard et réglé si nécessaire par le responsable du système
tous les 3 mois.
- Le système d'anesthésie est contrôlé et l'évaporateur d'isoflurane est calibré une fois par an par la société
Anesteo.
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5.2. Contrôles qualité de la prestation
Tout au long de la prestation, des contrôles sont réalisés par le personnel habilité pour vérifier le bon
déroulement des différentes étapes en imagerie :
- Selon le protocole défini par l’utilisateur, l’état général des animaux est contrôlé et les traitements éventuels
des animaux sont suivis et appliqués sur des animaux randomisés.
- L'anesthésie est vérifiée par pincement de la patte et réajustée en fonction d'une éventuelle réaction de
l'animal et/ou en fonction des données du monitoring.
- Les constantes vitales de l'animal sont mesurées et/ou contrôlées tout au long de l'expérimentation in vivo.
Seuls les animaux présentant des valeurs correctes de fréquence respiratoire, de fréquence cardiaque, de
température corporelle et de saturation des gaz du sang sont utilisés.
- Le logiciel d'acquisition permet de sauvegarder et de réutiliser des paramètres spécifiques pour vérifier les
niveaux des signaux fluorescents d'un animal à l'autre.
- Pour vérifier l'intégrité d'un tissu après dissection et la stabilité du niveau de perfusion, des données
spécifiques peuvent être vérifiées lors d'une imagerie et/ou d'une analyse rapide (par exemple mesures de flux,…)
en début et en fin d'expérimentation.
6. HYGIÈNE ET SÉCURITÉ
Règles Hygiène et Sécurité du laboratoire d’accueil du plateau technique
La plateforme informe ses utilisateurs lors de la 1 ère formation des règles Hygiène et Sécurité à respecter en
vigueur du laboratoire d’accueil. Les documents s’y rapportant sont accessibles sur demande auprès du personnel
de la plateforme.
Fiches Hygiène et Sécurité propres à l’équipement
Des fiches Hygiène et Sécurité afférentes à chaque équipement sont affichées à côté de l’équipement
concerné.
7. PRESTATIONS COMPLÉMENTAIRES DISPONIBLES
Pour faire suite à cette prestation, la plateforme peut vous proposer des prestations et des
développements complémentaires dans les domaines suivants :





Imagerie optique de fluorescence intravitale mono et biphotonique (IGF)
Bioluminescence (IRCM)
SPECT/CT (IRCM)
Echographie haute résolution (ADV)
Analyse d’images (IGF)
Pour plus de renseignements, veuillez consulter notre site internet : www.ipam.cnrs.fr