Analyse chromatographique en phase liquide à haute performance

Analyse chromatographique avec un chromatographe en phase liquide à haute performance (HPLC) équipé
de plusieurs détecteurs (large éventail des possibilités d’analyse et souplesse d’application)
Références : HPLC Ultimate 3000 de Dionex (ECP CEBB)
Principe :
HPLC est une technique d’analyse qui consiste à séparer les espèces contenues dans un échantillon par partage
entre une phase mobile (liquide) et une phase stationnaire (liquide ou solide).
Chaque soluté injecté sur la colonne est soumis à deux effets antagonistes :
•
un effet d'entraînement par la phase mobile dans laquelle il est soluble
•
un effet de rétention par la phase stationnaire avec laquelle il interagit
La séparation et le temps de migration des composés à séparer dépendent des différences d'affinités de ces
composés pour les phases mobile et stationnaire.
Objectifs : Analyse quantitative et qualitative des sucres C5-C6, acides organiques, polyphénols
Photographie de la configuration standard de
HPLC Ultimate 3000
Le système HPLC Ultimate est équipé de 4 détecteurs :
• Spectromètre de masse MSQ Plus ; détecteur de masse
quadripôle
• Détecteur à barrette de diodes UHPLC+ DAD-3000 (1024
diodes)- 8 canaux d'acquisition simultanés, 100 Hz - Gamme
spectrale de 190 à 800 nm
• Détecteur d'indice de réfraction RI-101
• Détecteur de fluorescence FLD 3100 - Gamme 200-65
L’utilisation en série ou en parallèle des différents
détecteurs permet d’obtenir un maximum d’informations sur
la structure et les concentrations des espèces analysées.
Par exemple, le spectromètre de masse branché après le
détecteur à barrette de diode permet de confirmer les poids
moléculaires des espèces séparées.
Deux exemples d’applications :
A
b
s
o
r
b
a
n
c
e
Temps d’élution
Séparation de l’uracile et de 9 alkylphénones
en 10 secondes, avec détection en barrette de
diodes 190–800 nm à 100 Hz (enregistrement
tridimensionnel : absorbance-temps-longueur
d’onde). L’analyse a été réalisée en utilisant un
débit de 3,7 ml/min, une contre-pression de
730 bars et une température de four de 100 °C
sur une colonne C18 30 × 2,1 mm avec une
taille de particules de 1,8 μm
Séparation de sucres issus de moût de fermentation en 22
minutes, avec détection d’indice de réfraction (µRUI - Unité
d’Indice de Réfraction). L’analyse a été réalisée en utilisant
un débit de 0,5 ml/min, une contre-pression de 100 bars et
une température de four de 35°C sur une colonne Aminex
HPX 87H