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BBL Selenite Cystine Broth 8816691 • Rev. 01 • Januar 2013 MASSNAHMEN ZUR QUALITÄTSKONTROLLE I EINFÜHRUNG Selenite Cystine Broth (Selenit-Cystin-Bouillon) dient als selektives Anreicherungsmedium für die Isolierung von Salmonella aus Kot, Nahrungsmitteln, pharmazeutischen Artikeln, Wasser und sonstigen Substanzen von hygienischer Bedeutung. II TESTDURCHFÜHRUNG 1. Repräsentative Proben mit 1,0 mL Mikroorganismen-Suspension von S. typhimurium ATCC 14028 und S. sonnei ATCC 9290 inokulieren, verdünnt auf 103 KBE/mL. Zu jedem zuvor inokulierten Röhrchen 0,1 mL E. coli ATCC 11775 hinzugeben, verdünnt auf 102 KBE/0,1 mL. 2. Die Röhrchen zum Zeitpunkt 0 sowie nach 24 h der Inkubation unter aeroben Bedingungen bei 35 ± 2 °C auf BBL MacConkey II Agar subkultivieren. Die Platten werden in aerober Atmosphäre einen Tag lang bei 35 ± 2 °C inkubiert. 3. Zu erwartende Ergebnisse Isolierung Wachstum auf MacConkey II-Agar nach Subkultivierung von Selenite Cystine Broth zum: Organismen ATCC *Salmonella enterica Subsp. enterica Serotyp Typhimurium 14028 Wachstumsspuren bis mäßiges Wachstum farbloser Kolonien Mittelmäßiges bis starkes Wachstum farbloser Kolonien *Shigella sonnei 9290 Wachstumsspuren bis mäßiges Wachstum farbloser Kolonien Mittelmäßiges bis starkes Wachstum farbloser Kolonien *Escherichia coli 11775 Mittelmäßiges bis starkes Wachstum rosaroter Kolonien Teilweise bis vollständige Hemmung Zeitpunkt 0 24 h * Empfohlener Organismusstamm für die Qualitätssicherung durch den Anwender. III ZUSÄTZLICHE QUALITÄTSKONTROLLE 1. Die Röhrchen auf Zeichen von Verfall überprüfen, wie unter „Haltbarkeit des Produkts“ beschrieben. 2. Repräsentative Röhrchen sichtprüfen, um sicherzustellen, dass ihre Nutzung nicht durch bereits vorhandene Beschädigungen beeinträchtigt werden kann. 3. Den pH-Wert potentiometrisch bei Raumtemperatur überprüfen, um festzustellen, ob die Spezifikation von 7,0 ± 0,2 eingehalten wird. 4. Nicht inokulierte repräsentative Proben bei 20 – 25 °C und bei 30 – 35 °C inkubieren und nach 7 Tagen im Hinblick auf Kontamination durch Mikroorganismen untersuchen. PRODUKTINFORMATIONEN IV VERWENDUNGSZWECK Selenite Cystine Broth (Selenit-Cystin-Bouillon) dient als selektives Anreicherungsmedium für die Isolierung von Salmonella aus Kot, Nahrungsmitteln, pharmazeutischen Artikeln, Wasser und sonstigen Substanzen von hygienischer Bedeutung. Dieses Medium entspricht den Spezifikationen des US-Arzneibuchs USP (The United States Pharmacopeia). V ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG Bei Selenite Cystine Broth handelt es sich um die Leifson1-Formulierung nach Zusatz von Cystin. Leifson stellte fest, dass Selenit-Bouillon das Wachstum von Salmonella begünstigt, jedoch gleichzeitig das Wachstum von fäkalen koliformen Bakterien und Enterokokken reduziert.1 Das Wachstum und die Isolierung von Salmonella in Nahrungsmittelproben können durch andere Bakterien als Salmonella sowie durch Inhaltsstoffe der Nahrungsmittelprobe beeinträchtigt werden, und in getrockneten verarbeiteten Nahrungsmitteln kann Salmonella in geringer Anzahl und geschwächtem Zustand vorliegen.2 Die Anwendung von Protokollen mit Voranreicherung, selektiver Anreicherung und selektiven Platten erhöht die Wahrscheinlichkeit der Salmonella-Isolierung. Bei den meisten herkömmlichen Methoden wird für den Schritt der selektiven Anreicherung Selenite Cystine Broth empfohlen.2-6 Als selektives Anreicherungsmedium ist Selenite Cystine Broth so formuliert, dass die Vermehrung von Salmonella ermöglicht und gleichzeitig das Wachstum konkurrierender anderer Bakterien (außer Salmonella) gehemmt wird.2 Selenite Cystine Broth und ähnliche Anreicherungsmedien sind außerdem nützlich für den Nachweis von Salmonella in den nicht-akuten Krankheitsstadien, in welchen die Organismen in geringen Anzahlen im Kot vorliegen, sowie im Rahmen von epidemiologischen Studien zur Optimierung des Nachweises geringer Organismusanzahlen bei asymptomatischen Patienten oder bei Patienten in der Rekonvaleszenz.7 VI VERFAHRENSGRUNDLAGEN Selenite Cystine Broth enthält Trypton als Quelle für Kohlenstoff, Stickstoff, Vitamine und Mineralien. Lactose ist das Kohlenhydrat. Saures Natriumselenit hemmt grampositive Bakterien sowie die meisten enterischen gramnegativen Bakterien mit Ausnahme von Salmonella. L-Cystin ist ein Reduktionsmittel. 8816691 1 Deutsch VII REAGENZIEN Selenite Cystine Broth Ungefähre Zusammensetzung* pro Liter destilliertes Wasser Pankreatisch abgebautes Casein .........................................5,0 g Lactose .................................................................................4,0 g Natriumphosphat ................................................................10,0 g Natriumselenit ........................................................ 4,0 g L-Cystin .................................................................. 0,01 g *Nach Bedarf auf die geforderten Testkriterien abgestimmt und/oder ergänzt. Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen: In-vitro-Diagnostikum. Röhrchen mit fest sitzenden Verschlusskappen sind vorsichtig zu öffnen, um Verletzungen auf Grund von Glasbruch zu vermeiden. Klinische Proben können pathogene Mikroorganismen, wie z. B. Hepatitis-Viren und HIV, enthalten. Beim Umgang mit allen mit Blut oder anderen Körperflüssigkeiten kontaminierten Gegenständen sind die „Allgemeinen Vorsichtsmaßnahmen“8-11 sowie die internen Institutsrichtlinien zu beachten. Vorbereitete Röhrchen, Probenbehälter und andere kontaminierte Materialien im Autoklav sterilisieren und erst dann entsorgen. Aufbewahrung: Röhrchen nach Erhalt bei 2 – 8 °C aufbewahren. Einfrieren oder Überhitzen vermeiden. Erst unmittelbar vor Gebrauch öffnen. Vor Lichteinwirkung schützen. Medien in Röhrchen, die vor Gebrauch gemäß der Anleitung auf dem Etikett gelagert werden, können bis zum Verfallsdatum inokuliert und entsprechend den empfohlenen Inkubationszeiten inkubiert werden. Das Medium vor der Inokulation auf Raumtemperatur erwärmen lassen. Haltbarkeit des Produkts: Röhrchen bei Anzeichen von mikrobieller Kontamination, Verfärbung, Austrocknung oder sonstigen Anzeichen von Produktverfall nicht verwenden. VIII PROBENENTNAHME UND -HANDHABUNG Einzelheiten zur Probennahme und -handhabung sind der einschlägigen Literatur zu entnehmen.12,13 Die Proben sollten vor der Anwendung von Antibiotika entnommen werden. Für einen umgehenden Transport zum Labor ist zu sorgen. IX VERFAHREN Mitgeliefertes Arbeitsmaterial: Selenite Cystine Broth Benötigtes, jedoch nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial: Zusätzliche Kulturmedien, Reagenzien, Qualitätskontrollorganismen und Laborgeräte nach Bedarf. Testverfahren: Aseptisch vorgehen. Für Kot, Nahrungsmittelproben oder sonstige Feststoffe 1 – 2 g Probe in der Bouillon suspendieren (ca. 10 – 15 Volumenprozent) und erforderlichenfalls mit Hilfe einer Impfnadel emulgieren. Nähere Angaben zur Verarbeitung und Inokulation anderer Proben sind der Fachliteratur zu entnehmen.2,4-6,14 Die Röhrchen bei 35 °C inkubieren und nach 6 – 8 h der Inkubation sowie erneut nach 12 – 24 h der Inkubation eine Subkultur auf Selektiv- und Differenzierungsmedien anlegen (z.B. auf MacConkey Agar, XLD Agar, XLT4 Agar, CHROMagar Salmonella). Qualitätskontrolle durch den Anwender: Siehe „Maßnahmen zur Qualitätskontrolle“. Die Qualitätskontrollen müssen unter Einhaltung der örtlich, landesweit und/oder bundesweit geltenden Bestimmungen oder Auflagen der Akkreditierungsorganisationen sowie der Standard-Qualitätskontrollverfahren Ihres Labors erfolgen. Anwendern wird geraten, die relevanten CLSI-Richtlinien und CLIA-Vorschriften über geeignete Maßnahmen zur Qualitätskontrolle einzusehen. X ERGEBNISSE Die Ergebnisse sollten mit denen der Qualitätskontrollstämme übereinstimmen. Nach der Inkubation sollte die Anzahl der pathogenen Kolonien, für die das Medium selektiv ist, zunehmen. Eine Subkultur auf einem geeigneten Selektiv- und Differenzierungsmedium anlegen, um die Pathogene zwecks Identifizierung zu isolieren. XI VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN Da die Nahrungsanforderungen von Organismen unterschiedlich sind, kann es Stämme geben, die in diesem Medium kein Wachstum oder nur schlechtes Wachstum zeigen. Anreicherungsbouillons sollten nicht als einziges Isolationsmedium verwendet werden. Sie müssen zusammen mit selektiven und nichtselektiven Plattenmedien verwendet werden, um die Wahrscheinlichkeit der Isolation von Pathogenen zu erhöhen, besonders, wenn diese evtl. nur in geringer Zahl vorhanden sind. Detaillierte Informationen und empfohlene Verfahren sind der Literatur zu entnehmen.2,4,6 XII LEISTUNGSMERKMALE Vor der Freigabe werden alle Chargen von Selenite Cystine Broth auf ihre spezifischen Leistungsmerkmale getestet. Die Proben werden mit Zellsuspensionen von S. typhimurium ATCC 14028 (1 mL einer 103 KBE/mL-Verdünnung), E. coli ATCC 11775 (0,1 mL einer 102 KBE/0,1 mL-Verdünnung) und S. sonnei ATCC 9290 (1 mL einer 103 KBE/mL-Verdünnung) getestet. Inokulierte Röhrchen werden zum Zeitpunkt 0 sowie nach 24 h der Inkubation unter aeroben Bedingungen bei 35 ± 2 °C auf BBL MacConkey II Agar subkultiviert. Die Platten werden in aerober Atmosphäre einen Tag lang bei 35 ± 2 °C inkubiert. S. typhimurium und S. sonnei zeigen nach 24 h mittelmäßiges bis starkes Wachstum. E. coli ist nach 24 h teilweise bis vollständig gehemmt. XIII LIEFERBARE PRODUKTE Best.- Nr. Beschreibung 292525 BBL Selenite Cystine Broth, 10 mL, Karton zu 100 Röhrchen der Größe A 297711 BBL Selenite Cystine Broth, 20 mL, Karton zu 100 Röhrchen der Größe A 8816691 2 Deutsch XIV LITERATUR 1. Leifson, E. 1936. New selenite selective enrichment medium for the isolation of typhoid and paratyphoid (Salmonella) bacilli. Am. J. 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Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 12. Murray, et al. (ed.). 1999. Manual of clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Isenberg, et al. 1979. Cumitech 9, Collection and processing of bacteriological specimens. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 14. Clesceri, Greenberg and Eaton (ed.). 1998. Standard methods for the examination of water and wastewater, 20th ed. American Public Health Association, Washington, D.C. Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD 21152 USA 800-638-8663 www.bd.com/ds Benex Limited Pottery Road, Dun Laoghaire Co. Dublin, Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. CHROMagar is a registered trademark of Dr. A. Rambach. BD, BD Logo and BBL are trademarks of Becton, Dickinson and Company. © 2013 BD 8816691 3 Deutsch