Congélation-et-gref..

Aspects cliniques de
la congélation et de la
greffe d’ovaire
Pascal Piver,Yves Aubard
CHU Limoges
P.Piver, 2006
Quel est le problème ?
De plus en plus de femmes et d’enfants se retrouvent
guéries
d’une maladie cancéreuse ou hématologique,
mais à jamais privées de leur fonction ovarienne
ou exposées à une ménopause précoce,
du fait de la toxicité ovarienne des
traitements qui leur ont été proposés
Historique
 Ovaires entiers => échec
 Fragments ovariens
 1e succès - 1953 - PARKES
 descente en congélation Slow cooling
 adjonction d’un cryopréservateur
 effet de l’ischémie chaude
 1959-1960 - PARROTT
 Grossesse après allogreffe de tissu congelé chez la souris
P.Piver, 2012
En matière de traitements du
cancer,
les choses ont évolué
Docteur House, vous
m’avez guérie, merci
 Autrefois
On guérissait moins de malades…
… et ils étaient contents
Docteur House,
vous m’avez
castrée, mon avocat
veut vous voir
 Aujourd’hui
On guérit plus de malades …
… et ils ne sont pas toujours contents
Historique
 1990 - GOSDEN
 Congélation de follicules primordiaux isolés (souris)
 Greffe dans la capsule ovarienne
=> grossesses
 1994 - GOSDEN
 1ères grossesses chez le gros animal : brebis
Greffe orthotopique de cortex ovarien congelé et
frais
 1996 – NEWTON, AUBARD, GOSDEN
1 ère xénogreffe de tissu humain chez la souris SCID
70 % de survie des follicules primordiaux
Les différentes étapes de la congélation
ovarienne
 Indications
 Prélèvement du tissu ovarien
 Congélation et décongélation
 Descente en T°, Cryoprotecteur, Décongélation
 Congélation de l’ovaire entier
 Maturation des follicules primordiaux
 Aspects pratiques
 Est-ce dangereux ?
 Quelle quantité de tissu faut-il congeler ?
 Règlements et éthique
Activités biologiques
Traitement du sperme en vue d'une insémination artificielle (Fiches I,
IX)« Art.
 L. 2141-11. − En vue de la réalisation
Activités relatives à la fécondation in vitro sans micromanipulation
ultérieure
(Fiches
II, IX) d’une
 assistance médicale à la
Activités
relatives à toute
la fécondation
in vitropeut
avec bénéficier
micromanipulation
procréation,
personne
du
(Fiches
II, IX)
recueil
et de laconservation de ses gamètes ou
Recueil, traitement, conservation et cession du sperme en vue d'un don
de tissu
…., lorsqu’une prise en
(Fiches
V) germinal,

Traitement,
cession
d'ovocytesd’altérer
en vue d'un sa
don (Fiches
chargeconservation
médicale etest
susceptible
II, fertilité,
IV, IX)
 lorsque sa fertilité risque d’être
ou
Conservation à usage autologue des gamètes et tissus
prématurément
germinaux
(Fiche VI) altérée.
 » LOI n° 2004-800 du
Conservation
des embryons
projet parental (Fiche VIII) 
6 août 2004
relativeenàvue
ladebioéthique
Conservation des embryons en vue de leur accueil et mise en œuvre de
celui-ci

(Fiches VII, VIII)
Pratique quotidienne ?
lorsqu’une prise en charge médicale
est susceptible d’altérer sa fertilité
Fertile
20 ans 20Hope
Graysis a national, nonprofit
organization
dedicated to providing
22
18
reproductive
information, support
24
16
and hope to cancer
patients
Chimiothérapie cyclophosphamide
20 ans
20 g and
survivors whose 22
medical
18 treatments
24 infertility.
16
present the risk of
Radiothérapie
Chirurgie
Risk Calculator www.fertilehope.org
 Fertile Hope has developed the following risk calculators
based on a compilation of clinical experience and published
research on common cancer treatments that may impact
reproductive function.
 Men
 Search by:
 Cancer Type
 Treatment Regimen
 Women
 Search by:
 Cancer Type
 Treatment Regimen
Risk Calculator:Women
— Search by Cancer Type


Please select your cancer type and click submit.
Acute lymphoblastic leukemia (ALL)
Acute myeloid leukemia (AML)
Any cancer requiring bone marrow transplant/stem cell transplant
Malignancies frequently requiring bone marrow and/or stem cell transplantation include: Hodgkin
Lymphoma, Non-Hodgkin Lymphoma, Acute Myeloid Leukemia, Chronic Myeloid Leukemia, Myeloma, Acute
Lymphoid Lymphoma, Chronic Lymphoid Lymphoma, some solid tumors (e.g., breast, ovarian, kidney,
brain) Brain tumor
Breast cancer
Chronic myeloid leukemia (CML)
Colon cancer
Gastrointestinal stromal tumor (GIST)
Head & neck cancer
Hodgkin lymphoma
Kaposi's sarcoma
Leukemia (General)
Neuroblastoma
Non-Hodgkin lymphoma (NHL)
Non-small cell lung
Ovarian cancer
Pancreatic cancer
Rhabdomyosarcoma
Sarcoma
Spinal tumor
Thyroid cancer
Wilms' tumor
Search Results: Hodgkin lymphoma













Degree of Risk Treatment Protocol High Risk
More than 80% of women develop amenorrhea post-treatment. Any alkylating agent + total body irradiation or pelvic
radiation
(e.g., cyclophosphamide, ifofsamide, busulfan, BCNU, CCNU)
COPP x 6 cycles
(cyclophosphamide, vincristine, procarbazine, prednisone)
COPP/ABVD
(cyclophosphamide, vincristine, procarabazine, prednisone/doxorubicin, bleomycin, vinblastine, dacarbazine)
Dose-escalated BEACOPP
(bleomycin, etoposide, doxorubicin, cyclophosphamide, vincristine, procarbazine, prednisone)
ChIVPP
(chlorambucil, vinblastine, prednisone, procarbazine)
ChIVPP/EVA
(chlorambucil, vinblastine, prednisone, procarbazine, doxorubicin, vincristine, etoposide)
MOPP > 3 cycles
(nitrogen mustard, vincristine, procarabazine, prednisone)
MOPP/ABVD
(nitrogen mustard, vincristine, procarabazine, prednisone/doxorubicin, bleomycin, vinblastine, dacarbazine)
MVPP
(nitrogen mustard, vinblastine, prednisone, procarabzine)
Whole abdominal or pelvic radiation doses
> / = 15 Gy in pre-pubertal girls; > / = 10 Gy in post-pubertal girls
Low Risk
Less than 20% of women develop amenorrhea post-treatment.
ABVD
COP
(cyclophosphamide, vincristine, prednisone)
Very Low/No Risk
No effects on menses. Vincristine
(used in multi-agent therapies)
Les pré-requis au prélèvement
 Indication posée en concertation pluridisciplinaire
 Gynécologues, biologistes de la reproduction
 Cancérologues, hématologues, internistes,
oncologues pédiatres …
 Consentement éclairé de la patiente
 Information de la patiente
 Simple chez l’adulte
 Plus difficile chez l’enfant (implication des parents)
Les problèmes éthiques
 La CPTO reste une méthode de recherche (pour son utilisation)
 Ceci doit être clairement expliqué aux patientes
 Les alternatives doivent être envisagées
 Don d’ovocytes
 La congélation d’ovocytes
 La congélation d’embryon
 La transposition ovarienne
 Il est possible de combiner plusieurs méthodes
 Transposition et congélation
 Congélation d’ovocytes et de cortex ovarien
Stratégie pour la
préservation de la fertilité
Faible risque de
Risque élevé de
localisation ovarienne
localisation ovarienne
Transposition
ovarienne
Chimiothérapie peut
attendre
Chimiothérapie
urgente
Congélation du
cortex ovarien
Congélation
d’ovocytes/embryons
Congélation du cortex
ovarien
Xéno greffe
Tumeur hormono
dépendante
Tumeur non hormono
dépendante
Greffe
Stimulation ovarienne
Tamoxifen ,letrozole
Maturation
in vitro
Stimulation ovarienne
classique
orthotopique
Greffe
hétérotopique
La radioprotection
 Les déplacements gonadiques
 Transposition ovarienne
 Décrite par Mc Call (1958)
 65% de fonctions endocrines
 15% de fertilité
 Trois facteurs d’échec
 L’âge
 Chimiothérapie associée
 Dose incidente
 Transplantation ovarienne
 Un cas rapporté (Caen)
 Faible reproductivité
MATERIEL A PREPARER EN VUE D'UNE CONGELATION DU TISSU OVARIEN
Les jours précédent la congélation du tissu ovarien : Vérifier les cuves d'azote.
Vérifier que l'appareil de congélation sera disponible à l'heure prévue de l'intervention.
Faire préparer environ 500 cc de Leibowitz avec vérification de la stérilité. Vérifier la quantité suffisante de DMSO.
Vérifier la place disponible dans les cuves d'azote liquide devant recevoir les tubes. Vérifier les sérologies de la patiente.
Vérifier d'avoir à disposition environ 10 cc de sérum décomplémenté et filtré de la patiente.
S'assurer qu'une boite d'instruments de microchirurgie sera mise à disposition et sera stérile pour le jour de l'intervention.
Le jour de l'intervention :
Identifier les tubes par les deux premières lettres de la patiente et la date de l'intervention.
Préparer un pot à ECBU de Leibowitz stocké dans de la glace pilée qui servira au transport du tissu ovarien.
Préparer dans un Falcone :
- 10 ml de DMSO (10 %), - 10 ml de sérum de la patiente (10 %), - 80 ml de Leibowitz (80 %).
Cette préparation sera répartie dans 20 à 25 tubes de 1,8 ml (pour un ovaire), le reste dans un pot à ECBU.
Les tubes et la préparation seront stockés à 4°C.L'ovaire, une fois prélevé, sera disséqué sous hotte.
L'ensemble de la médullaire sera retirée et adressée au laboratoire d'Anatomopathologie.
Les fragments d'ovaire, de 5 mm2 à 1 cm2, seront stockés dans le pot à ECBU contenant le DMSO
et mis dans un agitateur dans une enceinte à 4°C pendant 20 mn, puis transférés dans les tubes de 2 ml.
Les tubes seront transférés alors dans l'appareil permettant la congélation.
Le programme de congélation comprend 3 phases :
- de 4°C à - 9°C : descente en température de 2°C/mn ; à - 9°C, seeding manuel.
- de - 9°C à - 40°C, descente en température de 0,3°C/mn,
- puis de - 40°C à - 140°C de 10°C/mn.
Les tubes seront stockés dans l'azote liquide.Identification sur le tube.
Identification de la couleur du bouchon.Identification du canister.Identification du numéro de la cuve.
En fin de congélation, une fiche complète sera éditée (cf. pièce jointe) et
sera recopiée sur un registre numéroté.
Les pré-requis au prélèvement
 Le bilan biologique
 Bilan pré-anesthésique
 Les sérologies : Hépatites, CMV, HIV
 Le prélèvement sanguin pour le sérum
 La consultation anesthésique
 La consultation avec le biologiste
 Organisation pratique
 Disponibilité du chirurgien et du biologiste
 Préparation des tubes
 Disponibilité du congélateur
Le prélèvement : la voie
d’abord
 Deux possibilités
Avantages
Inconvénients
Peu invasive
Davantage de
La coelioscopie Cicatrices minimes
contre-indications
Hospitalisation courte Dissection plus difficile
Dissection facile
La laparotomie Hémostase mieux
contrôlée
Cicatrices, adhérences
Durée d’hospitalisation
Coelioscopie > laparotomie
L’ovariectomie
coelioscopique
Lig. Lombo-ovarien
Mésovarium
Lig. Utéro-ovarien
Section du mésovarium
Electrocoagulation
Endo-loop
Endo-GIA
Les ovariectomies partielles
 L’hémi-ovariectomie
 Section aux ciseaux
 Hémostase de la tranche ovarienne à la bipolaire fine
 Les prélèvements corticaux
 Section aux ciseaux
 Biopsies à l’emporte pièce (Meirow Fertil Steril 1999)
P.Piver, 2012
Extraction de l’ovaire ou du
tissu ovarien
 La moins traumatisante possible
 Ensachage
 Pour éviter la traction sur l’ovaire lui-même
 Elargissement d’un éventuel Mac-Burney
 Mini laparotomie de 2 cm en sus-pubien
 Culdotomie et extraction vaginale
En fin d’intervention
 Evaluation minutieuse de l’autre ovaire
 Evaluation des trompes
Clairement
consignées
dans le CRO
 Eventuelle transposition de l’autre ovaire dans
la gouttière pariéto-colique
Passage rapide du tissu
au biologiste …
Greffe ovarienne = procédure de recherche clinique
Medulla
Ovarian vessels
Cryopreservation du tissu ovarien
Culture folliculaire in vitro
Greffe in vivo
Greffe hétérotopique
Autogreffe orthotopique
Croissance in vitro
Autogreffe
Xénogreffe
Ponction ovocytaire
Fertilité naturelle
Maturation in vitro
F I V transfert d ’embryon
Cryopréservation du tissu ovarien
Culture folliculaire in vitro
Croissance in vitro
Maturation in vitro
F I V transfert d ’embryon
A primary follicle,
one week in culture
A secondary
follicle after 21
days in culture
An antral follicle after 21
days in culture
diameter 400 micrometer
Cryopreservation du tissu ovarien
Xénogreffe
Ponction ovocytaire
F I V transfert d ’embryon
xénogreffe
 Méthode efficace pour vérifier la qualité du tissu
congelé
 Pas de risque de transmission de cellules malignes
 Risque viral
 Modification du génome
 Développement normal jusqu’au stade antral 5mm
 Réponse normal à l’injection HCG
 Récupération des ovocytes produits
 Possibilité de maturation in vitro
Cryopreservation du tissu ovarien
Greffe in vivo
Greffe hétérotopique
Autogreffe
Ponction ovocytaire
F I V transfert d ’embryon
La greffe hétérotopique
 Avantages inconvénients
 Choix du site de la greffe
 Pour la reprise des greffons
 Pour la ponction des follicules
 Besoin de passer par la FIV pour obtenir
une grossesse
 Résultats
 Grossesse chez la souris (Carrol, 1990)
 Nos travaux sur le mouton (Piver & Aubard)
 Faibles taux de survie folliculaire
 Maturation folliculaire après stimulation
 FIV des ovocytes (Aubard & Piver Hum
Reprod 1999)
 Obtention de blastocystes (Piver & Aubard
unpublished data)
 Transfert des embryons : pas de grossesse
Greffe hétérotopique
sous la peau du
ventre de brebis
(Piver & Aubard)
Le premier ovocyte mature ponctionné
dans une greffe hétérotopique chez la
brebis
Aubard & Piver et al, 1999, Hum
Reprod
Les premiers blastocystes obtenus à
partir
d’une greffe hétérotopique chez la
brebis
Piver & Aubard et al. (unpublished
data)
Greffe hétérotopique C Poirot; P Piver ;G
Lefebvre
 hodgkin stade IV
 Prélèvement ovarien avant
intensification
 Pré revascularisation 48 H
avant la greffe
 Greffe des 2/3 de l’ovaire
en sus aponévrotique
 Reprise de la fonction
hormonale à 6 mois
Left graft
Neo vessels
1
2
3
4
Right graft
7 cycles de stimulation
1 ovocyte
9 ovocytes
6 ovocytes
0 ovocytes
1 ovocyte >MIV,ICSI> 1 embryon >> 7 cellules
2 ovocytes> M 1>MIV,ICSI >1 embryon
M 2,ICSI> 1 embryon
1 ovocyte
Ensemble des publications
greffes hétérotopiques
Auteur
Année Age indication
H reproduction
Oktay
2004
30
K du sein
+ 1 embryon
KIM
2004
37
K du col
+ -
PPL
2005
21
Hodgkin
+ 3 embryons
Schmidt
2005
28
Hodgkin
+
Schmidt
2005
25
Hodgkin
+ 1 embryon
Schmidt
2005
32
L N Hodgkin
+ 1 embryon
Wolner
2005
30
Rosendahl
2006
28
PR M
2006
+
Hodgkin
+ 2 embryons FCP
Sarcome
+ ?
140
Induction de la puberté*
120
100
80
60
40
20
FSH (UI/L)
E2 (pmol/L)
AMH (pmol/L)
Inhibine B (ng/L)





2003 drépanocytose chez une fille de 10 ans
Congélation d’un ovaire avant greffe de moelle
23 fragments
2006 Fsh 71 Lh 26 absence de puberté
Greffe hétérotopique sous anesthésie locale en 2 temps (
1 fragment puis 2 fragments )en 2007
 Induction de la fonction hormonale et de la puberté
 3 fragments 5 ans 23 fragments 38 ans
*Lancet 2012: Poirot C, Abirached F, Prades M, Coussieu C, Bernaudin F, Akakpo JP, Piver P.
LH (UI/L)
MPII
M5
M4
M3
M2
M1
D3
D1
0
Cryopreservation du tissu ovarien
Greffe in vivo
Autogreffe orthotopique
Fertilité naturelle
L’autogreffe orthotopique
 Grossesses dans 3 espèces
 Souris (Parrott, 1960)
 Mouton (Gosden, 1994)
 Rat (Aubard, 1997)
 Les limites actuelles
 Très facile dans le modèle murin (bourse ovarienne)
 Mais problèmes dans les espèces sans bourse ovarienne
 Chez le mouton
 Première grossesse obtenue en 94 par Gosden
 Reproduction à une plus grande échelle par Salle
Greffes orthotopiques
J, Donnez et coll Lancet 24/09/2004
 25 ans en 1997 hodgkin stade IV
 Prélèvement de 5 fragments sur l’ovaire droit 12*15*5mm
 70 fragments 2*2 mm + 1 de 12*4mm
 Traitement MOPP/AVB+ Rx 32 G
 En fin de traitement FSH 91, LH 85 ,17β 17 pg
 THS 06/98 >>>01/2001>>> arrêt désir de grossesse
 01/2001>>>12/2002 1 seul cycle observé
 1 corps jaune sur l’ovaire G
Greffes orthotopiques
J, Donnez et coll Lancet 24/09/2004
J Donnez 2011
J Donnez 2011
Orthotopic transplantation of ovarian tissue
C Andersen 2011
e 2. A: Right atrophic ovary. B:JDDonnez
ecortication
of the ovarian cortex. C: Small ovarian tissue pieces are placed on the medulla.
2011
100% castration
ischémie
dissection
Le cortex ovarien
congélation
Z-VAD-MK
décongélation
VEGF
70%à 90%
Sensible au
stress oxydatif
PDGF
greffe
ischémie
Vit E
vascularisation
10% à 28%
45 to 71%
Maturation
fécondation
?%
2,5
2
1,5
1
0,5
0
micro vessel density
14 14 13
12 11 10
9
Day 1: grafting
Day 2 and 3:
VEGF RNA messengers are present*
Day 2 to 4: VEGF concentration rises**
Day 4 to 7: VEGF concentration is
Max**
Day 3: micro vessel density rises**
concentration
Timing of angiogenesis
After ovarian tissue grafting
Day 1: grafting small
pieces of thawed ovarian
cortex to prepare the
vascularisation bed
VEGF
8
7
6
mRNA VEGF
5
4
3
2
1
Day
*Dissen, G. A., et al. (1994) Endocrinology, 134 (3), 1146-54.
**Long, HD, 2007 Fertil Steril, 88, S12.
Day 4 :grafting the large pieces
Of thawed ovarian cortex
Patiente
Limoges
 1999 : vascularite(27 ans)
 3 g de cyclophosphamide IV
 Ovariectomie droite par cœlioscopie
 15 fragments (8mm²)
 Slow cooling (Gosden)
 9g de cyclophosphamide IV
 2000 : puis 58g of cyclophosphamide per os pendant 2 ans
 2003 : arrêt de la contraception oral
 234 mUI/ml of Fsh and 97 mUI/ml of Lh
 THS
 2007 désir de grossesse…
8 ½ après la congélation du cortex ovarien
décision de la greffe du tissu ovarien .
Hormonal variations
Gastro-esophageal
surgery
HRT; Vit B6
IVF 1&2
IVF
3&4
Vascularisation
doppler analyze
Left peritoneal
window
No detection in right
peritoneal window
LO 2 pieces
LPW 3 pieces
RPW 3
pieces
IVF results according to the different graft
IVF 1
locations and comparison with the largest
Ultrasound > 12 mm
1
4
O
published series
Oocyte , oocyte MII
1>>>>>>0
Embryos, blastocyst
4>>>>>>2
2>>>>>>1
IVF 2
Ultrasound
2
11
1
Oocyte, oocyte MII
2>>>>>>2
9>>>>>>8
0 Ovulated
Embryo, Blastocyst
2>>>>>>1
7>>>>>>>3
Pregnancy, (frozen)
>>>>>>>>(1)
1 ectopic (1)
Ultrasound
1
4
4
Oocytes ,Oocyte MII
1>>>>>>>>0
4>>>>>>>4
0 Empty
follic
IVF 3
Embryo ,Blastocyst
2>>>>>>>2
IVF 4
Ultrasound
0
4
2
Oocyte, Oocyte MII
2>>>>>>1
0 Empty
follic
Embryo, pregnancy
1>>1 Live Birth
Total
TOTAL
ANDERSEN
DOLMANS
Hum Rep 2008
Hum Rep 2009
4 Cycles
27 Cycles
21 Cycles
Ultrasound
4
23
7
1 patient
6 Patients
4 Patients
Oocytes, oocytes MII
4>>>>>>>>2
19>>>>>>>15
0
23>>>>>>17
>>>>>>>>>18
16>>>>>>>10
Embryos, Blatocysts
1>>>>>>>>1
14>>>>>>>>6
0
15>>>>>>>7
11
5
Embryo quality by location and IVF cycle
IVF 1
LPW 1
LPW2
LPW 3
LPW 4
LO 1
IVF 2
LPW 1
LPW 2
LPW 3
LPW 4
LPW 5
LPW 6
LPW 7
LPW 8
LPW 9
LO 1
LO 2
IVF 3
LPW 1
LPW 2
LPW 3
LPW 4
LO
IVF 4
LPW 1
LPW 2
MII
MII
GV
PF
PF
GP PN Z D2
2 2 3 IV4+
2 2 3 IV 7 +
D3
IV8+
IV9+
D4
D5
STOP
B3AA
TRANSFERED
IVF 1 LPW 1 :
D2
MII
MII
MII
MII
MII
MII
MII
MII
GV
MII
MII
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
0
2
2
2
2
2
1 III 3 +
1 II4+
II8+
STOP
M
STOP
1 II4+
1 II4+
1 IV6+
1 IV6+
1 II4+
II7+
II8+
IV8+++
II8+
II8+
STOP
B3AA
B4AA
B3AA
STOP
FROZEN
TRANSFERED
TRANSFERED
2
2
2 1 II4+
2 2 II2+
II8+
IV7+
B3AA
M
FROZEN
STOP
MII
MII
MII
MII
PF
2
2
2
2
2
2
2
2
IV 10++
IV 7+++
IV 8++
IV 6 +
B4AA
STOP
B3BB
M
TRANSFERED
MII
PF
2
2 1 II4 +
4 IV7+
3 IV7+
3 II5+
3
TRANSFERED PREGNANCY
M II metaphase II ;GV germinal vesicul ; PF Pellucida fracture ; Z: pronuclei
score (Scott et al. 2000); D 2 and D3 embryo score (Giorgetti et al. 1995); D5
blastocyst score (Gardner et al. 2000)
IVF 1
LPW2 : D2
IVF 1 LPW 1 :
D3
IVF 1
LPW2 D3
IVF 2 LPW 4 :
D2
TRANSFERED
STOP
IVF 2 LO 1 : D2
IVF 4 LPW 1 :
D2
IVF 1
LPW2 D5
Patiente de Besançon
présentée par C Amiot …. C Roux Poster n° 46
120
3
 drépanocytose
100
2005: AVC
2005 : congélation du cortex ovarien
avant allogreffe de moelle.
80
2
60
 Avril 2008 : greffe en 2 temps sur 2 localisations
40
1
Variations hormonales
MRI
20
 Grossesse spontanée 6mois après: naissance d’une
fille
FSH UI/l
LH UI/l
AMH pmol/l
0
04/04/2008
0
04/05/2008
04/06/2008
04/07/2008
04/08/2008
04/09/2008
Conclusions
Ophélie
 2 nouvelles naissances
 Amélioration de la technique de greffe en 2 temps
 Patiente de Limoges
Quantité et qualité ovocytaire et
embryonnaire.
Greffe 8ans ½ après la congélation
accouchement 10 ans après
 Patiente de Besançon
Grossesse spontanée
6 mois après la greffe.
Ysaline
Patient
Age
Chemotherapy before
Cryopreservation
Reimplantati
at
cryopreservation
SF/DMSO/EG
on
cryo
Time interval
between
reimplantatio
n and
restoration of
ovarian
activity
Time interval Natural
between
IVF
reimplantatio
n and
pregnancy
(months)
Baby sex/weight
Baby
Duration
W
of
activity
(years)
1 JD
25
No
SF/DMSO
2003
4½
11
N
♀ / 3720
39
5y
2 JD
19
No
SF/DMSO
2008
3½
9
N
Ongoing
39
still
3 Meir
28
VACOP-B
MING/ESHAP
SF/DMSO
2003
6½
11
IVF
♀ / 3000
38.5
2y
4 DM
24
Only one cure of ABVD
SF/DMSO
2004
4
8
N
♀ / 3130
39
1.5 y
48
N
♀ /2870
39
still
6
IVF
♀/ 3204
39
still
25
N
♀ / 3828
39
2006
5 CA
6 CA
27
25
No
6 cures of ABVD
2 cures of MIME
SF/EG
SF/EG
2005
4
2005
5½
6
2006
5½
10
IVF
♂ / 2600
37
1
40
still
7 Sil
24
No
SF/DMSO
2006
4½
28
N
♀ / 4111
8 Sil
20
No
SF/DMSO
2007
3½
8
N
Ongoing
9 Pi
27
2.5g cyclophosphamide
SF/DMSO
2007
4½
11
IVF
♀ / 2030
37
still
10 Sa
36
No
SF/DMSO
2008
3½
10
IVF
♂ / 1650
♂ / 1830
33
still
11Roux
20
No
SF/DMSO
2008
4
6
N
♀ 3700
38
still
Children born after autotransplantation of cryopreserved ovarian tissue. A review of 13 live births Posted online on January 13, 2011.
Jacques Donnez1, Sherman Silber2, Claus Yding Andersen3, Isabelle Demeestere4, Pascal Piver5, Dror Meirow6, Antonio Pellicer7 & Marie-Madeleine Dolmans1
still
1800 prélèvements
20 greffes
4 naissances 1IVG 1 GEU 2FCS
? Prélèvements
? greffes
1 naissance
1000 prélèvements
13 greffes
8 naissances 1 FCS
? Prélèvements
? greffes
2 naissances
536 prélèvements
25 greffes
6 naissances 2IVG 3 FCS
? Prélèvements
? greffes
9 naissances
? Prélèvements
? Greffes
3 naissances + 11 don ovaires
? Prélèvements
22 greffes
4 naissances
Conclusions
 Site de la greffe :Orthotopique
 Expérience animale importante
 Gosden, Salle , Aubard….
 40 grossesses chez la femme
 37 enfants
 Site de la greffe hétérotopique
 Expérience animale
 Piver, Lee
 Expérience humaine
 Production embryons
 1 grossesse biochimique
 Induction de la puberté
 Que choisir
 Si possible orthotopique
 Importance du CRO de la 1ère coelioscopie
 Si CI chirurgicale >>> hétérotopique
 Fertilité naturelle ? FIV ? ICSI?
Conclusions
 Les prélèvements réalisés avant le traitement semblent plus
efficaces à moyen terme
 Radford Lancet 2001
 D’autres greffes non publiées
 Ovaire droit ovaire gauche?
 A pondérer avec l’âge des patientes
 Avoir recours à la pré revascularisation
 Kim
 Donnez
 Étude sur les brebis
 C Poirot; P Piver ;G Lefebvre;D Royere
 3ème intervention après la mise en place de système de régulation
des greffons ?
Conclusion
 Établissement d’une procédure (protocole de recherche)
afin de répondre à un certain nombre de questions
 Évaluer l’efficacité de la greffe en terme de restauration de la fonction
endocrine
 Évaluer l’inocuité de la greffe
 Comparer les résultats en terme de délai et de qualité de la reprise de
la fonction ovarienne entre les greffes orthotopiques et les greffes
hétérotopiques
 Mieux cerner le nombre de greffons nécessaires à la reprise de la
fonction ovarienne
 En cas de greffe hétérotopique, apprécier la qualité des ovocytes et
des embryons provenant des greffons
Les indications ?
 Actuellement
 UNE grossesse humaine avec cette technique +1+1+1+1…..
 Seulement si l’on est certain d’une destruction massive du
stock folliculaire = les patientes qui n’ont rien à perdre
 Irradiations corporelles totales
 Irradiations pelviennes + agents alkylants
 Agents alkylants au long cours
 Ovariectomie bilatérale
 Peut être davantage d’indications dans le futur
Aujourd’hui
 La ménopause précoce (si elle est prévisible)
 Traitement de la ménopause (pour certains)
Demain
Est-il dangereux de
réimplanter le tissu ?
 Shaw (Hum. Reprod. 1996)
 Transmission de lymphomes entre souris par des greffes ovariennes
de tissu frais et congelé
 Il y a des situations à risque
 Les leucémies aiguës(Donnez Blood 2010)
 Les tumeurs ovariennes
 Il y a des situations à moindre risque
 La maladie de Hodgkin (Meirow, Fertil Steril 1999)
 Sarcome d’Ewing
 Les maladies non cancéreuses
Les alternatives à la greffe :
- la maturation in vitro
- la xénogreffe
Jpg 3345565
49ans
Congélation de
spermatozoïdes
testiculaires à 45ans
Julie
15/11/2005
Jpg 2848765
42 ans
MIV
Espérance de vie
fertilité
Préservation de la fertilité
Activité
Plastie
mammaire
Professionnelle
puberté
Greffe de
neurones
lifting
Prothèse de hanche
Greffe de
myoblastes
0
15
25
35
45
55
65
75
85
Cancer du sein
95
105 110
100% castration
dissection
congélation
congélation
Slow cooling
Vitrification
Rapid cooling
Congélation directionnelle
décongélation
70%à 90%
Congélation de l’ovaire entier
chez la femme
 Belen Martinez-madrid, Donnez
 Prélèvement de 2 ovaires entiers .





Perfusion leibovitz + DMSO + sérum
Congélateur – 80°C
-1°C/mn
Azote liquide
Décongélation rapide
Test de viabilité
 99,2 % tissu frais
 97,2% après la perfusion de DMSO
 75,9% après décongélation
 Survie des vaisseaux de la médullaire
Cortex ovarien versus ovaire entier
 Prélèvement
 Coelioscopie
 Geste simple et rapide
 Dissection
 Ablation de la médullaire
 Permet l’étude anatomo-pathologique
à la recherche de localisation
ovarienne secondaire
 Congélation
 Simple
 Utilisation des appareils de
congélation standard
 Stockage
 Simple
 Prélèvement
 Coelioscopie
 Dissection du pédicule lombo-ovarien
sans lésion vasculaire
 Absence de dissection

ne permet pas d’analyse histologique
 Congélation
 Perfusion intra vasculaire du
cryoprotecteur
 Nécessitant une pompe spécifique
 Appareils de congélation spécifiques pour la
congélation directionnelle
 Plus simple pour le rapid cooling
 Stockage
 Nécessité d’avoir des cuves spécifiques
 Survie folliculaire : 81% (BEDAIWY HUM
REPROD 2007)
 Survie folliculaire : 75% (BEDAIWY HUM
REPROD 2007)
Cortex ovarien versus ovaire entier
 Greffe partielle
 Hétérotopique
 Simple sous anesthésie
locale – surveillance simple
 Production embryonnaire
mais absence de grossesse
 Orthotopique
 Coelioscopique ou
laparotomie
 Production ovocytaire,
grossesse dans l’espèce
humaine
 Greffe ovaire entier
 Laparotomie avec micro
chirurgie et anastomose
vasculaire
 Grossesse chez le gros animal
Imhof, Salle
 Survie folliculaire : 1.7 à
7.6% (IMHOF)
 Survie folliculaire chez le gros
animal : 5 à 10% (AUBARD et ALL)
P.Piver, 2012
Tu te souviens quand les
traitements du cancer
détruisaient les cellules
germinales
Oui, j’arrive pas à
croire qu’à l’époque
on congelait le tissu
ovarien pour
préserver la fertilité!!