DOSAGE DES CD4/CD8 PAR CMF DANS L`INFECTION HIV

DOSAGE DES CD4/CD8
PAR CMF
DANS L’INFECTION
HIV
Y.Flici , S.Benabdellah , M.Ardjoun. ( Alger , CTSA )
GENERALITES
L’action du VIH sur le système immunitaire
se manifeste d’au moins deux façons :
D’une part, les lymphocytes Th (CD4+) sont
diminués.
9 D’autre part les Tc (CD8+) sont actives et
voient leur nombre augmenté.
9
Ceci donne un rapport CD4/CD8 inverse
( généralement ratio inférieur à 1) .
DOSAGE DE CD4/CD8 PAR
CYTOMETRIE EN FLUX
L’utilisation largement répandue de
la cytométrie en flux permet le dosage
des CD4 ET CD8
Le FACSCount est un cytomètre en
flux spécialement adapté à la numération
des lymphocytes ‘’T’’ : CD4+ , CD8+ et
CD3+ dans le sang non lysé.
FACSCount
9Appareil compact.
9Système informatique intégré .
9Réactif prêt à l ’emploi, sous
forme de paires de tubes.
MODE OPERATOIRE
Le sang est collecté dans des tubes
EDTA et gardé à température ambiante.
FACSCount nécessite l’utilisation d’un
contrôle ( sujet hématologiquement sain)
pour le réglage de l’appareil.
MODE OPERATOIRE
1)
Dans chaque paire de tubes, mettre 50µl de sang,
bien refermer et agiter légèrement.
2)
Incuber 60 à 120 mn à température ambiante et
à l’obscurité.
3)
Ajouter dans chaque tube 50µl de la solution de
fixation, agiter légèrement.
4)
Ajouter dans les deux paires de contrôle 50µl
dans chaque tube de solution de contrôle.
5)
La lecture se fait à l’aide du FACSCount.
POPULATIONS ETUDIEES
Notre étude au sein du laboratoire de cytomètrie
a porté sur le dosage des CD4/CD8 dans deux
populations :
9
9
Une population témoin de 51 individus
adultes , composée de 24 hommes et
27 femmes agés de 20 à 60 ans.
Une population de 113 personnes (51
sidéens et 62 séropositifs) composée
de 23 femmes et 90 hommes agés de
20 à 70 ans (1 cas) .
RESULTATS DU DOSAGE CD4/CD8/CD3
EN FONCTION DU SEXE
DANS LA POPULATION TEMOIN
SEXE
MASCULIN
n=24
Moyenne ± SD
FEMININ
n=27
Moyenne ± SD
t*
P**
Interprétation
CD3
1752.8±483.9
1715.1 ±571.5
0.25
>0.5
NS
CD4
1010 ±322.8
1043.63±382.18
3.17
<0.01
SIGNIFICATIF
CD8
681.0±230.7
741.6±698.3
0.39
>0.50
NS
CD
(Cellule/µl)
CD4/CD8 1.60 ± 0.66
*TEST DE STUDENT
**PROBABILITE
1.82 ± 0.67
NS=non significatif
ddl=48
1.17 >0.20
NS
DOSAGE CD4/CD8 EN FONCTION DU SEXE
DANS LA POPULATION TEMOIN
2
1,8
1,6
1,4
RATIO
CD4/CD8 1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
1,82
1,6
MASCULIN
FEMININ
RESULTATS DU DOSAGE CD4/CD8/CD3
EN FONCTION DE L’AGE
DANS LA POPULATION TEMOIN
AGE
[ 20 – 30 [
n=15
Moyenne ± SD
[ 30 – 40 [
n=15
Moyenne ± SD
[ 40 – 50 [
n=08
Moyenne ± SD
[ 50 – 60 [
n=13
Moyenne ± SD
CD3
1770.1±540.1
1656.0±1880.1
1880.1±317.5
1690.7±698.8
CD4
1102.0±344.2
939.8±220.5
1016.6 ±263.3
1065.3 ±488.5
CD8
619.3±258.8
863.6±872.0
773.8 ±262.5
599.2 ±253.7
1.59 ± 1.03
1.87 ± 0.61
CD
(Cellule/µl)
CD4/CD8 1.90 ± 0.53 1.53 ± 0.53
RESULTATS DU DOSAGE CD4/CD8/CD3
DANS L’INFECTION HIV
EN FONCTION DU SEXE
SEXE
CD
(Cellule/µl)
MASCULIN
n=90
Moyenne ± SD
FEMININ
n=23
Moyenne ± SD
t*
P**
Interprétation
CD3
1151.67 ±783.66 982.43 ±556..33
0.97
> 0.50
NS
CD4
296.60 ±335.23
253.04±167.95
0.60
< 0.50
NS
CD8
753.10±474.51
736.00±437.56
0.16
0.80
NS
CD4/CD8
0.45 ± 0.63
0.36 ± 0.22 0.67
0.50
NS
*TEST DE STUDENT
**PROBABILITE
NS=non significatif
ddl= 111
RESULTATS DU DOSAGE CD4/CD8/CD3
EN FONCTION DE L’AGE
DANS LA POPULATION MALADE
AGE
[ 20 – 30 [
n=33
Moyenne ± SD
[ 30 – 40 [
n=29
Moyenne ± SD
[ 40 – 50 [
n=7
Moyenne ± SD
[ 50 – 60 [
n=5
Moyenne ± SD
CD3
1179.36±693.1
3
1040.52±746.68 1276.29±681.10
843.20±637.18
CD4
331.67±364.56
245.9±271.99
297.14±209.22
185.80±216.29
CD8
797.85±489.01
729.10±478.99
1010.14±529.32
634.40±412.08
CD4/CD8 0.22 ± 0.20 0.29 ± 0.24
0.35 ± 0.33
0.27 ± 0.14
CD
(Cellule/µl)
POPULATION MALADE
EN FONCTION DE L’AGE
nombre
[ 20 – 30 [
[ 30 – 40 [
[ 40 – 50 [
[ 50 – 60 [
DOSAGE CD4/CD8 EN FONCTION DU
SEXE DANS LA POPULATION HIV
RATIO
CD4/CD8
2
1,8
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0,45
MASCULIN
0,36
FEMININ
COMPARAISON DES CD3/CD4/CD8
ENTRE LA POPULATION TEMOIN
ET LA POPULATION MALADE
SEXE
CD
(Cellule/µl)
TEMOIN
n=51
Moyenne ± SD
MALADE
n=113
Moyenne ± SD
t*
P**
Interprétation
CD3
1733.60 ±527.90 1117.22 ±746.17
5.32
< 10-4
TS
CD4
1031.50 ±353.80
287.73±309.12
13.63
< 10-6
TTS
CD8
710.20±532.60
749.62±467.28
0.48
> 0.50
NS
CD4/CD8
1.73±0.67
0.43±0.58
12.65
< 10- 6
TTS
*TEST DE STUDENT
**PROBABILITE
NS=non significatif
ddl=162
DOSAGE CD3 COMPARANT
LES DEUX POPULATIONS
2000
1500
CD 3
1000
500
0
TEMOIN
TEMOIN
MALADE
MALADE
DOSAGE CD4 COMPARANT
LES DEUX POPULATIONS
1200
1000
CD 4
800
600
400
200
0
TEMOIN
TEMOIN
MALADE
MALADE
DOSAGE COMPARANT LE RATIO CD4/CD8
ENTRE LES DEUX POPULATIONS
2
1,8
1,73
1,6
RATIO 1,4
CD4/CD8 1,2
1
0,8
0,6
0,43
0,4
0,2
0
TEMOIN
MALADE
DOSAGE COMPARANT LE RATIO CD4/CD8
ENTRE LES DEUX POPULATIONS
EN FONCTION DE L’AGE
RATIO
CD4/CD8
2
1,8
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
1,9
1,87
1,53
0,22
[ 20 – 30 [
0,29
[ 30 – 40 [
TEMOIN
1,59
0,35
[ 40 – 50 [
MALADE
0,27
[ 50 – 60 [
SUIVI DES MALADES
DANS L’INFECTION HIV
51 malades (4 de sexe féminin et 47 de sexe
masculin ) ont bénéficié d’un suivi de dosage
CD4/CD8 durant les années 2003 à 2007.
¾ 2 à 10 dosages CD4/CD8 par malade ont
été effectués (de 3 à 6 mois d’intervalle
en 5 ans ).
¾ Ces malades ont bénéficié parallèlement
de charges virales HIV par Cobas Amplicor
depuis 2004.
¾
SUIVI DES MALADES DANS
L’INFECTION HIV
Nombre de
malades
Nombre de
prélèvement
Pourcentage
(%)
09
10
12
06
05
05
02
01
01
02
03
04
05
06
07
08
09
10
17.7
19.7
23.6
11.8
9.8
9.8
3.9
1.9
1.9
QUATRE TYPES DE MALADES SUIVIS
Dernier
Durée
Nombre
Premier
de
Taux de CD4 Taux de CD4
Min-Max
malades
Min-Max
6 – 35
22 – 138
6mois à1 ans
05
3 – 91
262 – 593
1 à 5 ans
09
108 – 263
330 – 778
6mois à3 ans
10
161 – 438
327 – 767
1 à 5 ans
27
CONCLUSION
6 La valeur du ratio CD4/CD8 dans la
population malade ( 0.43 ) est
nettement inférieure à celle trouvée
dans la population témoin (1.73 ).
6 Le sexe n’a aucun effet sur la valeur
du ratio dans les deux populations,
confirmant ainsi ceux trouve dans la
littérature.
CONCLUSION
la CMF est actuellement une méthode
de référence pour le dosage des CD4/CD8.
6
6
6
La simplicité de la technique.
Rapidité des résultats (1h 30mn).
Son importance dans le suivi et la
prise en charge des malades sidéens.