Phadebact Streptococcus-FR.indd

53-1138-02, Mar-12
Phadebact® Streptococcus Tests
(A, B, C, G), (A-D, F, G) et (A-D, G)
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G)
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D Tests
Phadebact® Strep F Test
Mode d’emploi
MKL Diagnostics AB
Kung Hans Väg 3
SE-192 68 Sollentuna
Sweden
Staphylocoques recouverts d´anticorps
Co-agglutination
Microorganismes possédant les
antigènes correspondants
BUT DU DOSAGE
Phadebact® Streptococcus Tests, Strep Respiratory Test, Strep A Test, Strep B Test, Strep D Tests et Strep F Test ont
été mis au point pour l’identification des Streptocoques béta-hémolytiques appartenant aux groupes A, B, C, D, F et
G.
RESUME ET INTERET DU TEST
La différenciation des Streptocoques béta-hémolytiques en groupes de Lancefield est importante pour le traitement
aussi bien que pour le pronostic de la maladie (1). En donnant au médecin des informations sur le groupe
sérologique, on peut éviter un traitement antibiotique inutile (2).
Les Streptocoques appartenant aux groupes A, B, C, D, F et G sont parmi les plus fréquemment associés aux
infections streptococciques humaines (3-9).
Il existe plusieurs méthodes pour l’identification des Streptocoques. Les méthodes biochimiques et le test
à la bacitracine ne donnent qu´une présomption d´identification. Le test de précipitation de Lancefield,
l´immunoélectrophorèse et l´agglutination sur latex fournissent une identification définitive. Avec ces techniques,
l´extraction des antigènes spécifiques du groupe est nécessaire. Phadebact® Streptococcus Test, qui repose sur une
technique simple et rapide de co-agglutination sur lame (10), permet l´identification définitive des Streptocoques des
groupes A, B, C, D, F et G.
PRINCIPE DU TEST
Des anticorps de lapin, dirigés spécifiquement contre les groupes A, B, C, D, F et G de Streptocoques sont liés à la
protéine A de Staphylocoques tués.Quand on mélange un échantillon contenant des Streptocoques appartenant à
l´un de ces groupes au réactif du groupe correspondant, les antigènes de surface se lient aux anticorps spécifiques
correspondants. Il se forme alors un réseau de co-agglutination, qui est visible à l´oeil nu.
REACTIFS
Chaque trousse de la gamme Phadebact® destinée à l´identification des Streptocoques contient suffisamment de
réactifs pour effectuer le nombre d´identifications suivantes:
Produits
Phadebact® Streptococcus Test (A, B, C, G)
Phadebact® Strep A-D, F, G Test
Phadebact® Strep A-D, G Test
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G)
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D 100 Test
Phadebact® Strep D Test
Phadebact® Strep F Test
Déterminations
300
300
250
200
100
100
100
50
50
Les réactifs sont colorés en bleu (bleu de méthylène) pour faciliter l´interprétation des résultats.
Composants de test
Les trousses citées contiennent les réactifs suivants:
Phadebact® Streptococcus Test (A, B, C, G)
Antisérum de lapin, spécifique de groupe, lié à des Staphylocoques non-viables.
•
Un flacon de réactif de chaque groupe A, B, C et G.
Phadebact® Strep A-D, F, G Test
Antisérum de lapin, spécifique de groupe, lié à des Staphylocoques non-viables.
•
Un flacon de réactif de chaque groupe A, B, C, D, F et G.
Phadebact® Strep A-D, G Test
Antisérum de lapin, spécifique de groupe, lié à des Staphylocoques non-viables.
•
Un flacon de réactif de chaque groupe A, B, C, D et G.
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G)
Antisérum de lapin, spécifique de groupe, lié à des Staphylocoques non-viables.
•
Un flacon de réactif de chaque groupe A, C et G.
•
Phadebact® Réactif de Contrôle:
Gammaglobulines de lapins non-immunisés, liées à des Staphylocoques non-viables.
Phadebact® Strep A Test
•
Réactif du Strep A:
Anticorps spécifiques, obtenus chez le lapin, liées à des Staphylocoques non-viables.
•
Phadebact® Réactif de Contrôle:
Gammaglobulines de lapins non-immunisés, liées à des Staphylocoques non-viables.
Phadebact® Strep B Test
•
Réactif du Strep B:
Anticorps spécifiques, obtenus chez le lapin, liées à des Staphylocoques non-viables.
•
Phadebact® Réactif de Contrôle:
Gammaglobulines de lapins non-immunisés, liées à des Staphylocoques non-viables.
1 flacon
1 flacon
1 flacon
1 flacon
1 flacon
Phadebact® Strep D 100 Test
•
Réactif du Strep D:
Anticorps spécifiques, obtenus chez le lapin, liées à des Staphylocoques non-viables.
•
Phadebact® Réactif de Contrôle:
Gammaglobulines de lapins non-immunisés, liées à des Staphylocoques non-viables.
Phadebact® Strep D Test
•
Réactif du Strep D:
Anticorps spécifiques, obtenus chez le lapin, liées à des Staphylocoques non-viables.
•
Phadebact® Réactif de Contrôle:
Gammaglobulines de lapins non-immunisés, liées à des Staphylocoques non-viables.
Phadebact® Strep F Test
•
Réactif du Strep F:
Anticorps spécifiques, obtenus chez le lapin, liées à des Staphylocoques non-viables.
•
Phadebact® Réactif de Contrôle:
Gammaglobulines de lapins non-immunisés, liées à des Staphylocoques non-viables.
2 flacons
2 flacons
1 flacon
1 flacon
1 flacon
1 flacon
Autres composants
•
Ecouvillons
•
Lames jetables
•
Mode d´emploi
Précaution
Pour usage in vitro uniquement.
Attention!
Les réactifs contiennent comme conservateur de l´azide de sodium (NaN3) qui peut réagir avec le plomb et le cuivre
des tuyauteries pour former des azides métalliques fortement explosifs. Au moment d´éliminer les réactifs, rincer
abondamment pour éviter la formation de ces composés explosifs.
Préparation des réactifs
Les réactifs sont PRETS A L´EMPLOI.
Conservation
La date de péremption est indiquée sur l´étiquette extérieure et sur les étiquettes des flacons. La température
recommandée pour la conservation de la trousse est de 2-8°C. Ne pas congeler les réactifs.
RECUEIL ET MANIPULATION DES ECHANTILLONS
Se référer à un manuel standard de microbiologie pour ce qui concerne le recueil et la manipulation des èchantillons.
Ceux-ci peuvent être prélevés partout où il peut y avoir des micro-organismes vivants. Si l’on doit transporter
l´échantillon jusqu’ au laboratoire, l´écouvillon doit être immergé dans un milieu de transport, tel le milieu de Stuart et
doit arriver au laboratoire dans les 48 heures au maximum.
Aucun additif ni préservatif n´est nécessaire pendant le transport ou la culture. Les échantillons prélevés chez des
patients sous antibiotiques peuvent contenir très peu ou aucune bactérie viable.
METHODE
Matériel fourni
Voir REACTIFS.
Matériel nécessaire mais non fourni
•
Culture primaire
•
Bouillon d´enrichissement (le bouillon Todd-Hewitt de BBL est fortement conseillé) - seulement pour la méthode
par inoculation sur milieu d’ enrichissment
•
Pipettes Pasteur
•
Anses d’ inoculation
•
Incubateur á 35-37°C (pour la méthode avec enrichissement)
•
Chronomètre indiquant les minutes et/ou les secondes
Paramètres du test
Température de réaction
Temps de réaction
Volume de réactif
température ambiante
1 minute
une goutte pour chaque groupe à tester
Préparation des échantillons
Se référer à un manuel standard de microbiologie pour ce qui concerne la préparation des cultures primaires. Il existe
trois alternatives pour la préparation des échantillons avec Phadebact® Streptococcus Test:
I.
•
•
•
Identification directe des colonies
Repérer les colonies β-hémolytiques sur le milieu de culture.
Prélever 1 à 5 colonies présumées de Streptocoques avec un écouvillon stérile ou une anse d´inoculation
jetable et les étaler sur 2-6 zones de réaction sélectionnée sur la lame.
Ces colonies sont utilisées directement pour l´identification.
II.
Extraction à partir de colonies
Une méthode alternative d´extraction directe à partir de colonies, utilisant les solutions d´extraction Phadebact®
- disponibles auprès de MKL Diagnostics AB - peut être employée dans les cas suivants:
Nombre de colonies insuffisant pour satisfaire aux conditions opératoires de la méthode sans extraction (1 à 5
colonies par réactif).
Résultats douteux obtenus par la méthode sans extraction.
Note! Cette méthode ne peut pas être utilisée avec les réactifs Phadebact® Strep D et Phadebact® Strep F.
III.
•
•
•
•
•
Enrichissement en bouillon nutritif
Repérer les colonies β-hémolytiques sur le milieu de culture.
Prélever 1 ou plusieurs colonies de Streptocoques β-hémolytiques.
Inoculer dans 2 mL de bouillon d´enrichissement.
Incuber à 35-37°C une nuit ou jusqu´à ce que la turbidité soit évidente (équivalente à une densité standard de
2-3 Mac Farland). La croissance est normalement suffisante après 4 heures d´incubation de plusieurs colonie
dans 0,5 mL de bouillon.
Quelques gouttes de la suspension sont utilisées pour le test.
Procédé du test
•
Homogénéiser les réactifs en les agitant avant de les utiliser.
•
Les réactifs doivent être à température ambiante au moment de leur utilisation.
•
ll est recommandé de respecter les bonnes pratiques le laboratoire et d´utiliser des contrôles positifs et négatifs
à chaque série d´identification.
I.
Méthode d´identification directe des colonies
Sur une lame jetable inscrire
le réactif d’identification
utilisé sur chaque zone de
réaction.
Etaler les colonies sur la
zone interne, délimitée par le
trait fin. Fig 1.
Déposer une goutte de
réactif d’identification sur
les colonies. Fig. 2.
Fig. 2
Fig. 1
Homogénéiser doucement la goutte
de réactif et les colonies avec un
bâtonnet de bois ou une anse
d´inoculation jetable. Changer d´anse
à chaque nouvelle identification.
ATTENTION:
- Les bâtonnets en cellulose peuvent
absorber les réactifs provoquant
ainsi une réaction faible ou nulle.
- La réaction est plus facile à
interpréter si le réactif est étalé sur
une surface plus grande que à celle
des colonies dans les limites de la
zone de réaction. Fig. 3.
Fig. 4
Fig. 3
Agiter la lame en
l´inclinant à 45° et lire le
résultat après 1 minute.
Fig. 4.
II.
•
•
•
•
•
•
•
III.
•
•
•
•
•
Méthode alternative d´extraction directe à partir de colonies
Utiliser la trousse Phadebact® Extraction Solutions. Mélanger 4 gouttes de chacune des solutions d´extraction 1
et 2 dans un petit tube à hémolyse (par exemple de dimension 8 x 50 mm).
Prélever 1 à 3 colonies de Streptocoques β-hémolytiques sur le milieu de culture et réaliser une suspension
homogène dans le mélange des solutions d´extraction.
Incuber à température ambiante pendant 10-15 minutes ou à 100°C pendant une minute.
Déposer à l’ aide d’une pipette Pasteur une goutte d´extrait obtenu dans chaque zone de réaction repérée, sur
la lame jetable.
Déposer une goutte de réactif d´identification sur chaque goutte d´extrait bactérien.
Homogénéiser les gouttes sur toute la surface de la zone, à l´aide d´une anse d´inoculation jetable ou d´un
bâtonnet en bois. Changer d´anse pour chaque réaction.
Agiter la lame en l´inclinant à 45° et lire le résultat après 1 minute.
Méthode avec enrichissement en bouillon nutritif
Sur une lame jetable, inscrire le réactif d’identification utilisé sur chaque zone de réaction.
Déposer 1 goutte de bouillon de culture dans la zone interne, délimitée par le trait fin.
Déposer 1 goutte de réactif d´identification sur chaque goutte de bouillon.
Homogénéiser la suspension bactérienne avec le réactif sur toute la surface de la zone de réaction, à l´aide
d´une anse d´inoculation jetable ou d´un bâtonnet en bois. Changer d´anse pour chaque réaction.
Agiter la lame en l´inclinant à 45° et lire le résultat après 1 minute.
Stabilité du mélange réactionnel final
La réaction de co-agglutination est stable, mais il est préférable de lire le résultat au bout de 1 minute tant que le
mélange est encore humide (il y a risque d´évaporation produisant l´assèchement des réactifs, qui peut conduire à
une mauvaise interprétation des résultats).
Calibration
Aucune calibration n´est nécessaire.
Contrôle de qualité
Contrôle positif
•
La trousse Phadebact® Strep Positive Controls est disponible auprès de MKL Diagnostics AB. Elle est constituée de
flacons contenant des antigènes provenant de cultures pures de Streptocoques de groupes A, B, C, D, F ou G.
•
Ces contrôles antigéniques étant séparés et purifiés, il n´est pas nécessaire d´utiliser des microorganismes de
référence vivants pour tester la spécificité et la réactivité des réactifs d´identification des Streptocoques.
•
Ces contrôles positifs sont utilisés comme les bactéries inconnues provenant d´un bouillon de culture.
•
Alternativement, comme souche de contrôle, on peut utiliser des souches déjà identifiées en laboratoire, par
exemple Strep A (ATCC 19615), Strep B (ATCC 12401), Strep C (ATCC 9892), Strep D (ATCC 9812), Strep F
(ATCC 12392) et Strep G (ATCC 12395).
Contrôle négatif
•
L´usage en parallèle de plusieurs réactifs pour l’identification d’un contrôle ou d’un échantillon inconnu conduit
à la réalisation d’un contrôle négatif. Si par exemple la bactérie testée est un Streptocoque du groupe A, on
observe une co-agglutination avec le réactif A. Les réactifs B, C et G donnent des résultats négatifs (pas de
réaction ou réaction très faible).
•
Lors d´une série d´identification avec une trousse ne comportant qu´un seul réactif d´identification (Phadebact®
Strep A Test, Phadebact® Strep B Test, Phadebact® Strep D Tests ou Phadebact® Strep F Test), utiliser comme
contrôle négatif un Streptocoque connu d’un autre groupe, contrôle ou souche déjà identifiée au laboratoire.
Aspect visuel de la réaction
Aucune réaction
Réaction positive
RESULTATS
Résultat positif
Un résultat positif est constitué par une réaction plus forte et plus rapide avec un des réactifs comparé aux autres
réactifs.
Résultat négatif
Une absence de réaction avec tous les réactifs suggère fortement que la bactérie n´est pas un Streptocoque des
groupes A, B, C, D, F ou G, ou bien que l´échantillon ne contient pas assez de matériel antigénique. Voir LIMITES
DU TEST.
Résultat non interprétable
S´il se produit des co-agglutinations d´égales intensité et vitesse d´apparition avec plusieurs réactifs d´identification
Streptocoque, se référer au paragraphe LIMITES DU TEST.
LIMITES DU TEST
•
Les souches de Streptocoques qui servent à produire les antisérums sont cultivées sur bouillon Todd-Hewitt
fabriqué par Difco. Il est donc préférable d´éviter les cultures dans ce bouillon lors d´identification par les réactifs
Phadebact®.
•
Si les résultats obtenus par la méthode sur colonies (I) sont douteux par manque de bactéries, il est
recommandé d´utiliser la méthode alternative d´extraction directe à partir des colonies (II).
•
Si les résultats obtenus après 4 heures d´incubation en bouillon (III) sont douteux il est recommandé de refaire
l´identification après une nuit d´incubation.
•
S´il se produit des co-agglutinations d´égales intensité et vitesse d´apparition avec plusieurs réactifs
d´identification de Streptocoques il est recommandé d´utiliser la méthode alternative d´extraction directe à partir
de colonies.
•
Les souches de Listeria possèdent une antigénicité très proche de celle des Streptocoques du groupe B et
peuvent ainsi réagir avec le réactif du groupe B. Pour différencier les Listeria des Streptocoques B, on peut
utiliser le test à la catalase: les Streptocoques sont catalase - et les Listeria sont catalase +.
•
La méthode d’extraction directe à partir de colonies ne peut pas être utilisée avec les réactifs Phadebact® Strep
D et Phadebact® Strep F.
CARACTERISTIQUES DU TEST
Spécificité et sensibilité
I.
Test sur colonies
Dans des essais cliniques (11, 12) effectués avec le test sur colonies, 263/279 (94,3%) des échantillons de routine de
Streptocoques béta-hémolytiques étaient correctement identifiés par cette technique.
II.
Test sur milieu d´enrichissement - incubation de 4 heures
Des essais cliniques (13, 14, 15) ont montré que 272/285 (95,4%) des Streptocoques béta-hémolytiques étaient
correctement identifiés après 4 heures d´incubation, comparé avec la technique de Lancefield.
III. Méthode avec incubation de 24 heures en bouillon
Des études cliniques (16, 17) ont montré que 99% des Streptocoques étaient correctement identifiés après
incubation de 24 heures.
V. Streptocoques du groupe B
IV. Streptocoques du groupe A
Diff. espèces bact.
No de souches
agglutinantes
Diff. espèces bact.
No de souches
agglutinantes
Strep A
166/168
Strep B
128/130
Non-strep A
(béta-hémolytique)
1/56
Non-strep B
(béta-hémolytique)
1/18
Strep D
0/13
1/11
Streptocoques
alpha-hémolytiques
0/109
S. pneumoniae
Klebsiella spp.
0/10
Streptocoques
non-hémolytiques
0/98
H. influenzae
0/10
Enterocoques
0/28
Staphylococcus spp.
0/20
Staphylocoques
0/118
Sensibilité: 98.8%
Précision: 99.1%
Sensibilité: 98.5%
Précision: 99.4%
Spécificité: 99.4%
Spécificité: 99.7%
VI. Streptocoques du groupe D
VII. Streptocoques du groupe F
Diff. espèces bact.
No de souches
agglutinantes
Strep F
77/81
1/26
No de souches agglutinantes
Diff. espèces
bact.
Test sur colonies
Test sur milieu
d’enrichissem.
Strep D
178/190
226/240
Strep A
Strep A,B,C,G
0/40
0/40
Strep B
1/24
S. mutans
0/11
0/11
Strep C
0/21
S. sangius
4/19
-
Strep D
0/7
S. uberis
0/2
0/2
Strep G
2/19
S. mitis
3/4
0/1
S. pneumoniae
1/71
S. milleri
0/11
0/11
Sensibilité: 95.0%
Précision: 96.4%
Sensibilité: 93.4%
Précision: 93.4%
Spécificité: 92.8%
Spécificité: 97.0%
Note! Si des bactéries béta-hémolytiques autres que les Streptocoques sont testées, on peut obtenir des résultats
incorrects. Par exemple, des souches de Streptococcus faecalis donnent une co-agglutination faible avec le réactif
du groupe C. Le Streptococcus pneumoniae (Diplococcus pneumoniae) donne des co-agglutinations avec le réactif
du groupe C. Ceci confirme les similitudes antigéniques que l´on connaît entre le Streptococcus pneumoniae et le
Streptocoque du groupe C.
Reproductibilité
Les réactifs utilisés dans ce test sont périodiquement vérifiés avec des souches connues pour s´assurer de la
reproductibilité.
GARANTIE
Les résultats présentés ici ont été obtenus en suivant exactement le protocole décrit. Tout changement ou
modification dans ce protocole non recommandé par MKL Diagnostics AB peut affecter les résultats, auquel cas
MKL Diagnostics AB décline toute responsabilité exprimée, implicite ou établie par la loi, y compris la responsabilité impliquée
par la vente ou le transport pour son utilisation. MKL Diagnostics AB dans une telle éventualité ne peut être rendue
responsable des dommages indirects ou conséquences en résultant.
Références:
1.
Moody M D: p 182 in Streptococci and streptococcal diseases. Eds. Wannamaker & Matsen. Academic Press
(New York, London) 1972.
2.
Wadström T, Nord C-E, Lindberg A & Möllby R: Rapid grouping of streptococci by immunoelectrophoresis. Med
Microbiol Immunol 159 (1974), 191-200.
3.
Pollock, H M & Dahlgren B J: Distribution of streptococcal groups in clinical specimens with evaluation of
bacitracin screening, Appl Microbiol 27 (1974), 141-143.
4.
Horn K, Meyer W T, Wyrick B C & Zimmerman R A: Group B streptococcal neonatal infections. JAMA 230
(1974), 1165-1167.
5.
Reid T M S: Emergence of group B streptococci in obstetric and perinatal infections. Br J Med (1975:2),
533-536.
6.
Feingold D S, Stagg N L & Kunz L J: Extra-respiratory streptococcal infections. New Eng J Med 275 (1966),
356-361.
7.
Finnegan P, Fitzgerald M M, Cumming G & Geddes A M: Lancefield group C streptococcal endocarditis. Thorax
29 (1974), 245-247.
8.
Baker C: Unusual occurence of neonatal septicaemia due to group G streptococcus. J Pediatr 53 (1974),
568-569.
9.
Facklam R: Isolation and identification of streptococci, part II. US. HEW/Public Health Service/Center for
Disease Control/Atlanta Georgia 30333.
10. Christensen P, Kahlmeter G, Johnson S & Kronvall G: New method for the serological grouping of streptococci
with specific antibodies absorbed to protein A containing staphylococci. Inf Imm 7 (1973), 881-885.
11. Pillot S, Lebrun L & De Maneville M: Progress in the identification of pathogenic Streptococcus. La Nouvelle
Presse Medicale 6 (1977), 1822.
12. Slifkin M, Engwall C, Pouchet G R: Direct-plate serological grouping of beta-hemolytic streptococci from primary
isolation plates with the Phadebact® Streptococcus Test. J Clin Microbiol 7 (1978), 356-360.
13. Rosner R: Clinical evaluation of a rapid four hour serological grouping of groups A, B, C and G beta-streptococci
using the Phadebact® Streptococcus Test. J Clin Microbiol 6 (1977), 23-26.
14. Farrel B & Amirak I: Agglutination grouping of streptococci. Lancet (1976:2), 1082.
15. West M E and Jacobs P F: Abstract C 162, presented Annual Meeting American Society for Microbiology, 1979.
16. Arvilommi H: Grouping of beta-hemolytic streptococci by using co-agglutination, precipitin or bacitracin
sensitivity. Acta Path Microbiol Scand 84 (1976), 79-84.
17. Finch R G & Philips I: Serological grouping of streptococci by a slide co-agglutination method. J Clin Pathol 30
(1977), 23-26.
18. Manual Guide-Safety Management, No CDC-22, 4/30/76.
PRODUITS
Phadebact® COA System
Phadebact® Streptococcus Tests
Phadebact® Streptococcus Respiratory Test
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D Tests
Phadebact® Strep F Test
Phadebact® Strep Positive Controls
Phadebact® Pneumococcus Test
Phadebact® Haemophilus Test
Phadebact® GC Positive Controls
Phadebact® CSF Test
Phadebact® CSF Positive Controls
Phadebact® Extraction Solutions
Phadebact® Monoclonal GC Test
Phadebact® ETEC-LT Test
Phadebact® Salmonella Test
Phadebact® Staph Aureus Test
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