Manuel de prelevement biochimie metabolique V01

Plateau de Biologie Hospitalière
- CHU Angers
4 rue Larrey
49933 ANGERS Cedex 9
Ref : BIO-90140-DO-029 V01
Manuel de prélèvement de
biochimie métabolique
Version : 01
Applicable le : 16-09-2015
Laboratoire de Biochimie et Génétique
C.H.U. d’Angers
Secrétariat :
Tél. : 02-41-35-33-14
Fax : 02-41-35-40-17
BIOCHIMIE METABOLIQUE
Responsable de l’unité
* Mr G. Simard, MCU-PH: [email protected]
Biologistes
* Mr C Homedan, PH: [email protected]
* Mme M-C Denis, PH: [email protected]
Ingénieur
•
Mme N. Gueguen : [email protected]
Techniciens
* Mme BLANCHET
* Mme BERTIN
* Mr GADRAS
* Mme TESSIER
* Mme WETTERWALD
Conditions de prélèvements des examens réalisés
Les dosages des Acides Aminés, Acyls Carnitine, Homocystéine, Créatine, Guanidinoacétate, Acide
Orotique et Carnitine sont réalisés par Spectrométrie de masse triple quadripôle : ESI/MS/MS couplé à une
chaîne HPLC.
Le dosage des Acides Organiques est réalisé par Chromatographie Phase Gazeuse
couplée à une masse : CPG MASSE de SHIMADZU avec le logiciel GCMS Solutions.
Les dosages des corps Cétoniques et Acides Gras Libres sont réalisés par dosage enzymatique sur
analyseur PENTRA 400 de Horiba ABX .
I. Acides Aminés Plasmatiques, LCR et Urinaires (AAP, AALCR,AAU)
1. Pour le dosage sanguin :
- Prélèvement veineux
- Prélever après une nuit de jeun physiologique ou à n'importe quel moment en situation critique
- Anticoagulant : héparinate de lithium uniquement
- Centrifuger, décanter et congeler rapidement
- Quantité minimum : 500 µl de plasma. (Si prélèvement difficile nous contacter.)
2. Pour le dosage dans le LCR :
- Ponction non hémorragique de 20 gouttes.
- Congeler rapidement l'échantillon.
3. Pour le dosage urinaire :
- Un échantillon des urines de 24 heures (conserver à + 4°C les urines pendant le recueil) ou un échantillon de la
première miction du matin.
- Congeler rapidement l'échantillon.
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49933 ANGERS Cedex 9
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biochimie métabolique
Version : 01
Applicable le : 16-09-2015
II. Acides Organiques Urinaires (AOU)
- Un échantillon des urines de 24 heures (conserver à + 4°C les urines pendant le recueil) ou un échantillon de la
première miction du matin.
- Si malaise recueillir l'échantillon à ce moment
- Volume minimum de l'échantillon 4 mL
- Congeler rapidement l'échantillon
III. Dosage de l'Acide Orotique
- Un échantillon des urines de 24 heures (conserver à + 4°C les urines pendant le recueil) ou un échantillon de la
première miction du matin.
- Si malaise recueillir l'échantillon à ce moment
- Volume minimum de l'échantillon 2 mL
- Congeler rapidement l'échantillon
IV. Acyls Carnitine
- Prélèvement sur papier buvard de type Guthrie ou sur plasma (héparinate de lithium)
- Guthrie : Veillez à ce que la tâche de sang ait traversé le buvard sans pour autant déposer plusieurs gouttes
successives
- Plasma : Centrifuger, décanter et congeler rapidement
Quantité minimum : 200 µl de plasma. (Si prélèvement difficile nous contacter.)
V. Dosage de la Créatine et du Guanidinoacétate
Pour ce dosage il faut impérativement un prélèvement sanguin ET urinaire.
1. Pour le dosage sanguin :
- Prélever le sang sur tube Héparinate de Lithium (bouchon vert)
- Centrifuger, décanter et congeler le plasma dans l'heure qui suit le prélèvement.
2. Pour le dosage urinaire
- Un échantillon des urines de 24 heures (conserver à + 4°C les urines pendant le recueil) ou un échantillon de la
première miction du matin.
- Congeler rapidement l'échantillon.
VI. Homocystéine Plasmatique
- Prélever le sang sur tube EDTA (bouchon violet)
- Centrifuger, décanter et congeler le plasma dans l'heure qui suit le prélèvement.
VII. Carnitine Plasmatique et Urinaire
1. Pour le dosage sanguin
- Le patient doit être à jeun
- Prélever le sang sur un tube héparinate de lithium, centrifuger, décanter et congeler le plasma
2. Pour le dosage urinaire
- Un échantillon des urines de 24 heures (conserver à + 4°C les urines pendant le recueil) ou un échantillon de la
première miction du matin.
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Manuel de prélèvement de
biochimie métabolique
Version : 01
Applicable le : 16-09-2015
- Si malaise recueillir l'échantillon à ce moment
- Volume minimum de l'échantillon 4 mL
- Congeler rapidement l'échantillon
VIII. Corps Cétoniques, Acides Gras Libres (CC, AGL)
- Prélever le sang sur un tube d'héparinate de lithium
- Centrifuger, décanter et congeler le plasma immédiatement (Ne pas laisser le prélèvement à température
ambiante)
IX. Lactate et Pyruvate
1. L’acide lactique
- Prélever le sang sur un tube iodoacétate (bouchon gris)
- Centrifuger, décanter, et congeler le plasma.
2. L’acide pyruvique
- 1,5 ml de sang est ajouté "au lit du patient" à 1,5 ml d'acide perchlorique normal (6 %).
- Agiter énergiquement immédiatement, centrifuger, décanter, congeler le surnageant.
X. Analyse spectrale du LCR
1. Technique et appareil :
Dosage sur Spectrophotomètre SAFAS
2. Prélèvements :
- Le prélèvement doit être réalisé 12 heures minimum après le début supposé de l'accident vasculaire cérébral.
- Pour la réalisation de cette analyse il est préférable de recevoir le dernier pot de la ponction lombaire.
- Le prélèvement doit arriver à l'abri de la lumière et hors pneumatique (pour éviter la lyse des hématies);
- Quantité de LCR : 0,5 mL soit 10 gouttes.
Le prélèvement doit ensuite être acheminé à +4°C à l'abri de la lumière.
- L'analyse doit être réalisée : - dans l'heure
- ou dans les 24 heures si et seulement si l'échantillon a été centrifugé 5 minutes
à 16,1Rcf et décanté dans l'heure puis conservé à + 4°C à l'obscurité.
XI. Complexes de la chaîne respiratoire et oxygraphie
1. Technique et appareil :
Dosages enzymatiques sur Spectrophotomètre SAFAS des enzymes de la chaîne respiratoire et du cycle de
krebs.
Analyses fonctionnelles sur oxygraphe de précision OROBOROS
2. Prélèvements :
Biopsies musculaire, hépatique et biopsie de peau (culture de fibroblastes).
Dosages enzymatiques : Biopsie musculaire ou hépatique et fibroblastes.
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Manuel de prélèvement de
biochimie métabolique
Version : 01
Applicable le : 16-09-2015
Analyses fonctionnelles sur biopsie fraîche et cultures cellulaires uniquement.
Biopsie musculaire ou hépatique, 30 à 50 mg nécessaire. Congeler immédiatement dans l'AZOTE LIQUIDE et
Conserver à -80 °C.
Si besoin, pour plus de précision, contacter Mme Naïg Gueguen.
Résultats
Délais : Deux Semaines pour AAP, AAU, CAOU, Acyls Carnitine, Homocystéine, Carnitine, Créatine et
Guanidinoacétate, CC, AGL, Acide Orotique.
Si URGENCE, le délai est alors raccourci à 48h
Pour cela veuillez contacter le laboratoire lors de l'envoi pour que des dispositions soient prises
Comptes-rendus
Ils sont réalisés par les biologistes :
Vérification de la qualité de toute chromatographie et intégration dans l’ensemble du dossier.
Discussion des dossiers lors d’une réunion métabolique hebdomadaire, conjointement avec Dr BARTH
Magali et Dr LAVIGNE Christian, Pédiatres Métaboliciens ainsi qu’avec d’autres intervenants en fonction des
problèmes exposés.
Conditions d'envoi des prélèvements
Tous les prélèvements cités ci-dessus doivent être envoyés dans de la Carboglace.
Ils doivent arriver impérativement congelés au Laboratoire.
Les prélèvements doivent obligatoirement être accompagnés de renseignements cliniques (voir feuille ci
jointe. Attention la feuille est écrite recto verso) rédigés par le Médecin prescripteur, contenant les données
cliniques, les traitements et les données biologiques (Lactate, Pyruvate, NH3, Corps cétoniques, Ac. gras libres)
Les prélèvements sont à adresser à :
Monsieur SIMARD, Madame DENIS, Monsieur HOMEDAN
Laboratoire de Biochimie et Génétique - Institut de Biologie en Santé
4 rue Larrey – C.H.U.
49933 ANGERS CEDEX 9
Tel : 02.41.35.33.14 - Fax : 02.41.35.40.17
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