Bouillon laurylsulfate-Tryptose

Bouillon laurylsulfate-Tryptose
DOMAINE D’UTILISATION / HISTORIQUE
Le bouillon laurylsulfate-Tryptose est un milieu d’enrichissement sélectif utilisé pour les
recherche et dénombrement des coliformes dans les eaux, les coquillages vivants, les produits
laitiers et les autres produits alimentaires.
Le milieu a été formulé par Mallmann et Darby qui ont montré, en 1941, que parmi un grand
nombre d’agents mouillants, le laurylsulfate de sodium s’avérait être le meilleur agent sélectif ne
présentant pas d’effet inhibiteur vis-à-vis des coliformes.
Lévine a ensuite démontré que ce milieu réduisait le nombre de faux-positifs en inhibant les
cultures de bactéries sporulées gazogènes.
PRINCIPES
- Le laurylsulfate de sodium inhibe largement le développement de la flore secondaire
contaminante.
- En raison de son excellent pouvoir nutritif, ainsi que de la présence de tampons phosphates,
le bouillon laurylsulfate-Tryptose permet aux coliformes de se développer rapidement et de
produire un dégagement gazeux important par fermentation du lactose, même avec de faibles
inoculums.
PREPARATION
Milieu simple concentration
- Mettre en solution 35,6 g de milieu déshydraté (BK010) dans 1 litre d’eau distillée ou
déminéralisée.
- Agiter lentement jusqu’à dissolution complète.
- Répartir en tubes contenant une cloche de Durham, à raison de 10 mL par tube.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
- Après refroidissement, les cloches de Durham ne doivent pas contenir d’air.
NOTA :
Dans le cadre de la mise en œuvre du milieu décrit dans la norme ISO 11866-1 /
FIL 170-1, il est indiqué que le milieu à simple concentration peut être additionné de MUG (4méthyl-umbelliféryl-ß-D-glucuronide - se référer à la monographie concernant le supplément
BS024) à la concentration de 0,1 g/L et de tryptophane à raison de 1,0 g/L, afin de détecter les
Escherichia coli présumés. Pour le milieu à double concentration (paragraphe suivant), les
quantités à rajouter devront être doublées.
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Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
Milieu double concentration
- Mettre en solution 71,2 g de milieu déshydraté (BK010) dans 1 litre d’eau distillée ou
déminéralisée.
- Agiter lentement jusqu’à dissolution complète.
- Répartir en tubes de capacité appropriée préalablement munis d’une cloche de Durham, à
raison de 10 mL par tube.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
- Après refroidissement, les cloches de Durham ne doivent pas contenir d’air.
MODE D’EMPLOI
Milieu simple concentration
- Ensemencer les tubes de milieu ainsi préparé ou prêt-à-l’emploi (BM097) avec 1 mL de
l’inoculum et de ses dilutions décimales successives.
Milieu double concentration
- Ensemencer les tubes ainsi préparés ou prêts-à-l’emploi (BM098) avec 10 mL d’inoculum.
Incubation
- Incuber pendant 24 à 48 heures à 30°C, 35°C ou 37°C, en fonction de la norme à respecter.
LECTURE
La fermentation du lactose, qui se traduit par l’apparition de gaz dans les cloches de Durham en
moins de 48 heures, indique la présence de coliformes.
Une vérification peut être opérée en pratiquant un isolement et une identification sur un milieu
approprié.
Faire la numération en utilisant la méthode du “nombre le plus probable”.
FORMULE - TYPE du milieu à simple concentration
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Tryptose.......................................................................................20,00 g
- Lactose ..........................................................................................5,00 g
- Phosphate dipotassique ................................................................2,75 g
- Phosphate monopotassique ..........................................................2,75 g
- Chlorure de sodium .......................................................................5,00 g
- Laurylsulfate de sodium.................................................................0,10 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 6,8 ± 0,2.
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CONTRÔLE QUALITE
-
Milieu déshydraté : poudre blanc cassé, fluide et homogène.
Milieu préparé à simple concentration : solution ambre clair, limpide.
Milieu préparé à double concentration : solution ambrée, limpide.
Réponse culturale typique après 48 heures d’incubation à 37°C :
Microorganismes
(1)
Escherichia coli
Citrobacter freundii
Enterococcus faecalis
(1)
ATCC® 25922
ATCC 43864
ATCC 29212
Staphylococcus aureus
(1)
ATCC 25923
Croissance
Production de gaz
bonne, score 2
bonne, score 2
partiellement inhibée,
score 0-1
inhibée, score 0
≥ 5 mm (tube Durham)
≥ 5 mm (tube Durham)
négative
inoculum ≤102 microorganismes.
STOCKAGE / CONSERVATION
Milieu déshydraté : 2-30°C.
La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
- Milieu préparé en tubes : 6 mois à 15-25°C, à l'obscurité (à titre indicatif).
- La réfrigération des tubes est déconseillée car elle peut entraîner la formation de troubles et
de précipités qui disparaissent après retour à la température du laboratoire.
Milieux prêts-à-l’emploi en tubes avec cloches de Durham
(simple et double concentration) :
- Stocker entre 15 et 25°C, à l’abri de la lumière.
- Les dates de péremption sont mentionnées sur les étiquettes.
Supplément MUG 50 mg :
- Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
PRESENTATION
Code
Milieu prêt-à-l’emploi en tubes avec cloches de Durham
(simple concentration) :
- Coffret de 50 tubes de 10 mL
BM09708
Milieu prêt-à-l’emploi en tubes avec cloches de Durham
(double concentration) :
- Coffret de 50 tubes de 10 mL
BM09808
Milieu déshydraté :
- Flacon de 500 g
BK010HA
Supplément MUG 50 mg :
- Coffret de 10 flacons
BS02408
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SUPPORT PHOTO
Référence produit : BK010HA (avec ou sans BS02408), BM09708, BM09808
Utilisation : Recherche et dénombrement des coliformes et Escherichia coli.
Escherichia coli
(à gauche, réaction positive sous une lampe UV)
Bouillon laurylsulfate-Tryptose + MUG
Réf : BM09708 + BS02408
Incubation : 24 heures / 37°C
Caractéristiques : La fluorescence sous une lampe UV démontre la
présence des bactéries positives pour l’enzyme β-glucuronidase.
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REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
MALLMANN, W.L., and DARBY, C.W.. 1941. Uses of a lauryl sulphate tryptose broth for the detection of coliform
organisms. American Journal of Public Health, 31 : 127-134.
HAJNA, A.A., and PERRY, C.A.. 1943. Comparative study of presumptive and confirmative media for bacteria of the
coliform group and for fecal streptococci. American Journal of Public Health, 33 : 550-556.
NF T 90-413. Octobre 1985. Essais des eaux. Recherche et dénombrement des coliformes et des coliformes
thermotolérants. Méthode générale par ensemencement en milieu liquide (NPP).
NF V 08-600. Octobre 2000 (2e tirage de Novembre 2000). Microbiologie des aliments. Dénombrement des Escherichia
coli présumés dans les coquillages vivants. Technique du nombre le plus probable.
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la
production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
NF ISO 7251 (V 08-020). Juillet 2005. Microbiologie des aliments. Méthode horizontale pour la recherche et le
dénombrement d’Escherichia coli présumés.Technique du nombre le plus probable.
ISO 11866-1 / FIL 170-1. Décembre 2005. Lait et produits laitiers. Dénombrement d’Escherichia coli présumés. Partie
1: Technique du nombre le plus probable avec utilisation de 4-méthtylumbelliféryl-β-D-glucuronide (MUG).
NF ISO 11866-1 (V 04-019-1). Septembre 2006. Lait et produits laitiers. Dénombrement d’Escherichia coli présumés.
Partie 1 : Technique du nombre le plus probable avec utilisation de 4-méthylumbelliféryl- -D-glucuronide (MUG).
NF ISO 4831 (V 08-016). Octobre 2006. Microbiologie des aliments. Méthode horizontale pour la recherche et le
dénombrement des coliformes. Technique du nombre le plus probable.
NF T 90-461/A2. Mai 2007. Qualité de l’eau. Microbiologie. Contrôle qualité des milieux de culture.
Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-02-10.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK010/F/2003-01 : 6.
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