Autophagie et apoptose examen Fichier

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Autophagie et apoptose examen Fichier
Hind Guenou
Socle Biologie Cellulaire Sujet d'examen
Partie II: Stress et réponse cellulaire
Master "Biologie Santé" - M1S1
Autophagie et apoptose :
En 2010, Rubinsztein DC. et ses collaborateurs ont publié une étude portant sur le lien entre
l’apoptose et l’autophagie autour de Beclin 1, un acteur majeur de l’autophagie. Dans cet article, les
auteurs ont évalué l’implication de la famille Bcl2 dans l’autophagie par surexpression de protéines
de fusion telles que Beclin 1 étiquetée Flag ou du LC3 étiquetée GFP.
Figure 1
Partie 1 : Des cellules HeLa sont co-transfectées distinctement
avec les vecteurs suivants :
- Vecteur Bcl-xL +Vecteur vide (xL/vector)
- Vecteur Bcl-xL+ Vecteur Beclin 1 étiquetée Flag (xL /Beclin1)
- Vecteur Bcl-xL+ Vecteur Beclin 1 étiquetée Flag +: Vecteur
Bad (xL /Beclin1/Bad)
- Vecteur Bcl-xL+ Vecteur Beclin 1 étiquetée Flag +: Vecteur Bad
(xL /Beclin1/Bax)
Après 20h de culture post-transfection, les cellules sont lysées, des
immunoprécipitations avec un anti-Flag et des western-Blots sont
réalisées avec des anticorps anti-Bcl-xl, anti-Flag, anti-Bad et antiBax (Figure1).
Q1. Donnez les évènements cellulaires d’une macro-autophagie
Q2. En quoi Beclin 1 et LC3 sont des acteurs moléculaires importants dans le processus
d’autophagie?
Q3. Pourquoi les auteurs étudient le niveau d’expression de la protéine Bcl-xl après
immunoprécipitation dans figure 1?
Q4. Analysez l’immunoblot de la figure 1.
Partie 2 : les cellules HeLa transfectées
avec les vecteurs suivants,
Vecteur LC3 –GFP ou Vecteur LC3 GFP
Vecteur Bax sont traitées soit avec un
inhibiteur de toutes les caspases (z-VAD)
soit avec du DMSO (le véhiculant du ZVad). A l’issue de ces traitements les
chercheurs ont quantifié la distribution
de LC3-GFP cytoplasmiques dans les
cellules (Figure2).
Q5 : Quelle information supplémentaire vous apporte cette expèrience ?
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