A mes grands parents

COMMENT RENDRAIS-JE AU SEIGNEUR TOUT LE BIEN DONT IL ME COMBLE ?
" LE SEIGNEUR M'A DIT : MA GRÂCE TE SUFFIT, DANS TA FAIBLESSE, MA
PUISSANCE DONNE SA PLEINE MESURE" 2 cor 12,9
- A mes grands parents
- A Maman,
de
Tu sais tout ce que j'éprouve pour toi ! une thèse entière ne suffirait
pas pour le dire.Retrouve en cette modeste œuvre, une part du fruit
l'amour que tu nous portes, et de tous les sacrifices que tu n'hésites
jamais à consentir pour notre bonheur.
- A Papa,
Tu n'as jamais lésiné sur les moyens de nous procurer la meilleure
instruction. Ce travail est à toi. Il n'aurait pu être accompli, sans la
conscience et la rigueur au travail, que, mine de rien, tu as tenu à
nous inculquer.
- A mes frérots et sœurettes chéris, ma p’tite puce, Dod’s chou, bébédou,
ma moule
Je vous aime tant...
Je souhaite que ceci contribue à vous motiver. Retenez que tout
succès repose dans le respect aux parents, dans la foi en le travail et
dans la persévérance, quelles que soient les circonstances
- A tata cocoé,
Trouve ici, toute notre reconnaissance, et le fruit de ton immense
dévouement pour nous.
-A tata Marie-lou et tonton Tidiane,
Cette œuvre est la vôtre, elle ne serait sûrement pas si vous n'aviez
été là à mes débuts en pharmacie.
- A tous mes cousins et cousines,
Amour fraternel, restons toujours unis.
- A Mame Louise
- A tatas Dédé, Joelle, Soly, Ndeye marie, Mamina et tonton Jean Luc
Toute mon affection
-A tata Odette et tata Nani.
Toute ma reconnaissance
- A tata Bibi et toutes les tatas de la fraternité
Profonde gratitude
- A tata Marie-Claude, tanti Djami, tata Astou, tata Arlette,.
Merci pour tout
A toutes mes tatas et tontons qui sont si gentils.
- A Oumy, A colette,
Merci encore.
- A tous (tes) mes amis (es).
En souvenir des merveilleux moments partagés.
- A tous mes promotionnaires, A tous les thésards et co-thésards de la
Bactério.
- A tous ceux qui, d'une façon ou d'une autre ont contribué à la
réalisation de ce travail.
- A tous les patients qui attendent mes services.
REMERCIEMENTS
- A tout le personnel du laboratoire de Bactériologie-Virologie de l'hôpital
Aristide Le Dantec, particulièrement :
Aux Docteurs Amy GASSAMA, Lamine DIAW
TOURE pour leurs constants encouragements.
et Ndéye Coumba
Aux « ATINS » Cheikh SY, Pape Ousmane DIAW, Leyfou DABO.
A Omar KAIRE, Babacar GNING, Djibi SAMBOU, pour leur
disponibilité.
Ndeye TALL et Ouly SOW
- A Mme AIDARA de l'Institut Pasteur de Dakar pour m'avoir permis de
manipuler dans son service. Et à tous le personnel du laboratoire de
Bactériologie expérimentale: Babacar DIALLO, Mme MBOW, Mme
SANKARE.
- A Mr. Jean Michel Rezk et tout le personnel de la pharmacie Ponty.
- A tous ceux que je n'ai pas cités et qui sauront se reconnaître dans
ce travail.
A NOS MAITRES
ET JUGES
A Notre Maître et Président de Jury,
Le Professeur Ibrahima WONE
un
Nous vous remercions pour le plaisir et la spontanéité avec laquelle vous
avez accepté de présider notre jury de thèse. Nous sommes très honorès.
Vos qualités de père et d'enseignant, vos conseils motivant, font de vous
maître des plus prestigieux de la faculté.
Recevez cher professeur, l'expression de notre profond respect.
A Notre Maître et Juge.
Le Professeur Issa LO
ce
C'est un grand honneur que vous nous faites en acceptant de sièger dans
jury, malgré votre emploi du temps O combien chargé.
Votre simplicité, vos qualité humaines et intellectuelles sont admirées de
tous.
Veuillez retrouver en ce travail notre sincère reconnaissance.
A Notre Maître et Juge,
le Professeur Souleymane MBOUP
Nous sommes très flattés de vous avoir comme juge.
Votre humilité malgré toutes vos connaissances intellectuelles nous
inspirent une grande estime.
Soyez assuré de notre profond respect.
A Notre Maître et Juge,
le Professeur Mamadou BADIANE
Nous vous remercions d'avoir accepté de nous juger, avec toute la
simplicité qui est la vôtre.
Votre esprit philanthropique, votre compètence et votre érudition forcent
l'admiration de tous ceux que vous enseignez.
Veuillez acceptez l'expression de notre profonde gratitude.
A Notre Maître et Juge,
le Professeur Cheikh Saad Bouh BOYE
Vous avez bien voulu nous confier ces travaux, malgré leur délicatesse.
Votre constante disponibilité et votre acharnement au travail nous ont
marquée.
Recevez par ce travail qui est aussi le vôtre, nos respectueux
remerciements.
PLAN
page
INTRODUCTION................ ................ .....................1
Première partie : GENERALITES
CHAPITRE I : STRUCTURE EXTERNE DE LA BACTERIE
2
I.1 Constituants de l'enveloppe des bactéries à Gram négatif..... 3
I.1.1 La membrane cytoplasmique.......................................................... 3
I.1.2 L'espace périplasmique................................................................... 3
I.1.3 La paroi..........................................................................................
3
I.1.4 La membrane externe.....................................................................
4
I.1.4.1- Les phospholipides.................................................................
5
I.1.4.2- Les lipopolysaccharides...........................................................
5
I.1.4.3- Les protéines........................................................................
5
I.2- Les lipopolysaccharides (LPS)................................................
6
I.2.1- Définition......................................................................................
6
I.2.2- Localisation...................................................................................
7
I.2.3- Etude immunochimique du LPS.................................................... 7
I.2.3.1- Extraction du LPS.................................................................
8
I.2.3.2- Etude immunochimique du LPS................................................
9
I.2.3.2.1- Les chaînes polysaccharidique à spécificité O..... 9
I.2.3.2.2- Le noyau polysaccharidique de base ou
core oligosaccharide...........................................................
11
I.2.3.2.3- Le lipide A..........................................................
12
page
CHAPITRE II : ETUDE PHYSIOLOGIQUE DU LPS :
PROPRIETES BIOLOGIQUES................. 13
II.1- Propriétés endotoxiniques thermostables: physiopathologie... 13
II.1.1- L'effet pyrogène.......................................................................................
13
II.1.2- L'effet léthal.............................................................................................
14
II.1.3- La nécrose tissulaire..................................................................... 14
II.1.4- Les manifestations vasculaires..................................................... 15
II.1.5 L'action abortive.......................................................................................
15
II.1.6- Actions diverses......................................................................................
15
II.2- Propriétés immunologiques du LPS......................................
15
II.2.1- La spécificité sérologique............................................................
15
II.2.2- mécanisme d'action in vivo du LPS.............................................. 17
II.2.3- Propriétés immunologiques non spécifiques du LPS.................... 17
II.2.3.1- L'effet adjuvant...............................................................................
17
II.2.3.2- L'effet mitogène sur les lymphocytes B............................................
17
II.2.3.3- Activation du complément..............................................................
18
CHAPITRE III: LPS ET VIRULENCE BACTERIENNE..................
19
CHAPITRE IV: LPS ET RESISTANCE BACTERIENNE AUX
ANTIBIOTIQUES.......................................................
21
CHAPITRE V: METHODES D'ETUDE DES LPS..............................
22
page
Deuxième partie : TRAVAIL PERSONNEL
24
CHAPITRE I : PRESENTATION.........................................................................
24
I.1- Cadre d'étude...................................................................................................
24
I.2- Objectifs du travail......................................................................................
24
CHAPITRE II: MATERIEL ET METHODE......................................
26
II.1- Souches bactériennes..............................................................
26
II.2- Obtention du matériel à extraire...........................................
26
II.2.1- Matériel.......................................................................................
26
II.2.1.1- Souches bactériennes......................................................................
26
II.2.1.2- Milieux de culture...........................................................................
26
II.2.1.3- Réactifs..........................................................................................
27
II.2.1.4 Matériel divers.................................................................................
27
II.2.2- Méthode....................................................................................................
27
II.2.2.1- Obtention des souches lisses(S).......................................................
27
II.2.2.2- Obtention des souches rugueuses (R).............................................
28
II.3- Extraction des lipopolysaccharides.......................................
28
II.3.1- Matériel.....................................................................................................
28
II.3.1.1- Souches bactériennes......................................................................
28
II.3.1.2- Réactifs.........................................................................................
29
II.3.1.3- Matériel divers................................................................................
29
II.3.2- Méthode..................................................................................................
29
II.3.2.1- Principe. ........................................................................................
29
II.3.2.2- Mode opératoire.............................................................................
30
II.4- Electrophorèse des LPS sur gel de polyacrylamide en
présence du dodécyl sulfate de sodium (SDS-PAGE).......... 31
II.4.1- matériel.....................................................................................................
31
II.4.1.1- Réactifs..........................................................................................
31
page
II.4.1.2- Matériel divers.....................................................................
31
II.4.2- Méthode....................................................................................................
32
II.4.2.1- Principe..............................................................................
32
II.4.2.2- Description de la méthode......................................................
32
II.4.2.3- Mode opératoire..................................................................
33
II.4.2.3.1- Montage du système
d'électrophorèse.................
33
II.4.2.3.2- Préparation des gels...........................................
33
II.4.2.3.3- Préparation des échantillons..............................
34
II.4.2.3.4- Dépôt des échantillons....................................... 34
II.4.2.3.5- Mise en route de la migration............................. 35
II.4.2.3.6- Arrêt de la migration.......................................... 35
II.5- Détection des bandes de LPS................ ................ ................ .....
35
II.5.1- Détection par coloration avec du bleu de coomassie brillant....... 35
II.5.1.1- Matériel..............................................................................
35
II.5.1.1.1- Réactifs................ ................ ................ ...........
35
II.5.1.1.2- Matériel divers................ ................ .................
36
II.5.1.2- Méthode................ ................ ................ ................ .........
36
II.5.1.2.1- Fixation - Coloration................ ......................... 36
II.5.1.2.2- Décoloration................ ................ ....................
36
CHAPITRE III : RESULTATS................ ................ ................ ...........
III.1- Répartition des souches................ ................ ................ .............
38
III.2- Profil de virulence des souches................ ................ .................
38
III.2.1- Profil de virulence des souches de E. coli................ .................. 38
III.2.2- Profil de virulence des souches de Shigella................ ................ 39
III.2.3- Profil de virulence des souches de Vibrio cholerae.................... 39
III.3- Profil de sensibilité des souches. ................ ................ .............
III.3.1- Profil de sensibilité des souches de
Salmonella...........................
40
40
III.3.2- Profil de sensibilité des souches de E. coli................ ................ 40
page
III.3.3- Profil de sensibilité des souches de Shigella................ .............. 42
III.3.4- Profil de sensibilité des souches de Vibrio cholerae................... 42
III.4- Obtention des souches rugueuses (R) ................ .....................
43
III.4.1- Obtention des souches de Salmonella................ ........................ 43
III.4.2- Obtention des souches de E. coli................ ................ .............. 44
III.4.3- Obtention des souches de Shigella................ ................ ............ 44
III.4.4- Obtention des souches de Vibrio cholerae................ ................ 45
III.5- Profils électrophorétiques des lipopolysaccharides (LPS)
47
des différentes souches................ ................ ................ ..............
47
III.5.1- Evaluation des bandes et détermination de la taille des
48
III.5.2- Profils électrophorétiques globaux des différentes souches......
48
III.5.2.1- Souches de Salmonella................ ................ .............
50
III.5.2.2- Souches de E. coli................ ................ ...................
51
III.5.2.3- Souches de Shigella................ ................ ..................
53
III.5.2.4- Souches de Vibrio cholerae................ ................ .......
55
LPS........
III.5.3- Profils électrophorétiques détaillés des différentes
souches........
55
III.5.3.1- Souches de Salmonella................ ................ ..............
58
III.5.3.2- Souches de E. coli................ ................ ...................
59
III.5.3.3- Souches de Shigella................ ................ .................
63
III.5.3.4- Souches de Vibrio cholerae................ ................ .......
64
III.6- Analyse du profil électrophorétique des LPS en fonction
de la virulence................ ................ ................ ......................
64
III.6.1- Souches de E. coli................ ................ ................ ..................
65
III.6.2- Souches de Shigella................ ................ ................ ................
66
III.6.3- Souches de Vibrio cholerae................ ................ .....................
67
III.7- Analyse du profil électrophorétique des LPS en fonction
de la sensibilité aux antibiotiques................ ................ ............
67
III.7.1- Souches de Salmonella................ ................ ................ ............
68
III.7.2- Souches de E. coli................ ................ ................ ..................
69
III.7.3- Souches de Shigella................ ................ ................ .................
70
III.7.4- Souches de Vibrio cholerae................ ................ ....................
71
page
CHAPITRE IV: DISCUSSION
IV.1- Obtention des souches rugueuses (R) ................ ...................... 71
IV.2- Extraction des LPS des souches S et des souches R. ............ 71
IV.3- Electrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de
72
dodécyl sulfate de sodium (SDS-PAGE).................................
IV.4- LPS et virulence bactérienne................ ................ .....................
74
IV.5- LPS et résistance bactérienne................ ................ ...................
75
CONCLUSION................ ................ .......................................
78
ANNEXES................ ................ .....................................................
80
BIBLIOGRAPHIE................ .....................................
87