RapportLeptospirose07_Matthieu Roger
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RapportLeptospirose07_Matthieu Roger
Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse CIRAD-EMVT Campus international de Baillarguet 34398 Montpellier cedex 5 23, chemin des Capelles 31300 Toulouse C.E.A.V. de PATHOLOGIE ANIMALE EN REGIONS CHAUDES ____________ RAPPORT DE STAGE Enquête de séroprévalence de la leptospirose dans la population extensive de cerfs rusa (Cervus timorensis russa) de l’Ile Maurice. Présenté par Matthieu ROGER Réalisé sous la direction de : Organisme et pays : Période du stage : Date de soutenance : Dr Ferran JORI Ministry of Agro-industry and Fisheries Department of Veterinary Services Réduit, Ile Maurice. du 26 avril 2007 au 6 août 2007 20 septembre 2007 Année universitaire 2006-2007 Remerciements A Jacqueline SAUZIER, Manager de la Deer Farming Co-Operative Society et Présidente de la Mauritius Meat Producers Association, Pour son dynamisme, sa gentillesse, sa disponibilité et toutes les solutions qu’elle a pu trouver pour régler les problèmes logistiques, Qu’elle veuille bien trouver ici l’expression de ma profonde gratitude. Aux Drs PRYAG et MEENOWA, Chief Agricultural Officer and Chief Veterinary Officer at the Ministry of Agro-Industry and Fischeries of Mauritius, Merci de m’avoir accueilli dans vos locaux et de m’avoir mis a disposition les moyens humains et matériel nécessaires, Remerciements respectueux. Au Dr JAUMALLY, Vétérinaire officiel au sein du Département des Services Vétérinaires de l’Ile Maurice, Pour les conseils et les plans débrouille pour trouver du matériel ou toutes les formalités administratives, Remerciements chaleureux. Au Dr Ferran JORI, Vétérinaire épidémiologiste au sein de l’Unité « Epidémiologie et écologie des maladies animales » du CIRAD, Pour avoir superviser ce travail, Sincères remerciement. Au Pr Philippe JACQUIET, Professeur à l’Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse, Pour nous avoir concocter 3 mois de cours très attractifs, pour juger ce travail. Remerciements respectueux. Au Dr François ROGER, Vétérinaire épidémiologiste responsable de l’Unité « Epidémiologie et écologie des maladies animales » du CIRAD, Pour avoir accepter d’être rapporteur de ce travail, Sincères remerciements. Au Dr Flavie GOUTARD, Vétérinaire épidémiologiste au sein de l’Unité « Epidémiologie et écologie des maladies animales » du CIRAD, Pour avoir accepter d’évaluer de ce travail, Remerciements chaleureux. 1 A toute l’équipe du département des Services vétérinaires de l’Ile Maurice pour leur accueil chaleureux et leur respect incroyable. Un merci tout particulier au Dr Gya pour les trajets en voiture et sa gentillesse ainsi qu’à Mr Mungroo pour contourner les méandres de l’administration mauricienne. Merci à Mr Ragubeen pour sa compréhension ainsi qu’à tous les chauffeurs qui ont du me trimbaler à droite et à gauche, de jour comme de nuit parfois au bout du monde. Enfin un très très grand merci à mes deux fidèles collaborateurs de terrain, Rawa sans qui je n’aurai pas fait le quart du travail accompli et Ari. Merci au Dr Andrew POTTS du Laboratoire de Bactériologie de l’Onderstepoort Veterinary Institute pour la bonne réception des échantillons envoyés ainsi que pour les analyses effectuées. A Iqbal et sa famille pour leur hospitalité. A Dhruvi, Nicolas, Moin et comparses, coachs Melveen et Sydney ainsi que tous les autres. A Thierry, Karen, Dorian et Jenna pour m’avoir recueilli deux fois en moins de 6 mois et permis de découvrir un hameau où il fait bon vivre. A tous mes compagnons de galère et de fiesta durant cette année mouvementée, dans le désordre et de façon non exhaustive : Aurélia, Jean-Marc, Val, Mag, Lise, Fanny, Simon, Mohadji, Bachir, Aurore, Denis, Alhadji, Kathian, Simeon, Marion, Ivan, Marie-Marie, JP, Cindy et particulièrement mes incroyables collocatrices du gîte 3, Amaia, Mariela et Ramo. Merci à tous ceux que j’ai oublié. A mes parents, mes deux sœurs et mon futur beau-frère ainsi que tout le reste de la famille. A Fanfan. Aux rencontres exotiques passées et futures. 2 Sommaire Liste des Tableaux_________________________________________________________________ 5 Liste des Figures _________________________________________________________________ 6 Liste des Cartes _________________________________________________________________ 6 Liste des Annexes _________________________________________________________________ 6 Introduction _________________________________________________________________ 7 Première partie :Données bibliographiques sur la leptospirose et la filière cerf rusa de l’Ile Maurice __________________________________________________________ 8 I. Quelques rappels bibliographiques sur la leptospirose______________________________________ 9 A. Rappels généraux __________________________________________________________________________ 9 1. Taxonomie _____________________________________________________________________________ 9 2. Caractères bactériologiques _______________________________________________________________ 10 3. Pathogénie ____________________________________________________________________________ 11 4. Epidémiologie__________________________________________________________________________ 11 5. Symptômes ____________________________________________________________________________ 13 6. Diagnostic et dépistage ___________________________________________________________________ 13 7. Traitement_____________________________________________________________________________ 14 B. La leptospirose dans la région de l’Archipel des Mascareignes ______________________________________ 14 1. Ile de la Réunion________________________________________________________________________ 14 2. Madagascar____________________________________________________________________________ 14 3. République de Maurice___________________________________________________________________ 15 II. L’élevage du cerf rusa (Cervus timorensis russa) à l’Ile Maurice ____________________________ 16 A. Rappel sur les différentes filières _____________________________________________________________ 16 B. La filière cerf rusa_________________________________________________________________________ 17 1. Historique _____________________________________________________________________________ 2. Rappels zoologiques _____________________________________________________________________ 3. Importance culturelle et sociologique________________________________________________________ 4. Importance économique __________________________________________________________________ 5. Organisation de la filière _________________________________________________________________ 6. Exportations et réglementation européenne ___________________________________________________ 17 17 17 17 17 19 C. Statut sanitaire officiel de la République de Maurice ______________________________________________ 21 Deuxième partie :Enquête de séroprévalence de la leptospirose dans la population extensive de cerfs rusa (Cervus timorensis russa) de l’Ile Maurice ____________________ 22 I. Objectifs___________________________________________________________________________ 23 A. Objectifs généraux ________________________________________________________________________ 23 B. Objectifs secondaires ______________________________________________________________________ 23 II. Matériel et méthode ________________________________________________________________ 23 A. Zone d’étude_____________________________________________________________________________ 23 1. Données démographiques _________________________________________________________________ 2. Géographie ____________________________________________________________________________ 3. Relief ________________________________________________________________________________ 4. Climat ________________________________________________________________________________ 5. Faune ________________________________________________________________________________ 23 24 25 25 26 B. Population d’étude ________________________________________________________________________ 27 C. Plan d’échantillonnage _____________________________________________________________________ 27 3 D. Collecte des données ______________________________________________________________________ 27 1. Procédure de prélèvement et de conditionnement ______________________________________________ 27 2. Nombre d’échantillons testés et données sur l’âge, le sexe, la localisation géographique, l’altitude, l’influence climatique et la densité _____________________________________________________________________ 28 E. Mesures de laboratoire _____________________________________________________________________ 30 F. Gestion des données _______________________________________________________________________ 31 1. But __________________________________________________________________________________ 31 2. Définition des variables __________________________________________________________________ 31 3. Modèle statistique_______________________________________________________________________ 32 III. Résultats _________________________________________________________________________ 32 A. Résultats généraux ________________________________________________________________________ 32 B. Prévalences d’agglutinines anti-leptospire dans les strates âge et sexe ________________________________ 33 C. Prévalences d’agglutinines anti-leptospire en fonction de l’influence climatique ________________________ 34 D. Résultats de l’analyse statistique _____________________________________________________________ 35 1. Sur la prévalence générale ________________________________________________________________ 35 2. Sur la prévalence par sérogroupe ___________________________________________________________ 35 IV. Discussion ________________________________________________________________________ 36 A. Sur la qualité des informations recueillies ______________________________________________________ 36 1. Echantillonnage ________________________________________________________________________ 36 2. Qualité du test d’agglutination microscopique (MAT)___________________________________________ 37 3. Qualité des informations relatives aux animaux et aux chassés ____________________________________ 37 B. Sur la prévalence générale d’agglutinines anti-leptospire dans la population extensive de cerfs rusa (Cervus timorensis russa) de l’Ile Maurice _______________________________________________________________ 37 1. Prévalence générale _____________________________________________________________________ 37 2. Relation entre la prévalence générale et l’effet du climat_________________________________________ 38 C. Sur la prévalence d’agglutinines anti-leptospire par sérogroupe positif ________________________________ 38 1. Prévalence par sérogroupe ________________________________________________________________ 2. Relation entre la prévalence du sérogroupe Tarassovi et l’âge_____________________________________ 3. Relation entre la prévalence des sérogroupes Pomona et Sejroe et le climat __________________________ 4. Relation entre la prévalence du sérogroupe Sejroe et la densité ____________________________________ 38 39 39 40 Conclusion ________________________________________________________________ 41 Perspectives ________________________________________________________________ 42 Bibliographie ________________________________________________________________ 43 Annexes ________________________________________________________________ 46 4 Liste des Tableaux Tableau I : Principaux sérogroupes et quelques sérovars de L. interrogans sensu lato (Levett 2001) (en gras les sérovars testés dans la suite de l’étude). ______________________________________________ 9 Tableau II : Génomospécies de Leptospira et distribution de quelques sérogroupes (Levett 2001) (en gras les sérogroupes ciblés dans la suite de l’étude). __________________________________________ 10 Tableau III : Principaux sérogroupes susceptibles d’être rencontrés chez quelques espèces hôtes. ________ 12 Tableau IV : Principales maladies humaines contagieuses et zoonotiques de la République Maurice entre 2004 et 2006 (source CSO 2007)._____________________________________________________ 15 Tableau V : Statistiques d’élevage et d’abattage des filières animales de l’Ile Maurice en 2006___________ 16 Tableau VI : Informations officielles sur la situation sanitaire de la République de Maurice en 2007 concernant les principales maladies pouvant affecter les bovins, suidés, ovins et caprins et potentiellement transmissibles aux cervidés._____________________________________________________ 21 Tableau VII : Données démographiques de la République de Maurice (Central Statistic Office (CSO) 2007).23 Tableau VIII : Divisions administratives par district de l’Ile Maurice. ______________________________ 24 Tableau IX : Températures moyennes mensuelles relevées dans les différentes régions de l’Ile Maurice pour l’année 2006 (source CSO 2007). ________________________________________________ 25 Tableau X : Nombre d’animaux, surface, densité et classification pour l’influence climatique pour les chassés de cerfs rusa de l’Ile Maurice ___________________________________________________ 30 Tableau XI : Sérovars testés pour évaluer la leptospirose dans la populations extensive de cerf rusa de l’Ile Maurice ____________________________________________________________________ 30 Tableau XII : Identification des sérogroupes de leptospires détectés deux ou trois fois chez un même individu ___________________________________________________________________________ 32 Tableau XIII : Prévalence d’agglutinines anti-leptospire par sérogroupe positifs chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice en fonction de l’âge et du sexe. ___________________________________________ 33 Tableau XIV : Prévalence d’agglutinines anti-leptospire par sérogroupe positifs chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice en fonction de l’influence climatique. ______________________________________ 34 Tableau XV : Modèle linéaire généralisé mixte (effectué en utilisant la fonction de R glmmPQL) à propos de la prévalence générale d’agglutinines anti-leptospires (variable de réponse) chez les cerfs rusa en fonction de l’âge (jeunes (<15 mois) ou adultes (≥15 mois), le sexe (mâle ou femelle), la localisation (Cote ou Haut), l’altitude (mètre) ; l’influence climatique (Climat (A) : chaud et sec ; Climat (B) : Froid et humide, Climat (C) : chaud et humide) et la densité (N/km2). Age, sexe, localisation, altitude, climat et densité ont été définis comme des facteurs fixes alors que le chasse a été modélisé comme un facteur aléatoire. Les effets significatifs sont indiqués en bleu gras. _______________________________________________________________________ 35 Tableau XVI : Modèle linéaire généralisé mixte (effectué en utilisant la fonction de R glmmPQL) à propos des prévalences d’agglutinines anti-leptospires (variables de réponse) pour les sérogroupes Tarassovi, Pomona et Sejroe chez les cerfs rusa en fonction de l’âge (jeunes (<15 mois) ou adultes (≥15 mois), le sexe (mâle ou femelle), la localisation (Cote ou Haut), l’altitude (mètre) ; l’influence climatique (Climat (A) : chaud et sec ; Climat (B) : Froid et humide, Climat (C) : chaud et humide) et la densité (N/km2). Age, sexe, localisation, altitude, climat et densité ont été définis comme des facteurs fixes alors que le chasse a été modélisé comme un facteur aléatoire. Les effets significatifs sont indiqués en bleu gras. _______________________________________ 35 Tableau XVII : Résultats de prévalence d’agglutinines anti-leptospires par sérogroupe et par chassé chez des cerfs rusa (Cervus timorensis rusa) de l’Ile Maurice__________________________________ 48 Tableau XVIII : Répartition de l’échantillonnage par chassé en fonction du sexe _____________________ 49 Tableau XIX : Répartition de l’échantillonnage par chassé en fonction de l’âge_______________________ 50 5 Liste des Figures Figure 1 : Blason de la République de Maurice ________________________________________________ 17 Figure 2 : Représentation des fréquences des sérogroupes de leptospire positifs chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice en fonction de l’âge et du sexe. ______________________________________________ 33 Figure 3 : Représentation des fréquences des sérogroupes de leptospire positifs chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice en fonction de l’influence climatique. _________________________________________ 34 Liste des Cartes Carte 1 : Représentation des zones boisées de l’Ile Maurice (Page and d'Argent 1997). _________________ 19 Carte 2 : République de Maurice (http://www.intnet.mu/iels/mauritius_map.gif).______________________ 24 Carte 3 : Représentation de la division administrative par district de l’Ile Maurice _____________________ 24 Carte 4 : Relief de l’Ile Maurice (http://www.seeyhoo.com/images/imagearticle/relief.jpg). _____________ 25 Carte 5 : Représentation géographique des températures relevées habituellement à l’Ile Maurice au mois de Juillet (http://www.seeyhoo.com/images/imagearticle/tempjuill.jpg). _______________________ 25 Carte 6 : Représentation géographique de la pluviométrie moyenne à l’Ile Maurice ____________________ 26 Carte 7 : Distribution spatiale des 26 chassés de cerfs rusa ayant donné lieu à au moins un résultat sérologique pour la leptospirose, ainsi que leur appartenance à la classification de l’influence climatique : A (périmètre jaune), B (périmètre vert) ou C (périmètre rouge) (source fond de carte http://www.colonialvoyage.com/viaggi/maumap.jpg) ____________________________________ 29 Liste des Annexes Annexe I : Procédure de stérilisation des tubes en verre 10 ml utilisés pour la récolte des sera ____________ 47 Annexe II : Résultats des prévalences d’agglutinines anti-leptospires par sérogroupe et par chassé ________ 48 Annexe III : Répartition de l’échantillonnage par chassé en fonction du sexe et de l’âge ________________ 49 6 Introduction e cheptel cervin (Cervus timorensis russa) représente la plus importante filière de viande rouge de l’Ile Maurice avec un effectif estimé ces dernières années à 70.000 individus. Celui-ci se compose d’environ 60.000 cerfs exploités traditionnellement dans des chassés et environ 10.000 cerfs élevés de manière plus intensive dans des feed-lots. L En 1992, avec la signature du traité de Maastricht le 7 février et la création de l’Union Européenne, l’Ile de la Réunion, principal importateur de viande de cerf mauricienne à l’époque, entrait au marché commun de l’UE. Les conditions de production et d’exportation de la viande cervine mauricienne n’atteignant pas l’exigence des normes européennes, les exportations vers la Réunion ont donc été contraintes de s’arrêter. C’est aussi en 1992 que la Mauritius Deer Farming Co-operative Society Ltd fut créée suite à l’essor considérable de l’élevage intensif du cerf rusa. Elle s’est fixée pour objectifs d’encadrer les membres éleveurs, de promouvoir la vente de leur production et de développer la filière en demandant des appuis techniques extérieurs. Ainsi, suite à la visite du Dr Philippe Chardonnet (Centre de Coopération Internationale en Rencherche Agronomique pour le Développement, Elevage et Médecine Vétérniaire Tropicale (CIRAD EMVT)) en mars 1992, la Mission d’Aide et de la Coopération Française a programmé un soutien technique à la filière cervine de l’Ile Maurice pendant 5 ans. Celui-ci s’est articulé en quatre modules et le dernier module a été effectué par Sébastien Le Bel lors d’une mission d’appui technique et scientifique qui s’est déroulée du 14 au 29 juin 1997 (Le Bel 1997). Ce stage s’inscrit dans cette démarche d’assistance technique et fait suite à la volonté de la Mauritius Deer Farming Co-operative Society Ltd, de la Mauritius Meat Producers Association ainsi que de la Direction des Services Vétérinaires de l’Ile Maurice, de relancer les exportations de viande cervine vers la Réunion. L’objectif du stage était d’établir un bilan sanitaire de la population de cerfs en captivité à l’Ile Maurice. Le but était de savoir, en suivant une démarche épidémiologique qualitative, si les maladies susceptibles d’infecter le cerf rusa sont présentes sur le territoire (Tuberculose bovine, Paratuberculose, Brucellose, Leptospirose, Fièvre Catarrhale du mouton, Maladie Hémrorragique Epizootique du cerf (EHDV), Cowdriose, Babésiose bovine et Anaplasmose bovine). En effet, très peu d’informations sanitaires sont communiquées au niveau international (Office International des Epizooties (OIE)). Or, un point de la réglementation européenne (résumée dans ce document) précise qu’une des conditions pour prétendre à exporter des produits d’origine animale vers les pays de l’Union Européenne consiste à connaître et suivre dans le temps le statut sanitaire du cheptel donnant lieu à ces exportations. Un échantillonnage des espèces de tiques infestant les cerfs rusa ainsi que la description de leur répartition géographique étaient aussi prévus. Le tout avait pour but de proposer un programme sanitaire dans le but de relancer les exportations de viande de cerf. Au moment de la rédaction de ce document, seul les résultats des analyses pour la leptospirose étaient connus. La suite du document se contentera donc de présenter dans un premier temps quelques rappels bibliographiques sur la leptospirose et la filière cerf en faisant un point sur la réglementation européenne régissant les importations de viande de gibier originaire d’un pays tiers à l’UE. La seconde partie présente l’enquête de séroprévalence de la leptospirose dans la population extensive de cerfs rusa (Cervus timorensis russa). 7 Première partie : Données bibliographiques sur la leptospirose et la filière cerf rusa de l’Ile Maurice 8 I. Quelques rappels bibliographiques sur la leptospirose La leptospirose est une des zoonoses les plus répandues dans le monde (Plank and Dean 2000). Elle est appelée selon les régions : maladie du coupeur de cannes, fièvre des marais, fièvre de vase, fièvre des rizière… témoignant une forte association entre la maladie et l’environnement. A. Rappels généraux Le nom Leptospira vient du grec "lepto" : fin, et "spira" : torsade. Des descriptions anciennes de maladies qui étaient probablement des leptospiroses ont été rapportées chez des porchers en Europe et parmi des riziculteurs en Chine (Faine 1994) mais c’est en 1886 que Weil décrit chez l’homme, en Allemagne, une maladie infectieuse associant splénomégalie, ictère et néphrite. Isolé une première fois en 1907 par Stimson, l’agent responsable de la maladie fut classé dans le nouveau genre Leptospira par Nogutchi quelques années après en 1916. L’importance de la profession en tant que facteur de risque a été très vite mis en avant ainsi que le rôle du rat comme source d’infection. L’existence de la maladie chez les chiens et les animaux de rente a été reconnu un peu plus tard, en même temps que l’implication de ces animaux dans la contamination humaine (Faine et al. 1999). 1. Taxonomie Le genre Leptospira appartient à la famille des Leptospiraceae, de l’ordre des Spirochaetales. Depuis la fin des années 80, la taxonomie passe d’une classification phénotypique basée sur des caractères antigéniques à une classification génétique. a. Classification sérologique Avant 1989, le genre Leptospira se divisait en 2 espèces : Leptospira interrogans regroupant toutes les souches pathogènes pour l’homme et pour l’animal et Leptospira biflexa comprenant les souches saprophytes. L. interrogans comprend plus de 230 sérovars regroupés dans plus de 25 sérogroupes (Tableau I). C’est le Test d’Agglutination Microscopique (M.A.T.) qui est utilisé pour cette classification sérologique des leptospires. Celui-ci reste encore aujourd’hui le test diagnostique de référence pour l’identification des sérovars. Tableau I : Principaux sérogroupes et quelques sérovars de L. interrogans sensu lato (Levett 2001) (en gras les sérovars testés dans la suite de l’étude). Sérogroupes Sérovars Icterohaemorrhagiae Autumnalis Pyrogenes Grippotyphosa Canicola Australis Pomona Sejroe Ballum Tarasovi Mini icterohaemorrhagiae, copenhageni, mai, zimbabwe autumnalis, fortbragg, bim, weerasinghe pyrogenes grippothyphosa, canalzonae, ratnapura canicola australis, bratislava, lora pomona sejroe, saxkoebing, hardjo ballum, aroborea tarassovi Mini, georgia, szwajizak L’importante hétérogénéité antigénique masque les relations phylogéniques existant entre tous les leptospires pathogènes, mises en évidence par hybridation d’ADN et aboutissant à une classification génomique. 9 b. Classification génomique La classification génomique ne divise plus le genre Leptospira en deux espèces mais en une douzaine de génomospécies (Tableau II). Désormais, en suivant cette classification, les souches d’un même sérogroupe peuvent appartenir à des espèces différentes. Tableau II : Génomospécies de Leptospira et distribution de quelques sérogroupes (Levett 2001) (en gras les sérogroupes ciblés dans la suite de l’étude). Génomospécies L. interrogans L. noguchiis L. santarosais L. meyeri L. wolbachii2 L. biflexa2 L. fainei L. borgpetersenii L. kirschneri L. weilii L. inadai L. parva2 L. alexanderi Sérogroupes Icterohaemorrhagiae, Canicola, Pomona, Australis, Grippotyphosa, Sejroe, Mini, Autumnalis, Pyrogenes Tarassovi, Australis, Pomona, Autumnalis, Pyrogenes Tarassovi, Mini, Grippotyphosa, Sejroe, Pomona, Pyrogenes, Autumnalis Semaranga1, Sejroe, Mini Codice1 Semarranga1, Andamana1 Hurstbridge Sejroe, Tarassovi, Mini, Pyrogenes, Australis, Ballum, Autumnalis Grippotyphosa, Autumnalis, Australis, Pomona, Canicola, Icterohaemorrhagiae Icterohaemorrhagiae, Mini, Tarassovi, Sejroe, Pyrogenes Icterohaemorrhagiae,Tarassovi, Canicola Turneria1 Mini En attendant que des techniques plus simples pour l’identification basée sur l’ADN soient validées et de pratique courante, les cliniciens et les épidémiologistes utilisent la classification sérologique. L’identification des sérovars par le MAT reste la méthode de référence. 2. Caractères bactériologiques Les leptospires sont des spirochètes très fins, spiralés, recourbés aux extrémités et nécessitant un microscope à fond noir pour leur observation (Faine et al. 1999). Leur génome se constitue de deux chromosomes circulaires l’un d’environ 4400 kb et l’autre plus petit de 350 kb (Zuerner 1991). Ce sont des bactéries Gram-, leur culture est longue et délicate et se réalise dans un milieu liquide spécifique (EMJH) à 29°C avec un pH compris entre 7,2 et 7,4 (Faine et al. 1999). Leur survie dans le milieu extérieur se fait dans les sols boueux, marécageux ou dans l’eau à l’abri des UV. Cette survie peut aller de quelques heures à quelques mois, selon la température, le pH, l’humidité, l’ensoleillement, la salinité, la richesse en matière organique, ou encore la présence de composés inhibiteurs (Crawford et al. 1971, Alexander et al. 1975, Henry and Johnson 1978). Heureusement les lepstospires sont sensibles à la plupart des agents chimiques de désinfection (formaldéhyde, chlore…) et sont sensibles à un large spectre d’antibiotiques (Levett 2001). 1 2 Ces sérogroupes contiennent des souches non pathogènes Dans ces trois espèces, seules les souches non pathogènes sont connues 10 3. Pathogénie Les mécanismes de la pathogénie de leptospiroses sont encore peu connus. On sait que les leptospires sont des pathogènes très efficaces ayant comme facteurs de virulence remarquables (1) leur très grande mobilité qui leur permet de pénétrer dans l’hôte et d’atteindre les organes cibles (Faine et al. 1999) ; (2) la présence d’enzymes comme les hémolysines utiles à leur métabolisme ferreux (Yuri et al. 1993) ; (3) l’adhérence au niveau des organes cibles qui est primordiale à la phase de localisation des leptospires et vraisemblablement à leur échappement à une réponse immune de l’hôte (Thomas and Higbie 1990). L’infection leptospirosique commence par la pénétration des leptospires au niveau de la peau ou des muqueuses (Faine et al. 1999) et leur passage dans le sang où ils se multiplient avant de se diriger vers les organes cibles (foie, reins, poumons, cœur…) tandis qu’une réponse immunitaire à médiation principalement humorale se met en place (Bharti et al. 2003). Les leptospires qui se retrouvent dans les tubules rénaux échappent à cette réponse immunitaire et peuvent être excrétés plus ou moins longtemps dans les urines. 4. Epidémiologie a. Espèces concernées Les espèces pouvant être infectées par les leptospiroses sont très nombreuses mais vraisemblablement pas encore toutes identifiées. Ces espèces, incluant l’homme peuvent être divisées en deux groupes : les réservoirs ou hôtes amplificateurs, et les espèces sensibles bien que cette séparation ne soit pas absolue. Les principales espèces réservoirs sont des petits mammifères sauvages, surtout des petits rongeurs (rat, souris, ragondins….). L’infection chez ces animaux ne s’accompagne donc d’aucun symptôme mais ils sont porteurs rénaux et excréteurs urinaire de leptospires qu’ils peuvent disséminer dans l’environnement ou parmi les espèces sensibles. Leur rôle est donc primordial dans le cycle épidémiologique de la leptospirose (Michel 2001). Parmi les espèces sensibles, considérées comme des hôtes accidentels, l’homme et le chien sont les deux espèces développant le plus fréquemment des formes cliniques graves (Michel 2001) même si ainsi que les félins même si pour ces derniers la littérature est beaucoup moins riche (Lilenbaum et al. 2002, Lilenbaum et al. 2004). Cependant, la plupart des infections humaines par leptospirose sont asymptomatiques et uniquement 10% développent jaunisse sévère (Silverman et al. 2004). Les cervidés sauvages, tous comme les animaux de rente et le cheval font partis des espèces très peu sensibles. Ils peuvent être porteurs rénaux et excréter de façon intermittente dans leurs urines sur des périodes plus ou moins courtes (André-Fontaine 2004). Les symptômes sont souvent très frustes chez ces espèces (principalement des troubles de la reproduction). Au sein des populations atteintes, il arrive que des individus meurent, ce sont des impasses épidémiologiques, tandis que d’autres peuvent excréter les leptospires et entretenir l’agent pathogène au sein du groupe. Ces individus, qui peuvent être des porteurs séronégatifs jouent alors un rôle de réservoirs « imparfait » (sensible) dans un cycle dit « bruyant » du fait de l’occurrence de manifestations cliniques (Michel 2001). Le rôle d’espèces sauvages telles que le pécari à collier (suiformes) (Mendoza et al. 2007 May) reste encore flou et doit être évaluer. Le tableau III recense les principaux sérogroupes susceptibles d’être rencontrés chez quelques espèces hôtes. 11 Tableau III : Principaux sérogroupes susceptibles d’être rencontrés chez quelques espèces hôtes. Hôtes Sérogroupes Référence Pomona, Tarassovi, Australis, Icterohaemorrhagiae Sejroae, Pomona, Australis, Icterohaemorrhagiae (Ganière et al. 2001) Petits ruminants Sejroe, Grippotyphosa (Ganière et al. 2001) Chiens Canicola Rats surmulots (Rattus norvegicus) Icterohaemorrhagiae, Ballum, Autumnalis (Michel 2001) Souris (Mus musculus) Ballum, Autumnalis (Michel 2001) Hérissons (Erinaceus europaeus) Australis, Icterohaemorragiae (Michel 2001) Ragondins (Myocastor coypus) Sejroe, Icterohaemorraghiae (Michel 2001) Mangouste (Herpestes spp) Sejroe, Icterohaemorrhagiae (Bharti et al. 2003) Chauve-souris Cynopteri, Sejroe (Bharti et al. 2003) Cervidés sauvages Sejroe, Pomona (Ayanegui-Alcerreca et al. 2007) Porcs Bovins (Ganière et al. 2001) (André-Fontaine and Ganière 1992) b. Transmission Les leptospires présents dans les tubules rénaux des hôtes sont excrétés sans l’urine lors de la miction et contaminent ainsi le milieu extérieur ou directement d’autres animaux. La transmission se fait le plus souvent de façon indirecte : les animaux entrent en contact avec un milieu souillé par les urines des animaux excréteurs urinaires. Comme il a été vu précédemment, les souches pathogènes ne peuvent pas se multiplier mais peuvent survivre hors de l’hôte si les conditions environnementales sont favorables, c'est-à-dire si le milieu est ombragé, humide (eau, boue…) et le pH légèrement alcalin (Faine et al. 1999). La contamination se fait soit par contact entre la peau ou les muqueuses avec de l’eau souillée, soit par inhalation d’eau ou d’aérosols contaminés (Levett 2001). La transmission directe se fait par contact avec les matières virulentes, à savoir les urines d’animaux porteurs rénaux, le lait, le sperme ou les sécrétions vaginales d’animaux infectés. Ce contact peut survenir, pour l’homme, lors de la manipulation de tels animaux pas des professionnels (éleveurs, vétérinaires, animaliers, personnel d’abattoir…). La transmission sexuelle existe chez des espèces comme le porc ou les bovins (Heinemann et al. 1999). La transmission verticale chez les bovins a été démontrée par l’isolement de souches du sérovar hardjo (sérogroupe Sejroe) chez des avortons mais aussi chez des fœtus normaux (Levett 2001). c. Répartition géographique et prévalence La leptospirose a une répartition mondiale et se retrouve être une des zoonoses les plus répandues dans le monde. Toutefois, les données manquent sur la morbidité et la mortalité dues à cette infection qui est souvent négligée, notamment dans les pays tropicaux (OMS 1999). La prévalence de la leptospirose varie en fonction du biotope : le climat, la présence d’eau douce, et l’habitat jouent un rôle essentiel dans le cycle épidémiologique de cette maladie. Ainsi la prévalence est plus élevée en région tropicale, les conditions d’humidité, de températures et d’hygiène étant plus favorables à la survie des leptospiroses dans l’environnement et à leur transmission aux animaux ou aux hommes (Levett 2001). De même on observe, pour une région donnée, des variations saisonnières de la prévalence des leptospires (pendant les mois pluvieux en zone tropicale) ou lors de catastrophes naturelles comme les inondations ou les cyclones (Tangkanakul et al. 2000). 12 5. Symptômes La leptospirose présente un tableau clinique très variable en fonction de l’inoculum (Truccolo et al. 2001), des espèces infectés et de l’âge de l’individu atteint. Un très grand nombre d’organes peuvent être atteints, ensemble ou séparément, dont les principaux sont : les reins, le foie, le tube digestif, les poumons, le cœurs, les yeux, les muscles du squelette et le tractus génital. Les formes aiguës sont les moins fréquentes et se caractérisent par des septicémies, des hépatites, des néphrites, des hémorragies et des atteintes céphalées (Katz et al. 2001). Ces formes aiguës concernent principalement les humains, les chiens et les jeunes animaux de rente. Dans les formes subaiguës, les signes généraux sont moins intenses et les avortements fréquents, notamment chez les animaux de rente (Ganière et al. 2001). Dans les formes chroniques, fréquentes chez les animaux de rente, des néphrites interstitielles peuvent être observées et chez certaines espèces (équins) des uvéites (André-Fontaine and Ganière 1992). L’existence de ces formes chroniques n’a pas encore été démontrée chez l’homme. L’infection par L. interrogans chez le cerf rusa est comparable à ce qui a été décrit chez le cerf élaphe (Cervus elaphus). Elle est le plus souvent due aux sérovars pomona et hardjo (Fairley et al. 1984, Ayanegui-Alcerreca et al. 2007). La plupart du temps, cette infection est subclinique toutefois des morts brutales suite à des septicémies ont été décrites chez des faons ainsi que des avortements pour les femelles (Fairley et al. 1986, Wilson et al. 1998, Ayanegui-Alcerreca et al. 2007). 6. Diagnostic et dépistage a. Tests bactériologiques L’examen direct se fait au microscope à fond noir. Malgré sa faible sensibilité et le fait que les prélèvements doivent être frais, ce test présente l’avantage d’être très précoce et rapide ce qui en fait un bon test d’orientation. La culture des leptospires est très délicate, de faible sensibilité et très longue (2 à 16 semaines). L’amplification génique par PCR est une méthode rapide de diagnostic, très sensible et précoce. Son seul inconvénient, hormis sa technicité et son coût, est de ne pas permettre l’identification des sérovars. b. Tests sérologiques La technique de référence en sérologie est le Test d’Agglutination Microscopique (MAT) qui est spécifique de sérovars. C’est pourquoi il est également le test le plus approprié en épidémiologie. Celui-ci consiste en une lecture des agglutinats formés entre les anticorps anti-lesptospires contenus dans les sera testés et les leptospires du sérovar testé. Le titre retenu est l’inverse de la dilution la plus élevée à laquelle 50% des lesptospires étaient agglutinés. L’ensemble des antigènes testés doit inclure tous les sérovars représentatifs des sérogroupes ainsi que les sérovars les plus fréquents localement pour être sûr de pouvoir détecter le sérogroupe infectant. La sensibilité du test dépend donc du panel de sérovars testés et du lieu géographique où à lieu l’infection. La MAT détecte les immunoglobulines agglutinante de type M (IgM), les plus précoces, et ceux de type G (IgG). La cinétique de ces anticorps n’est pas parfaitement connue ce qui peut compliquer l’interprétation des résultats. Chez les animaux de rente, la réponse immunitaire est entretenue par des contacts réguliers avec des leptospires. La leptospirose évolue souvent vers une phase chronique et les anticorps anti-leptospires peuvent perdurer des mois sans traduire une infection évolutive. Les titres significatifs sont de l’ordre de 100 chez les bovins. Le titre retenu pour le sérodiagnostic dans la faune sauvage se situe en général en dessous de cette valeur (Fairley et al. 1986, Bender and Hall 1996, Fischer-Tenhagen et al. 2000, Ayanegui-Alcerreca et al. 2007). 13 L’interprétation du MAT est également compliquée par les réactions croisées entre les différents sérovars d’un même sérogroupe dues à des antigènes communs entre leptospires (Levett 2001). De plus, des animaux peuvent être infectés mais avoir des titres en agglutinines anti-leptospire négligeables. Enfin outre sa technique complexe car nécessitant de maintenir vivantes des cultures de tous les sérovars que l’on veut tester, la standardisation du MAT entre laboratoires est difficile car le test repose sur la visualisation par un technicien des agglutinats. Cette lecture est donc subjective et les résultats peuvent être légèrement différents d’un laboratoire à un autre. L’ELISA est très souvent utilisée pour le diagnostic sérologique car ce test est plus simple que le MAT et plus précoce. Ses inconvénients sont de ne pas permettre l’identification des sérovars et d’être moins sensible que le MAT. 7. Traitement La prophylaxie sanitaire représente le principal volet de la lutte contre la leptospirose. Elle repose sur des interventions au niveau des sources d’infection (détection, lutte contre les réservoirs sauvages, dépistage et traitement des animaux domestiques) et des interventions au niveau des voies de contamination (information des personnes, désinfection des plaies, protections par le port de gant, bottes, masques…). La prophylaxie médicale se fait par l’utilisation d’antibiotiques ou de vaccins. L’antibioprophylaxie permet de blanchir les animaux porteurs avec par exemple deux injections de streptomycine à 14 jours d’intervalle. La vaccination des animaux de rente est largement pratiquée dans certains pays développés comme l’Australie, les Etats-Unis, le Canada et l’Italie pour l’élevage porcin et les Etat-Unis et la Nouvelle-Zélande pour l’élevage bovins. Des vaccins contenant les sérovars prédominants localement ne sont pas disponible dans les pays en voie de développement. B. La leptospirose dans la région de l’Archipel des Mascareignes 1. Ile de la Réunion A la Réunion, la leptospirose humaine est souvent endémique. Une étude réalisée en 1987 sur un échantillon représentatif de 3338 personnes a montré, avec le test MAT, une séroprévalence de 1108 ±354 /100000 habitants (Michaut 1998). L’incidence annuelle dépasse régulièrement les 10 cas pour 100.000 habitants. Les formes graves sont très fréquentes (33%) et la mortalité dépasse 4% (Agésilas et al. 2005). Les données concernant la leptospirose animale à la Réunion sont plus rare. Aucune enquête sur les espèces potentiellement réservoirs n’a jamais été réalisée même si les rongeurs (rats et souris) sont souvent incriminés, de même que le "tangue" (hérisson). On peut tout de même citer une étude réalisée sur 1582 sera de bovins prélevés à l’Ile de la Réunion de 1979 à 1981. Celle-ce a montré une séroprévalence de 29% (n=452) avec, pour les sérogroupes testés, la répartition suivante : 23% Hebdomadis, 23% Sejroe, 13% Icterohaemorrhagiae, 12% Pomona, 10% Autumnalis et 4 à 5% pour les sérogroupes Australis, Bataviae, Grippotyphosa et 0,5% pour Canicola (Debarbat 1982). 2. Madagascar La leptospirose ne semble pas poser de problèmes majeurs dans l’île bien que toutes les conditions semblent réunies pour son développement : pluviométrie, chaleur, rizières et réservoir animal très riche. La dernière étude faite à Madagascar sur la leptospirose humaine date de 2001. Elle portait sur les sérums de 74 travailleurs d’un abattoir et de 31 employés d’une conserverie de viande. Les tests MAT et ELISA ont été positifs pour un seul sérum. Les titres étaient faibles et le sérogroupe en cause était Canicola. Une enquête plus ancienne avait montré la présence d’anticorps spécifiques des sérogroupes Tarassovi, Grippotyphosa, Australis et Hebdomadis chez des sujets humains vivants dans une zone au climat semi-aride (Ralaiarijaona et al. 2001). L’étude de 2001 s’est également intéressée à l’existence d’un éventuel réservoir animal de leptospires à Madagascar. Pour cela des test PCR ont été réalisé sur des prélèvements fait sur 115 rats, 14 50 zébus et 13 porcs. Tous les résultats étaient négatifs laissant supposé que si la maladie existe, elle doit être rare (Ralaiarijaona et al. 2001). Cependant, des enquêtes antérieures ont montré des sérologies positives chez les bovins et d’autres animaux domestiques pour de nombreux sérogroupes tels que Pomona, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola, Tarassovi, Australis, Hebdomadis et Bataviae. 3. République de Maurice a. Leptospirose humaine Les résultats disponibles sont vraiment limités et correspondent aux cas diagnostiqués par les laboratoires de l’île, dont le principal est le Central Health Laboratory, de l’hôpital Victoria (Tableau VI). Concernant la leptospirose, en 2006, 6 cas ont été reportés. Cependant, cette faible détection de cas pourrait être expliquée par le fait que la maladie peut être traitée et guérie à base d’antibiotiques et peut donc souvent passer inaperçue. En effet, la leptospirose peut être souvent confondue avec d’autres maladies fébriles et même le paludisme. Tableau IV : Principales maladies humaines contagieuses et zoonotiques de la République Maurice entre 2004 et 2006 (source CSO 2007). b. Leptospirose animale dans la République de Maurice Seule une étude menée chez le macaque Mauricien en 2006 donne quelques indications sur la situation concernant la leptospirose animale à l’Ile Maurice (Bouet 2007). 14 serovars correspondant à 9 sérogroupes ont été testés : Australis Ballum Canicola Grippotyphosa Icterohaemorrhagiae (australis, bratislava, 372 munchen) (castellonis) (canicola) (grippotyphosa, vanderhageni) (copenhageni, icterohaemorrhagiae ainsi qu’un icterohaemorrhagiae isolé sur place) 15 Panama Pomona Sejroe Tarassovi (374 panama) (pomona) (hardjo) (tarassovi) Sur les 421 sera analysés (dont 94 provenant de singes de capture, prises de sang faites en été 2005), 27 étaient positifs pour au moins un sérovar avec un titre supérieure à 100 (6,4%). La répartition de la séroprévalence par sérogroupe était, sur les 27 MAT positifs : 51,6% Grippothyphosa, 29% Panama, 6,5% Ballum, 6,5% Australis et 6,5% Icterohaemorrhagiae. Pour les singes de captures, 67% des infections étaient dues à Panama et 33% à Grippothyphosa. II. L’élevage du cerf rusa (Cervus timorensis russa) à l’Ile Maurice A. Rappel sur les différentes filières Le secteur agricole ne représente que 5,5% du PIB loin derrière celui des services (72,5%) directement lié au tourisme et le secteur industriel (22%) (source CSO 2007). En 2006, la culture de la canne à sucre génère à elle seule, avec presque 5.000 millions de roupies mauriciennes, environ 50% des richesses du secteur agricole, l’élevage lui en générant environ 1.300 millions (~ 11%) (source CSO 2007). Le nombre de têtes de bétails par espèces domestiques élevées et abattues ainsi que le tonnage correspondant pour 2006 sont présentés dans le tableau V. Tableau V : Statistiques d’élevage et d’abattage des filières animales de l’Ile Maurice en 2006 (source CSO 2007). Espèce Nb de têtes élevées Nb de têtes abattues Bovin 6.934 10.999 Caprin 23.734 7.369 Ovin 1.264 224 Porcin 15.550 10.479 681,2 / 36.000 13.000 400 Volaille Cerf1rusa (estimé) / 70.000 Tonnage abattu 2.187,0 (2.087,0 importé) 96,3 (67,0 importé) 3,1 Concernant la filière bovine, le cheptel élevé à l’Ile Maurice représente une faible part des bovins tués à l’abattoir de l’île (Port-Louis). En effet, la production de viande bovine repose sur l’engraissement et l’abattage de jeunes bovins de boucheries importés principalement du Kenya et d’Afrique du Sud ainsi que l’importation de viande fraîche, viande désossée et carcasses ou demi carcasse principalement d’Australie, d’Inde, d’Afrique du Sud et d’Argentine, (The Mauritius Chamber of Commerce and Industry, 2006 http://www.mcci.org/ITTrade.aspx). La filière cerf rusa se place au premier rang au nombre de têtes de bétail et au second rang pour le tonnage abattu sur l’île derrière la filière volaille et lorsque l’on exclu la viande bovine importée. La viande de cerf représente la seconde viande la plus consommée après la viande bovine. 1 Aucunes données sur la filière cerf ne figurent dans les statistiques officielles. Ces chiffres sont une compilation des données fournit par la Mauritius Meat Producers Association (MMPA) et la Mauritius Deer Farming Co-Operative Society Ltd (MDFCS). 16 B. La filière cerf rusa 1. Historique Le cerf rusa (Cervus timorensis russa), originaire de Java, fut introduit à l’Ile Maurice le 8 novembre 1639 par les Hollandais. Après le lâché de quelques individus, l’espèce proliféra et colonisa rapidement l’ensemble de l’île. Avec l’extension de la canne à sucre, les hardes de cerfs furent repoussées sur les terres marginales, impropres à toutes cultures. A partir de 1950, les populations sauvages furent graduellement clôturées et isolées formant les "chassés", élevages extensifs. Les rares cerfs sauvages restant qui pourraient être recensés sont certainement pour la majorité des animaux ayant sauté des clôtures. 2. Rappels zoologiques Le cerf rusa (Cervus timorensis russa), originaire de Java, est un cervidé tropical se caractérisant par une période de reproduction (rut) désaisonnée, étalée sur plusieurs mois (Juillet à SeptembreOctobre). Son format est intermédiaire entre celui du daim (Dama dama) et celui du cerf rouge (Cervus Elaphus), la biche adulte pèse 50 à 60 kg et le mâle de 90 à 120 kg. L’espèce est considérée comme étant prolifique avec un taux de fertilité supérieur à 90% et un taux de sevrage de 80 à 85%. Le poids moyen de faon à la naissance (Avril à Juin) est de 3,5-4 kg et atteint une vingtaine de kilos à 4 mois, époque où s’effectue le sevrage des jeunes animaux (Septembre à Novembre). 3. Importance culturelle et sociologique L’importance culturelle du cerf rusa à Maurice est forte puisqu’il figure ainsi sur le blason de la République de Maurice au même titre que le dodo (Raphus cucullatus), espèce endémique disparue vers 1680 (Figure 1). Ce gros oiseau, marchant mal et incapable de voler à cause de sa lourdeur, fut le gibier le plus facile à chasser et fut vite anéanti. Les Hollandais en tuèrent la majorité pour consommer leur chair. Figure 1 : Blason de la République de Maurice (http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/a6/Coa_Mauritius-large.svg). Traditionnellement produite par les chassés, la viande de cerf est devenue au fil des ans un produit populaire apprécié par tous les Mauriciens, quelque soit leur appartenance ethnique ou religieuse. A l’époque de la chasse, l’étalage des bouchers offre ainsi un large choix de pièces de découpe vendues en peau. La participation aux parties de chasse est un passe-temps très prisé où se tissent les relations professionnelles et sociales. 4. Importance économique Cf paragraphe I.B.1. et Tableau IV. 5. Organisation de la filière L’organisation de la filière cerf rusa à l’Ile Maurice s’articule autour de ses deux pôle de production : le chassé, élevage extensif traditionnel et saisonnier, et l’élevage intensif produisant de la venaison toute l’année. On peut distinguer cependant deux secteurs, un public et un privé associatif. 17 a. Le secteur public Celui-ci se compose : Des administrations agricoles qui sont le Ministère de l’Agro-Industrie et des Pêches ainsi que son département des Services Vétérinaires et l’Agriculture Research and Exension Unit (AREU). Aucune directive particulière en matière de politique agricole n’existe concernant l’élevage du cerf rusa. Les Services Vétérinaires ont pour vocation (1) la surveillance sanitaire des troupeaux (épidémiosurveillance passive clinique), (2) la qualité des produits carnés et (3) le contrôle des importations avec la quarantaine. L’AREU est un service de recherche-développement qui travaille pour la filière cerf rusa sur l’amélioration de l’alimentation. De l’abattoir de Port-Louis sous la responsabilité de la Mauritius Meat Authority rattaché au Ministère de l’Agro-Industrie et des Pêches. Sa conception est ancienne, voir vétuste. L’abattage des porcins, petits ruminants et bovins s’effectue sur trois files distinctes. La main d’œuvre est relativement nombreuse mais peu qualifiée pour ce qui est des règles d’hygiène. Jusqu’à ce jour, les cerfs rusa provenant des élevages intensifs ne peuvent pas être abattu à l’abattoir. Ils y arrivent déjà mort pour y être simplement découpés et inspectés. L’Université de Maurice - Faculté d’Agriculture. Son rôle est encore mineur dans la filière. b. Le secteur privé et associatif Les associations professionnelles : - La Mauritius Meat Producers Association (MMPA) qui comptait au 31 mars 2007 43 membres dont 35 éleveurs de cerfs rusa. - La Mauritius Deer Farming Co-operative Society Ltd (MDFCS), fondé en 1992 à l’initiative de la Chambre d’Agriculture. Elle regroupe des élevages de cerfs rusa intensifs (encore 7 actifs à ce jour). Elle a pour but la promotion de la venaison et de sa vente tout au long de l’année. Les membres ont en général un "feed-lot" et un chassé qui sont considérés comme complémentaire et non concurrents. - Food and Agricultural Research Concil (FARC) qui doit coordonner les projets de recherche et développement. - La Chambre d’Agriculture de Maurice Les transformateurs : Outre l’abattoir qui ne découpe en fait que les 40t de carcasses de cerfs produites par les élevages intensifs d’Octobre à Mai, ce sont les bouchers qui travaillent directement avec les propriétaires de chassés pendant la période de chasse de Juin à Septembre et qui écoulent sur le marché local la majorité des 360t de carcasses de cerfs abattus. Les élevages : Il est difficile de dire précisément combien de chassés il y a sur l’île. En effet, aucun recensement n’est tenu à jour par les autorités officielles et chaque année, des petits chassés disparaissent alors que d’autres se créent. - Localisation : les chassés se localisent essentiellement dans ce qui reste de zones boisées sur l’île (Carte 1). Les élevages intensifs sont situés sur la côte Ouest et Sud Ouest de l’île. Un seul se trouve sur la côte Est. - Les élevage intensifs : Les premiers essais d’intensification des méthodes d’élevage furent faits dès 1976 à Case Noyale. Les 8 élevages de cervidés intensifs actuels exploitent environ 10.000 têtes sur 1.000 hectares et fournissent au marché local 40 tonnes de venaison (10% de la production de venaison) et 400 animaux vendus en vivants directement aux chassés. Les cerfs sont abattus sur place dans un couloir de contention et égorgés. Ils sont ensuite transportés à l’abattoir de Port Louis où ils sont éviscérés, découpés et inspectés. 18 - Les élevages extensifs : Ils s’étendent sur environ 23.800 hectares, exploitent environ 60.000 têtes (85% du cheptel cervidé) et fournissent de Juin à Septembre 400 tonnes de venaison, soit 90% de la production nationale de venaison. Les cerfs sont tirés lors d’une partie de chasse pendant la saison de chasse. A la fin de la partie, ils sont tous apportés au lieu de partage du chassé où ils sont éviscérés et découpés. Le bâtiment est en général conçu pour permettre la suspension des animaux par les postérieurs ainsi que le principe de marche en avant. L’eau doit être disponible en abondance et le bâtiment hermétique aux insectes. Carte 1 : Représentation des zones boisées de l’Ile Maurice (Page and d'Argent 1997). 6. Exportations et réglementation européenne a. Rappel Avant 1992, le principal pays importateur de viande de cerf en provenance de l’Ile Maurice était l’Ile de la Réunion. Ainsi, de 1983 à 1993, la MDFCS a exporté sur la Réunion 4.741 carcasses pour un volume de 144 tonnes (25 tonnes en 1992) et une valeur d’environ 15 millions de Roupies Mauriciennes soit environ 350.000€. Cependant, avec la signature du traité de Maastricht le 7 février 1992 et la création de l’Union Européenne, l’Ile de la Réunion entrait au marché commun de l’UE. Les conditions de production et d’exportation de la viande cervine mauricienne ne répondant plus aux normes européennes, les exportations vers l’île de la Réunion se sont arrêtées. b. Réglementation européenne pour l’importation de viandes fraîches de gibier vers l’Union Européenne (UE) L’Union Européenne définit comme "gibier" les mammifères terrestres et les oiseaux, soit sauvages soit d'élevage, qui ne sont normalement pas considérés comme des animaux domestiques (les animaux suivants sont spécifiquement exclus : bovins, porcins domestiques, ovins et caprins, solipèdes domestiques, volailles domestiques, dindes, perdrix, canards et oies). Le cerf rusa s’inscrit donc dans cette définition. 19 Les 7 règles suivantes doivent être respectées pour pouvoir importer des viandes fraîches de cerf rusa issu de chassé ou d’élevage intensif dans la l’Union Européenne (le texte en bleu souligné permet correspondent à des liens Internet accessibles directement en faisant CTRL et en cliquant) : 1. Les viandes fraîches de gibier doivent répondre aux conditions de police sanitaire, aux règles de base, ainsi qu’aux conditions de santé animale et de santé publique visées dans les directives : - Pour les viandes de gibier d'élevage : directive 92/118/CEE du Conseil - Pour les viandes de gibier sauvage : directive 92/45/CE du Conseil . . Cependant, la directive 2002/99/CE du Conseil définit la base légale de toutes les règles de police sanitaire régissant la production, la transformation, la distribution et l'introduction de produits d'origine animale destinés à la consommation par l'homme. Les grands principes de cette directive sont résumés ci-dessous : 2. Avant que la République de Maurice soit autorisée à exporter des viandes fraîches vers l'UE, l'Office vétérinaire et alimentaire (OAV) de la Commission exécute une mission , afin de s'assurer que toutes les conditions visées de la législation communautaire sont dûment remplies. 3. Sur la base des principes arrêtés dans la législation communautaire et en fonction des résultats de la mission de l'OAV, la République de Maurice pourra ensuite être ajoutée à la liste des pays tiers autorisés à exporter des viandes fraîches de gibier puisqu’elle n’y figure pas pour le moment: - pour les viandes de gibier d'élevage à poils, l'annexe I, chapitre 11, de la directive . 92/118/CE les pays tiers sont énumérés dans la décision 79/542/CEE du Conseil - pour les viandes de gibier sauvage, les pays tiers sont énumérés dans la décision 94/86/CE de la Commission . 4. Lorsqu'un pays tiers ou une partie de celui-ci est repris dans la décision correspondante du Conseil, il est, en principe, autorisé à exporter vers l'UE. Mais il reste d'autres démarches à entreprendre avant de pouvoir exporter des viandes fraîches de gibier. Ainsi doit-on encore procéder à une évaluation de la situation sanitaire spécifique. Des conditions particulières peuvent s'imposer, afin de mitiger les risques potentiels de maladie. Ces conditions sont fixées et se reflètent dans les conditions arrêtées dans les certificats sanitaires qui doivent accompagner toutes les importations de viandes fraîches de gibier entrant sur le territoire de l'UE. Les certificats sanitaires définissant les conditions sanitaires pour l’importation dans l’UE de viandes fraîches issue de gibier d’élevage (RUF) et de gibier sauvage (RUW) se trouvent dans la décision 79/542/CEE du Conseil citée précédemment (pages 72 à 77 de ladite décision). Les maladies concernées sont la peste bovine, la fièvre aphteuse, la brucellose ainsi que toutes maladies transmissibles à l’homme ou aux animaux et dont le diagnostic peut être effectué par des inspections vétérinaires régulières. 5. Les viandes fraîches entrant dans la Communauté sont inspectées à un poste d'inspection frontalier (PIF) (ces PIF sont énumérés dans la décision 2001/881/CE de la Commission du 7 décembre 2001) où des vétérinaires officiels des États membres vérifient qu'elles répondent à toutes les exigences visées dans la législation européenne. Le PIF de la Réunion se situe à Saint-Denis. 6. Afin de pouvoir exporter des viandes fraîches, les pays tiers doivent également se conformer à certaines exigences de police sanitaire. Ainsi, par exemple, un pays doit disposer d'un plan de "résidus" approuvé et doit appliquer certaines conditions en rapport avec l' ESB. Les exigences de police sanitaire sont détaillées [Ici]. 7. Les exigences de bien-être animal à l'abattage visées dans la législation communautaire doivent, par ailleurs, aussi être satisfaites. Ces exigences sont détaillées [Ici] 20 C. Statut sanitaire officiel de la République de Maurice L’Ile Maurice est inscrite sur la liste des pays officiellement reconnu indemne par l’OIE de Fièvre Aphteuse1 et de Peste Bovine2. Cependant, bien que supposée indemne des autres principales maladies pouvant entraver les échanges commerciaux, aucune information sanitaire officielle n’a été reportée ces dernières années (Tableau VI). Aucun bilan sanitaire de la population cervine n’a été effectué depuis les années 90. Tableau VI : Informations officielles sur la situation sanitaire de la République de Maurice en 2007 concernant les principales maladies pouvant affecter les bovins, suidés, ovins et caprins et potentiellement transmissibles aux cervidés. (source OIE, http://www.oie.int/wahid-prod/public.php?page=disease_timelines&disease_id=1, http://www.oie.int/hs2/zi_pays.asp?c_pays=132&annee=2004 ) Ovins Caprins Porcins Maladies Fièvre Aphteuse1 Stomatite vésiculeuse Fièvre Catarrhale du mouton Peste des Petits Ruminants Fièvre de la Vallée du Rift Peste Bovine2 PPCB ESB Bovins Dermatose nodulaire contagieuse Tuberculose Bovine Brucellose Bovine Dermatophilose Anaplasmose bovine Babésiose bovine Theileriose Multiespèces Cowdriose Leptospirose Paratuberculose 1 2 Statut Dernier cas reporté Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 2005 Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 2005 Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 1996 Maladie jamais signalée (au 1er semestre 2005) Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 2005 Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 2005 Maladie jamais signalée (au 1er semestre 2005) Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 2005 Maladie non signalée (au 1er semestre 2005) Maladie non signalée (au 1er semestre 2005) Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 1996 Maladie non signalée (au 1er semestre 2005) Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 2001 Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 1996 Maladie non signalée (au 1er semestre 2005) Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 1996 Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 1996 Pas d’informations communiquées à l’OIE depuis 1996 Source OIE, http://www.oie.int/fr/info/fr_fmd.htm#changement (page mise à jour le 9 août 2007). Source OIE, http://www.oie.int/fr/info/fr_peste.htm#free (page mise à jour le 22 août 2007). 21 / / 1996 ? / / / / / 2004 2000 1986 2004 2001 1994 2001 1996 1996 1995 Deuxième partie : Enquête de séroprévalence de la leptospirose dans la population extensive de cerfs rusa (Cervus timorensis russa) de l’Ile Maurice 22 I. Objectifs A. Objectifs généraux L’objectif du stage était d’établir un bilan sanitaire de la population de cerfs en captivité à l’Ile Maurice dans le but de rétablir les exportations de viande de cerf vers des pays de l’UE et en particulier vers l’Ile de la Réunion. Cela impliquait de : En suivant une démarche qualitative, situer la prévalence des maladies suivantes: Tuberculose bovine, Paratuberculose, Brucellose, Leptospirose, Fièvre Catarrhale du mouton, Virus de la Maladie Hémorragique Epizootique du cerf (EHDV), Cowdriose, Babésiose bovine et Anaplasmose bovine dans le cheptel cervin de l’Ile Maurice. Faire un point sur les espèces de tiques infestant les cerfs ainsi que leur répartition géographique. Proposer un programme sanitaire dans le but de relancer les exportations de viande de cerf. B. Objectifs secondaires Au moment de la rédaction, seul les résultats des analyses pour la leptospirose étaient connus. La suite du document se contentera donc de présenter une estimation de la prévalence d’agglutinines anti-leptospire dans la population extensive de cerfs rusa de l’Ile Maurice. Celle-ci sera détaillée par sexe, âge et localisation géographique ainsi que par sérovars identifiés. Une analyse statistique concernant des facteurs pouvant influencer la séroprévalence de la leptospirose tels que l’âge, le sexe, la densité, la localisation géographique, l’influence climatique ou l’altitude a été également effectuée. II. Matériel et méthode A. Zone d’étude 1. Données démographiques Le Tableau VII présente quelques données démographiques générales de la République de Maurice. Tableau VII : Données démographiques de la République de Maurice (Central Statistic Office (CSO) 2007). Population (habitants, 2007) Superficie (km²) Densité (hab/km²) Taux d’urbanisation (%, 2005) Espérance de vie (années, 2004) Taux de mortalité (‰, 2006) Taux de mortalité infantile (‰, 2006) Taux de croissance annuel (%, 2006) PIB/habitant ($US, 2003) Taux de chômage (%, 2004) 1 260 696 2040 609,45 43,8 Femmes : 75,8 Hommes : 69,0 7,3 14,1 3,4 estimé 11280 8,5 Textiles, vêtements, sucre, produits alimentaires, animaux vivants Indo-Mauriciens (68%), Créoles (27%), Sino-Mauriciens (3%), Franco-Mauriciens (2%) Anglais (Français et créole parlés nationalement) Roupie Mauricienne (1€=43,115) Principales exportations Groupes ethniques Langue officielle Monnaie 23 2. Géographie La République de Maurice est un état de l’Archipel des Mascareignes situé dans l’Océan Indien. Elle se situe au Sud-Est de l’Afrique à environ 900 kilomètres à l’Est de Madagascar est à environ 200 kilomètres au Nord-Est de l’Ile de la Réunion (Carte 2). L’état se compose d’une île principale, l’Ile Maurice, (91% de la surface de l’état avec 1865 km²) et de petites îles dispatchées dans le Sud-Ouest de l’Océan Indien (Rodrigues, Agalegas, St Brandon, Tromelin et Chagos). Les coordonnées géographiques de l’Ile Maurice sont (57°35’E ; 20°15’S). Carte 2 : République de Maurice (http://www.intnet.mu/iels/mauritius_map.gif). Les 9 districts administratifs qui divisent l’Ile Maurice sont présentés dans le Tableau VIII et représentés sur la Carte 3. Tableau VIII : Divisions administratives par district de l’Ile Maurice. Nom du District Black River Flacq Grand Port Moka Pamplemousses Plaines Wilhems Port Louis Rivière du Rempart Savanne Ville Principale Tamarin Centre de Flacq Mahebourg Moka Pamplemousses Rose Hill Port Louis Poudre d'Or Souillac N° 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Carte 3 : Représentation de la division administrative par district de l’Ile Maurice (http ://fixedreference.org/2006-Wikipedia-CDSelection/images/12/1243.png). 24 3. Relief La formation de l’archipel des Mascareignes résulte d’éruptions volcanique sous-marines qui se sont produites il y a plusieurs millions d’années. L’Ile Maurice s’est formée autour d’un plateau central si situant entre 400 et 600m d’altitude (Carte 4). Le point le plus élevé, le Piton de la Petite Rivière Noire, se situe dans le Sud-Ouest de l’île et culmine à 828m d’atitude. Carte 4 : Relief de l’Ile Maurice (http://www.seeyhoo.com/images/imagearticle/relief.jpg). 4. Climat Proche du Tropique du Capricorne, l’Ile Maurice bénéficie d’un climat subtropical avec des températures moyennes élevées toute l’année et une pluviométrie relativement importante. Deux saisons se succèdent chaque année, une saison estivale de Novembre à Mai avec une température moyenne de 30°C et un hiver de Juin à Octobre avec des variations allant de 17°C la nuit à 24°C en mi-journée (Tableau IX). La Carte 5 illustre la répartition géographique des températures relevée habituellement au mois de juillet. La température de l’Océan Indien sur les côtes mauriciennes varie selon la saison de 23 à 28°C. Tableau IX : Températures moyennes mensuelles relevées dans les différentes régions de l’Ile Maurice pour l’année 2006 (source CSO 2007). Nord Sud Est Ouest Centre Jan Fev Mar Avr Mai Jui Juil Aou Sep Oct Nov Dec 27,3 26,5 25,5 26,2 24,3 27,3 26,6 25,8 26,6 24,5 27,3 26,6 25,6 26,6 24,4 26,5 25,5 24,8 25,9 23,8 24,7 23,2 22,8 23,8 21,8 23,5 22,2 22,2 23,1 20,5 22,2 21,0 20,5 21,7 19,0 21,9 20,6 20,3 21,3 18,6 73,0 21,8 21,0 22,2 19,6 24,1 23,2 21,8 23,2 20,5 26,0 25,3 23,9 25,0 22,9 27,9 27,0 25,4 27,0 24,4 Carte 5 : Représentation géographique des températures relevées habituellement à l’Ile Maurice au mois de Juillet (http://www.seeyhoo.com/images/imagearticle/tempjuill.jpg). 25 L’Ile Maurice n’est pas soumise à un climat de mousson mais à un régime de fortes perturbations tropicales pendant la période dite "cyclonique" qui survient entre Décembre et fin Avril. Si les cyclones n’abordent directement l’île qu’une fois tous les 10 ans, ils leur arrivent fréquemment de venir perturber la météo avec leur cortèges de vents violents et de pluies torrentielles. C’est une île tropicale globalement humide mais dont les différentes régions sont soumises à des précipitations disparates. Le climat est contrasté selon les côtes : l’Est est plus venté (Alizés du SudEst) et plus humide que l’Ouest. La pluviométrie est très variable et est fonction du relief de la région concernée (Carte 6). Ainsi sur une même durée à un même moment, des précipitations cinq fois plus élevées sur le plateau central que sur la côte Ouest peuvent être enregistrées. Carte 6 : Représentation géographique de la pluviométrie moyenne à l’Ile Maurice (http://www.seeyhoo.com/images/imagearticle/pluviometrie.jpg). 5. Faune La faune mauricienne peut être classée en cinq catégories : océanique, endémiques mortes, endémiques vivantes, exotiques et indigènes. L’auteur s’intéressera surtout aux trois dernières catégories qui regroupent les espèces de mammifères susceptibles d’être des réservoirs de maladies animales transmissibles au cerf. Les autres espèces endémiques vivantes, exotiques ou indigènes de mammifères que l’on peut trouver sur l’Ile Maurice sont : le cerf rusa (Cervus timorensis russa) introduit par les Hollandais en 1639. Sa viande est très prisée. le cochon marron est un cochon sauvage introduit d’Indonésie probablement en même temps que le cerf. C’est la seconde cible de chasse après le cerf. le macaque cynomolgus (Macaca fascicularis), vraisemblablement importé d’Indonésie par les hollandais (Sussman and Tattersall 1980, Berthelot 1992 Octobre). le "tangue" ou "tendrak" (Tenrec ecaudatus), sorte de hérisson introduit de Madagascar au 17ème siècle par les Français et très apprécié pour sa viande dans les Mascareignes. la chauve-souris roussette (Pteropus niger), indigène, frugivore qui se retrouve principalement dans les régions boisées de l’île et donc souvent en bordure des champs de cannes à sucre. les chauves-souris insectivores, chauve-souris banane (Taphozous mauritianus) et la chauve-souris Herman (Tadarida acetabulosus), surtout présentes sur la côte ouest. les rongeurs, très nombreux notamment le rat noir (Rattus rattus) qui habite les régions urbaines mais surtout la forêt, la souris (Mus musculus) près des habitations et dans les champs et le rat musqué (Suncus murinus). la mangouste, introduite pour la première fois à l'Ile Maurice au 19e siècle cependant les colons la détruisirent en voyant son appétit insatiable pour la volaille et le gibier à plume. Toutefois, après une épidémie de peste en 1899, les autorités gouvernementales décidèrent de faire venir de l'Inde un certain nombre de mangoustes mâles pour détruire les rats, porteurs de la maladie….. Hélas, parmi les dix-neuf individus relâchés en 1900, il y avait trois femelles. Les envahisseurs, au lieu de manger les rats se jetèrent sur le gibier à plume et la volaille et se multiplièrent à un tel point qu'en 1905 le Gouvernement dû offrir une prime pour la présentation d'une queue de mangouste tuée (Staub 1993). 26 B. Population d’étude Au départ, la population ciblée était l’ensemble de la population de cerfs rusa de l’île Maurice. Cependant, pour des raisons techniques, il a été décidé pour ce stage de n’effectuer des prélèvements que sur la population extensive résidant dans les chassés. En effet, Mai à Octobre correspond à la période de mise-bas puis à celle du rut. Les responsables des élevages intensifs ne préfèrent donc pas manipuler le troupeau reproducteur (femelles gestantes ou avec leur nouveau-né et mâles en rut) au risque de stresser les animaux et de provoquer des pertes (avortements, faons écrasés, bagarre de mâles adultes). La population de cerfs rusa extensive est estimée à environ 60.000 individus répartis dans plus de 50 chassés couvrant une surface d’environ 24.000 hectares. Ceux-ci se concentrent surtout dans le quart Sud-Ouest de l’île qui correspond à la partie la plus boisée. La taille des cheptels varie de quelques dizaines d’individus à plusieurs milliers. Les individus ne sont généralement pas identifiés individuellement. Le sexe ratio est très variable en fonction des chassés car il est fonction de nombre de trophées à proposer aux chasseurs. Il peut aller de 1 à 4 femelles pour 1 mâle (Le Bel 1997). Les cerfs sont chassés du 1er Juin au 30 Septembre lors de parties se déroulant principalement le week-end mais aussi les mardi, jeudi et parfois le vendredi. Le nombre de cerfs abattus par partie varie selon le chassé d’une dizaine d’individus à plus de 150 ainsi que selon le quota défini au préalable. Ce quota évolue tout au long de la saison de chasse. En effet, le début de la saison de chasse correspond à la fin de la période de mise-bas. Les animaux tirés en majorité en Juin et Juillet sont des cerfs de 11 à 15 mois ainsi quelques mâles de 2 à 4 ans et trophés : mâles de plus de 5 ou 6 ans en général. Les biches primipares et multipares commencent à être incluses dans le quota des parties de chasse à partir de la fin du mois de Juillet lorsque les faons sont assez agés pour être sevrés même précocement. Aucune base de données précise concernant le nombre d’individus, leur âge et leur sexe et même de nombre d’élevage n’existe. Un premier travail a donc consisté à créer cette base de données en rassemblant des informations collectées auprès du département des Services Vétérinaires, de la MMPA et la MDFCS ainsi qu’auprès des éleveurs eux-mêmes lorsque cela était possible. Une liste de 42959 animaux répartis dans 52 élevages différents (dont 36 membres de la MMPA) a été créée. Seule l’information sur le sexe a pu être renseignée sauf pour 5140 individus. C. Plan d’échantillonnage Le plan d’échantillonnage a été basé sur une démarche qualitative. L’Ile Maurice étant supposée indemne de certaines maladies recherchées (comme la tuberculose) et n’ayant que peu d’hypothèses de prévalence sur les autres (seulement pour la leptospirose, 9,6% de macaques mauriciens de capture positifs, (Bouet 2007) le taux de prévalence limite retenu pour un risque α de 5% a été de 1%. La taille de l’échantillon a pu ainsi être déterminée à 299 individus (Toma et al. 2006). Ce nombre a été majoré en considérant que les tests diagnostiques utilisés n’auraient pas une sensibilité de 100%. Une sensibilité moyenne de 80% a été retenue. Au final, 374 individus ont été tirés au sort dans la liste précédemment créée, de façon aléatoire et sans remise grâce à une fonction du logiciel Excel®. Le nombre de chassés à échantillonner a été déterminé ainsi que le nombre d’animaux à prélever par sexe lorsque l’information était disponible. Un calendrier d’échantillonnage a pu être élaboré ce qui correspondait à 35 visites de chassés pour effectuer de 1 à 90 prélèvements par visite. Sur les 374 animaux à prélever, 125 mâles avaient été tirés au sort ainsi que 209 femelles (ratio de 1 mâle pour 1,7 femelle). 40 animaux devaient être prélevés en choisissant le sexe au hasard. D. Collecte des données 1. Procédure de prélèvement et de conditionnement Un total de 393 sera a été récolté provenant de 28 élevages différents entre le 1er Juin et le 29 Juillet 2007. Le calendrier de chasse ne permettait pas d’effectuer toutes les visites d’élevages nécessaires afin de respecter le plan d’échantillonnage. 27 Des ajustements ont été effectués pour arriver au-delà du nombre prévu, incluant une marge de sécurité compte tenu de la qualité des sera récoltés. En effet, les prélèvements étaient effectués à la fin de la partie de chasse dans le lieu de partage du chassé, lorsque les animaux étaient éviscérés par les bouchers. Le sang qui s’écoulait de la cavité thoracique était alors récolté à l’aide d’une seringue de 20 ml stérile, puis versé dans des tubes secs en verre de 10 ml, stérilisés selon la procédure décrite dans l’Annexe I (p 47). De plus, compte tenu de la proportion très élevée de cerfs mâle de 1 an tirés en début de saison de chasse par rapport aux autre catégories et afin de ne pas arriver à un échantillon final trop biaisé, les prélèvements se portaient préférentiellement sur les femelles ainsi que sur les animaux adultes (principalement les cerfs de plus de 5 ans) lorsqu’il y en avait de tirés. Cela avait aussi pour but d’augmenter les chances de détecter des taux d’anticorps. Les tubes étaient ensuite centrifugés à 3500 tour/minute pendant 15 minutes. Les sera obtenus étaient conditionnés dans des fioles en verre de 3 ml stérilisés au préalable puis bouchonnés par les capsules en caoutchouc elles-mêmes serties par une bague en alliage métallique. Les sera jugés de mauvaise qualité étaient rejetés. Chaque fiole était identifiée par le numéro d’échantillonnage de l’animal. L’ensemble des fioles d’un même chassé était regroupé dans un sachet plastique dans lequel était placé une étiquette indiquant les principales informations relatives aux échantillons (nom de la personne ayant effectué les prélèvements, la date d’échantillonnage, le type d’identification des échantillons ainsi que le nombre, le numéro manquant s’il y avait lieu, le nom de l’élevage, le lieu et le pays ainsi que le pays d’expédition pour l’analyse de laboratoire). Le tout était placé ensuite sous régime du froid dans un congélateur réglé à -20°C. 2. Nombre d’échantillons testés et données sur l’âge, le sexe, la localisation géographique, l’altitude, l’influence climatique et la densité Un total de 373 sera fut expédié sous régime du froid le 31 Juillet 2007 à Onderstepoort en Afrique du Sud au laboratoire de Bactériologie de l’Onderstepoort Veterinary Institute qui les a reçu le 3 Août. Seuls 320 sera choisis au hasard, correspondant à 26 chassés différents, ont été analysés pour des raisons budgétaires. La distribution géographique des 26 chassés pour lesquels des échantillons ont été récoltés est illustrée par la carte 7. A chaque échantillon correspondait des données concernant l’âge, le sexe, la densité, la localisation géographique, l’influence climatique et l’altitude : L’âge et le sexe de l’animal étaient renseignés lors du prélèvement. L’information localisation géographique renseigne si le chassé est situé sur la côte ou plutôt sur les hauteurs de l’île. L’altitude était prise à l’aide d’un GPS (Global Positioning System) au niveau du lieu de partage du chassé. Pour quelques élevages cependant elle ne témoigne pas de l’altitude réelle à laquelle les animaux évoluent. Concernant l’influence du climat, 3 zones ont été distinguées : - A : « chaud et sec » pour 3 chassés de l’Ouest et 1 chassé de l’Est de l’île (n=139) - B : « froid et humide » pour 17 chassés principalement situés sur le plateau central (n=119) - C : «chaud et humide » pour 4 chassés situés au Sud-Ouest de l’île (n=62) Ce distinguo se base sur les informations concernant les températures moyennes ainsi que la pluviométrie moyenne à l’île Maurice illustrées par les cartes 5 et 6 présentées précédemment. Ces informations ont été croisées par les dires des responsables de chassés. Cette classification reste néanmoins assez subjective. La carte 7 illustre la répartition géographique des 26 chassés pour lesquels des sera ont été testés ainsi que leur appartenance à la catégorie A, B, ou C du climat. La densité était calculée sur la base des informations concernant le nombre d’animaux dans le chassé ainsi que la surface du chassé, demandées au responsable de la partie de chasse. L’âge et le sexe de l’animal étaient renseignés lors du prélèvement. Le Tableau X reprend les informations sur nombre d’animaux, la surface et la densité par chassé ainsi que sa classification pour l’influence climatique. 28 Carte 7 : Distribution spatiale des 26 chassés de cerfs rusa ayant donné lieu à au moins un résultat sérologique pour la leptospirose, ainsi que leur appartenance à la classification de l’influence climatique : A (périmètre jaune), B (périmètre vert) ou C (périmètre rouge) (source fond de carte http://www.colonialvoyage.com/viaggi/maumap.jpg) 29 Tableau X : Nombre d’animaux, surface, densité et classification pour l’influence climatique pour les chassés de cerfs rusa de l’Ile Maurice Nombre d’animaux Surface (ha) Densité Codage climat 300 3000 300 275 1650 260 1100 1400 225 1200 200 300 300 4500 935 500 1100 300 350 3000 1200 175 400 300 1100 440 450,0 1500,0 126,6 84,4 538,2 200,0 136,0 2110,0 380,0 250,0 160,4 400,0 126,6 7000,0 295,5 3337,7 1266,2 126,6 126,6 350,0 400,0 118,2 120,0 300,0 422,1 348,0 0,7 2,0 2,4 3,3 3,1 1,3 8,1 0,7 0,3 4,8 1,2 0,8 2,4 0,6 3,2 1,5 0,9 2,4 2,8 8,6 3,0 1,5 3,3 1,0 2,6 1,3 C C B B B B A B B B B C A A B B B B C A A B B B B B Total 24.810 20.673,1 / / Moyenne 954 795,1 2.4 / Chassés I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII XIV XV XVI XVII XVIII XIX XX XXI XXII XXIII XXIV XXV XXVI E. Mesures de laboratoire Les 320 sera testés on été soumis au test de référence d’agglutination microscopique (MAT) selon la méthode BS/ME 002 accréditée par The South African Accreditation System. Ces tests ont été réalisés au laboratoire de Bactériologie de l’Onderstepoort Veterinary Institute à Onderstepoort en Afrique du Sud en septembre 2007. Ces tests ont été réalisés avec des souches vivantes entretenues au laboratoire. Les 8 sérovars testés qui ont été employés appartiennent à 8 sérogroupes différents. Ils sont rapportés dans le Tableau XI. Le titre seuil de positivité a été fixé à 100. Ces sérovars appartiennent à ceux fréquemment isolés chez les cerfs ainsi qu’en région tropicale. Tableau XI : Sérovars testés pour évaluer la leptospirose dans la populations extensive de cerf rusa de l’Ile Maurice Sérogroupes Sérovars (abbréviation) Australis Canicola Grippotyphosa Icterohaemorragiae Mini Pomona Sejroe Tarassovi Bratislava Canicola Grippotyphosa Icterohaemorrhagiae Szwajizak Pomona Hardjo Tarassovi 30 (BRA) (CAN) (GRI) (ICT) (SZW) (POM) (HAR) (TAR) F. Gestion des données 1. But Après avoir saisi toutes les données dans un fichier Excel®, celles-ci ont été analysées avec le programme de traitement statistique R®. La prévalence d’agglutinines anti-leptospire a ensuite été décrite de façon générale puis en fonction des strates âge et sexe ainsi que de l’influence climatique par sérogroupe testés. Le protocole d’échantillonnage est basé sur une démarche qualitative. Ainsi, seule la borne limite supérieure de l’intervalle de confiance à 95% (IC95%[0 ;-]) peut être calculer pour extrapoler la prévalence d’agglutinines anti-leptospires dans la population générale (Toma et al. 2006). Les hypothèses pour l’analyse statistique sont que la prévalence d’agglutinines anti-leptospires de la population extensive de cerfs rusa de l’Ile Maurice pourrait : être positivement corrélée avec l’âge, le risque d’être en contact avec un agent pathogène augmentant avec celui-ci. varier avec la localisation géographique. En effet, la population extensive de cerfs rusa à l’Ile Maurice a été divisée en chassés il y a plusieurs dizaines d’années de cela. Ceux-ci sont clôturés et il y a peu de mouvements d’animaux entre chassés. Ainsi, en fonction de chaque particularité du chassé (notamment les animaux réservoirs potentiels résidant dans le chassé), les résultats pourraient être différents ainsi que les séroprévalence par sérovars. varier en fonction du sexe de l’animal, le comportement entre les cerfs mâles et femelles étant différents (bagarre entre mâles, marquage du territoire par ceux-ci…). être positivement corrélée avec la densité, les contacts entre individus augmentant avec celle-ci et pouvant aussi provoquer plus de situation de stress chez les mâles notamment. être dépendante de l’influence climatique. En effet, la survie des leptospires dans l’environnement peut aller de quelques heures à quelques mois, selon la température, l’humidité et l’ensoleillement entre autre. Un climat chaud et humide étant plus propice à cette survie. L’altitude pouvant, dans une certaine mesure, refléter aussi le climat entre dans cette hypothèse. 2. Définition des variables La variable de réponse du modèle statistique a été nommée P100 (prévalence au-delà d’un titre de 100). Elle a été construite comme une variable binaire avec 0 pour un titre d’agglutinines antileptospire inférieur à 100 et 1 pour un titre supérieur à 100. La variable considérée comme aléatoire était le chassé. Les variables incluses dans les modèles statistiques étaient : les variables altitude et densité comme variables quantitatives continues (après vérification en utilisant un Model Généralisé Additif) alors que toutes les autres variables étaient des variables qualitatives. la variable âge définie en deux catégories : « Jeune » (<15 mois) et « Adulte » (≥15 mois). En effet, il a été considéré que le risque d’exposition à l’agent pathogène était relativement différent pour ces deux catégories d’animaux. Habituellement, l’immunité maternelle, vis à vis d’un agent pathogène à laquelle la mère a été exposé, disparaît entre 4 et 9 mois chez les ruminants (environ 7 mois pour les anticorps maternelle dirigés contre l’alphaherpesvirus de la rhinotrachéite infectieuse bovine chez le veau (Lemaire et al. 2000)). Cela induirait que les jeunes cerfs commenceraient à synthétiser leur propre agglutinine anti-leptospires pas avant le mois de janvier (environ 8 mois d’âge). Or les pics pluviométriques se situent plutôt entre Décembre et Mars ainsi que Juin et Août (source CSO 2007). Ainsi, au mois de Juin (13 mois d’âge), le système immunitaire d’un animal de 15 mois n’aura été exposé aux leptospires que pendant la fin d’une saison pluvieuse contre trois pour un animal de 30 mois. la variable sexe définie en deux catégories : « mâle » et « femelle » la variable localisation géographique définie en deux catégories : « Cote » et «Haut » la variable climat définie en trois catégories « A », « B » et « C », tel que vu précédemment. 31 3. Modèle statistique Un modèle généralisé mixte a été utilisé (Greenland 2000, Wood 2006). Ce type de modèle a déjà été employé dans le passé pour l’étude de l’incidence d’agents pathogènes spécifiques de mammites cliniques chez des vaches laitières par exemple (de Haas et al. 2002) ou l’analyse épidémiologique de facteurs pouvant influencer la séroprévalence d’un alphaherpesvirus dans les populations de rennes semi-domestiques du Comté du Finnmark en Norvège par exemple (Roger 2006). Les modèles ont été construits en introduisant la variable chassé comme aléatoire et les autres variables pouvant influencer la prévalence d’agglutinines anti-leptospires comme variables fixes. Le modèle suit une distribution binomiale (P100 0/1) et la valeur attendue pi de la prévalence d’agglutinines anti-leptospires peut être écrite comme: Logit(pi) = β0 + aj + β1 Densité + β2 Sexe + … Avec: aj ~ (distribution normale pour l’effet aléatoire, avec une moyenne de 0 et une variance σA2) β0 : Intercept β1 : effet de la densité (coefficient de régression) β2 : effet de l’age (Différence entre jeunes et adultes) Logit(p) = log(p/(1-p)) N(0,σA2), Le modèle a d’abord été lancé pour la variable de réponse P100 puis pour les variables codant pour les sérovars les plus représentés. III. Résultats A. Résultats généraux Des agglutinines anti-leptospires ont été détectées au-delà d’un titre 100 chez 88/320 (27,5%, cerfs rusa élevés de façon extensive à l’Ile Maurice. Au niveau des chassés, 19/26 (73,1%) ont au moins une réponse positive. Les prévalences individuelles par chassé varient de 0 à 100% et sont détaillées par sérogroupe de leptospire testé dans l’Annexe II (p 48). IC95%[22,6 ;32,4]) Les sérogroupes sont répartis comme il suit : - 42,0% Tarassovi - 29,5% Pomona - 19,3% Sejroe - 18.2% Mini - 2,3% Gryppothyphosa - 2,3% Canicola - 1,1% Icterohaemorrhagiae - 0% Australis (n=37, IC95%[8,1 ;15,1]) (n=26, IC95%[5,1 ;11,1]) (n=17, IC95%[2,8 ;7,8]) (n=16, IC95%[2,6 ;7,4]) (n=2, IC95%[0 ;1,5]) (n=2, IC95%[0 ;1,5]) (n=1, IC95%[0 ;0,9]) (n=0, IC95%[0 ;1,0]). Les titres les plus élevés détectés ont été de 3200 pour le sérogroupe Tarassovi et 1600 pour les sérogroupes Pomona et Sejroe. Deux sérogroupes ont été détectés chez 9 individus et 3 sérogroupes chez 2 individus du même chassé (Tableau XII). Tableau XII : Identification des sérogroupes de leptospires détectés deux ou trois fois chez un même individu Sérogroupe Nombre d’individu Nombre d’élevage 3 3 1 1 1 2 3 2 1 1 1 1 Tarassovi et Pomona Pomona et Mini Tarassovi et Sejroe Pomona et Sejroe Grippotyphosa et Mini Pomona, Sejroe et Mini La répartition de l’échantillonnage par sexe et par âge est représentée dans les Tableaux de l’Annexe III (p 49 et 50). 32 B. Prévalences d’agglutinines anti-leptospire dans les strates âge et sexe Les prévalences d’agglutinines anti-leptospire par sérogroupe positifs chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice en fonction de l’âge et du sexe sont présentées dans le Tableau XIII. Les fréquences des sérogroupes positifs dans ces strates sont représentées par la figure 2. 37/158 des jeunes animaux (23,4%, IC95%[18,8 ;28,1]) ont été détectés positifs contre 51/162 pour les adultes (31,5%,IC95%[26,4 ;36,6]). 27/104 des femelles (26,0%, IC95%[21,2 ;30,8]) ont été détectées positives contre n=61/216 pour les mâles (28,2%, IC95%[23,3 ;33,2]). Tableau XIII : Prévalence d’agglutinines anti-leptospire par sérogroupe positifs chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice en fonction de l’âge et du sexe. Jeunes (<15 mois) (n=158) Mâle Femelle (n=100) (n=58) Sérogroupe Tarassovi Pomona Sejroe Mini Grippotyphosa Canicola Icterohaemorraghiae Australis Total IC95% Réaction positive Nb (%) 37 (42,0) 26 (29,5) 17 (19,3) 16 (18,2) 2 (2,3) 2 (2,3) 1 (1,1) 0 (0,0) 88 (27,5) Titre Max 3200 1600 1600 800 100 200 100 Réaction positive Nb (%) 7 (7,0) 5 (5,0) 6 (6,0) 1 (1,0) 1 (1,0) 1 (1,0) 1 (1,0) Titre Max 800 1600 800 200 Réaction positive Nb (%) 2 (3,4) 6 (10,3) 4 (6,9) 6 (10,3) Adultes (≥15 mois) (n=162) Mâle Femelle (n=116) (n=46) Titre Max 800 1600 800 400 Réaction positive Nb (%) 21 (18,1) 12 (10,3) 5 (4,3) 9 (7,8) 1 (0,9) Réaction positive Nb (%) Titre Max 7 (15,2) 3 (6,5) 2 (4,3) 1600 400 1600 Titre Max 3200 200 400 800 0 / 100 0 / 100 0 / 200 1 (1,7) 200 0 / 0 / 100 0 / 0 / 0 / / 0 / 0 / 0 / 0 / 3200 21 (21,0) 1600 16 (27,6) 1600 40 (34,5) 1600 11 (23,9) 3200 [22,6;32,4] [16,5;25,5] [22,7;32,5] [29,3;39,7] [19,2;28,6] Tarassovi Pomona Sejroe Mini Grippotyphosa Canicola Icterohaemorrhagiae Australis Figure 2 : Représentation des fréquences des sérogroupes de leptospire positifs chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice en fonction de l’âge et du sexe. 33 C. Prévalences d’agglutinines anti-leptospire en fonction de l’influence climatique Les prévalences d’agglutinines anti-leptospire par sérogroupe positif chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice en fonction de l’influence climatique sont présentées dans le Tableau XIV. Les fréquences des sérogroupes positifs en fonction de la catégorie climatique sont représentées par la figure 3. Tableau XIV : Prévalence d’agglutinines anti-leptospire par sérogroupe positifs chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice en fonction de l’influence climatique. Climat Sérogroupe Tarassovi Pomona Sejroe Mini Grippotyphosa Canicola Icterohaemorraghiae Australis Réaction positive Nb (%) 37 (42,0) 26 (29,5) 17 (19,3) 16 (18,2) 2 (2,3) 2 (2,3) 1 (1,1) 0 (0,0) 88 (27,5) Total IC95% Titre Max 3200 1600 1600 Chaud/Sec (A) (n=139) Réaction positive Nb (%) 14 (10,1) 4 (2,9) 11 (7,9) Titre Max 800 200 Froid/Humide (B) (n=119) Réaction positive Nb (%) 18 (15,1) 11 (9,2) Titre Max 3200 1600 1600 0 / 800 0 / 1 (0,8) 400 100 1 (0,7) 100 0 / 200 0 / 100 0 / / 0 / 3200 27 (19,4) 1600 [22,6;32,4] [15,1;23,8] 2 (1,7) 1 (0,8) Chaud/Humide (C) (n=62) Réaction positive Nb (%) 5 (8,1) 11 (17,7) 6 (9,7) 15 (24,2) 1 (1,6) Titre Max 400 400 800 800 100 200 0 / 100 0 / 0 / 0 / 32 (26,9) 1600 29 (46,8) 800 [22,0;31,7] [41,3;52,2] Tarassovi Pomona Sejroe Mini Grippotyphosa Canicola Icterohaemorrhagiae Australis Figure 3 : Représentation des fréquences des sérogroupes de leptospire positifs chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice en fonction de l’influence climatique. 34 D. Résultats de l’analyse statistique 1. Sur la prévalence générale L’analyse statistique sur la prévalence générale est détaillée dans le Tableau XV. Seul le climat (C) (chaud et humide) apparaît comme avoir un effet significatif. Tableau XV : Modèle linéaire généralisé mixte (effectué en utilisant la fonction de R glmmPQL) à propos de la prévalence générale d’agglutinines anti-leptospires (variable de réponse) chez les cerfs rusa en fonction de l’âge (jeunes (<15 mois) ou adultes (≥15 mois), le sexe (mâle ou femelle), la localisation (Cote ou Haut), l’altitude (mètre) ; l’influence climatique (Climat (A) : chaud et sec ; Climat (B) : Froid et humide, Climat (C) : chaud et humide) et la densité (N/km2). Age, sexe, localisation, altitude, climat et densité ont été définis comme des facteurs fixes alors que le chasse a été modélisé comme un facteur aléatoire. Les effets significatifs sont indiqués en bleu gras. Prévalence générale d’agglutinines anti-leptospire Valeur Erreur Standart P Intercept Age (adulte) Sexe (femelle) Localisation (H) Altitude Climat (B) Climat (C) Densité -2,75 0,51 -0,21 -0,53 0,00 1,41 2,62 0,18 0.79 0,29 0,29 1,39 0,00 1,63 0,89 0,12 <0.001 0,082 0,482 0.710 0,760 0,397 0,008 0,146 n=320 cerfs rusa, 26 chassés: Déviation standard de la variable aléatoire Chassé=0.825, Résidu (cerf individuel)=0.947 P significatif si <0,05 2. Sur la prévalence par sérogroupe L’analyse statistique sur la prévalence d’agglutinines anti-leptospires pour les sérogroupes Tarassovi, Pomona et Sejroe est détaillée dans le Tableau XVI. Ce sont les seuls sérogroupes pour lesquels il y aurait un effet significatif pour au moins un facteur : l’âge pour Tarassovi, le climat (C) pour Pomona et ce même climat ainsi que la densité pour Sejroe. Tableau XVI : Modèle linéaire généralisé mixte (effectué en utilisant la fonction de R glmmPQL) à propos des prévalences d’agglutinines anti-leptospires (variables de réponse) pour les sérogroupes Tarassovi, Pomona et Sejroe chez les cerfs rusa en fonction de l’âge (jeunes (<15 mois) ou adultes (≥15 mois), le sexe (mâle ou femelle), la localisation (Cote ou Haut), l’altitude (mètre) ; l’influence climatique (Climat (A) : chaud et sec ; Climat (B) : Froid et humide, Climat (C) : chaud et humide) et la densité (N/km2). Age, sexe, localisation, altitude, climat et densité ont été définis comme des facteurs fixes alors que le chasse a été modélisé comme un facteur aléatoire. Les effets significatifs sont indiqués en bleu gras. Prévalence d’agglutinines anti-leptospire Valeur Intercept Age (Adulte) Sexe (femelle) Localisation (H) Altitude Climat (B) Climat (C) Densité P significatif si <0,05 -3,16 0,91 -0,20 2,67 0,00 -3,45 -0,52 -0,02 Tarassovi Pomona Erreur Standart Erreur Standart 0,99 0,42 0,42 1,66 0,00 1,99 1,21 0,15 P 0,002 0,031 0,631 0,122 0,119 0,098 0,671 0,880 n=320 cerfs rusa, 26 chassés Déviation standard de la variable aléatoire: Chassé=0.987, Résidu =0.921 (cerf individuel) Valeur -4,78 0,76 -0,08 -25,7 0,00 28,1 3,03 0,19 0,97 0,46 0,45 >100 0,00 >100 0,84 0,12 Sejroe P 0,000 0,103 0,860 0,999 0,157 0,999 0,002 0,123 n=320 cerfs rusa, 26 chassés Déviation standard de la variable aléatoire: Chassé=0.000, Résidu =0.979 (cerf individuel) 35 Valeur -3,46 -0,19 0,05 -27,6 -0,01 2,96 1,81 0,27 Erreur Standart 0,80 0,50 0,50 >100 0,00 >100 0,70 0,10 P 0,000 0,688 0,913 1,000 0,152 1,000 0,023 0,013 n=320 cerfs rusa, 26 chassés Déviation standard de la variable aléatoire: Chassé=0.000, Résidu =0.843 (cerf individuel) IV. Discussion A. Sur la qualité des informations recueillies 1. Echantillonnage a. Représentativité La représentativité de l’échantillon conditionne l’exactitude de l’extrapolation de la prévalence de la maladie déterminée dans l’échantillon à la population générale. Elle est dépendante avant tout de la méthode utilisée pour constituer l’échantillon (Toma et al. 2006). Dans cette étude, c’est bien la méthode de choix qui a été appliquée (le tirage au sort aléatoire sans remise) toutefois la représentativité de l’échantillon est loin d’être parfaite. En effet, en premier lieu, la base de données constituée pour ce tirage au sort était incomplète. Un nombre indéterminé de chassés et donc d’animaux (probablement entre 7.000 et 15.000) n’y sont pas recensés. De plus, les cerfs rusa des chassés ne sont presque jamais identifiés de façon individuelle. Il serait nécessaire de renseigner dans la base de données au minimum le sexe ratio par élevage ainsi que les proportions d’animaux par catégorie d’âge afin de cibler au maximum les animaux à prélever à l’issu des parties de chasse. Pour l’étude, seule une indication sur le sexe ratio a été renseignée pour la majorité des élevages dans la base de données mais aucune information sur l’âge. Un second élément nuançant la représentativité de l’échantillon porte sur l’application du plan d’échantillonnage défini. En effet, la réalité du terrain fait qu’il n’est pas toujours possible d’effectuer les prélèvements prévus. Parfois le nombre d’animaux tirés lors de la partie de chasse est inférieur au nombre escompté. D’autres fois, il a été décidé arbitrairement de ne pas suivre le plan d’échantillonnage. Ainsi, par exemple, au lieu de prélever deux femelles, la récolte de sang de 4 mâles de plus de 5 ans a été préférée. Les résultats de l’étude concernent 216 mâles et 104 femelles soit un sexe ratio de 1 mâle pour 0,5 femelle loin du sexe ratio attendu de 1 mâle pour 1,7 femelle. De plus, seuls 28 chassés ont été échantillonnés sur 35 et les résultats de l’étude ne porte que sur 26 d’entre eux seulement. Notre échantillon est donc certainement loin d’être représentatif de la population générale extensive de cerfs rusa de l’Ile Maurice. Cela induit que la prévalence d’agglutinine anti-leptospire extrapolée de l’échantillon à la population générale ne sera pas exacte. Cette idée est à pondérée à la vue de l’analyse statistique puisqu’aucune relation statistiquement significative entre la prévalence générale et le sexe ou l’âge n’a été mise en évidence. Il en va de même entre la prévalence par sérogroupe et le sexe. Cependant une relation significative entre la prévalence du sérogroupe Tarassovi et l’âge serait statistiquement significative. b. Extrapolation à la population générale Bien que cette étude soit basée au départ sur une démarche qualitative (avec un taux de prévalence limite fixé à 1% pour un risque α de 5%) et étant donné le taux de prévalence élevé ainsi que l’effectif important d’animaux échantillonnés, il est possible de calculer un intervalle de confiance bilatéral correspondant à une probabilité de 95% (retenu dans cette étude) qu’il comprenne la valeur réelle du taux de prévalence de la maladie dans la population générale (Toma et al. 2006). Ainsi, dans le cas présent 88 réponses positives sur 320 ont été enregistrées. Cela correspond à une prévalence d’agglutinines anti-leptospires dans l’échantillon de 27,5% et situe avec 95% de probabilité la valeur réelle de la prévalence dans la population générale entre 22,6 et 32,4%. Le nombre de chassé ayant au moins une réponse positive est de 19/26 (73,1%). 36 2. Qualité du test d’agglutination microscopique (MAT) Pour cette étude, 299 résultats devaient être obtenus avec un test diagnostic d’une sensibilité maximale (100%) pour pouvoir affirmer avec 95% de certitude, dans le cas où les 299 résultats étaient négatifs que l’agent pathogène ne circulait pas dans plus de 1% de la population. En gardant les mêmes contraintes de taux de prévalence limite et de risque α, et avec 320 résultats, un test diagnostic avec 93,4% de sensibilité était suffisant. Cependant la sensibilité du test d’agglutination microscopique n’atteint pas cette valeur puisque que sont aptitude à détecter des individus infectés chroniques est mauvaise. Or ce cas est fréquent chez les ruminants et cervidés sauvages (André-Fontaine 2004). Rétrospectivement, un plus grand nombre d’échantillons aurait du être testés. Plusieurs titres de sérogroupes (ou sérovars) différents ont été détectés chez onze individus. Ceci est assez courant lors d’un diagnostic utilisant un test sérologique et difficile à interpréter. Plusieurs titre d’agglutinines anti-leptospires chez un même individu peuvent être la conséquence de réactions croisées entre différents sérovars ou due à de réelles infections multiples (André-Fontaine 2003). 3. Qualité des informations relatives aux animaux et aux chassés Les informations portant sur l’âge et le sexe des individus sont globalement de bonne qualité. La confusion entre les sexes n’est que très peu probable de même que les cerfs nés l’année précédente se reconnaissent assez facilement par rapport à leur gabarit pour les femelles et la morphologie des bois pour les mâles. En cas de doute, un examen des dents était effectué. Les informations au niveau du chassé quant à elles sont plus sujettes à discussion. En effet, si la mesure d’altitude est donnée par un GPS, la densité a été calculée sur la base d’informations orales recueillies alors que parfois l’attention de l’interlocuteur n’était pas forcément toute à la conversation (en générale cela se passait en quelques minutes dans le lieu de partage alors que l’interlocuteur était entrain de gérer le partage des animaux entre boucher etc…). De même, la personne chargée de recueillir les informations n’était pas à l’abri d’une erreur d’inattention. De plus, comme il a été dit précédemment (§II.D.2), le codage du climat a été effectué de façon assez subjective. Ainsi, si d’autres facteurs ayant une influence sur la prévalence d’agglutinines antileptospires interviennent (facteurs de confusion), l’effet mesuré ne sera pas celui exclusif du climat. B. Sur la prévalence générale d’agglutinines anti-leptospire dans la population extensive de cerfs rusa (Cervus timorensis russa) de l’Ile Maurice 1. Prévalence générale Cette étude reporte une prévalence d’agglutinines anti-leptospires de 27,5% (n=320, IC95%[22,6;32,4]) chez les cerfs rusa de l’Ile Maurice élevé de façon extensive. Une étude effectuée en 2006 sur le macaque mauricien d’élevage a montré que sur 421 sérums analysés en utilisant un test d’agglutination microscopique, 27 d’entre eux étaient positifs pour au moins un sérovar avec un titre >100, soit une séroprévalence de 6,4% (IC95%[4,3;9,2]). Cette valeur serait assez éloignée du résultat de notre étude toutefois la prévalence d’agglutinine anti-leptospires chez les macaques capturés dans la nature passe à 9,6% (n=94, IC95%[4,5;17,4]). Les titres les plus élevés dans cette étude (3.200 pour Tarassovi et 1.600 pour Pomona et Sejroe) peuvent s’expliquer soir par des infections chez des individus particulièrement sensibles, soit par une exposition répétée d’un même individu à l’agent pathogène présent dans l’environnement. 37 2. Relation entre la prévalence générale et l’effet du climat Le modèle linéaire généralisé mixte utilisé pour l’analyse statistique des différents facteurs étudiés à montrer un effet statistiquement significatif du climat en fonction de sa caractérisation, le climat catégorisé comme chaud et humide (C) ayant une prévalence d’agglutinines anti-leptospires (46,8%, n=62) significativement plus élevé que les deux autres (A : chaud et sec, 19,4%, n=139 ; B : froid et sec, 26,9%, n=119) (P=0,008<0,05). Il serait en effet logique de penser qu’un climat chaud et humide soit un milieu favorable pour la survie des leptospires (Tangkanakul et al. 2000). Cependant, les différences de température sur l’île ne sont pas si grandes ce qui induirait que la température ne serait pas un facteur primordial pour la survie de l’agent pathogène en cause à l’île Maurice. C’est sur cette nouvelle hypothèse et en voulant tester le seul effet de la pluviométrie que les catégorie B et C ont été regroupées et que le modèle a été relancé. Aucun changement sensible n’a été observé puisque l’effet et la P-value de la variable climat (B’ : pluviométrie) sur la prévalence générale sont restés dans le même ordre de grandeur (effet=2,69, P=0,0079). Vu que l’analyse précédente avait montré qu’il n’y avait pas de différence significatives entre le climat chaud et sec (A,) et le climat froid et humide (B), il semblerait donc qu’il y ait bien un autre facteur que le climat mais spécifique aux chassés regroupés dans la catégorie C qui influe sur la séroprévalence générale. La prévalence plus élevée dans cette zone pourrait être une situation épidémiologique particulière comme par exemple une plus grande densité de cochons marrons ou de rongeurs. Il a en effet été montré que des cochons sauvages en zones péri-urbaine pouvaient être une source potentielle de contamination par des lesptospires (Jansen et al. 2007 May). D’autres espèces comme les hérissons ou les mangoustes devraient peut-être aussi être prises en considération. C. Sur la prévalence d’agglutinines anti-leptospire par sérogroupe positif 1. Prévalence par sérogroupe Dans l’étude de la prévalence d’agglutinines anti-leptospires chez le macaque mauricien d’élevage (Bouet 2007), les sérogroupes infectant les plus fréquents étaient Grippotyphosa (51,6%), Panama (29%), Australis, Ballum et Icterohaemorrhagiae (6,5% respectivement)et parmi 9 testés (14 sérovars) (Bouet 2007). Or les macaques sauvages cohabitent souvent avec le cerfs rusa (les lieux de capture des macaques se faisant souvent dans des chassés). Ces résultats sont éloignés de ceux de notre étude puisque les sérogroupes infectants les plus fréquants étaient Tarassovi (42,0%), Pomona (29,5%), Sejroe (19,3%) et Mini (18.2%), Gryppotyphosa n’étant isolé que chez 2 cerfs (2,3%). Il aurait donc été intéressant de tester aussi le sérovar Panama puisqu’il a été détecté à 67% chez les macaques de captures. Si les sérogroupes Pomona et Sejroe (sérovar hardjo) sont le plus fréquemment détectés au sein des population de cerfs (Fairley et al. 1984, Fairley et al. 1986, Goyal et al. 1992, Wilson et al. 1998, Ayanegui-Alcerreca et al. 2007), la très grande fréquence du sérogroupe Tarassovi dans notre étude est assez surprenante. En effet, c’est un sérogroupe habituellement plutôt isolé dans d’autre espèces comme le porc en Europe ou au Japon par exemple (Ganière et al. 2001, André-Fontaine 2004, Naito et al. 2005) ou plus originalement chez l’éléphant en Thaïlande (Oni et al. 2007). Une explication pour expliquer cette particularité de notre étude pourrait être la cohabitation entre les populations de cerfs rusa et celle de cochons marrons. Peu d’informations sur cette dernière population sont disponibles. Cependant, dans certains chassés, les cerfs sont parfois supplémentés en aliment pour bétail (pour passer la saison sèche ou pour traiter contre les parasites externes). Celui-ci peut être distribué dans des mangeoires accessibles aux cochons marrons. Il n’est pas alors pas rare de les voir s’alimenter à cette source de nourriture providentielle. Les contacts (directs ou indirects) entre les deux espèces sont alors possibles et pourrait permettre le passage de la leptospire appartenant au sérogroupe Tarassovi, cochon au cerf rusa. Pour vérifier cette hypothèse, il faudrait alors effectué un échantillonnage sur les cochons marrons tirés lors des parties de chasse. Ceci permettrait de vérifier leur exposition à ce sérovar et de savoir s’ils l’excrètent dans le milieu extérieur. 38 Il est aussi intéressant de constater qu’il semblerait y avoir une certaine spécificité des sérogroupes en fonction du chassé comme le montre le tableau de l’Annexe II présentant la distribution des sérogroupes par chassés. Ainsi 12/16 (75,0%) détections du sérogroupe Mini ont été observées dans le même chassé (XII) qui présentait une prévalence générale de 100% (13/13). Cette situation se répète pour le sérogroupe Tarassovi dans l’élevage XIV avec 11/37 (29,7%) réponses positives pour une prévalence générale du chassé de 17,7% (14/79), ainsi que pour le sérogroupe Sejroe principalement détectés dans l’élevage XX avec 8/17 (47,1%) réponses positives pour une prévalence générale du chassé de 31,1% (9/28). Deux hypothèses explicatives peuvent être envisagées. Tout d’abord, il pourrait exister un réservoir animal spécifique à chaque chassé, entretenant le cycle d’un sérogroupe particulier. Les animaux réservoirs de leptospires ne manquent pas sur l’île entre les rongeurs, le tangue (hérisson) et la mangouste entre autre. Ce réservoir spécifique au chassé pourrait être lié à des pratiques particulières d’élevage ou de gestion de l’environnement (par exemple certains chassés posent des pièges pour rats et mangouste et d’autre non). Une seconde explication pourrait être lié à la constitution des chassés. A partir de 1950, les populations sauvages de cerfs furent graduellement clôturées et isolées formant les chassés. Or depuis, il y a peu de mouvements d’animaux d’un chassé à l’autre. On pourrait donc imaginer que depuis 60 ans, chaque cheptel ait plus ou moins sélectionné un sérogroupe spécifique de leptospire en fonction des caractéristiques uniques du chassé. 2. Relation entre la prévalence du sérogroupe Tarassovi et l’âge Un effet statistiquement significatif de l’âge (P=0,031<0,05) sur la prévalence d’agglutinines anti-leptospires a été mis en évidence pour le sérogroupe Tarassovi indiquant que la prévalence d’agglutinine dirigé contre ce sérogroupe était plus élevée dans la population des cerfs adultes que dans celle des jeunes cerfs. Etant le plus représenté parmi tous les sérogroupes testés, la puissance statistique pour cette variable de réponse est plus grande. Peut être qu’en disposant de plus de puissance statistique pour les autres sérogroupes (ie plus de réponses positives mais pour la même prévalence), cet effet aurait été mis en évidence pour d’autre sérogroupe comme Pomona. L’effet de l’âge sur la prévalence est connu pour de nombreux agents pathogènes et notamment les virus capable d’induire chez l’hôte des réponses immunitaires élevés et durable (Pastoret and Thiry 1985). Plus le temps s’écoule et plus l’individu a des risques d’être en contact avec l’agent pathogène et ainsi développer une réponse immunitaire. Celle-ci sera ensuite renforcer après chaque nouveau contact entre le système immunitaire de l’hôte et l’agent pathogène. Ainsi des titres élevés d’anticorps dirigés contre les leptospires peuvent être détectés plusieurs mois ou année après la primo infection (Bharti et al. 2003). 3. Relation entre la prévalence des sérogroupes Pomona et Sejroe et le climat Comme pour la prévalence générale d’agglutinines anti-leptospires, un effet statistiquement significatif du climat sur la prévalence du sérogroupe Pomona a été observé (P=0,002<0,05) ainsi que pour le sérogroupe Sejroe (P=0,023<0,05). Le même recodage (ie regroupement des catégories climats B et C pour tester l’hypothèse de la pluviométrie) que pour la prévalence générale a été effectué et le modèle a été relancé pour chaque prévalence de chaque sérogroupe. A nouveau, aucun changement significatif des effets et P-value n’a été observé. L’hypothèse avancée précédemment reste donc potentiellement valable. Cependant, un bémol est à noter pour le sérogroupe Sejroe dont la prévalence est surtout fonction du chassé XX qui n’est pas situé dans la zone climat C. Une analyse statistique plus fine après avoir recueillis plus de données épidémiologiques devrait donc être investiguée afin de mieux identifier le facteur de cette zone géographique qui influence la prévalence d’agglutinines anti-leptospires. 39 4. Relation entre la prévalence du sérogroupe Sejroe et la densité Un effet statistiquement significatif de la densité (P=0,013<0,05) sur la prévalence d’agglutinines anti-leptospires a été mis en évidence pour le sérogroupe Sejroe. Cependant, lorsque l’on regarde les données brutes, on s’aperçoit que la prévalence d’agglutinines dirigées contre ce sérogroupe est fonction surtout d’un seul élevage (XX, cf §V.C.1). Lorsque l’on ne tient plus compte de cet élevage et que l’on relance le modèle statistique, l’effet de la densité n’est plus statistiquement significative. 40 Conclusion C ette enquête sérologique a montré que la population extensive de cerfs rusa (Cervus timorensis russa) de l’Ile Maurice était sujette à la leptospirose. Au total, un test d’agglutination microscopique effectués pour 8 sérogroupe différents a détecté 88 sur 320 (27,5%) cerfs rusa avec un titre d’agglutinines anti-leptospires supérieur ou égal à 100. Cela correspond à 7 sérogroupes de leptospires différents. Les sérogroupes les plus représentés sont Tarassovi (42,0%), Pomona (29,5%), Sejroe (19,3%) et Mini (18,2%) qui ont été détectés le plus fréquemment. Enfin, 19 chassés sur 26 (73,1%) échantillonnés ont donnés au moins une réponse positive au test MAT. Ces résultats sont assez surprenants puisque habituellement ce sont des agglutinines dirigées contre les sérogroupes Pomona et Sejroe qui sont détectées le plus fréquemment dans les populations de cervidés sauvages. Des agglutinines dirigées contre le sérogroupe Tarassovi, bien qu’ayant déjà été détectées chez des cervidés sont plus habituellement identifiées chez les porcins. Il serait donc intéressant d’un point de vue épidémiologique d’effectuer une enquête de séroprévalence sur la population de cochons sauvages de l’Ile Maurice et de voir s’il y a des animaux excréteurs des sérogroupes incriminés. D’autre part, les sera de cerfs rusa pourraient être à l’avenir testés contre le sérogroupe Panama qui a induit 67% de réponses positives au test d’agglutination microscopique chez 94 macaques mauriciens capturés dans le milieu naturel en 2005. Cela rejoint l’idée que tous les sérogroupes existant n’ont pas été testés. Il y a donc une possibilité pour qu’en réalité ce soit au contact d’un autre sérogroupe que les cerfs s’immuniseraient principalement et que cette étude soit passée à coté. Une analyse statistique utilisant un modèle linéaire généralisé mixte a montré un effet statistiquement significatif de l’âge sur la prévalence du sérogroupe Tarassovi. Un second facteur associé à la zone Sud-ouest de l’île a été identifié comme ayant une influence sur la prévalence d’agglutinines anti-leptospires de façon générale et sur celles des agglutinines dirigées contre les sérogroupes Pomona et Sejroe. Ce facteur est mal identifié et ne s’avère pas relié directement au climat une fois les résultats interprétés. Il serait donc nécessaire de collecter plus de données épidémiologiques dans cette zone et d’effectuer une analyse statistique plus fine pour identifier précisément la nature de ce facteur. Les conséquences cliniques dans la population extensive de cerfs rusa de l’Ile Maurice restent à évaluer car la symptomatologie de la leptospirose est généralement fruste chez les cervidés sauvages. La leptospirose peut toutefois entraîner des avortements et induire des morts brutales. Il serait aussi intéressant si les cerfs excrètent des leptospires dans le milieu extérieur pour pouvoir estimer l’importance épidémiologique de cette espèce dans le cycle. Enfin, la population intensive de cerfs rusa de l’Ile Maurice n’a pas été prise en compte dans cette enquête. Or, les densités d’animaux étant plus élevés dans cette population, on pourrait s’attendre à une prévalence plus élevée. Si à l’avenir des conséquences cliniques ou épidémiologiques étaient démontrés, il serait opportun de mettre en place des mesures de prophylaxie telle que le drainage des zones marécageuses à risque, le contrôle des réservoirs d’animaux voir même de vacciner les animaux avec un vaccin synthétisé à partir du ou des sérovars incriminés. En dernier lieu, il ne faut pas oublier l’importance de la leptospirose en tant que zoonose. Ainsi, si une excrétion urinaire était démontrée chez le cerfs rusa, il serait important de mettre en place des mesures préventives auprès des personnes travaillant directement en contact avec les cerfs ou les carcasses à savoir : le personnel de l’abattoir de Port Louis, les éleveurs de cerfs et leurs employés, les bouchers, les chasseurs et les vétérinaire. 41 Perspectives L es résultats de cette enquête sérologique sur la leptospirose dans la population extensive de cerf rusa de l’Ile Maurice ne remplissent qu’en partie l’objectif général. En effet, celui-ci était de situer la prévalence de différentes maladies (Tuberculose bovine, Paratuberculose, Brucellose, Leptospirose, Fièvre Catarrhale du mouton, Virus de la Maladie Hémorragique Epizootique du cerf (EHDV), Cowdriose, Babésiose bovine et Anaplasmose bovine) dans le cheptel cervin de l’Ile Maurice et de faire un point sur les espèces de tiques infestant les cerfs ainsi que leur répartition géographique. Tout cela devait aboutir à la proposition d’un programme sanitaire dans le but de relancer les exportations de viande de cerf. Les perspectives à venir concernent : les résultats des analyses pour les mycobactéries. Pour le moment, un seul cas de tuberculose clinique a été confirmé par PCR. les résultats sérologiques pour la brucellose les résultats sérologiques pour la bluetongue et l’EHDV (en relation avec 3 piégeages de culicoides) les résultats pour l’étude sur les tiques qui porte sur: - l’analyse PCR de 628 tiques récoltés sur 137 animaux - des sérologies cowdriose, babésiose et anaplasmose bovine de 369 prélèvements (dont 108 associés avec un prélèvement de tiques) - ces résultats seront à mettre en relation avec 28 petits questionnaires l’analyse spatiale et statistique de tous ces résultats A l’issu de tout cela, un rapport synthétique des résultats devra être rédigé. Celui-ce proposera un plan de stratégie sanitaire en vue de rétablir les exportations de viande de cerf. 42 Bibliographie Agésilas, F., F. Gey, A. Monbrunt, J. C. Combes, B. Llanas, P. Schlossmacher, and B. A. Gaüzère. 2005. Leptospirose de l'enfant à l'île de la Réunion: à propos de 16 cas. 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Physical map of chromosomal and plasmid DNA comprising the genome of Leptospira. Nucleic Acids Res 19:4857-4860. 45 Annexes 46 Annexe I : Procédure de stérilisation des tubes en verre 10 ml utilisés pour la récolte des sera 1. Trempage dans de l’eau de javel pendant 12h 2. Lavage au savon antibactérien 3. 5 rinçages à l’eau courante 4. 1 rinçage à l’eau distillée 5. Séchage à 100°C pendant 1h 6. Stérilisation ambiance sèche à 160°C pendant 2 heures 47 Annexe II : Résultats des prévalences d’agglutinines anti-leptospires par sérogroupe et par chassé Tableau XVII : Résultats de prévalence d’agglutinines anti-leptospires par sérogroupe et par chassé chez des cerfs rusa (Cervus timorensis rusa) de l’Ile Maurice Identification Chassés Tarassovi Pomona Sejroe Mini Grippotyphosa Canicola Icterohaemorrhagiae Australis I 1 0 1 0 0 0 0 0 II 1 7 3 3 0 0 0 0 III 3 0 0 0 0 0 0 0 IV 5 0 0 0 0 0 0 0 V 0 4 0 0 0 0 0 0 VI 1 1 0 0 0 0 0 0 VII 2 1 1 0 0 0 0 0 VIII 1 1 0 0 0 0 0 0 IX 1 0 0 0 0 0 0 0 X 0 3 0 0 0 2 0 0 XI 0 0 0 0 0 0 0 0 XII 0 4 2 12 1 0 0 0 XIII 0 0 0 0 0 0 0 0 XIV 11 2 2 0 0 0 0 0 XV 1 0 0 0 0 0 1 0 XVI 0 0 0 0 0 0 0 0 XVII 0 0 0 0 0 0 0 0 XVIII 0 1 0 0 0 0 0 0 XIX 3 0 0 0 0 0 0 0 XX 1 1 8 0 1 0 0 0 XXI 0 0 0 0 0 0 0 0 XXII 0 0 0 0 0 0 0 0 XXIII 0 0 0 0 0 0 0 0 XXIV 2 0 0 0 0 0 0 0 XXV 4 1 0 0 0 0 0 0 XXVI 0 0 0 1 0 0 0 0 37 (42,0) 26 (29,5) 17 (19,3) 16 (18,2) 2 (2,3) 2 (2,3) 1 (1,1) 0 (0,0) TOTAL 48 N/Total (%) 2/7 (28,6) 11/37 (29,7) 3/4 (75,0) 5/6 (83,3) 4/18 (22,2) 2/9 (22,2) 4/14 (28,6) 2/11 (18,2) 1/2 (50,0) 5/15 (33,3) 0/4 (0,0) 13/13 (100,0) 0/4 (0,0) 14/79 (17,7) 2/5 (40,0) 0/5 (0,0) 0/8 (0,0) 1/2 (50,0) 3/5 (60,0) 9/28 (32,1) 0/14 (0,0) 0/2 (0,0) 0/5 (0,0) 2/4 (50,0) 4/17 (23,5) 1/2 (50,0) 88/320 (27,5) Annexe III : Répartition de l’échantillonnage par chassé en fonction du sexe et de l’âge Tableau XVIII : Répartition de l’échantillonnage par chassé en fonction du sexe Identification des Chassés I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII XIV XV XVI XVII XVIII XIX XX XXI XXII XXIII XXIV XXV XXVI TOTAL Nombre de mâles Nombre de femelles TOTAL 4 16 2 5 13 4 14 9 1 10 4 9 2 65 2 2 5 1 4 17 7 / 3 4 11 2 3 21 2 1 5 5 / 2 1 5 / 4 2 14 3 3 3 1 1 11 7 2 2 / 6 / 7 37 4 6 18 9 14 11 2 15 4 13 4 79 5 5 8 2 5 28 14 2 5 4 17 2 216 104 320 49 Tableau XIX : Répartition de l’échantillonnage par chassé en fonction de l’âge Identification Chassés I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII XIV XV XVI XVII XVIII XIX XX XXI XXII XXIII XXIV XXV XXVI TOTAL Nombre de Jeunes (<15 mois d’âge) 5 32 2 / 11 0 2 1 1 10 3 5 / 37 4 1 7 1 / 17 10 0 2 3 4 / Nombre d’Adultes (≥ ≥15mois d’âge) 2 5 2 6 7 9 12 10 1 5 1 8 4 42 1 4 1 1 5 11 4 2 3 1 13 2 158 162 50 TOTAL 7 37 4 6 18 9 14 11 2 15 4 13 4 79 5 5 8 2 5 28 14 2 5 4 17 2 320