PIFA® Heparin / Platelet Factor 4 Rapid Assay

CRYOPEP
avec les microparticules pourront traverser la membrane filtrante et migrer vers la
fenêtre « TEST » où une couleur bleue apparaitra.
Akers Biosciences, Inc.
PIFA® Heparin / Platelet Factor 4 Rapid Assay
1.
METHODE
Le PIFA® Heparin / Platelet Factor 4 Rapid Assay est un dispositif de diagnostic in vitro
pour la détection des anticorps dirigés contre le Facteur Plaquettaire 4 (PF4). Ces
anticorps sont retrouvés chez certains patients qui suivent un traitement à l’héparine.
2.
RESUME
Le risque d’une thrombopénie induite par l’héparine (TIH) est accru de façon significative
chez les patients récemment traités à l’héparine. La TIH est souvent causée par des
anticorps qui activent les plaquettes en reconnaissant le complexe Héparine / PF4. En
conséquence, la détection rapide de ces anticorps est devenue une norme en
hématologie et en cardiologie. La majorité des tests de laboratoire pour la TIH sont
classifiés par la CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendments) comme étant d’une
haute complexité, la réalisation du dosage prenant parfois plusieurs heures et
nécessitant souvent une confirmation de la TIH, avec ou sans thrombose, après
l’apparition des symptômes chez le patient. Il y a donc un réel besoin de disposer d’un
test simple et rapide qui aiderait les cliniciens à identifier et à traiter les patients à risque
de TIH ou de thrombose.
3.
EXPLICATION
La TIH est causée par des anticorps héparine-dépendants dirigés contre le complexe
Héparine / PF4, et de 1 à 5% des patients traités à l’héparine développent ce type
d’anticorps(1). Ces anticorps apparaissent initialement quand les patients sont sous
thérapie à l’héparine depuis au moins 5 jours. Une réponse immunitaire peut être
observée plus tôt (1-2 jours) si le patient a été exposé au préalable à l’héparine. Les
symptômes majeurs de la TIH sont une chute brutale des plaquettes et l’apparition de
thromboses. Des réactions cutanées peuvent aussi apparaître, allant d’une simple
réaction allergique à des lésions nécrotiques.
Il existe deux catégories de méthodes utilisées par les laboratoires pour identifier les
anticorps TIH :
 Méthodes fonctionnelles / activation : test de libération de sérotonine radio marquée
14
C (SRA) et le test d’agrégation plaquettaire (TAP).
 Méthodes immunologiques / antigène : tests immuno-enzymatiques (ELISA) et tests
d’immuno-filtration de particules (PIFA®).
Les méthodes SRA, TAP et ELISA sont classifiés par la CLIA comme étant d’une haute
complexité, nécessitant plusieurs heures, et étant utilisées comme confirmation, après
apparition des premiers symptômes de la TIH chez le patient(2).
Le PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay est le seul essai manuel qui peut être réalisé
facilement en quelques minutes, il est donc classifié par la CLIA comme étant d’une
complexité modérée.
4.
PRINCIPE DU TEST
®
Le PIFA Heparin / PF4 Rapid Assay est basé sur le principe de l’immuno-filtration de
particules (PIFA®). Des microparticules colorées, greffées avec du Facteur Plaquettaire 4
purifié à partir de plasmas riches en plaquettes, fournissent un signal visuel pour le
résultat du test (coloration). La capacité des particules complexées ou non à franchir la
membrane filtrante est proportionnelle à la réactivité ou à la non-réactivité de
l’échantillon testé.
Le PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay consiste en un « MINI-REACTEUR » qui contient une
membrane de filtration, une fenêtre « REACTIF », une fenêtre « TEST », une fenêtre
« CONTROL » et un bouton poussoir pour déclencher la réaction en libérant le réactif,
nommé « TOUR », qui contient le réactif à base de microparticules.
Le « MINI-REACTEUR » contient une chambre de réaction qui va permettre au réactif de
réagir avec le sérum frais du patient. Le réactif contenu dans la « TOUR » est libéré dans la
chambre de réaction avant de mettre l’échantillon par pression sur la « TOUR ». Le réactif
contient des microparticules greffées avec du Facteur Plaquettaire 4 purifié, ainsi que
des agents qui favorisent l’agrégation rapide ou la formation de complexes en présence
des anticorps spécifiques anti-PF4 présents dans l’échantillon.
Une fois que le réactif a réagi avec l’échantillon dans la chambre de réaction, le mélange
réactionnel s’accumule automatiquement au-dessus de la membrane filtrante. Les
microparticules non complexées sont séparées des complexes formés en traversant cette
membrane. Par conséquent, un échantillon positif va déclencher la formation de
complexes avec les microparticules qui ne diffuseront pas au niveau de la membrane. Le
réactif constitué de microparticules de couleur bleue ne pourront donc pas migrer vers la
fenêtre « TEST ». Inversement, un échantillon non-réactif ne formant pas de complexes
5.
MATERIEL FOURNI
Un coffret contenant 6 dispositifs unitaires « MINI-REACTEUR » et un mode d’emploi.
6.
MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI
Micropipette pouvant délivrer 30 µL
Un minuteur
Un contrôle positif et négatif (voir9. Contrôle de qualité)
7.
CONDITIONS DE CONSERVATION
Les « MINI-REACTEUR » doivent être conservés à +2/+8°C.
11. PERFORMANCES DU TEST
Akers Biosciences Inc. a mené des séries d’évaluations pour déterminer la performance
de PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay pour la détection des anticorps anti-Héparine / CXCL4.
Les études comparatives pour déterminer la performance de PIFA® Heparin / PF4 Rapid
Assay ont été menées par des laboratoires d’analyses médicales externes avec des
échantillons de patients collectés sur le terrain. La méthode standard des laboratoires
concernés était un test ELISA commercial.
SPECIFICITE / SENSIBILITE
ELISA
Positif
PIFA®
Négatif
Positif
21
3
Négatif
2
153
Spécificité :
98.1%
Sensibilité :
91.3%
Accord global : 97.2%
Stabilité à température ambiante : 8 heures, avant stockage au réfrigérateur pour une
utilisation ultérieure.
FIDELITE
- Ne pas congeler les tests : Si les dispositifs sont congelés à réception, les résultats
peuvent être erronés.
- Ne pas utiliser les tests au-delà de la date d’expiration.
La fidélité de PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay pour la détection des anticorps antiHéparine / PF44 a été démontrée en analysant 10 aliquotes de 5 échantillons pour la
fidélité inter-jour et 10 aliquotes pour la fidélité intra-jour. La fidélité du test a été de 100
% dans les deux cas.
8.
PRECAUTIONS
- Ne pas exposer PIFA® « MINI-REACTEUR » à une température supérieure à 40°C ou
inférieure à 0°C.
- Ramener chaque PIFA® « MINI-REACTEUR » à une température ambiante (18-27°C), dans
son sachet d’origine, pendant 30 minutes minimum, avant utilisation.
Le PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay doit être réalisé
EXCLUSIVEMENT avec du sérum frais.
Les échantillons prélevés sur tube contenant un anticoagulant ne sont pas adaptés
pour ce test et ne doivent donc pas être utilisés.
- Les échantillons de sérum frais doivent être collectés dans de bonnes conditions
d’asepsie et manipulés selon les bonnes pratiques de laboratoire.
- Les échantillons de sérum congelés, décongelés, hémolysés, ictériques ou lipémiques
(en excès), contaminés par des bactéries, ou de contrôles d’autres coffrets, ne doivent
pas être utilisés. Ils peuvent induire des résultats erronés.
- Un temps d’incubation inadéquate, un mélange incomplet ou le non-respect des
procédures du test peuvent produire des résultats erronés.
- Voir aussi le chapitre 10. Limites du test.
9.
CONTROLE DE QUALITE
Les dispositifs PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay sont à usage unique.
Akers Biosciences Inc. recommande aux laboratoires de tester un échantillon
représentatif par lot en tant que contrôle qualité.
Il est également recommandé d’utiliser un contrôle qualité positif et négatif, dans les cas
suivants :
- Première utilisation d’un nouveau lot de PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay
- Après chaque série de 100 tests avec le même lot de dispositifs.
Le PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay dispose d’un contrôle interne. Une coloration rouge
de la fenêtre « CONTROL » indique que le test a fonctionné. S’il n’y a pas de coloration
rouge dans la fenêtre « CONTROL » dans un délai de 10 minutes maximum, après avoir mis
en œuvre le test, le résultat obtenu est considéré comme invalide.
Les contrôles doivent être testés selon les usages du laboratoire de la même manière
que les spécimens. Utilisez des échantillons contrôles confirmés. Akers Biosciences Inc.
commercialise des échantillons de sérum approuvés par la FDA pour l’utilisation sur les
dispositifs PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay. Pour plus d’information sur ces produits,
veuillez contacter votre distributeur local.
10. LIMITES DU TEST
Le PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay est un test de dépistage. Il doit être utilisé pour une
détermination qualitative des anticorps dirigés contre le complexe Héparine / PF4. Dans
certains cas, il peut y avoir des anticorps qui réagissent avec le complexe Héparine / PF4
mais demeurent insensibles à ce test. Le résultat ne doit pas s’appuyer uniquement sur ce
test.
12. BIBLIOGRAPHIE
1. Warkentin Theodore, Heparin Induced Thrombocytopenia : A Ten Year Retrospective,
Annual Review in Medicine, 1999, vol. 50, pp 129-47
2. Daneschvar H.Leon (MD), Daw Hamed (MD): How to Interpret and Pursue an Abnormal
Complete Blood Cell Count in Adults, Mayo Clinic Proc., 2005, 80:1389-1394, Mayo
Foundation for Medical Education and Research
3. CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) H18-A3: Procedures for the Handling
and Processing of Blood Specimens, Approved Guideline -- 3rd ed. (2004) (ISBN 156238555-0)
13. FABRICANT
Akers Biosciences Inc.
201 Grove Road, Thorofare
NJ 08086 USA
Tel: +1-856-848-2116
Fax: +1-856-848-0269
E-mail: [email protected]
www.akersbiosciences.com
14. MANDATAIRE EUROPÉEN
MDSS
Schiffgraben 41
D-30175 Hannover
Germany
PN 1322003 R7 06/13
15. DISTRIBUTEUR
ZAC Parc 2000
83 rue Yves Montand
34080 Montpellier
France
Tel : +33 (0) 467 10 71 20
Fax : +33 (0) 467 10 71 21
Email : [email protected]
www.cryopep.fr
Un résultat de test positif est un indicateur de la présence d’anticorps anti-Héparine /
PF4 dans l’échantillon analysé. Cependant, la présence de ces anticorps ne confirme pas
le diagnostic de TIH ou de thrombose. De ce fait, les résultats obtenus avec PIFA® Heparin
/ PF4 Rapid Assay doivent aussi être interprétés en fonction des signes cliniques et
d’autres résultats disponibles.
Distributeur en France : CRYOPEP 83, rue Yves Montand, 34080 Montpellier Tel: 04 67 13 21 00
Version 2015/03
Fr
CRYOPEP
« PUITS
ECHANTILLON »
« TOUR »
1. Retirer le PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay du réfrigérateur et le laisser à
température ambiante (18-27°C / 64-81°F) dans son emballage d’origine
pendant 30 minutes au minimum. S’assurer que le dispositif n’est pas froid
au toucher.
Fenêtre
« REACTIF »
Un PIFA® « MINI-REACTEUR » sorti de son emballage
doit être utilisé dans un délai de 60 minutes maximum.
Fenêtre
« TEST »
« CHAMBRE DE
REACTION »
4.
4
2. Vérifier la date de péremption du dispositif.
3. Etiqueter le dispositif avec les identifiants du patient et le placer sur une
surface plane.
Fenêtre
« CONTROL »
5.
1.
REALISATION DU TEST
Appuyer sur la « TOUR » complétement pour libérer les réactifs dans la
chambre de réaction.
5.
1
Incliner le « MINI-REACTEUR » à 45° de façon à surélever la « TOUR ».
Tapoter la bande des résultats avec le doigt jusqu’à ce qu’une couleur
bleue apparaisse dans la fenêtre « REACTIF ».
5
PIFA® Heparin / PF4 « MINI-REACTEUR »
1.
Après ce temps d’une minute, remonter la « TOUR » jusqu’en position
d’arrêt (1er cran).
PRELEVEMENT DE L’ECHANTILLON
Le PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay doit être réalisé
EXCLUSIVEMENT avec du sérum frais.
N’utilisez pas des échantillons congelés ou décongelés.
Selon le guide de bonnes pratiques H18-A3 de la CLSI « Procedures for the
handling and processing of blood specimens », le sérum doit être séparé des
cellules sanguines dans les 2 heures qui suivent la sédimentation(3).
2.
Les échantillons de sang total doivent être collectés dans des tubes de type
Vacutainer® à bouchon rouge. Des tubes unis, en verre ou en plastique, avec
des activateurs de la coagulation doivent être utilisés pour obtenir des
échantillons de sérums des patients. L’utilisation d’autres tubes, y compris
des tubes séparateurs de sérum (SST), n’est pas recommandée.
2.
Prélever 30 µL d’échantillon de sérum frais avec une micropipette.
Introduisez le cône de la micropipette dans le « PUITS ECHANTILLON » de la
« TOUR » jusqu’à ce qu’il touche le fond du puits. Remonter légèrement
et déposer délicatement l’échantillon.
6.
2
PREPARATION DE L’ECHANTILLON
IMPORTANT : Le sérum doit être séparé du culot sanguin dans les
60 minutes qui suivent la centrifugation. Au-delà de ce temps, le résultat du
test peut être invalide.
3.
CONSERVATION DES ECHANTILLONS
Poser le dispositif sur une surface plane. Quand une couleur rouge
apparaît dans la fenêtre « CONTROL », interpréter le résultat dans la
fenêtre « TEST ». Un bon éclairage est nécessaire pour lire correctement
le résultat. Le résultat du test est stable pendant une heure.
L’apparition de couleur rouge dans la fenêtre « CONTROL » est dépendante du
flux de liquide, un délai de 1 à 10 minutes est nécessaire pour lire le résultat.
Au-delà de 10 minutes, le test est considéré comme invalide.
1. Activation de la coagulation : les échantillons de sang total doivent être
coagulés avant d’être centrifugés.
- Tubes en plastique à bouchon rouge avec activateur de
coagulation :
Consulter la notice du fabricant pour connaître le temps nécessaire à
la coagulation (30 - 60 minutes).
- Tubes en verre à bouchon rouge :
Laisser l’échantillon coaguler pendant 30 minutes environ.
2. Centrifugation : L’échantillon doit être centrifugé immédiatement après
la coagulation. Consultez la notice du fabricant des tubes de collecte pour
connaître le temps et la vitesse de centrifugation.
Apparition de la couleur
bleue dans la fenêtre
« REACTIF »
6.
3.
INTERPRETATION DES RESULTATS
Secouer le dispositif vigoureusement dans le plan horizontal pendant 5
secondes (12-15 fois). Ensuite, utiliser un minuteur pour laisser le
dispositif se stabiliser pendant 1 minute.
3
Fenêtre
« TEST »
Fenêtre
« CONTROL »
Blanche*
Rouge
Positif
Bleue**
Rouge
Négatif
Blanc*
Blanc
Invalide
Bleu**
Blanc
Invalide
Résultat
*
Résultat positif : La fenêtre « TEST » peut parfois apparaître gris pâle ou
mouillée par l’humidification générée par le mélange réactif / sérum.
**
Les échantillons de sérum préparés qui ne peuvent pas être testés
immédiatement, doivent être conservés au réfrigérateur (+2/+8°C) pendant
72 heures au maximum. Dans tous les cas, ramener les échantillons à
température ambiante avant de les tester.
Résultat négatif / échantillon non-réactif : L’intensité de la couleur bleue
dans la fenêtre « TEST » varie entre le bleu pâle à un bleu foncé, en fonction
de l’échantillon.
7.
ELIMINATION DES DECHETS
Eliminer le dispositif usagé dans des conteneurs adaptés conformément aux
procédures d’élimination des déchets médicaux en vigueur au laboratoire et
à la réglementation locale.
4.
PREPARATION DU TEST
Avant de commencer le test :
Distributeur en France : CRYOPEP 83, rue Yves Montand, 34080 Montpellier Tel: 04 67 13 21 00
6.
Akers Biosciences, Inc.
PIFA® Heparin / Platelet Factor 4 Rapid Assay
1.
The PIFA® Heparin / Platelet Factor 4 Rapid Assay is a qualitative in vitro diagnostic device
designed for the detection of antibodies to Platelet Factor 4 (PF4) sensitized
microspheres. These antibodies are found in some patients undergoing heparin therapy.
2.
SUMMARY
The risk of heparin induced thrombocytopenia (HIT) is greatly increased in patients with
recent exposure to heparin. HIT is often caused by platelet activating antibodies that
recognize complexes of Heparin / PF4. As a result, antibody detection is rapidly becoming
a standard of care in hematology and cardiology. The majority of laboratory tests for HIT
are classified by CLIA as high complexity, take many hours to perform, and often provide
confirmation of HIT or HIT and thrombosis (HITT) after the symptoms are seen in a
patient. As a result, there is a need for an easily performed, rapid test that helps clinicians
identify and treat patients at risk for HIT or thrombosis.
3.
There are two categories of laboratory methods used to identify HIT antibodies:
 Functional / Activation :
Aggregation Test (PAT).
14
C Serotonin Release Assay (SRA) and the Platelet Assays
 Antigen Assays / Immunoassays : the Enzyme-Linked Immunoassay (ELISA) and the
Particle ImmunoFiltration Assay (PIFA®).
SRAs, PATs and ELISAs are CLIA-classified high complexity, take many hours to perform,
and are used primarily as a confirmation of HIT after the symptoms are seen in a
patient(2).
The PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay is the only manual assay that can easily be performed
in minutes and is CLIA-classified as moderate complexity.
PRINCIPE DU TEST
The PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay consists of a « MINIREACTOR » device that contains a
membrane filtration system, a « REAGENT » Window, « TEST » Result Window, « CONTROL »
Window, and a push button reagent dispensing system, referred to as the « TOWER », that
contains microparticle-based reaction reagents.
The « MINIREACTOR » contains a reaction chamber that allows the reagents to react with
the patient’s fresh serum sample. The reagent contained in the « TOWER » is added to the
reaction chamber followed by the sample. The reagent contains microparticles coated
with purified PF4 protein, as well as additional enhancing agents designed to promote
rapid aggregation or matrix formation of the particles in the presence of specific
antibodies in the test sample.
Once the reagent has reacted with the sample in the reaction chamber, the reaction
mixture automatically collects over the membrane filtration system. This system acts to
filter matrixed particles, while allowing non-matrixed particles to pass through. Thus, a
reactive sample will form a matrix of particles that will be trapped within the membrane.
Since the dyed particles are trapped within this membrane filter, no particles and hence,
no BLUE color, are able to migrate into the « TEST » result window. Conversely, a nonreactive sample will not form a matrix of particles. These non-matrixed particles will pass
through the membrane filter into the wicking layers, and BLUE color will migrate into the
« TEST » result window.
MATERIALS PROVIDED
Kit containing:
6 « MINIREACTOR » Devices
1 PIFA® Heparin / PF4 Package Insert
PRECAUTIONS
- Do not expose PIFA® « MINIREACTOR » to temperatures greater than 40°C (104°F) or
below 0°C (32°F).
- Allow each PIFA® « MINIREACTOR » to warm to an ambiant temperature (18-27°C), in the
individual foil sealed pouch, for a minimum of 30 minutes prior to performing the test.
The PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay must be performed
using FRESH patient serum ONLY.
Anticoagulated samples are not suitable for test
with this assay and must not be used.
- All fresh serum specimens should be collected using aseptic technique and should be
handled in accordance with good laboratory practices
- Frozen, thawed, hemolyzed, icteric, lipemic (of an excessive nature), bacterial
contaminated specimens, or controls from other test kits should not be used, and can
produce erroneous results.
- Inadequate incubation time, incomplete mixing, or improperly performed test
procedures can produce erroneous results
- See also 10. Limitations
QUALITY CONTROL
The PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay is a single-use / unit use test system.
Akers Biosciences Inc. recommends that the laboratory analyzes a sample representative
of the lot for Quality Control.
It is also recommended that a positive and negative control be utilized in the following
circumstances:
®
The PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay is based upon principles of the Particle
ImmunoFiltration Assay (PIFA®). Dyed microparticles coated with purified Platelet Factor
4 (PF4) protein derived from platelet-rich plasma provide the visual signal for the results
of the assay. The ability of matrixed or non-matrixed particles to move through a filter
medium is the measure of the reactivity / nonreactivity of the test sample.
5.
Please note:
- Do not freeze tests.
- If the test is frozen upon receipt, results will be invalid.
- Do not use any tests beyond their expiration date.
9.
SPECIFICITY / SENSIBILITY
ELISA
Positive
Devices that have been removed from refrigeration and stored at an ambient
temperature for a maximum of 8 hours may be returned to refrigeration for future use.
8.
originating from field sources. The standard laboratory method was a commercially
available ELISA technique.
STORAGE CONDITIONS
The PIFA® « MINIREACTOR » must be stored refrigerated at 2-8°C (36-46°F).
EXPLANATION
HIT is caused by heparin-dependent antibodies formed to the heparin / platelet factor
4 complex, and 1-5% of adults exposed to heparin develop these antibodies(1). These
antibodies are initially formed when a patient has been on heparin therapy for five or
more days. An immune response to a heparin dose may be observed sooner (1-2 days) if
the patient has had previous exposure to heparin. The hallmark symptoms of HIT are a
drastic fall in platelet count and thrombosis. Other symptoms may include cutaneous
reactions, from a simple allergic reaction to lesions to necrosis.
4.
Pipettor capable of delivering 30 µL and disposable tips
Timing device
Positive and negative controls (see 9. Quality Control)
7.
INTENTED USE
CRYOPEP
MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED
- during the initial use of a new lot of PIFA Heparin / PF4 Rapid Assay devices
- after running 100 tests of the same lot of devices
The PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay provides an internal device control with each test
run. The appearance of RED in the « CONTROL » window indicates that the device has
functioned as designed. If RED does not develop in the « CONTROL » window within a
maximum of 10 minutes after performing the test procedure, the test result is
considered invalid.
Controls should be assayed as required by your laboratory’s standard quality control
procedures using the same procedure as the specimens. Use only confirmed Heparin /
PF4 antibody positive and negative samples as controls. Akers Biosciences Inc. supplies
FDA-approved Heparin / PF4 antibody serum panels for use with the PIFA® Heparin / PF4
Rapid Assay. For information on product availability contact your local distributor.
10. LIMITATIONS
The PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay should be used for the qualitative detection of any
antibody directed against the PF4 complex, and should be used as a screening test. There
may be some antibodies reactive to the Heparin / PF4 complex that are non-reactive with
this test. Test results should not be relied upon solely to identify an antibody to the PF4
complex.
PIFA®
Negative
Positive
21
3
Negative
2
153
Specificity :
Sensibility :
98.1%
91.3%
Overall
agreement :
97.2%
REPRODUCTIBILITY
The reproducibility of the PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay in detecting Heparin / PF4
antibodies was demonstrated by testing 10 aliquots of 5 specimens for inter-day
evaluation and 10 aliquots for intra-day evaluation. Reproducibility of the PIFA® Heparin /
PF4 Rapid Assay was determined to be 100% in both studies.
12. REFERENCES
1. Warkentin Theodore, Heparin Induced Thrombocytopenia : A Ten Year Retrospective,
Annual Review in Medicine, 1999, vol. 50, pp 129-47
2. Daneschvar H.Leon (MD), Daw Hamed (MD): How to Interpret and Pursue an Abnormal
Complete Blood Cell Count in Adults, Mayo Clinic Proc., 2005, 80:1389-1394, Mayo
Foundation for Medical Education and Research
3. CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) H18-A3: Procedures for the Handling
and Processing of Blood Specimens, Approved Guideline -- 3rd ed. (2004) (ISBN 156238555-0)
13. MANUFACTURER
Akers Biosciences Inc.
201 Grove Road, Thorofare
NJ 08086 USA
Tel: +1-856-848-2116
Fax: +1-856-848-0269
E-mail: [email protected]
www.akersbiosciences.com
14. EUROPEAN REPRESENTATIVE
MDSS
Schiffgraben 41
D-30175 Hannover
Germany
PN 1322003 R7 06/13
15. DISTRIBUTOR
ZAC Parc 2000
83 rue Yves Montand
34080 Montpellier
France
Tel : +33 (0) 467 10 71 20
Fax : +33 (0) 467 10 71 21
Email : [email protected]
www.cryopep.fr
A positive test result may be indicative of a Heparin / PF4-related antibody in the test
sample. However, the presence of these antibodies does not confirm the diagnosis of HIT
or HITT. Therefore, results obtained from the PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay should be
interpreted along with other serological tests and clinical findings.
11. PERFORMANCES DU TEST
Akers Biosciences Inc. has conducted a series of evaluations to determine the
performance of the PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay for the detection of antibodies to the
Heparin / PF4 complex.
Studies were performed by outside laboratories to determine the performance of the
PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay compared to standard laboratory methods using samples
Distributeur en France : CRYOPEP 83, rue Yves Montand, 34080 Montpellier Tel: 04 67 13 21 00
Version 2015/03
En
4.
« SAMPLE
WELL »
PRE-TEST PREPARATION
CRYOPEP
4.
At the end of the 1 minute timing, pull tower up to the stop position.
Before beginning the test procedure :
« REAGENT »
« TOWER »
WINDOW
1. Remove the PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay from refrigeration and allow
to sit in the foil sealed pouch at an ambient temperature (18-27°C / 6481°F) for a minimum of 30 minutes. Make sure the device is not cold to the
touch.
« TEST »
WINDOW
4
The PIFA® « MINI-REACTOR » that is removed
from the foil sealed pouch should be used within 60 minutes.
2. Visually inspect device to confirm date of use is prior to expiration date.
« CONTROL »
WINDOW
3. Label the device with the patient’s identification number and place on a
level surface.
5.
TEST PROCEDURE
5.
1. Push the « TOWER » down completely to release the reagents in to the
reaction chamber.
PIFA Heparin / PF4 « MINIREACTOR »
1.
5
1
®
Tilt the « MINI-REACTOR » 45° so that the « TOWER » portion is elevated.
tap the results flange with finger until a BLUE color appears in the
« reagent » window.
SPECIMEN COLLECTION
FRESH serum must be used
with the PIFA® Heparin / PF4 Rapid Assay.
Do not use frozen and / or thawed specimens.
In accordance with CLSI Guideline H18-A3, “Procedures for the Handling and
Processing of Blood Specimens”, serum should be separated from contact
with cells within a maximum of 2 hours of the draw(3).
Whole blood specimens must be collected in red top tubes ONLY. Plain,
glass red top tubes OR plastic, red top tubes, with clot activator must be
used to obtain patient specimens; no other collection tubes are
recommended for use, including gel serum separation tubes (SST).
2.
2.
IMPORTANT : Patient specimen should not stand on the clot for longer than
60 minutes after centrifugation or the PIFA® test result may be invalid.
Using a pipettor, obtain a 30 µL sample of the patient’s FRESH serum.
Insert the pipettor tip into the « SAMPLE WELL » in the « TOWER ». When the
pipettor tip makes contact with the bottom of the well, pull up slightly
and dispense the sample.
6.
Lay unit on a level surface. When a RED color appears in the « CONTROL »
window, interpret the result in the « TEST » window in well-lit conditions.
The test result is stable for one (1) hour.
Since flow rate is sample dependent, the time interval for a RED color to
develop in the « CONTROL » window varies, ranging from 1 to 10 minutes.
SPECIMEN PREPARATION
1. Clot activation : Patient specimens must be allowed to clot before
centrifugation
- Plastic, Red Top Tubes with Clot Activator :
Consult collection tube manufacturer’s instructions for mixing
protocols and recommended clotting times (clotting times range
from thirty (30) to sixty (60) minutes).
- Plain, glass red top tubes :
Allow specimen to clot for approximately 30 minutes.
2. Centrifugation : The specimen should be centrifuged at the end of the
clotting period in strict accordance with the collection tube
manufacturer’s instructions for speed and duration of centrifugation.
3.
Blue color appears in
« RÉAGENT » window
2
If RED fails to appear in the « CONTROL » window, beyond the 10 minutes mark,
the test result is considered invalid.
6.
INTERPRETATION OF RESULTS
The following PIFA® Interpretation Guide is provided to assist in the
determination of the results :
3.
Slide the device vigorously from side-to-side for 5 seconds
(approximately 12 to 15 times), then keep it stationary and initiate
1 minute timing.
SPECIMEN STORAGE
« TEST »
« CONTROL »
WINDOW
WINDOW
NO blue*
ANY red
Positive / Reactive
ANY blue**
ANY red
Negative / Non-reactive
NO blue*
NO red
Invalid
ANY blue**
NO red
Invalid
Result
*
Properly prepared serum that has been removed from the clot, but cannot
be tested immediately, should be stored refrigerated (2-8°C; 36-46°F) for no
longer than 72 hours.
Note : Any refrigerated serum should reach an ambient temperature prior
to performing the test.
3
Reactive / Positive Result : The « TEST » window may appear to be a pale
grey or « wet white » color as the wicking material will have been moistened
by the reagent / sample mixture.
**
Non-Reactive / Negative result : The intensity of the blue color in the
« TEST » window may range from a pale blue to a vibrant blue as the color is
sample dependent.
7.
TEST DISPOSAL
Dispose of the test in accordance with applicable, standard laboratory
biohazard procedures.
Distributeur en France : CRYOPEP 83, rue Yves Montand, 34080 Montpellier Tel: 04 67 13 21 00