PNF-SAN.01.4 - Centre national de biologie expérimentale

CENTRE NATIONAL DE BIOLOGIE EXPÉRIMENTALE (CNBE)
Procédure Normalisée de Fonctionnement
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PNF-SAN.01.4
PROGRAMME DE GESTION DU STATUT SANITAIRE CHEZ LES SOURIS ET RATS
(SENTINELLES)
DESTINATAIRES: Personnel technique, vétérinaire du CNBE
OBJET:
Décrire le fonctionnement du programme de surveillance du statut sanitaire
chez les souris et rats (programme de sentinelles) afin de contrôler les variables
microbiologiques pouvant affecter les résultats de recherche.
GÉNÉRALITÉS:
Le programme de sentinelles s’applique lorsque des animaux sont hébergés
plus de 3 mois ou lorsqu’ils sont dans une pièce avec des animaux hébergés plus
de 3 mois. Il est également obligatoire pour chaque groupe d’animaux qui doit
être mis en quarantaine.
Les sentinelles, mis en contact direct ou indirect avec les animaux d’une pièce
d’hébergement pendant 6 mois, servent à détecter la présence de pathogènes
dans la population.
Des prélèvements sont effectués sur les sentinelles et analysés par un laboratoire
spécialisé (p. ex. Charles River, Wilmington) afin de déterminer le statut de
santé de la population.
Les sentinelles sont remplacées aux 6 mois.
Des prélèvements supplémentaires et des tests additionnels peuvent être
effectués au besoin, selon les circonstances, à la discrétion et suivant les
recommandations du vétérinaire.
MATÉRIEL :
- souris : femelles CD-1 de 4-6 semaines
- rats : femelles adultes CD de 4-6 semaines
- système de tatouage
- tube de contention
- aiguilles 23G (saphène) ; ≥ 21G (facial)
- seringues et aiguilles 1cc ≤ 23G1 (jugulaire)
- alcool isopropylique 70%
- gazes
- microtubes (sang /sérum)
- cartes EZ-spot™
- vaseline
- poinçon
PROCÉDURE :
1
ARRIVÉE DES SENTINELLES
1.1
Les animaux destinés au programme de sentinelles doivent provenir de fournisseurs
reconnus et être sélectionnés selon la PNF-ADM.02.
1.2
Suivre la PNF-SAN.04 Réception et acclimatation des animaux.
1.3
Tatouer les animaux selon la PNF-SAN.22 ou les identifier par un poinçonnage au niveau
de l’oreille.
1.4
Dans les 72 heures de l’arrivée, faire une première prise de sang par la veine saphène ou
tout autre site approuvé (p. ex. facial chez la souris). Prélever 250 µL de sang, attendre que
le caillot se forme (environ 30 minutes à la température ambiante) et centrifuger pour
séparer le sérum des cellules :

Tube Microvette 500 Z-Gel : 10 000g, 5 minutes, 20°C
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
1.5
2
Tube MiniCollect 0.8 ml gel activator : 3 000g (1 600-5 000g), minimum 10 minutes,
15-24°C
Identifier et conserver le sérum à -80˚C pour les besoins ultérieurs.
EXPOSITION DES SENTINELLES
2.1
Niveau de confinement 1
- Les sentinelles sont placées 2 par cage (1 cage testant 1 pièce) et maintenues dans les
mêmes conditions d’hébergement que les autres animaux de la pièce.
- Tel que décrit dans la PNF-OPE.16, la cage des sentinelles servant à tester
l’environnement primaire doit contenir une proportion d’environ 50:50 de litière propre et
de litière souillée provenant de toutes les cages de la pièce.
- La cage des sentinelles servant à tester la litière souillée (environnement primaire) doit
être placée à une extrémité au bas du portoir, branchée à l’arrivée d’air et identifiée par
une carte de cage rouge.
2.2
Niveau de confinement 2
- En plus d’une cage de sentinelles exposée à la litière souillée, une deuxième cage de 2
sentinelles, non branchée à l’arrivée d’air du portoir, avec litière propre et sans couvercle,
est ajoutée dans la pièce d’hébergement de niveau de confinement 2 pour tester l’efficacité
de la barrière (environnement secondaire).
3
PRÉLÈVEMENTS
3.1
3 mois d’exposition
- Faire une prise de sang sur les 2 sentinelles (veine/artère faciale ; goutte de sang sur une
carte EZ-Spot™, sécher et identifier)
- Les cartons EZ-spot sont fournis sur demande par le laboratoire.
- Ne pas mettre les doigts sur le papier buvard.
- Remplir un cercle avec le sang d’un animal (4 animaux/carton). Identifier chaque spot
avec une étiquette.
- Inscrire la date et les pièces sur le dessus du carton. Conserver à température pièce jusqu’à
l’envoi.
- Acheminer l’échantillon au laboratoire diagnostique pour les tests de sérologie.
- Si des résultats sont positifs, un second échantillonnage et des tests supplémentaires
pourront être demandés par le vétérinaire.
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3.2
6 mois d’exposition
- Envoyer les 2 sentinelles (animaux vivants) au laboratoire pour une expertise complète :
sérologie (agents), parasitologie (endoparasites, ectoparasites, œufs d’oxyures) et
bactériologie.
4
5
6
QUARANTAINE
4.1
Les sentinelles placées dans une quarantaine servent à s’assurer que les animaux provenant
d’un fournisseur non reconnu (p. ex. animalerie d’université) sont exempts des pathogènes
exclus avant d’être acheminés dans une pièce d’hébergement.
4.2
Chaque groupe d’animaux provenant d’un envoi d’un même fournisseur destiné à un
responsable de projet et un numéro de protocole doit posséder ses propres sentinelles.
4.3
Suivre les procédures décrites aux sections 1.3, 1.4 et 1.5.
4.4
La cage des sentinelles servant à tester la litière souillée doit être branchée à l’arrivée d’air
du portoir, placée au bout de la rangée des cages provenant d’un même envoi et identifiée
par une carte de cage rouge avec les informations requises.
4.5
Après une période d’exposition de 40 jours (ou plus selon les directives du vétérinaire),
envoyer les 2 sentinelles (animaux vivants) au laboratoire pour expertise complète.
MORTALITÉ
5.1
Vérifier auprès du vétérinaire clinicien les procédures à suivre lorsqu’un animal sentinelle
est trouvé mort.
5.2
Toute anomalie décelée pendant la nécropsie doit être immédiatement rapportée au
vétérinaire.
5.3
Effectuer une prise de sang sur un animal de la même cage pour l’analyse sérologique.
PATHOGÈNES
6.1
Vérification trimestrielle (aux 3 mois) :
Souris : LCMV, MPV (1 et 2), MVM, NS-1, MHV, TMEV (GDVII), SEND, PVM, REO,
MPUL, EDIM, MNV
Rat : RPV, H-1, KRV, RMV, NS-1, SDAV, RTV, PCAR (RRV), SEND, PVM, REO,
MPUL, LCMV
6.2
Vérification annuelle (une fois par année) :
Souris : LCMV, MPV (1 et 2), MVM, NS-1, MHV, TMEV (GDVII), SEND, PVM, REO,
MPUL, EDIM, MNV, ECTRO, MAV, POLY, K
Rat : RPV, H-1, KRV, RMV, NS-1, SDAV, RTV, PCAR (RRV), SEND, PVM, REO,
MPUL, LCMV, MAV
6.3
Description des abréviations
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Abréviation
ECT ou ECTRO
EDIM
H-1
K
KRV
LCM ou LCMV
MAV
MHV
MNV
MPUL
MPV
MVM
NS-1
PCAR (RRV)
POLY
PVM
REO
RPV
RTV
SDAV
SEND
TMEV
7
Pathogène ou maladie
Ectromelia virus
Rotavirus, Epizootic Diarrhea of Infant Mice
Toolan’s H-1 virus
Pneumonite virale de la souris-papovavirus de la souris
Kilham rat virus
Lymphocytic choriomeningitis virus
Mouse adenovirus
Mouse hepatitis virus
Mouse norovirus
Mycoplasma pulmonis
Mouse parvovirus (1 and 2)
Minute virus of mice
Recombinant mouse parvovirus protein
Rat respiratory virus
Polyomavirus
Pneumonia virus of mice
Reovirus 3
Rat parvovirus
Rat theilovirus
Rat coronavirus
Sendai virus
Mouse encephalomyelitis virus, Theiler’s disease, GDVII
ENVOI DES ÉCHANTILLONS
7.1
Commander les tests désirés (p. ex. HM assessment, MFIA) chez Charles River
https://ltm.criver.com/LTMCatalog/
7.2
Imprimer et faire signer le formulaire de réquisition par le vétérinaire pour chaque envoi de
cartons E-Z spots et écouvillons ou d’animaux. Sauvegarder une copie.
7.3
Les boîtes avec séparateurs sont fournies par Charles River.
7.4
Mettre 1 cage (2 souris) par séparateur, 3 cages par boîte ou 1 cage (2 rats) par boîte. Coller
les cartes de cages à l’intérieur du couvercle vis-à-vis les animaux correspondants.
7.5
Mettre de la nourriture et de l’hydrogel dans la boîte pour le transport.
7.6
Fermer la boîte.
7.7
Joindre le formulaire de réquisition signé.
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RÉFÉRENCES
Charles River Laboratories International Inc 2014 EZ Spot™ How to collect and prepare the
samples http://www.criver.com/files/pdfs/research-models/rm_ld_d_ez_spot.aspx
9. DOCUMENTATION
Les rapports d’analyses doivent être conservés pendant au moins 5 ans par le service vétérinaire ou
dans le dossier du protocole.
ENTRÉE EN VIGUEUR : 2 décembre 2016