Phadebact® Monoclonal GC Test

53-1139-04, Mar-12
Phadebact®
Monoclonal GC Test
Mode d´emploi
MKL Diagnostics AB
Kung Hans Väg 3
192 68 Sollentuna
Sweden
Co-agglutination
Staphylocoques recouverts d´anticorps
Microorganismes possédant les
antigènes correspondants
UTILISATION
Phadebact® Monoclonal GC Test est destiné à l´identification de Neisseria gonorrhoeae.
RESUME ET INTERET DU TEST
L’agent responsable de la blennorragie, maladie sexuellement transmissible est N. gonorrhoeae. Certains microorganismes autres que Neisseria gonorrhoeae appartiennent au genre Neisseria. Ces autres Neisseria sont:
1.
N. meningitidis (1), responsable de la méningite épidémique et de la méningococcie, est occasionnellement
rencontrée dans les écoulements vénériens. De plus, elle peut se trouver dans le nasopharynx sans
observation de symptômes cliniques.
2.
N. sicca (1), N. subflava (1), N. flavescens (1), N. mucosa (1), et N. lactamica peuvent toutes se trouver dans
le naso-pharynx sans observation de symptômes cliniques. Elles sont occasionnellement pathogènes. De plus
Moraxella (Branhamella) catarrhalis peut se trouver sur les membranes muqueuses, y compris le pharynx et
occasionnellement dans les écoulements vénériens. Elle peut aussi se révéler pathogène.
Afin de différencier N. gonorrhoeae des autres Neisseriae, il est nécessaire de pratiquer des tests de confirmation.
Différentes méthodologies peuvent être utilisées pour confirmer l’identification. Le test de fermentation des sucres est
actuellement la méthode de référence. On peut également utiliser une technique en immunofluorescence. Cependant,
les limites techniques et pratiques de ces deux méthodologies réduisent leur application et leur utilisation pour la
confirmation de l’identification de N. gonorrhoeae.
La technique de co-agglutination a été appliquée pour la confirmation de l’identification de N. gonorrhoeae (2). Phadebact®
Monoclonal GC Test est basé sur cette technique.
PRINCIPE DU TEST
Les réactifs Gonocoques WI et WII/III sont composés de deux pools d’anticorps monoclonaux de souris qui
réagissent avec protéine une membranaire spécifique du gonocoque nommé protéine I (3). Les gonocoques
contenant de la protéine IA sont classés en sérogroupe WI tandis que les gonocoques contenant de la protéine
IB appartiennent au sérogroupe WII/III (4). Les réactifs Gonocoques WI et WII/III sont composés d´anticorps
monoclonaux fixés à la protéine A de Staphylocoques tués. Quand on mélange un échantillon contenant du
gonocoque avec le réactif Gonocoque WI et WII/III, les antigènes de protéine I de la cellule se lient aux anticorps
monoclonaux spécifiques. Il se forme alors un réseau de co-agglutination, qui est visible à l’oeil nu.
REACTIFS
Chaque trousse de Phadebact® Monoclonal GC Test contient suffisamment de réactifs pour un minimum de 50
déterminations. Les réactifs sont colorés en bleu (bleu de méthylène) pour faciliter l’interprétation des résultats.
Composants du test
•
Réactif Gonocoque WI composé d´anticorps
monoclonaux de souris dirigés contre la protéine
IA, fixés sur des Staphylocoques tués.
•
Réactif Gonocoque WII/III composé d´anticorps
monoclonaux de souris dirigés contre la protéine
IB, fixés sur des Staphylocoques tués.
1 flacon
1 flacon
Autres composants
•
Ecouvillons
•
Lames jetables
•
Mode d’emploi
Précaution
Pour usage in vitro uniquement.
Attention! Les réactifs contiennent comme conservateur de l´azide de sodium (NaN3) qui peut réagir avec le plomb
et le cuivre des tuyauteries pour former des azides métalliques fortement explosifs. Au moment d´éliminer les réactifs,
rincer abondamment pour éviter la formation de ces composés explosifs.
Préparation des réactifs
Les réactifs sont PRETS A L’EMPLOI.
Conservation
La date de péremption est indiquée sur l’étiquette extérieure et sur les étiquettes des flacons. La température
recommandée pour la conservation de la trousse est de 2-8°C. Ne pas congeler les réactifs.
RECUEIL ET MANIPULATION DES ECHANTILLONS
Se référer à un manuel standard de microbiologie pour ce qui concerne le recueil et la manipulation des échantillons.
Ceux-ci peuvent être prélevés partout où la présence de gonocoques viables est suspectée.
Si l’on doit transporter l’échantillon jusqu’au laboratoire pour la culture et l’identification, l´écouvillon devra être inoculé
ou immergé dans un milieu de transport, tel que le milieu Transgrow ou le milieu de Stuart (5,6). L’échantillon devra être
protégé des différences de température trop importantes et devra arriver au laboratoire dans les 24h (5). Alternativement,
l’écouvillon peut être inoculé sur une boite de Petri contenant un milieu de croissance approprié, incubé et, après
croissance, envoyé au laboratoire pour l’identification (6).
Les échantillons prélevés chez des sujets sous antibiotiques peuvent contenir très peu ou aucune bactérie viable.
METHODE
Matériel fourni voir REACTIFS.
Matériel nécessaire mais non fourni
•
Culture primaire contenant des micro-organismes diplocoques gram moins et oxydase plus
•
Anses d’inoculation
•
Bain-marie
•
Solution saline 0,9%
Paramètres du test
Température de réaction
Temps de réaction
Volume de réactif
température ambiante
1 minute
une goutte
Préparation des échantillons
Se référer à un manuel standard de microbiologie pour ce qui concerne la préparation des cultures primaires.
Après inoculation, le milieu devra être incubé à 35-37°C sous une atmosphère humide contenant 3 à 7% de
CO2 pendant 16 à 24 heures (7). Les colonies présumées N. gonorrhoeae (7) peuvent être testées ensuite par
Phadebact® Monoclonal GC Test pour la confirmation de l´identification.
•
Prélever des colonies de la culture primaire, présumées N. gonorrhoeae de façon à réaliser une suspension
légère dans 0,5 ml de solution saline à 0,9%.
•
Chauffer la suspension dans un bain-marie bouillant pendant un minimum de 5 minutes. Pour éviter toute
évaporation, recouvrir les tubes.
•
Laisser la suspension revenir à température ambiante.
•
Utiliser une goutte de la suspension chauffée pour le test.
Procéde du Test
Note! Remettre parfaitement en suspension les réactifs par agitation.
Déposer une goutte
de Gonocoque WI et
une goutte de réactif
Gonocoque WII/III sur la
lame. Fig 1.
Ajouter une goutte de la
suspension de colonies
ébouillantées au réactif
Gonocoque WI et une
goutte réactif Gonocoque
WII/III. Fig. 2.
Fig. 2
Fig. 1
Homogénéiser doucement les
gouttes avec une anse jetable.
Utiliser une nouvelle anse pour
chaque réactif. Fig. 3.
Fig. 4
Fig. 3
Agiter la lame en
l´inclinant à 45° et lire le
résultat après 1 minute.
Fig. 4.
Stabilité du mélange réactionnel final
La réaction de co-agglutination est stable mais il est préférable de lire le résultat au bout de 1 minute tant que le
mélange est encore humide (il y a risque d’évaporation produisant l’assèchement des réactifs, qui peut conduire à
une mauvaise interprétation des résultats).
Calibration
Aucune calibration n’est nécessaire.
Pour le contrôle de qualité
Contrôle positif
Pour le contrôle de qualité, utiliser soit les contrôles positifs Phadebact® GC (extraits purs de N. gonorrhoeae prêts â
l´emploi), soit des souches de référence fraichement obtenues comme ATCC 19424 (sérogroupe WI) et ATCC 49498
(sérogroupe WII/III).
Contrôle négatif
L’usage en parallèle des deux réactifs pour l’identification d’un échantillon inconnu conduit à la réalisation d’un
contrôle négatif, car les infections avec un mélange de souches sont rares. En effet, si la bactérie appartient à l´un
des groupes WI ou WII/III, une co-agglutination avec le réactif Gonocoque correspondant apparaîtra et l´autre réactif
Gonocoque donnera un résultat négatif.
Aspect visuel des réactions
Aucune réation
Réaction positive
RESULTATS
Résultat positif
Une réaction avec soit le réactif Gonocoque WI soit le réactif Gonocoque WII/III constitue un résultat positif. Un
résultat positif fournit une identification définitive de N. gonorrhoeae (voir CARACTERISTIQUES DU TEST). Une
réaction positive de la même souche avec les 2 réactifs doit être considérée comme un résultat équivoque.
Diluer la suspension traitée 2 à 4 fois dans de solution saline á 0,9%, et refaire le test.
Résultat négatif
Une absence de réaction avec les réactifs Gonocoque WI et WII/III constitue un résultat négatif. Un résultat négatif
suggère fortement que la bactérie testée n´est pas une N. gonorrhoeae (voir CARACTERISTIQUES DU TEST).
LIMITES DU TEST
Utiliser un autre test d´identification (Biochimique si possible) quand la culture supposée positive donne un résultat
douteux par le test de co-agglutination. Des résultats positifs sont obtenus avec des prélèvements extra-génitaux
chez des patients présentant de faibles risques d´infection gonococcique. Ce type de résultats est obtenu également
avec des prélèvements génitaux ou extra-génitaux d´enfants.
CARACTERISTIQUES DU TEST
Spécificité et sensitivité
Au total, 1366 prélèvements génitaux et rectaux de femmes, urétraux et rectaux d’hommes et de gorge ont été
examinés (8). Les échantillons ont été identifiés par le test de fermentation des sucres et/ou par la technique
d’immuno-fluorescence.
Positif par la méthode de référence
Positif par la co-agglutination
1080
1077
Sensitivité:
99.7%
Négatif par la méthode de référence
Négatif par la co-agglutination
286
286
Spécificite:
100%
Note! Une réaction faussement positive avec N. meningitidis a été reportée dans deux occasions.
GARANTIE
Les résultats présentés ici ont été obtenus en suivant exactement le protocole décrit. Tout changement ou
modification dans ce protocole non recommandé par MKL Diagnostics AB, peut affecter les résultats, auquel cas
MKL Diagnostics AB décline toute responsabilité exprimée, implicite ou établie par la loi, y compris la responsabilité
impliquée par la vente ou le transport pour son utilisation. MKL Diagnostics AB dans une telle éventualité ne peut être
rendue responsable des dommages indirects ou conséquences en résultant.
Réferences:
1.
Murray P R, Baron E Jo, Pfaller M A, Jorgensen J H, Yolken R H: Manual of Clinical Microbiology. 8th ed. ASM
Press, Washington DC, 2003.
2.
Danielsson D & Kronvall G: Applied Microbiol 27 (1974), pp 368-374.
3.
Tam M R et al: Serological classification of Neisseria gonorrhoeae with monoclonal antibodies. Infect and
Immun 36: pp 1042-53, 1982.
4.
Sandström E G et al: Serology of Neisseria gonorrhoeae: Coagglutination Serogroups WI and WII/III correspond
to different outer membrane protein I molecules. Infect and Immun 38: pp 462-470, 1982.
5.
Danielsson D & Johansson G: Culture diagnosis of gonorrhea. Acta Derm Venerol 53 (1973), p 75.
6.
USDHEW: Criteria and Techniques for the Laboratory Diagnosis of Gonorrhea. CDC Atlanta 1975.
7.
Neisseria gonorrhoeae and gonococcal infections. WHO Technical Report Series 616, 1978.
8.
Young H, Moyes A: Utility of monoclonal antibody coagglutination to identify Neisseria gonorrhoeae. Genitourin
Med. 65 (1989), pp 8-13.
9.
Data on file. MKL Diagnostics AB
Phadebact® COA System
Phadebact® Streptococcus Tests
Phadebact® Streptococcus Respiratory Test
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D Tests
Phadebact® Strep F Test
Phadebact® Strep Positive Controls
Phadebact® Pneumococcus Test
Phadebact® Haemophilus Test
Phadebact® GC Positive Controls
Phadebact® CSF Test
Phadebact® CSF Positive Controls
Phadebact® Extraction Solutions
Phadebact® Monoclonal GC Test
Phadebact® ETEC-LT Test
Phadebact® Salmonella Test
Phadebact® Staph Aureus Test
Near Patient Testing
Strep A
Phadirect®
Phadirect®
Rapid CRP Test
Pour d’autres langues: www.mkldiagnostics.com
For other languages: www.mkldiagnostics.com
Für andere Sprachen: www.mkldiagnostics.com
Para otros idiomas: www.mkldiagnostics.com
Per altre lingue: www.mkldiagnostics.com
Гια άλλες γλώσσες: www.mkldiagnostics.com
Andre sprog, se venligst: www.mkldiagnostics.com
På andra språk: www.mkldiagnostics.com