Intérêt du diagnostic moléculaire dans le syndrome de Gilbert

Intérêt du diagnostic moléculaire
dans le syndrome de Gilbert
Dr François PETIT
Laboratoire de génétique moléculaire
Centre de référence des maladies héréditaires du métabolisme hépatique
Hôpital Antoine Béclère
Le syndrome de Gilbert
Affection bénigne du métabolisme de la bilirubine
Touche entre 3 et 10 % de la population
Autosomique récessif
Diagnostic moléculaire et pharmacogénétique
- population Caucasienne et Africaine : variant TA7,
- population Asiatique : mutation c.211G>A
- mutation du PBREM : c.-3279T>G
 Pénétrance incomplète : ~20% de 7/7 et ~40% de 6/7
 Autres gènes potentiellement impliqués : hèmeoxygénase 1, canal OATP2 => pas de preuves réelles




Buts de l’étude
 Mise au point d’une méthode d’analyse simultanée des
trois variants TAx, c.211G>A et c.-3279T>G
 Etude des liens génétiques entre ces anomalies de
séquence
 Etude de la prévalence de ces anomalies en population
générale et en population sélectionnée
Analyse moléculaire : 2 PCR, 1 lecture
 Plusieurs types d’anomalies = plusieurs techniques
 Variant de longueur du promoteur : PCR avec amorces
fluorescentes et mesure de longueur sur séquenceur
Permet de mettre en
évidence tous les variants
décrits : TA5, TA6, TA7 et TA8
 Mutations ponctuelles : Tétra-ARMS PCR fluorescente
Outer F
Inner F
C
Inner F
Outer R
G
Allèle 2 pathologique
Allèle 1 normal
Allèle contrôle
interne
Analyse faisable en une journée
Conclusion 1
 Technique efficace, robuste et sensible pour déterminer
les trois variants en simultané
 Contrôles internes inclus
 Coût réduit
 Résultats disponibles en 24h, extraction incluse
 Technique et analyse accréditées Cofrac en 2013
Liens génétiques entre ces anomalies
 226 patients (plus de 10 ans) et 65 témoins inclus
 Pas de différence entre valeurs observées et valeurs
attendues
 Très fort déséquilibre de liaison entre TAX et PBREM :
variants TA5, TA7 et TA8 systématiquement associés à
l’allèle G du PBREM
 Variant TA6/TA6 : pas de différence de répartition des
groupes T/T, T/G et G/G entre patients et témoins
 Variant TA6/TA7 : pas de surreprésentation de G/G chez
les patients par rapport aux témoins
Conclusion 2
 Surreprésentation des TA7/TA7 chez les patients par
rapport aux témoins
 Démonstration in vitro de la réduction de l’expression
d’UGT1A1 en présence de G/G (Li et al., 2009) mais :
- pas d’association TA7/T,
- pas de surreprésentation de G/G chez les patients
TA6/TA6 et TA6/TA7 par rapport aux témoins
 Déséquilibre de liaison : variant ancestral TA6/T,
apparition du variant TA6/G, modification du nombre de
TA plus récente intervenue chez TA6/G ? Instabilité des
configurations TA5/T, TA7/T et TA8/T ?
Prévalence génétique
 103 nouveau-nés caucasiens, à terme et ayant présenté
une hyperbilirubinémie non-conjuguée avec des
concentrations entre 85 et 727 µmol/L
 Étude du promoteur et du PBREM, séquençage des
exons 1 à 5 du gène UGT1A1
 Réduction significative des TA7/TA7 chez les nouveaunés par rapport à la population générale
Témoins
Patients
TA6/TA6
36,9 %
65,0 %
TA6/TA7
41,6 %
25,3 %
TA7/TA7
21,5 %
9,7 %
Conclusion 3
 Cause génétique de l’hyperbilirubinémie retrouvée
uniquement chez 12 patients sur 103 : 9 patients
TA7/TA7, 2 patients avec deux mutations dans les
séquences codantes et 1 TA7/mutation exon 2
 L’étude moléculaire étendue d’UGT1A1 n’apporte pas
de réponse étiologique suffisante aux
hyperbilirubinémies en période néonatale
 Elément commun retrouvé : allaitement maternel
Remerciements
Laboratoire de génétique moléculaire
Hôpital Antoine Béclère
Dr Emilie BRISELET
Liliane CAPEL
Dr Aurélie HUBERT
Frédéric PARISOT
Centre de référence des maladies
héréditaires du métabolisme hépatique
Hôpital Antoine Béclère
Dr Aurélie HUBERT
Dr Karen MILCENT
Pr Philippe LABRUNE
Et le comité scientifique de la SFEIM