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Détection rapide par culture de Streptococcus agalactiae pour le dépistage périnatal
Reto Lienhard, Marie-Lise Tritten, Alain Jacquet et Hans H. Siegrist
ADMED Microbiologie, 2300 La Chaux-de-Fonds, Suisse
Résumé:
Objectifs: Tester une méthode rapide pour la recherche de streptocoques bêta-hémolytiques du Groupe B (SGB) basée sur
la détection directe de l’antigène de Lancefield B à partir d'un enrichissement dans un bouillon Todd-Hewitt, de l’écouvillon
de dépistage périnatal.
Méthodes: Un total de 447 écouvillons pour la recherche de SGB sont mis en culture dans un Todd-Hewitt contenant de la
colistine et de l'acide nalidixique. Après une incubation de 18 h à 35°C, 100 l (2 gouttes) de bouillon prélevés autour de
l’écouvillon sont extraits selon la procédure du kit Streptex® (Remel Inc.) avant l’agglutination pour la détection des groupes
de Lancefield A,B,C,D,F et G. Simultanément chaque bouillon est repiqué sur une gélose au sang de mouton (n=447) et
pour une partie d'entre eux, sur une gélose chromogène Strepto B ID® (bioMérieux) (n=168). L’agglutination est aussi
utilisée pour identifier les colonies de la gélose chromogène ou bêta-hémolytiques. Les Todd-Hewitt présentant des
résultats discordants sont repiqués ou analysés par PCR pour contrôle.
Résultats : Parmi les 81 bouillons présentant une agglutination directe positive pour un SGB, 80 ont été confirmés. Pour 1
bouillon positif il n’a pas été possible de mettre en évidence un SGB. Sur les 366 bouillons sans agglutination, ou positif
pour un autre groupe, seul 1 repiquage a révélé des SGB sur gélose au sang de mouton et gélose chromogène (sensibilité
= 98,7%, spécificité = 99,7%) .
Conclusion: L
L’agglutination
agglutination directe d’un
d un bouillon d’enrichissement
d enrichissement contenant l’écouvillon
l écouvillon de dépistage donne une réponse
rapide dans les 24h par une méthode sensible et spécifique pour la détection des SGB. La procédure s’intègre dans le flux
des analyses d’un laboratoire de bactériologie médicale et son coût est faible.
Introduction
Le streptocoque du groupe B (SGB) est reconnu depuis les années 70 comme une
cause majeure d’infections néonatales pouvant conduire à la mort. L’antibioprophylaxie intra-partum administrée aux femmes porteuses de cette bactérie permet
de réduire de façon importante ces risques. Les directives de 2002 du CDC
recommandent l’utilisation d’un milieu sélectif d’enrichissement avant de procéder
aux cultures traditionnelles sur milieux solides. Cette procédure étant relativement
lente ((48 heures au minimum)) nous avons testé une méthode simplifiée
p
permettant
p
de donner un résultat fiable dans les 24 heures après réception de l’échantillon.
Résultats
Matériel et méthodes
J0
Ecouvillon inoculé dans
Bouillon Todd-Hewitt
Culture + gr B
Culture – ou
autre groupe
Total
18 heures 35°C
Agglutination
positive
Lancefield gr B
Agglutination
négative
ou autres groupes
Total
80
1
81
1
365
366
81
366
447
Sensibilité: 98,7% Spécificité: 99,7%
Tableau 1 : Résultats de l’agglutination directe par rapport à celui des
cultures après enrichissement
J1
Agglutination
A
l i i
directe
Colonie rose
Colonie autre ou
stérile
Total
Groupe B
34
0
34
Non groupe B
51
117
168
85
117
202
18 heures 35°C
Total
J2
Sensibilité: 100% Spécificité: 69.6%
Tableau 2 : Comparaison colonie rose sur milieu chromogène StreptoB ID®
vs groupage par agglutination des colonies
Columbia au sang
StreptoB ID®
J0.
Inoculation des écouvillons vaginaux/rectaux prélevés en fin de grossesse
(n=447) dans le bouillon Todd-Hewitt sélectif (colistine 10mg/l + acide
nalidixique 15 mg/l) et incubation 18 h à 35°C
J1.
Prélèvement de 100 l pour agglutination Kit Streptex® (Remel Inc.)
Repiquage du bouillon sur Columbia au sang de mouton incubé en
anaérobiose 18 h à 35 °C
Repiquage sur gélose chromogène Strepto B ID® (BioMérieux) incubés
18h à 35°C en CO2
J2.
Observation de l’hémolyse sur gélose au sang et agglutination des
colonies
Observation des colonies roses pour la présence de S.agalactiae et
agglutination des colonies
Discussion
La corrélation entre l’agglutination du Todd-Hewitt et les cultures est excellente
(n=447). Un prélèvement sur les 81 positifs n’a pas été détecté (sensibilité = 98.7%).
Le groupe Lancefield associé est le D (11.1%), mais il ne cache jamais le groupe B.
Un échantillon sur les 366 négatifs en cultures a donné une agglutination directe en B
seulement (spécificité = 99,7%). Ce faux positif a toutefois été confirmé pour
S.agalactiae par PCR sur le bouillon. Les réactions croisées connues sur le groupe B
sont exceptionnelles et n’altèrent donc pas les résultats.
Le repiquage sur la gélose StreptoB ID® (n
(n=202)
202) a montré une très bonne sensibilité.
Une colonie rose sur cette gélose chromogène par contre nécessite une confirmation
par groupage de Lancefield car la valeur prédictive positive est très faible
(VPP=40%). Cette faible valeur est probablement due à la difficulté d’interprétation
de la couleur qui peut-être améliorée par une incubation à 48h ou par l’expérience.
Elle a aussi l’avantage de détecter 5.9% (2/34) de souches non hémolytiques.
La méthode rapide donne une réponse le lendemain matin (J1) et ne nécessite pas de
repiquage qui reporte le délai de réponse au surlendemain (J2). Elle n’est pas aussi
rapide que la détection génomique directe sur le prélèvement mais l’antibiogramme
reste disponible sur demande et l’analyse est moins coûteuse. Elle permet même
d’envisager une incubation du prélèvement dans le Todd-Hewitt comme milieu de
transport avant l’acheminement au laboratoire.
Conclusion
La détection par agglutination directe des SGB à partir du bouillon d'enrichissement est une méthode sensible, spécifique, rapide et peu coûteuse. Si un
antibiogramme est nécessaire la souche reste disponible après repiquage. Cette méthode est pratiquement aussi rapide que la PCR, moins chère, et
accessible à tout laboratoire de microbiologie.