Université Paris-Sud - Centre National de la Recherche Scientifique
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Écologie, Systématique et Évolution PROCÉDURE SYBR SAFE USAGERS Utilisation comme marqueur d’acides nucléiques Le SYBR Safe est un agent d'intercalation utilisé comme marqueur d'acide nucléique. Bien qu'il soit considéré comme peu ou pas génotoxique dans les documentations fournies par Invitrogen, les protocoles d'usages et d'élimination des déchets mis en place pour le Bromure d'Ethidium seront impérativement respectés pour le SYBR Safe. Protocole d'utilisation les stagiaires doivent impérativement être accompagnés de leur responsable de stage lors d'une première utilisation. Blouse fermée et gants sont obligatoires pour manipuler le SYBR Safe. 1. Placer le gel d'agarose sur la pelle plastique réservée à cet usage. Déposer le gel dans le bain de SYBR Safe 1X en le faisant glisser délicatement du support afin d'éviter les éclaboussures et en évitant de mettre les doigts directement dans le bain. Enlever les gants et les jeter dans la poubelle à déchets BET marquée "gants + papiers absorbants contaminés" placée sous la paillasse. 2. Laisser tremper le gel de 20 à 30 mn suivant la dimension du gel. 3. Déposer un petit stock de papier absorbant près de la chambre d'exposition UV avant toute manipulation (Celui-ci servira à essuyer la chambre après usage). Ouvrir la chambre d'exposition UV et allumer l'interrupteur électrique situé sur la multiprise ainsi que les différents appareils de prise de vue avant de manipuler le gel. Récupérer le gel avec la pelle plastique en évitant toujours de mettre les doigts directement dans le bain. Égoutter le gel délicatement avant de le placer dans la chambre d'exposition UV. Si le gel est trop grand pour être manipulé avec la pelle plastique, changer (après manipulation du gel) le gant de la main qui va servir à manipuler les appareils de prise Procédure BM 08-011 Page 1 de vue (une main doit impérativement restée "propre" pour manipuler la porte et les interrupteurs de la chambre d'exposition UV ainsi que les différents appareils de prise de vue). 4. Lorsque les prises de vues sont réalisées, éteindre les différents appareils ainsi que l'interrupteur électrique situé sur la multiprise. Jeter le gel après usage dans la poubelle blanche située sur la paillasse et marquée "gels d'agarose contaminés". Nettoyer le plateau de la chambre d'exposition UV avec le papier absorbant et jeter ce dernier dans la poubelle à déchets SYBR Safe située sous la paillasse et marquée "gants + papiers absorbants contaminés". Enlever les gants et les jeter dans la même poubelle. Le changement des bains se fait lorsque la solution a servi 10 à 12 fois (ce chiffre varie en fonction de la taille des gels) où lorsque la solution a été préparée depuis plus de 10 jours (ou lorsque on ne voit plus rien à l'exposition UV !!!). Dans ces différents cas de figure prévenir une des personnes responsables qui éliminera la solution usagée et préparera une nouvelle solution. De même, lorsque l'une des poubelles à déchets SYBR Safe est pleine, prévenir un responsable pour qu'il la remplace. Il est indispensable d'indiquer sur le tableau (à disposition sur la paillasse SYBR Safe), l'utilisation du bain (taille approximative du gel (1 : petit - 2 : moyen - 3 : grand) date et initiales de l'utilisateur). Procédure BM 08-011 Page 2