Méthode d`agglutination au latex Pour la détermination quantitative

Hyaluronic acid LT
- Lire attentivement et totalement la notice avant utilisation -
992-71185-02
0809 D1
Méthode d’agglutination au latex
Pour la détermination quantitative de l’Acide Hyaluronique (AH) dans le Sérum et le Plasma
Utilisation
Application suivant les analyseurs automatiques
Saisir les paramètres conformément aux indications des appareils utilisés pour la mesure. Applications
relatives aux appareils disponibles sur simple demande.
Hyaluronic acid LT est une méthode de dosage in vitro pour la détermination quantitative de l’acide
hyaluronique (AH) dans le sérum et le plasma.
Etalonnage
La courbe d’étalonnage se fait automatiquement dans l’analyseur automatique en mesurant
l’absorbance (turbidité) en fonction de la concentration. Employer une solution saline pour une
utilisation à vide. Se référer au mode d’emploi pour effectuer l’étalonnage.
Résumé et explication du test
L’acide hyaluronique est un glycosaminoglycane non ramifié, une simple chaîne de polymères de
motifs disaccharidiques formés de N-acétyl-hexosamine et d’hexose.1 L’acide hyaluronique est
largement présent dans le tissu conjonctif et est produit principalement par les cellules
mésenchymateuses.2 L’acide hyaluronique a plusieurs fonctions, notamment la lubrification des
articulations, la prévention contre les infections bactériennes et l’hydratation des tissus cutanés en
profondeur.
L’acide hyaluronique est le meilleur marqueur pour évaluer en série la cirrhose du foie.
La concentration sérique d’AH augmente parallèlement à l’évolution de la fibrose, elle diminue
également en réponse à une thérapie par interféron chez les patients atteints d’une infection hépatique
chronique (VHC).3-9
Hyaluronic acid LT est un test de détermination quantitative de l’acide hyaluronique basé sur la
méthode de l’agglutination au latex. Cette méthode peut être réalisée, en général, sur les analyseurs
automatiques.
Résultats
Les résultats finaux sont calculés et imprimés automatiquement. La concentration est donnée en
ng/ml.
Valeurs attendues10
La valeur attendue pour l’acide hyaluronique est de 23 ± 17 ng/ml.
Limites de la procédure
(1)
Principe de la méthode
Lorsque des réactifs non spécifiques (par exemple un anticorps hétérophile) sont présents
dans l’échantillon, il est possible que les résultats ne soient pas corrects. L’analyse devra être
corrélée par un avis médical et par les symptômes.
La linéarité de l’Hyaluronic acid LT va jusqu’à 1000 ng/ml. Si les valeurs en acide hyaluronique
dépassent la limite supérieure mesurable, diluer l’échantillon dans une solution saline, répéter
l’analyse et multiplier le résultat obtenu par le facteur de dilution. Lorsque la concentration de
l’acide hyaluronique de l’échantillon est comprise entre 1000 - 50000 ng/ml, le résultat ne peut
être inférieur à 1000 ng/ml.
Un échantillon est mélangé à la protéine liante de l’acide hyaluronique (HABP), et l’acide hyaluronique
de l’échantillon se combine au HABP. Afin de constituer un agrégat insoluble, des billes de latex
recouvertes d’anticorps HABP sont ajoutées et le latex se combine au mélange.
L’agrégat insoluble augmente ainsi la turbidité de la solution. Le degré de turbidité de la solution peut
être mesuré optiquement, il est proportionnel à la concentration en acide hyaluronique de l’échantillon.
(2)
Réactifs
Avertissements et précautions
Contenus et conditions de conservation
R1 :
Réactif HABP
2 flacons x 15 ml
R2 :
2 flacons x 6 ml
Réactif latex AH
•
•
Conserver à 2 - 10°C
(ne pas congeler)
Conserver à 2 - 10°C
(ne pas congeler)
•
•
•
Ingrédients
R1 :
Réactif HABP
R2 :
Réactif latex AH
Protéine liante de l’acide hyaluronique
recombinante (rHABP)
Sérumalbumine Bovine
Azide de Sodium
Latex sensibilisé avec anticorps anti-HABP
(souris, monoclonale)
Acide Borique
Sérumalbumine Bovine
Azide de Sodium
•
•
0,1%
0,09%
•
•
•
0,31%
0,5%
0,09%
•
Préparation du réactif
Utiliser le réactif HABP fourni.
Après ouverture, le conserver entre 2 - 10°C et l’utiliser dans le mois.
Utiliser le réactif AH latex fourni.
Après ouverture, le conserver entre 2 - 10°C et l’utiliser dans le mois.
•
Prélèvement et préparation de l’échantillon
•
R1:
R2:
•
•
Utiliser du sérum ou du plasma comme échantillon.
Analyser les échantillons immédiatement après le prélèvement.
La stabilité du AH est résumée ci-dessous. Tous les résultats fournis proviennent d’évaluation interne.
La stabilité de l’AH dans les échantillons peut être différente selon les caractéristiques de l’échantillon.
Les prélèvements doivent être effectués conformément aux lois et règlements locaux et nationaux. Les
échantillons doivent être considérés comme potentiellement infectieux et manipulés selon les
règlements locaux et nationaux en vigueur.
Température de conservation
Stabilité AH dans l’échantillon
-80°C
Stable jusqu’à 2 mois.
-30°C
•
•
•
•
•
•
Stable jusqu’à 2 mois.
7°C
Diminution d’environ 7% après 60 jours.
26°C
Diminution d’environ 11% après 14 jours.
•
Utiliser uniquement in vitro.
Ce test est réservé à des professionnels habilités à le réaliser selon les lois locales et
nationales en vigueur.
Utilisation externe uniquement (humains et animaux).
Ne pas mélanger les réactifs de différents lots.
Conserver les réactifs dans les conditions précisées. Ne pas utiliser les réactifs après la date
de péremption.
N‘utiliser les réactifs que pour l’usage prévu sur cette notice.
Ne pas utiliser les réactifs pour toute autre procédure que celle décrite dans cette notice. Nous
ne saurions garantir la fiabilité des résultats en cas d’utilisation d’une procédure différente.
Se servir des appareils conformément au mode d’emploi et dans les conditions correctes. Se
référer au manuel du constructeur pour les détails.
Ne pas utiliser de réactifs qui auraient été congelés par erreur.
Utiliser de préférence les réactifs immédiatement après ouverture. Si vous stockez des réactifs
ouverts, bien fermer les flacons et les conserver les dans les mêmes conditions que celles
décrites pour les réactifs neufs.
Ne pas utiliser les emballages ou tout autre partie du coffret pour autre chose que ce que cette
notice décrit.
Avant d’utiliser le réactif latex AH, homogénéiser le réactif en retournant lentement le
flacon.
Le matériel d’étalonnage est vendu séparément. Pour l’utiliser lire la notice du coffret.
En cas de résultats trop élevés ou trop bas, vérifier la turbidité. Si les résultats vous paraissent
douteux, vérifier la réaction ou diluer l’échantillon et répéter l’analyse.
La prise de nourriture a pour conséquence une élévation de la concentration en acide
hyaluronique dans le sang ou le plasma. Faire les prélèvements à jeun.
En cas de contact avec la bouche, la peau, ou les yeux, rincer immédiatement à grande eau.
Contacter un médecin ou votre centre antipoison.
L’ensemble du matériel en contact avec les échantillons doit être traité avec attention afin
d’éviter d’éventuelles infections.
Tout objet, y compris les réactifs et les flacons de réactifs, qui entre en contact avec le
prélèvement doit être considéré comme potentiellement infectieux.
Les réactifs R1 et R2 contiennent 0,09% d’azide de sodium comme stabilisateur. L’azide de
sodium peut réagir au contact du cuivre ou du plomb et former des composés explosifs. Malgré
la faible quantité d’azide de sodium contenue, il convient de rincer les évacuations d’eau
lorsqu’on y vide le produit.
Les réactifs contiennent 3090 mg/l d’acide borique (540 mg/l sous forme de bore).
Porter des vêtements de protection lorsque vous jetez les eaux usées, la cuve échantillon et le
disque de mesure afin d’éviter tous risques infectieux.
Eliminer les réactifs conformément aux lois locales et nationales en vigueur.
Substances interférentes
Indications physique et chimique concernant l’instabilité
a)
La présence d’un précipité dans les réactifs ou des valeurs de contrôle en dehors de la gamme
acceptable fournie par le fabricant peut indiquer une instabilité du réactif.
b)
Instruments
Le réactif doit être utilisé sur les analyseurs automatiques présents sur le marché. Consulter le manuel
d’instruction pour la description du mode opératoire et les spécifications de l’appareil. Il est
indispensable que l’utilisateur procède à une validation dans son laboratoire en pratiquant un nombre
suffisant de mesures sur des échantillons appropriés de sérums de contrôle ou de patients.
L’acide ascorbique, la bilirubine et l’hémolyse n’ont pas d’influence significative sur les
analyses.
Les anticoagulants de type héparine, citrate, oxalate et EDTA, et le fluorure de sodium utilisés
comme inhibiteur glycolytique, en quantité habituelle, n’ont pas d’influence significative sur les
analyses.
Performances
Ces données ont été obtenues en utilisant un Hitachi®917s.
Linéarité
Procédure standard
Température: 37°C (Hitachi®917s)
0
Les concentrations en acide hyaluronique jusqu’à 1000 ng/ml étaient linéaires dans l’évaluation
réalisée suivant le protocole CLSI EP6-A.
4,6
5,7
8,6
9,8 (min)
Sensibilité
Mesure (2 POINTS)
Ï
Echantillon: 2,5 µl
R1: 150 µl
Ï
R2: 50 µl
FR.IT
Calibrateur: Wako HA Calibrator Set (disponible séparément).
La limite de détection de cette méthode est de 5,8 ng/ml. Cette limite a été fixée suivant le protocole
CLSI EP17-A.
Longueur d’onde
Principale: 800nm
Secondaire: ---
Produit par:
1
Wako Chemicals GmbH
Fuggerstraße 12, D-41468 Neuss
Telephon(e): + 49 - 2131 - 311 - 0
Facsimile: + 49 - 2131 - 311 - 100
URL: www.wako-chemicals.de
FR 0809 D1
Hyaluronic acid LT
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Méthode d’agglutination au latex
Pour la détermination quantitative de l’Acide Hyaluronique (AH) dans le Sérum et le Plasma
Précision
Spécimen de sérum 2
Ajouté
(ng/ml)
[Précision intra-série]
Données représentatives de la précision intra-série. Le CV de l’acide hyaluronique obtenu en
mesurant du sérum de contrôle 21 fois n’a jamais dépassé 4,3% à 38,7 ng/ml ou plus en concentration
d’AH.
Référence échantillon
Echantillon 1
Echantillon 2
Echantillon 3
Moyenne (ng/ml)
38,7
307,9
914,4
Ecart type (ng/ml)
1,7
2,8
CV (%)
4,3
0,9
Mesuré
514,7
105,2
201,8
0,9
Surcharge
(%)
---
107,3
105,2
100,9
Spécimen de sérum 3
0,00
40,0
100,0
200,0
751,6
794,8
868,1
943,3
909,2
757,1
796,6
865,5
972,0
18,3
752,5
789,2
857,0
968,5
863,5
961,3
Précision totale CV (%)
5,3
2,4
2,0
Ajouté
La spécificité a été étudiée après ajout de substances dans le sérum qui auraient pu interférer de
façon endogène sur le résultat des dosages d’acide hyaluronique.
Hémoglobine
(mg/dl)
Aucun
100
200
300
400
500
AH
(ng/ml)
67,0
66,4
68,8
63,2
66,7
62,8
93,7
100,0
99,1
102,7
94,3
99,6
Bilirubine
(mg/dl)
Aucun
10
20
30
40
50
AH
(ng/ml)
68,2
65,9
65,5
64,7
65,0
66,2
100,0
96,6
96,0
94,9
95,3
97,1
(mg/dl)
None
10
20
30
40
50
(ng/ml)
69,4
64,3
67,2
66,8
67,1
65,8
100,0
92,7
96,8
96,3
96,7
94,8
Aucun
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
68,0
68,4
69,5
69,4
65,5
67,5
100,0
100,6
102,2
102,1
96,3
99,3
Aucun
10
20
30
40
50
(ng/ml)
Rendement (%)
EDTA-2Na
(%)
AH
(ng/ml)
Rendement (%)
Citrate de
sodium
AH
(%)
(ng/ml)
Rendement (%)
Oxalate
d’ammonium
AH
(%)
(ng/ml)
Rendement (%)
Fluorure de
sodium
AH
(%)
(ng/ml)
Rendement (%)
Sodium
hépariné
AH
(%)
(ng/ml)
Rendement (%)
62,1
66,2
66,3
63,9
63,2
62,5
100,0
106,6
106,8
102,9
101,8
100,6
Aucun
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
65,0
66,2
63,5
65,8
65,6
68,3
100,0
101,8
97,7
101,2
100,9
105,1
Aucun
0,4
0,8
1,2
1,6
2,0
65,1
61,5
65,5
62,8
65,8
67,4
100,0
94,5
100,6
96,5
101,1
103,5
Aucun
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
74,6
76,3
76,4
73,9
74,0
77,6
100,0
102,3
102,4
99,1
99,2
104,0
Aucun
0,6
1,2
1,8
2,4
3,0
76,4
75,2
74,7
72,3
74,4
74,3
100,0
98,4
97,8
94,6
97,4
97,3
Aucun
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
99,4
101,8
101,7
101,9
102,8
103,5
100,0
102,4
102,3
102,5
103,4
104,1
Exactitude
L’exactitude de cette méthode a été déterminée par un test de surcharge.
Spécimen de sérum 1
Ajouté
(ng/ml)
0,00
40,0
100,0
Mesuré
83,7
140,8
235,6
39,2
80,1
141,3
242,9
40,2
79,9
142,1
240,9
Moyenne
(ng/ml)
38,6
81,2
141,4
239,8
Obtenu
(ng/ml)
---
42,6
102,8
201,2
(%)
---
106,5
102,8
100,6
Surcharge
Moyenne
(ng/ml)
753,7
793,5
Obtenu
(ng/ml)
---
39,8
109,8
207,6
(%)
---
99,5
109,8
103,8
Surcharge
La surcharge en acide hyaluronique varie entre 99,5% et 109,8% dans les gammes de concentrations
indiquées sur ce tableau.
Corrélation
Une comparaison entre l’acide hyaluronique LT et ELISA (produit de la société A) a été menée en
utilisant Hitachi®917s. Les résultats des tests sont les suivants :
Spécimen
Sérum
Coefficient de corrélation
r = 0,995 (n = 133)
Equation de régression
y = 1,004x + 1,917
x
Produit de la société A (ng/ml, sérum)
y
Wako Hyaluronic acid LT (ng/ml, sérum)
x (ng/ml)
Min = 5, Max = 805, moyenne = 113
y (ng/ml)
Min = 6, Max = 862, moyenne = 115
Une comparaison entre des échantillons de sérum et de plasma a été menée en utilisant Hitachi®917s.
Les résultats de ces tests :
Coefficient de corrélation
r = 0,998 (n = 36)
Equation de régression
y =1,013x + 0,275
x
Sérum (ng/ml)
y
Plasma (ng/ml)
x (ng/ml)
Min = 7, Max = 221, Moyenne = 63
y (ng/ml)
Min = 10, Max = 219, Moyenne = 64
Contrôle de qualité
Chaque laboratoire doit avoir un programme de contrôle de qualité. Nous vous recommandons
d’utiliser pour ce faire le coffret Wako HA Calibrator Set pour chaque analyse afin de surveiller la
performance de cette procédure. Les valeurs obtenues lors de ces contrôles doivent rester
à + 20% des valeurs communiquées.
Références
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Informations de commande
200,0
36,5
(ng/ml)
Mesuré
Spécificité
(mg/dl)
510,9
42,9
7,39
Rendement (%)
419,0
---
308,7
Acide
ascorbique
AH
357,1
(ng/ml)
2,04
(ng/ml)
519,4
308,9
Obtenu
38,5
(% )
419,6
8,1
Précision totale ST (ng/ml)
Injection souscutanée
AH
355,3
418,1
Moyenne totale (ng/ml)
Rendement (%)
513,9
313,2
355,8
Echantillon 3
Bilirubine
conjuguée
AH
200,0
312,9
Echantillon 2
Rendement (%)
100,0
415,8
(ng/ml)
Echantillon 1
Rendement (%)
40,0
354,9
Moyenne
[Précision totale]
Ci-dessous les données relatives à la précision totale. Toutes ces données ont été collectées selon le
protocole CLSI EP5-A.
Echantillon No.
0,00
316,5
Produit par:
2
Réf. catalogue
Produit
Conditionnement
992-71185
Hyaluronic acid LT
R1:
R2:
2 x 15 ml
2 x 6 ml
5 conc. x 2 ml
993-71115
HA Calibrator Set
CAL:
998-71165
HA Control Set
CONTROL: 2 x 2 conc. x 2 ml
Wako Chemicals GmbH
Fuggerstraße 12, D-41468 Neuss
Telephon(e): + 49 - 2131 - 311 - 0
Facsimile: + 49 - 2131 - 311 - 100
URL: www.wako-chemicals.de
FR 0809 D1