Imagerie microscopie confocale BAT

nouvelle méthode d’investigation
la microscopie confocale
à balayage laser
un examen complémentaire d'avenir ?
La microscopie optique à balayage
laser est une méthode non invasive
d'imagerie tomographique
à l'échelle cellulaire,
avec une résolution proche
de celle obtenue avec l’histologie.
— Connaître le principe
et l’intérêt
de la microsopie confocale
en dermatologie.
Image bidimensionnelle de microscopie confocale.
- À 15-20 µm de profondeur se trouve le stratum granulosum,
formé de deux à quatre couches de cellules granuleuses.
- Elles ont une taille de 25 à 35 µm et un noyau central,
qui apparaît noir (flèches blanches), entouré d’un cytoplasme
granuleux et plus lumineux (Barre = 25 µm).
taire non invasif en dermatologie chez
l'Homme [1, 3].
L'architecture histologique de la peau est
visualisée en trois dimensions, de façon
dynamique. La résolution est proche de
celle de l'histologie standard (0,5-1,0 µm de
résolution latérale, 4 à 5 µm de résolution
axiale), jusqu'à une profondeur de 300 à
400 µm. Cette limite d'exploration est due à
la faible pénétration des ondes proches de
l'infrarouge dans la peau.
Chez l'homme, comme chez les animaux,
l'épiderme, la jonction dermo-épidermique
et le derme papillaire peuvent ainsi être
détaillés [2, 4].
En pratique, un anneau est posé sur la
région d'intérêt pour la fixer. Cette zone est
ensuite mise en contact mécanique avec la
lentille de l'objectif du microscope, par l'intermédiaire d'un liquide d'immersion (eau
ou gel). L'opérateur visualise des coupes de
la peau dans les plans horizontal et vertical
en parallèle. Après un examen global de la
région étudiée, il peut ensuite zoomer sur la
zone à caractériser.
Les images sont stockées sous format
D.I.C.O.M. (photo), et des vidéos peuvent
être enregistrées, puis exportées [5].
CONCLUSION
QUEL EST SON INTÉRÊT ?
Le 1er prix
éditorial 2007
Essentiel
— La microscopie confocale,
technique très avancée
en microscopie optique,
présente l’avantage
de pouvoir acquérir
des images du tissu analysé
in vivo, sans l’endommager.
Références
1. Gonzalez S, Swindells K, Rajadhyaksha M, coll.
Changing paradigms in dermatology: confocal
microscopy in clinical and surgical dermatology.
Clin Dermatol. 2003;21:359-69.
2. Marghoob AA, Charles CA, Busam KJ, coll. In
vivo confocal scanning laser microscopy of a series
of congenital melanocytic nevi suggestive of
having developed malignant melanoma. Arch
Dermatol. 2005;141(11):1401-12.
3. Pellacani G, Cesinaro AM, Seidenari S. In vivo
assessment of melanocytic nests in nevi and melanomas by reflectance confocal microscopy. Mod
Pathol. 2005;18:469-74.
4. Rajadhyaksha M, González S, Zavislan JM, coll.
In vivo confocal scanning laser microscopy of
human skin II: advances in instrumentation and
comparison with histology. J Invest Dermatol.
1999;113(3):293-303.
5. http://www.olympusconfocal.com /theory/confocalintro.html accédé en ligne le 05/07/2008.
La microscopie confocale à balayage laser
est actuellement de plus en plus utilisée
chez l’homme en pratique courante.
Cette technique est une piste prometteuse pour la dermatologie chez les animaux.¿
— Crédit Formation Continue :
Remerciements
0,05 CFC par article
La microscopie confocale est une technique d'imagerie “cellulaire” non invasive,
elle permet de réaliser un examen histologique de la peau in vivo et en temps réel.
Cette technique est de plus en plus utilisée
comme moyen d'investigation complémen
1 Unité A.C.S.A.I. (Anatomie, Chirurgie,
Soins Intensifs, Anesthésiologie et Imagerie)
UPSP 2007.03.135 RTI2B
2 Unité de Dermatologie
UPSP 2007.03.135 RTI2B
École Nationale Vétérinaire de Lyon
1, avenue Bourgelat
69280 Marcy l’Étoile
Objectif pédagogique
LE PRINCIPE DE CETTE TECHNIQUE
Les images des tissus obtenues par microscopie confocale in vivo ressemblent à celles obtenues ex vivo en microscopie
optique classique. La façon dont elles sont
générées est cependant totalement différente, et réalisable in vivo.
Le principe physique de la microscopie
confocale a été décrit pour la 1re fois par
Marvin Lee Minsky, dans le milieu des
années 1950. Ce n'est qu'à la fin des années
1980 que cette technique a commencé à
être utilisée pour l'analyse des tissus biologiques. Le plus souvent, un rayon laser est
utilisé comme source de lumière.
L’appareil est un microscope confocal à
balayage laser, ou M.C.B.L. (C.L.S.M. en
anglais pour Confocal Laser Scanning
Microscope). Les tissus ne sont pas directement observés par l'utilisateur. Les images
sont recomposées par un ordinateur.
La microscopie confocale peut être considérée comme une tomographie à l'échelle
cellulaire. L’opérateur visualise des sections
horizontales (ou sections “optiques”) du
tissu. Une série de sections optiques est
ensuite obtenue, par le déplacement du
plan focal de l’objectif à différentes profondeurs du tissu. Une fois la tomographie
obtenue, en réunissant les différentes images, comme pour le scanner à rayon X, l'ordinateur peut reconstruire par stéréoscopie
une vue en trois dimensions du tissu, ou une
vue en deux dimensions, nette en tout point
de la zone imagée.
Caroline Boulocher1
Didier Pin2
à MAVIG GmbH pour l’image de microscopie confocale.
59
LE NOUVEAU PRATICIEN VÉTÉRINAIRE
canine-féline
vol 8 / n°41
JUIN 2009 - 523