Revue de publication semestrielle fondée en 1906 par Charles

Transcription

LES ARCHIVES DE L’INSTITUT
PASTEUR DE TUNIS
COLLOQUE JEUNES CHERCHEURS DE L’INSTITUT PASTEUR DE TUNIS
«Innover pour avancer»
Revue de publication semestrielle
fondée en 1906 par Charles Nicolle
Institut Pasteur de Tunis, 8-9 Décembre 2016
COMITE D’ORGANISATION DU CJC
PRESIDENT
ISSN 0020-2509
COORDINATEUR
Wael Fraihi
Hichem Ben Hassine
SECRETAIRE GENERALE
Emna Hannachi
COMITE DE REDACTION
Président
Professeur Hechmi LOUZIR
Editeur en chef
Dr. Mohamed ELAYEB
Responsable de la publication
Dr. Abdeljelil GHRAM
Membres
Dr. Ridha BARBOUCHE
Dr. Ikram GUIZANI
Dr. Afif BEN SALAH
Dr. Helmi MARDASSI
Dr. Sonia ABDELHAK
Assistante de rédaction
Melle Imen FATHALLAH
TRESORIERES
Chaima Bensaoud, Sana Riabi
PRESIDENTS DES COMMISSIONS
Rym Chamakh (Financement et Sponsoring), Mariem Ben Rekaya
(Breakthrough), Amal Mechaal ( Workshops), Melek Chaouch
(Communication), Ikbel Naouar (Table ronde), Cyrine Bouabid (Activités
sociales), Nedra Meftahi (Symposium scientifique)
VICE-PRESIDENTS DES COMMISSIONS
Emna Harigua (Financement et Sponsoring), Sana Chammem (Breakthrough),
Hager Tabka ( Workshops), Sonia Maatoug (Communication), Yosr Hamdi (Table
ronde), Rym Ouni (Activités sociales), Neira Dekhil (Symposium scientifique)
MEMBRES
Khadija Bahrini, Oussama Ben Fadhel, Khaoula Ben Farhat, Haifa Bichiou,
Meriem Fassatoui, Sarra Hamrouni, Kaouther Jaouadi,
Refka Jelassi, Wafa Kammoun-Rebai, Nacira Laamiri, Asma Tounsi, Saba Zouari,
Elhem Yacoub, Amani Cheikh, Meriem Houes, Safa Boujemaa, Imen Chniba,
Ramla Ben Yekhlef
COMITE SCIENTIFIQUE DU SYMPOSIUM
Prix de l’abonnement par an :
Étranger : 25 U.S.$
Tunisie : 20 Dinars
Ikram Guizani, Melika Ben Ahmed, Balkiss Bouhaouala,
Khadija Essafi, Kais Ghdira, Nedra Meftahi, Wafa Kammoun, Saba Zouari, Asma
Tounsi, Melek Chaouch, Meriem Fassatoui, Neira Dkhil, Ikbel Naouar
SOUTIEN LOGISTIQUE
Hechmi Louzir, Amina Hedfi, Sihem Gharbi, Souad Hajjem, Olfa Arbi, Moufida
Soumri, Rym Soltani, Wassim Ben Salah, Zeineb Boubaker,
Fathia Yahyaoui, Imen Fathallah, Hafedh Ghorbal, Jalel Tiouari.
Pour les échanges et services,
s’adresser au Bureau des Archives,
Institut Pasteur de Tunis,
13, Places Pasteur, BP 74,
1002 Tunis-Belvédère
Tél : 71 783 022 - Fax: 71 791 833
Tome 92 (1-2)
SOMMAIRE
Programme .............................................7
Symposium scientifique............................11
Conférences............................................13
Communication orales................................21
Communications affichées.........................47
Présentations libres..................................105
Workshops..............................................109
Breakthrough..........................................115
Table ronde.............................................119
1
REMERCIEMENTS
Le comité d’organisation du Colloque Jeunes Chercheurs de l’Institut Pasteur de Tunis remercie pour
leur soutien, ses différents partenaires
Partenaires internes
- L’Institut Pasteur de Tunis
- Les laboratoires de recherches de l’Institut Pasteur de Tunis
- PCI 17 : Les lectines de type C issues du venin de la vipère tunisienne Macrovipera lebetina : activités
anti-inflammatoires et mécanisme d’action sur les cellules myélomonocytaire humaine (THP1). (Jed Jebeli)
- TOX 26 : Conception et synthèse de peptides à haute affinité et séléctivité affinité et séléctivité pour les
cannaux potassium de type KV1.3 dans le venin de scorpiomaurus. (Najet Srairi)
- VIP10: Developpement of a reval and cost-effective robies vaccins for dog and live stock as an exemple
to consolidate innovation management and technology (Hela Kallel)
- PCI010: L’Etude de la persistance virale et la régulation cellulaire T lors de la pathogénèse chez les
maladies SEP en comparaison avec des sujets saints dans le but de déterminer des éventuels bio
marqueurs de la maladie. (Meriam Belghith)
- TOX33: Toxin and voltage goted sodium channels interaction a bio-informatique approche of strecture
activity relationship (Balkiss Bouuhaouala)
- LVN: Developpement of label free electrochemical biosensor for influenza virus detection and
neutraminidase activity assessment. (Mohamed Fethi Diouani)
- EEP41: An integrated approach for the development of sustainable methods to control tropical
theileriosis PHASE II. (Souha Ben Abderrazak)
- IMM114: Conception de vaccin peptidique anti-leishmanioses et developpement de nouvelles
technologies de biologie cellulaire pour cribler ex vivo leur efficacité à induire une protection chez
l’homme. (Amel Garnéoui)
- IMM127: Reinforcing IPT capacities in Genomic Medecine Non Communicable Diseases Investigation
and international cooperation. (Sonia Abdelhak)
- IMM116: TB-LaTAS (Tuberculose Latente à Tunis, Antananarivo et Saint-Louis). (Chaouki Benabdessalem)
Partenaires externes - Le réseau Internationnal des Instituts Pasteur (RIIP)
- Université Tunis El Manar
- BiotechPole Sidi Thabet
- Institut de Recherche pour le Développement IRD
- Institut Français de Tunisie
- Société Scientifique Tunisienne de Médecine Vétérinaire Aviaire
- Wiki Start Up
- KIA
- Orange
- L’Oréal
- HTDS
- Eau Royale
- Golden Events
- Centre scientifique de développement et d’invention (CSDI)
- Ceva
- Looxis
2
Archs. Inst. Pasteur Tunis, 2015
AVANT-PROPOS
Dans la lignée des grands événements scientifiques organisés par l’Institut Pasteur de Tunis, notre
revue Les Archives de l’Institut Pasteur de Tunis a décidé de consacrer une édition spéciale à ce 1er
colloque Jeunes Chercheurs (CJC) de l’Institut Pasteur de Tunis (IPT).
Cet événement est fondé sur plusieurs paris.
Le pari d’un événement de grande ampleur organisé par les étudiants et les post-doctorants tant
sur le plan logistique que sur le plan scientifique.
En s’organisant en 8 commissions, ils sont plus de 35 à s’être engagés pour faire exister ce projet au
sein de l’institution.
Cette expérience leur a permis de se familiariser avec des aspects fondamentaux de la carrière de
chercheurs que sont l’organisation d’événements scientifiques, leur dissémination et le réseautage.
Ils ont créé un lieu d’échange convivial à la fois entre les jeunes chercheurs et entre les différentes
générations de chercheurs et dynamisé la vie scientifique et sociale à l’IPT.
Le pari de l’innovation. Une forme d’événement inédite et originale, grâce à la multiplicité des
manifestations (symposium scientifique, session breakthhrough, tables rondes, workshop, culture
scientifique, engagement sociétal).
Le pari de la valorisation de la place de l’étudiant dans l’institution. L’IPT, en confiant la
responsabilité de cet événement à ses Jeunes Chercheurs ouvre ainsi de nouvelles perspectives
valorisant la place de l’étudiant au sein de l’institution.
Le pari d’un engagement pérenne. L’association des Jeunes Chercheurs de l’IPT qui naîtra à la
suite de ce colloque aura pour tâches, notamment, de maintenir la tradition d’un événement annuel
pour renforcer l’animation scientifique à l’IPT et de créer une véritable vie étudiante dans l’Institut.
Le pari d’une Recherche/Innovation Responsable (RRI).
Ce Colloque veut lancer une nouvelle dynamique au sein de l’Institut. Une dynamique où la Recherche/
Innovation sera davantage ouverte à ses étudiants, à l’environnement socio-économique, à la société
civile et au grand public.
Un pari ambitieux. Près de 300 participants, des partenaires internes, institutionnels, internationaux,
privés. Vingt-huit communications orales, 77 posters, 12 projets breakhthrough, 3 workshops, une
table ronde et un concert.
Des invités et intervenants représentants les différents partenaires nationaux de l’IPT.
2 jours intenses de sciences, de réseau, d’échanges, de débats et d’animation culturelle.
Avec l’espoir que ce colloque atteigne ses objectifs et encourage les jeunes chercheurs à ouvrir leurs
perspectives, nous tenons à remercier notre institution, nos mentors et encadrants, et nos partenaires
pour leur soutien et pour avoir pu rendre ce Colloque Jeunes Chercheurs, possible.
Wael Fraihi
Président du comité d’organisation du CJC
Tome 92 (1-2)
Hichem Ben Hassine
Coordinateur du CJC
3
4
PROGRAMME
Tome 92 (1-2)
5
6
PROGRAMME
Jeudi, 8 Décembre, 2016
07:30 – 08:00:
08:00 – 08:15:
Inscription, Soumission des Slides et affichage des Posters
Cérémonie d’ouverture
08:15 – 11:00: Thématique I = Cancer, Maladies génétiques et auto-immunité
08:15 – 09:05: C1: Ridha BARBOUCHE (Chef du laboratoire de Transmission, contrôle et immunologie
des infections IPT)
“Primary immunodeficiencies (PIDs): a model for the study of genetic susceptibility to infections in
humans“
09:05 – 10:00: Session I: Chairpersons: Samir BOUBAKER, Yosr GALAI
09:05 - 09:15: O1 “Mechanisms underlying the anti-tumoral effect of Allium roseum L. extract on Chronic
Myeloid Leukemia K562 cells” Soumaya SOUID
09:15 - 09:25 : O2 “Wrch1, une GTPase régulatrice de l’homéostasie intestinale et la tumorigenèse
colorectale : rôle anti-oncogène” Chaker SLAYMI
09:25 - 09:35: O3 “ Investigation de la réponse inflammatoire chez des patients atteints de mélanome
d’origine sporadique et chez des patients atteints de Xeroderma pigmentosum” Asma CHIKHAOUi
09:35 - 09:45: O4 “KAah1 and KAah2, two scorpion peptides targeting Kv channel subtypes overexpressed
in several cancer cell lines”Dorra AISSAOUI
09:45 – 10:00:
Discussion
10:05 – 11:00: Session II: Chairpersons: Meriem BELGHITH et Sadri ZNAIDI
10:05 - 10:15: O5 “Lactase Persistence in Tunisia: Result of natural selection or admixture?”
Yosra BEN HALIMA
10:15 -10:25: O6 “CD39 expression in the cerebrospinal fluid of patients with neurological disorders”
Khadija BAHRINI
10:25 - 10:35: O7 “Variability of pharmacogenes involved in Metabolic Syndrome in Tunisia and
comparison with worldwide populations” Haifa JMEL
10:35 - 10:45: O8 “High resolution melting method for SNPs genotyping and mutation detection”
Hamza BEN SALALH
10:45 – 11:00
Discussion
11:00 – 11:15
Session III : pause-café et Session Poster
11:15 – 13:00
Thémathique II: Bio-informatique, Biomathématique, Bio-statistique
11:15 – 12:05 C2: Alexandre DUFOUR (Chercheur permanant à l’unité d’analyse d’images biologiques,
Institut Pasteur Paris)
“Deciphering cellular morpho-dynamics using Bioimage Informatics”
Tome 92 (1-2)
7
12:05 – 12:45: Session IV: Chairpersons: Alia BENKAHLA, Fatma GUERFALI
12:05 – 12:15: O9 “In Silico Identification and biochemical Validation of Novel Inhibitors of Leishmania
Eukaryotic Initiation Factor 4A” Emna HARIGUA-SOUIAI
12:15 – 12:25: O10 “Genomic features and insights into the biology of Mycoplasma meleagridis and
Mycoplasma gallinarum through comparative genomic analysis with other avian mycoplasmas”
Elhem YACOUB
12:25 – 12:35: O11 “Interaction model of peptidic Chloride Channel blockers to collagen binding domain
of MMP-2 predicted by biomolecular simulation docking and free energy calculation”
Houcemeddine OTHMAN
12:35 – 12:45: O12 “Coupling of physiological and ecological models to explore food fluctuation effects
on the sex change in hermaphrodite species” Dorra LOUATI
12:45 – 13:00:
Discussion
13 :00 – 14 :00: pause déjeuner et Session Poster
14:00 – 16 :40:
Thématique III = Maladies Infectieuses
14:00 – 14:50: C3: Helmi MARDASSI (Chef du laboratoire de Microbiologie moléculaire, vaccinologie
et éveloppement biotechnologique IPT)
“Aperçu sur les Evènements Majeurs Ayant Façonné le Succès Evolutif de Mycobacterium tuberculosis“
14:50 – 15:45: Session V: Chairpersons: Karim AOUN, Youmna M’GHIRBI
14:50 – 15:00: O13 “Selection and biochemical characterization of small molecules that inhibit LeIF:
Leishmania translation initiationfactor” Yosser Zina ABDELKRIM
15:00 – 15:10: O14 “Implication of hedgehogs as potential reservoir hosts in the transmission cycle of
leishmaniasis in Tunisia” Hejer SOUGUIR OMRANI
15:10 - 15:20: O15 “Localization and dynamics of Lipid droplet during Leishmania major macrophage
infection” Sameh RABHI
15:20 – 15:30: O16 “Asteraceae Artemisia campestris and Artemisia herba alba Essential Oils Trigger
Apoptosis and Cell Cycle Arrest in Leishmania infantum Promastigotes” Zohra ALOUI
15:30 – 15:45: Discussion
15:45- 16:35: Session VI : Chairpersons: Lamia GUIZANI, Mourad BARHOUMI
15:45 – 15:55: O17 “Deux conformations spatiales de l’antigène de virulence de Mycobacterium
tuberculosis, ESAT-6, sont à l’origine de la controverse autour de ses fonctions biologiques” Amira REFAI
15:55 – 16:05: O18 “Dynamique invasive de la bactérie endosymbiotique Wolbachia chez le moustique
Culex pipiens en Tunisie” Marwa BEJI
16:05 – 16:15: O19 “Antimicrobial Susceptibility, Plasmid-mediated quinolone resistance, Virulotyping,
Pulsed-Field Gel Electrophoresis and Plasmid Analysis of Salmonella enterica Serotype Enteritidis from
chickens and chicken farm environment in Tunisia” Rakia BEN SALEM
16:15–16:25: O20 “Application de la technologie NucleofectionTM pour l’identification des proteines salivaires
de phlebotomus papatasi, candidats vaccins contre la leishmaniose cutanée chez l’Homme” Aymen TLILI
8
16:40 – 17:00: Session VII = pause-café et Session Poster
16:00 – 18:00: Workshop animé par Sonia ABEDELHAK : Montage et Managment des projets (Au niveau
du petit Amphithéâtre en parallèle avec la session Maladies infectieuses) (Ce Workshop n’est accessible
qu’aux personnes préalablement inscrites)
17:00 – 18:00: Session VIII = Divers
17:00 – 17:15: Présentation du Mozilla IPT Study Group
17:15 – 17:30: Présentation du projet H3ABIONET
17:30 – 18:00: Présentation du projet « l’Association Jeunes Chercheurs de L’IPT »
Vendredi, 9 Décembre, 2016
07:30– 08:00:
Soumission des Slides et affichage des Posters
08:00 – 10:50: Thémathique IV = Biotechnologie Appliquée
08:00 – 08:55: C4: Hamadi AYADI (PDG du BiotechPole de Sidi Thabet)
“La valorisation des produits de recherche en Biotechnologie de la Sante en Tunisie“
09:00- 09:55: Session IX: Chairpersons: Hela KALLEL, Rym BENKHALIFA
09 :00 – 09 :10: O21 “Lebetin 2, a Snake Venom-Derived Natriuretic Peptide, Attenuates Myocardial
Ischemic Injury in a Postcoditionning Manner in ex vivo and in vivo Ischemia-Reperfusion Experimental
Models” Bochra TOURKI
09:10 – 09:20: O22 “A novel multiplex RT-PCR coupled with Luminex® assay for the simultaneous
detection of the most important avian respiratory viruses” Nacira LAAMIRI
09:20 – 09:30: O23 “Biophysical Control-Quality of RHUG-CSF: Effect of Dual temperature-Time
Parameters on Protein Aggregation” Hazar KRAIEM
09:30 - 09:40: O24 “Caractérisation biochimique et propriétés interfaciales de deux phospholipases A2
de venins de vipères tunisiennes” Douja BAÏRAM
10:00- 10:55: Session X : Chairpersons: Najet SRAIRI, Issam HMILA
10:00 – 10:10: O25 “Evaluation of the immunogenicity of an adeno-associated virus 5 vectored vaccine
against hepatitis E virus delivered via the nasal route” Cyrine BEN TALEB
10:10 – 10:20: O26 “ATX-enriched extract induces inhibition of amiloride sensitive sodium channel
current in Xenopus oocytes cell model” Ameni CHEIKH
10:20 – 10:30: O27 “Probiotics in freshwater fishes: isolation, molecular identification, phylogenetic,
phyloproteomic and genomic analysis” Rim EL JENI
10:30 – 10:40: O28 “Preclinical comparative toxicity study of enoxaparin biosimilar product versus
reference product” Zina KOBBI
Tome 92 (1-2)
9
10:55 – 11:10: Session XI = pause-café et Session Poster
11:10 – 13:00: Workshop animé par Cyrine HAYOUNI : Coaching de croissance personnelle et professionnelle
13:00 – 14:00: pause déjeuner et Session Poster
14:00 – 15:30: Session Breakthrough
15:30 16:00: Session XII = pause-café interactive Session Breakthrough et Session Poster
16:00 – 18:00: Session Table Ronde : Insertion à la vie Professionnelle
18:00 18:30: Cérémonie de Clôture et remise des prix
19:00 – 21:00: Diner gala / Concert
10
SYMPOSIUM SCIENTIFIQUE
Tome 92 (1-2)
11
12
CONFERENCES
Tome 92 (1-2)
13
14
CONFERENCE 1: PRIMARY IMMUNODEFICIENCIES (PIDS):
A MODEL FOR THE STUDY OF GENETIC SUSCEPTIBILIT Y TO
INFECTIONS IN HUMANS
MOHAMED RIDHA BARBOUCHE M.D., PH.D
Department of Immunology, LR11IPT02, Institut Pasteur de Tunis.
Background: PIDs are a heterogeneous group of inherited disorders in which immune system dysfunctions
cause an enhanced susceptibility to infections that is the common clinical feature of these diseases. To date,
more than 250 genes have been identified and associated with as many different immunodeficiencies. The
frequency of PIDs is higher in North-Africa and Middle-East as compared to Europe and North-America.
Indeed, our population is characterized by a high frequency of consanguineous marriages which may reach
50% in rural areas. This may account for the higher incidence of autosomal recessive immunodeficiencies
observed.
Material and Methods: During the last twenty years, we’ve diagnosed and investigated at the Institut Pasteur
de Tunis one thousand cases of PIDs including patients with combined immunodeficiencies, antibody
deficiencies, phagocytosis defects, complement deficiencies and other well-defined immunodeficiencies.
Results: The immuno-genetic investigation and the establishment of an accurate diagnosis allowed an
appropiate and targeted treatment of the affected children e.g. bone marrow transplantation, substitutive
intravenous immunoglobulins, IFNg or GM-CSF therapy... This did also allow us to establish a preventive
approach by genetic counselling and prenatal diagnosis. Moreover, we did contribute to dissection of the
IFNg-IL12/23 dependant pathway in patients with mendelian susceptibility to mycobacterial diseases, which
might be a model to better understand immune responses during tuberculosis. We did also contribute to
the World Health Organization efforts to eradicate poliomyelitis by studying PIDs patients who can be
directly or indirectly infected by oral vaccine strains and may become chronic excretors of polioviruses.
This is a major concern since long-lasting strains in the intestine of these patients have been shown to
be able to revert and cause vaccine-derived poliomyelitis outbreaks, representing a potential reservoir
for infection in the post eradication era. Furthermore, wecontributed to better understand the role of
TH17 cells in susceptibility to severe fungal diseases and we discovered, recently, a novel gene underlying
susceptibility to staphylococcal infection, inflammation and allergy in hyper-IgE syndrome patients.
Conclusion: The study of these diseases helps unravelling specific immunological pathways, rare
autosomal forms offer a privileged physiopathological model for infections including some which are
linked to global health challenges.
BIOGRAPHIE:
Mohamed Ridha Barbouche est Docteur en Médecine et Docteur en Sciences. Il est Professeur d’Immunologie et
Directeur de la Recherche à la Faculté de Médecine de Tunis, Université Tunis El Manar. Il est également Chef de
Service Hospitalo-Universitaire et Directeur de Laboratoire de Recherche à l’Institut Pasteur de Tunis. Ses activités
cliniques sont axées sur l’investigation des patients atteints de déficits immunitaires primitifs et ses activités de
recherche s’intéressent à l’étude de l’interaction hôte-pathogène et en particulier la susceptibilité génétique aux
infections chez l’homme. Il a plus de 90 publications. Il est Vice-Président de la Société Tunisienne d’Immunologie et
Membre Elu du Conseil Scientifique de l’Union Internationale des Sociétés d’Immunologie.
Tome 92 (1-2)
15
CONFERENCE 2: DECIPHERING CELLULAR MORPHO-DYNAMICS
USING BIOIMAGE INFORMATICS
DR. ALEXANDRE DUFOUR
Cell deformation and migration are key factors involved in numerous aspects of cell development,
immune responses, cancer and infectious diseases. Our team develops image analysis tools and software
to extract quantitative information from multi-dimensional, multi-modal live microscopy, with the aim
to derive mathematical models of cellular morpho-dynamics. Throughout this talk, I shall describe
some of our algorithmic developments to a) automatically track multiple cells in 2D/3D microscopy in
cluttered environments and low signal-to-noise conditions, b) efficiently describe the 3D morphology of
cells despite their natural shape variability, and c) extract biophysical quantities at the intra-cellular level
directly from imaging data. Finally, we shall emphasize the need for open-source tools and software by
presenting the Icy platform (http://icy.bioimageanalysis.org), a next-generation software dedicated to the
bioimaging communities by providing the latest developments in image acquisition, visualisation, analysis
and computational modeling.
BIOGRAPHIE:
Dr. Alexandre Dufour graduated in Artificial Intelligence & Pattern Recognition from University Pierre & Marie Curie
(Paris, France) in 2004, and performed his doctoral research at Institut Pasteur Korea (Seoul, South Korea) from
2005 to 2007, where he co-founded the Image Mining group as a Junior Scientist. He then pursued his postdoctoral
work in the Bioimage Analysis group at Institut Pasteur (Paris, France), and is now a permanent Staff Scientist in the
group, leading an interdisciplinary team focusing on cell morphology and dynamics via imaging and modelling
techniques. Dr. Alexandre Dufour is Associate Editor of the IEEE International Symposium on Biomedical Imaging,
and a board member of the “Functional Live Microscopy” development group (GdR 2588) of the CNRS. His teaching
activities include the EMBO course « Imaging Parasite Infection » and the CNRS school on live microscopy «MiFoBio».
16
CONFERENCE 3 : APERÇU SUR LES EVENEMENTS MAJEURS
AYANT FAÇONNE LE SUCCES EVOLUTIF DE MYCOBACTERIUM
TUBERCULOSIS
HELMI MARDASSI, DVM, PHD
Unité de Typage et Génétique des Mycobactéries, Laboratoire de Microbiologie Moléculaire,Vaccinologie
et Développement Biotechnologique (LR11IPT01) Institut Pasteur de Tunis
Mycobacterium tuberculosis, agent principal de la tuberculose humaine, demeure incontestablement le
pathogène qui a su déjouer le plus les stratégies visant son éradication. Le succès de M. tuberculosis en
tant que pathogène humain est reflété dans les statistiques alarmantes qui le placent en pole position dans
le classement des pathogènes les plus meurtriers de par le monde.
Nous tenterons à travers cette présentation de revisiter les évènements génétiques majeurs ayant conféré à
M. tuberculosis son pouvoir pathogène extraordinaire, et ce depuis les espèces ancestrales (Mycobactéries
atypiques) en passant par son progéniteur putatif, Mycobacterium prototuberculosis. A cet effet, nous
évoquerons l’évolution réductive et son phénomène inverse, à savoir l’acquisition et l’expansion de
nouvelles séquences, incarné chez M. tuberculosis par les familles multigéniques PE/PPE. En outre, et afin
d’être en phase avec l’un des thèmes de prédilection en matière de tuberculose, à savoir la multirésistance
aux antibiotiques, nous présenterons l’état de l’art sur la question ainsi que les résultats de nos recherches
sur la génétique et la génomique d’un clone épidémique multirésistant, représentant un cas typique de
succès évolutif de M. tuberculosis.
BIOGRAPHIE:
Helmi Mardassi obtained his doctorate in Veterinary Medicine in 1988 at the Tunisian National School of Veterinary
Medicine, and then moved to the University of Montreal, Canada, where he completed a master degree in microbiology
and animal pathology. From 1992 to 1996 he pursued a Ph.D in molecular virology at the Institut Armand-Frappier
(University of Quebec, Laval, Montreal), and next joined the Biotechnology Research Institute of Montreal for a
post-doctoral training. Since 1999, H. Mardassi integrated the Institut Pasteur de Tunis as a permanent researcher.
Actually he is leading the laboratory of Molecular Microbiology, Vaccinology and Biotechnology Development,
focusing on research aspects pertaining to drug resistance and evolution of Mycobacterium tuberculosis.
Tome 92 (1-2)
17
CONFERENCE 4 : LA VALORISATION DES PRODUITS DE
RECHERCHE EN BIOTECHNOLOGIE DE LA SANTE EN TUNISIE
PROF. HAMMADI AYADI
Biotechpôle Sidi Thabet
Plus de 600 docteurs en sciences biologiques sont sans emploi et plusieurs centaines sont en formation
en Tunisie et à l’étranger. L’état est le seul recruteur étant donné l’absence de sociétés innovantes et de
départements R&D dans notre tissu industriel. En plus, il n’y a pas eu une politique efficace Université/
Entreprise en Tunisie. Nous donnons des exemples de réussite scientifique mais échec dans la création
d’emplois avec des résultats utiles et disponibles mais non commercialisés à temps! Pourtant la
commercialisation de ce même genre de résultats existe ailleurs, alors, Où est le problème?
Exemple: Processus d’essaimage scientifique :
Recherche
Maturation
Naturation et
développement
tecnologique: scale up
Accompagnement
dans la réalisation de
business plan et création
d’entreprise
STARTUPS
Hébergement
Fond d'amorçage
Nous pensons qu’il y a problème à deux niveaux : 1) au niveau de la maturation de nos résultats de
recherche par manque de moyens et de visibilité et 2) au niveau du lancement industrielle du projet par
manque de fond d’amorçage.
En biotechnologiede la santé, nous sommes dans une étape transitoire et décisive: La nécessité de
développer une industrie biopharmaceutique tunisienne performante, créatrice d’emplois de haut
bniveau, permettant l’accès de la Tunisie au rang des pays « pharmergent» nécessite une logistique et
des compétences de haut niveau. Afin d’atteindre ces deux objectifs nous travaillons sur la création d’un
centre de ressources technologiques (CRT) dont les objectifs sont de permettre à la Tunisie de se doter
d’un ensemble d’infrastructures et de mécanismes nécessaires pour 1) Effectuer le développement de
biomolécules et de réactifs en phase PréGMP et résoudre de cette manière le premier problème de la
maturation des résultats de la recherche 2) Passer de l’étape de l’importation des biomédicaments (vaccins
et biosimilaires) en vrac (bulk) à l‘étape de les produire sur place.
BIOGRAPHIE:
Depuis ma nomination Prof. de l’enseignement supérieur à la faculté de médecine de Sfax en 1994, je n’ai cessé
de développer l’immunologie et la génétique moléculaire dans cette institution et en Tunisie. J’ai monté un
laboratoire de recherche d’immunologie et de génétique humaine avec des doctorants et des stagiaires ingénieurs
et médecins travaillant notamment sur les maladies autoimmunes thyroïdiennes et les surdités héréditaires de
l’enfant. Plusieurs thèses de sciences et de médecine et de projets de fin d’étude ont été soutenus faisant l’objet de
plus de deux cents articles publiés dans des revues à IF allant jusqu’à 37.5. J’ai organisé des ateliers de formation
nationaux et internationaux en génétique moléculaire et en bioinforrmatique. j’ai développé des projets nationaux
18
et internationaux notamment européen. Au fait durant 6 ans, j’étais membre d’un grand projet d’excellence
européen Eurohear. En 2003, nommé DG au Centre de Biotechnologie de Sfax, j’ai développé un nouveau créneau
dans ma carrière qui est l’innovation et la relation avec l’entreprise. Plusieurs projets avec l’industrie ont été
signé et honoré rendant l’institution que je dirigeais un vrai outils de développement. En 2010, j’étais nommé
coordinateur d’un projet Era wide BioProtech financé par l’Union Européenne. Ce projet m’a permis d’aligner le
CBS avec les institutions équivalentes en Europe et de transférer une grande partie des connaissances et du savoir
de l’université vers le milieu économique. Ceci a été complété par un autre projet Université et Entreprise financé
aussi par l’Europe aussi. Depuis le 18 mars dernier, j’étais nommé à la tête de la Biotechpole Sidi Thabet. Mon
objectif principal est de contribuer au développement de l’industrie pharmaceutique issue de la biotechnologie et
l’intégration du maximum de jeunes diplômés dans ce domaine.
Tome 92 (1-2)
19
20
COMMUNICATIONS ORALES
Tome 92 (1-2)
21
SESSION 1 : CANCERS, MALADIES GENETIQUES ET AUTOIMMUNITE
O1- MECHANISMS UNDERLYING THE ANTI-TUMORAL EFFECT OF
ALLIUM ROSEUM L. EXTRACT ON CHRONIC MYELOID LEUKEMIA
K562 CELLS
S. SOUID1, 2, H. NAJJAA3, I. RIAHI-CHEBBI1,2, M. HAOUES2,4, M. NEFFATI3, I. ARNAULT5,
J. AUGER6, H. KAROUI1,2, M. ESSAFI2,4 AND K. ESSAFI-BENKHADIR1,2*
1
2
3
4
5
6
Institut Pasteur de Tunis, LR11IPT04 Laboratoire d’Epidémiologie Moléculaire et Pathologie
Expérimentale Appliquée Aux Maladies Infectieuses, 1002, Tunis, Tunisie.
Université de Tunis El Manar, 1068, Tunis, Tunisie.
Laboratoire d’Ecologie Pastorale, Institut des régions Arides de Médenine, Tunisie
Institut Pasteur de Tunis, LTCII LR11IPT02 Laboratoire de Transmission, Contrôle et Immunobiologie
des infections, Tunis, 1002, Tunisie.
CETU Innophyt, Université François Rabelais, avenue Monge, France -37200 Tours.
IRBI, UMR CNRS 6035, Université François Rabelais, avenue Monge, France -37200 Tours.
E-mail: [email protected]
Background and objectives: Among various strategies that have been explored to overcome tumor drug
resistance, the combination of current chemotherapy with plant extracts as chemosensitizers has emerged
as a promising one. In the present study, we investigated for the first time the anti-cancer activity of Allium
roseum L. extract, a wild edible species in North Africa and its mechanisms against the well-characterized
human Chronic Myelogenous Leukemia (CML) K562 cells in vitro.
Methodology: K562 cells were treated with dehydrated aqueous (DAE) and fresh extracts in a time- and
dose-dependent manner. Cell viability and cytotoxicity were evaluated by MTT and LDH assays. Cell cycle
analysis and the apoptosis levels were assessed by flow cytometry. Using Western blot and Elisa assays, we
elicited key signaling pathways and effectors proteins targeted by DAE.
Results: DAE exhibited the highest antiproliferative activity on K562 cells even compared with the
chemotherapeutic drug Imatinib Mesylate, a tyrosine kinase inhibitor that targets the fusion oncoprotein
BCR-ABL responsible for this disease. DAE disturbed the cell cycle progression and induced the apoptosis
of K562 cells. Chemical analysis of DAE showed a diversity of organosulfur compounds RCSO and high
amount of allicin, suggesting that such molecule may be behind the anti-cancer effect of Allium roseum
extract. Similarly to Imatinib Mesylate, DAE inhibitory effect was associated with the dephosphorylation
of BCR-ABL kinase and interfered with the major prosurvival pathways, ERK1/2 and Akt. Furthermore, we
found that DAE-induced inactivation of Akt kinase led to the activation of its target FOXO3 transcription
factor, enhancing the expression of FOXO3-regulated pro-apoptotic effectors, Bim and Bax, and cell cycle
inhibitor p27. Finally, we found that DAE-treated K562 cells presented a reduced secretion of the proangiogenic effector, Vascular Endothelial Growth Factor ( VEGF), compared to the non-treated cells.
Conclusion: Our data suggest that Allium roseum L. extract has great potential as a non-toxic cheap and
effective alternative to conventional chemotherapy that presents a dual inhibitory effect on both cancer
cell viability, through FOXO3 activation, and its angiogenic promoting regulator VEGF.
Key words: Chronic Myeloid Leukemia; Allium roseum L. Extract; Organosulfur compounds; Imatinib;
Mechanism of action.
22
O2- WRCH1, UNE GTPASE REGULATRICE DE L’HOMEOSTASIE
INTESTINALE ET LA TUMORIGENESE COLORECTALE : ROLE ANTIONCOGENE.
C. SLAYMI1,2,3, E. VIGNAL1,2, M. JEMAA4, A. BLANGY1,2, P. RAYNAUD1,2, K. HAMZAOUI3 &
P. FORT1,2.
1
2
3
4
CNRS, CRBM - UMR 5237 Montpellier, France.
Université de Montpellier, Montpellier, France.
Faculté de Médecine de Tunis- Université Tunis El Manar Tunisie.
Département de Cardiologie, Médecine Vasculaire Physiologie, Université de Tuebingen, Allemagne.
E-mail : [email protected]
Introduction : L’épithélium intestinal se renouvelle tous les 4-6 jours chez les mammifères grâce aux cellules
souches localisées au fond des cryptes. Le renouvellement dépend des signaux du microenvironnement
et requiert une phase de prolifération des cellules souches, de différenciation et d’apoptose des cellules
épithéliales. La signalisation Wnt, joue un rôle majeur dans l’homéostasie intestinale par l’action de deux
gradients inversés le long de l’axe crypte/lumière; la signalisation Wnt canonique, active au fond des
cryptes, contrôle la prolifération alors que la signalisation non-canonique, active vers le haut des cryptes
contrôle la différenciation. Ces deux voies contrôlent l’activité de la GTPase atypique Wrch1. Wrch1 est
une GTPases qui s’activent spontanément, son activité est donc directement proportionnelle à son niveau
d’expression dans la cellule. Enfin, cette GTPase est sous exprimée dans de nombreuses tumeurs gastriques
et colorectales. Compte tenu de ces données, nos objectifs étaient donc de caractériser les changements
morphologiques induits par l’invalidation conditionnelle de Wrch1 dans l’épithélium intestinal murin et
d’en déterminer les mécanismes d’action.
Matériel et méthodes: Nous avons utilisés une panoplie d’approches pour étudier les fonctions de Wrch1 :
à savoir qPCR, séquençage, générations des souris mutées, microscopie confocale, Immuofluorescence,
culture cellulaire, siRNA et Western Blot.
Résultats : Nos résultats montrent que la déplétion de Wrch1 n’est pas létale, cependant elle a induit
une augmentation de 20% de la densité cellulaire et une désorganisation de la structure de l’épithélium
dans le haut des cryptes du colon. Dans la lignée de tumeur colorectale DLD-1, nous avons montré que
l’absence de Wrch1 mime le phénotype d’augmentation de la densité cellulaire observé chez la souris.
L’invalidation de Wrch1 ne modifie pas la distribution des phases du cycle cellulaire ni de celle de la
mitose, cependant, elle réduit le nombre des cellules en apoptose dans le colon des souris et dans les
cellules DLD-1. L’invalidation de Wrch1 a réduit la signalisation Hippo et a altéré la contractilité cellulaire
via une augmentation de la phosphorylation de la protéine MLC2. Des travaux récents ont montré
que la diminution du niveau MLC2 phosphorylée est nécessaire pour l’activation des caspases par un
stimulus apoptotique. Ceci suggère que cette perturbation de la contractilité peut être à l’origine de cette
diminution de l’apoptose qui est la cause majeure responsable de ce phénotype.
Conclusion : Wrch1 est un régulateur de l’homéostasie intestinale chez la souris via son rôle modérateur
de la mort cellulaire.
Mots clés : Wrch1, épithélium intestinal, lignée tumorale DLD-1, apoptose, cancer colorectal.
Tome 92 (1-2)
23
O3- INVESTIGATION DE LA REPONSE INFLAMMATOIRE CHEZ DES
PATIENTS ATTEINTS DE MELANOME D’ORIGINE SPORADIQUE ET
CHEZ DES PATIENTS ATTEINTS DE XERODERMA PIGMENTOSUM
A. CHIKHAOUI1,2, I. NABOULI1,2, M. BEN AHMED4, C. NAOUALI1,2, M. BEN REKAYA1,2, M. JONES3, M. ZGHAL3,
S. ABDELHAK1,2, H. YACOUB-YOUSSEF1,2
1
2
3
4
Laboratoire de Génomique Biomédicale et Oncogénétique (LR 11 IPT 05), Institut Pasteur de Tunis, Tunisie.
Université Tunis El Manar, Tunis, Tunisie
Département de Dermatologie, Hôpital Charles Nicolle de Tunis, Tunisie.
Laboratoire de Transmission, Contrôle et Immunobiologie de l’infection, LR11IPT02, Institut Pasteur
de Tunis Université de Tunis El Manar I, 2092 Tunis, Tunisie
Introduction : Le Mélanome Cutané (MC) est parmi les cancers de la peau les plus rares en Tunisie avec
une incidence allant de 0.5-0.7/ 100 000 habitants par an. Le MC est le cancer cutané le plus mortel en cas
de détection tardive. Le Xeroderma Pigmentosum (XP) est une maladie génétique autosomique récessive
rare. Elle touche les gènes de la voie réparation de l’ADN. Les individus atteints de XP sont des malades
photosensibles présentant un profil clinique très particulier. Ils développent des lésions cutanés suite à
l’exposition aux rayons UVs qui prédisposent aux cancers cutanées. L’incidence du XP dans le monde est
très faible 1/250000 mais elle est plus fréquente une Tunisie 1/10000.
L’objectif de notre étude est l’investigation du système immunitaire et en particulier les monocytes et les
biomarqueurs inflammatoires chez les patients atteints de mélanomes-XP et non XP.
Matériel et méthodes : Le travail a porté sur 8 patients atteints de mélanome cutané sporadiques et 4
patients atteints de la forme XP-C/Mélanome. Nous avons tout d’abord, utilisé la technique de cytométrie
de flux 18-plex qui permet de doser au niveau sérique 18 molécules. Nous avons également investigué la
composante monocytaire à l’échelle systémique.
Résultats : Les biomarqueurs qu’on a pu détecter sont IL33, MCP1, MIP1b et IP10. Ils étaient moins
exprimés chez les patients atteints de mélanomes sporadiques et surtout chez les XP-C. Ceci témoigne
de la présence d’une déficience au niveau de l’immunité chez les patients développant des cancers
cutanés comme le mélanome. Concernant l’investigation des monocytes, Nous avons détecté les trois
populations différentes. Nous avons trouvé une diminution importante des monocytes intermédiaires à
action inflammatoire chez les patients ayant développé un mélanome cutané. Ces résultats supportent
le fait que chez les patients développant un mélanome cutané qu’il soit sporadique ou sur fond XP, il y a
une déficience immunitaire à l’échelle sérique. Ce qui pourrait expliquer en partie, la susceptibilité des
patients à développer des tumeurs.
Conclusion : La maladie de XP pourrait constituer un modèle prometteur pour des futures études de la
cancérogenèse.
Mots clés : Inflammation, mélanome, Xeroderma pigmentosum.
O4- KAAH1 AND KAAH2, T WO SCORPION PEPTIDES TARGETING KV
CHANNEL SUBT YPES OVEREXPRESSED IN SEVERAL CANCER CELL LINES
D. AISSAOUI 1, S. MLAYAH-BELLALOUNA1, J. JEBALI 1, E. AYEDI 1, Z. ABDELKEFI-KOUBAA1, K.
BENKHADIR-ESSAFI2, N. MARRAKCHI1, M. ELAYEB1, N. SRAIRI-ABID1.
24
1
2
Université de Tunis El Manar, Institut Pasteur de Tunis, Laboratoire des Venins et biomolécules
thérapeutiques LR11IPT08, Tunis, 1002, Tunisia.
Université de Tunis El Manar, Institut Pasteur de Tunis, Laboratoire d'Epidémiologie Moléculaire et
Pathologie Expérimentale appliquée aux Maladies infectieuses LR11IPT04, Tunis, 1002, Tunisia
Background: Potassium channels have been considered as new targets for cancer treatment strategies
due to their pivotal role in tumor progression. Peptides, from scorpion venom, acting on K+ Channels
were widely studied. KAah1 and KAah2 are two peptides isolated from the venom of Androctonus australis
Hector (Aah) scorpion. KAah1 blocks Kv1.1 and Kv1.3 channels with IC50 values of 5 nM and 50 nM
respectively, whereas KAah2 blocks only 20% of Kv1.1 and is inactive on Kv1.3 channels. KAah1 contains
two amino acids representing the functional dyad reported to be essential for the activity on Kv1 channel
subtypes. In this work, both KAah1 and KAah2 were tested on several tumor cell lines expressing different
subtypes of Kv channels.
Methods: Purification of KAah1 and KAah2 was performed by several chromatography techniques (Gel
filtration, Ion exchange FPLC and reverse phase HPLC). Peptides pharmacological characterization
(Cell proliferation, cell adhesion and migration) were evaluated against three cancer cell lines: U87
(glioblastoma), MDA-MB231 (breast cancer) and LS174 (human colon adenocarcinoma).
Results: KAah1 inhibits adhesion and migration of U87 cells, whereas KAah2 inhibits their proliferation. We
demonstrated that the effect of KAah1 is integrin independent, suggesting that it acts via the Kv channels.
For MDA-MB231 and LS174 cells, both peptides affected only the migration of these cells with more
pronounced effect of KAah1. We studied the pattern of gene expression of Kv isoforms in the three tumor
cell lines using real-time quantitative PCR.
Conclusion: The functional significance of potassium channel during tumorigenesis could vary with the
channel and/or cancer type. The anti-migratory effect suggests the implication of Kv1.1 and Kv1.3 channels
in tumor spreading.
Keys words: Scorpion venom, blocker peptides, potassium channel subtypes, tumor cells.
O5- LACTASE PERSISTENCE IN TUNISIA: RESULT OF NATURAL
SELECTION OR ADMIXTURE?
Y. BEN HALIMA1,5, R. KEFI1,5, C. GIULIANI2,3, S. DE FANTI2, M. SAZZINI2, C. NOUALI1,5, M. NAGARA1,5, G.
MENGOZZI2, S. ELOUEJ1,5, A.M. ABID1,4, G. ROMEO6, H. JAMOUSSI1,4, S. ABDELHAK1,5, D. LUISELLI2.
1
2
3
4
5
6
Laboratory of Biomedical Genomics and Oncogenetics, Institut Pasteur de Tunis, BP 74, 13 Place
Pasteur, Tunis 1002, Tunisia.
Laboratory of Molecular Anthropology, Department of Biological, Geological and Environmental
Sciences (BiGeA), University of Bologna, Bologna, 40126, Italy.
Center for Applied Biomedical Research (CRBA), St. Orsola-Malpighi University Hospital, Bologna 40138, Italy.
Department of external consultation, National Institute of Nutrition and Food Technology, Tunis, Tunisia.
Université de Tunis El Manar, 2092 El Manar I Tunis, Tunisie.
Department of Ankle and Foot Surgery, IRCCS Istituto Ortopedico Galeazzi, Milan, Italy.
Background : The ability to digest lactose after weaning, called Lactase Persistence (LP) is encoded by
the -13910 C >T polymorphism in the MCM6 gene. LP varies widely in frequency among different human
Tome 92 (1-2)
25
populations. Few studies were conducted in Northern Africa and never for Tunisia. Accordingly, the present
study aims to describe the genetic diversity related to this adaptive trait in the Tunisian population.
Materials and Methods: In a first step, we extracted genotypic data for 135 healthy subjects from data
available in our laboratory, covering a 5 Mb region and spanning genes responsible for LP. Data analysis
was performed with “ADMIXTURE” software.
As a second step, we selected 40 SNPs covering the LCT and MCM6 genes and reported as associated with
LP in previous studies. Using the iPlex Gold Genotyping Assay and Sequenom Mass Array technology,
we genotyped 117 Tunisian individuals randomly recruited. Statistical and bioinformatic analyses were
performed using PLINK v.1.09 software and R programming language. Obtained results were compared
versus several European human groups publicly available.
Results : Our results show that the -13,910 C/C and -22,018 G/G genotypes were predominantly present
in the examined population reaching frequencies of 78% and 74%, respectively. Differences in the allele
frequency of the two above-mentioned functional SNPs were significant when comparing the Tunisian
population versus the Northern European, North Eastern and North Western Italian populations
(p < 0.01). Haplotypes reconstruction showed that the haplotype carrying reference alleles was the
predominant one (58%), followed by the haplotype constructed with the derived alleles (38%). These
observations were further confirmed by principal component analysis (PCA) that again highlight clear
differentiation between Tunisian and Northern European and Northern Italian samples.
Conclusions : Tunisia show high frequencies of genotypes associated with LNP. This finding could be
interpreted as evidence of a weak positive selection having acted on the LCT locus in such population.
These high frequencies could be also explained by admixture processes that occurred by different ways in
the various geographic regions of our country.
Key words: Lactase Persistence, LCT, Tunisia, admixture, Natural selection.
O6- CD39 EXPRESSION IN THE CEREBROSPINAL FLUID OF PATIENTS
WITH NEUROLOGICAL DISORDERS
K. BAHRINI1,2, M. BELGHITH1,2, M. KCHAOU3, S. BLEL3 AND M.R. BARBOUCHE1
1
2
3
Institut Pasteur de Tunis, LTCII, LR11IPT02, Tunis, 1002, Tunisia
Tunis El Manar University, Tunis, Tunisia
Department of Neurology, Charles Nicolle Hospital, Tunis, Tunisia
Introduction/Objective: Multiple sclerosis is a chronic inflammatory disease of the central nervous
system (CNS). It has been reported that effectors T cells involved in the pathogenesis of MS are mainly
TH1 and TH17 populations. Indeed, they emerged as crucial players in CNS inflammation associated to
disease. The purpose of this study is to characterize the phenotype of TCD4 subpopulation present in the
cerebrospinal fluid (CSF) and to investigate biomarkers able to discriminate MS patients from patients
with other inflammatory neurological disease.
Materiel and Methods: We quantified, using quantitative RT-PCR, the mRNA of INF-γ, IL-17, IL-10, IL-4,
Foxp3 and CD39 in the CSF of 21 patients with relapsing remitting multiple sclerosis (RRMS), 19 patients
with Neuro-Behçet disease (NBD) and 22 healthy controls. CD39 expression in the CSF was studied
simultaneously with Foxp3 intracellular labeling by flow cytometry.
Results: Our findings show an increased level of INF-γ and IL-17 in the CSF of RRMS and NBD patients
compared to controls (p<0.05). Moreover, measurement of anti-inflammatory cytokines, showed a
significant increase of IL-10 in the CSF of NBD compared to other groups (p<0,001). The evaluation of
26
Foxp3 mRNA expression did not show a significant difference between the 3 groups. Thus, we studied
another marker called CD39, which is defined as an ecto-enzyme that cleaves ATP to AMP. We demonstrated
that CD39 is highly expressed in CSF of RRMS patients (p<0,001). However, it is absent in the CSF from
control group. Moreover, by cytometry the CD39 does not correlate with Foxp3 labeling in the CSF of
RRMS patients.
Conclusion: To conclude, we show an increase of pro-inflammatory cytokines in the CSF particularly INF-γ
and IL-17. Furthermore, a strong involvement of CD39+ cells seems to play a role in immunodysregulation
in the CSF of RRMS patients.
Keywords: Multiple sclerosis, Neuro-Behçet, Central nervous system, Cerebrospinal fluid.
O7- VARIABILIT Y OF PHARMACOGENES INVOLVED IN METABOLIC
SYNDROME IN TUNISIA AND COMPARISON WITH WORLDWIDE
POPULATIONS
H. JMEL1, 5, L. ROMDHANE1, 5, Y. BEN HALIMA1, 4, M. NAGARA1, C. NAOUALI1, 4, H. DALLALI1,5, M. HECHMI1,
A.B. ABID3, H. JAMOUSSI3, S. TRABELSI6, D. LUISELLI2, S. ABDELHAK1, 4 AND R. KEFI1, 4.
1
2
3
4
5
6
Laboratory of Biomedical Genomics and Oncogenetics, Institut Pasteur de Tunis, BP 74, 13 Place Pasteur,
Tunis 1002, Tunisia.
Laboratory of Molecular Anthropology, Department of Biological, Geological and Environmental Sciences
(BiGeA), University of Bologna, Bologna, 40126, Italy.
Department of external consultation, National Institute of Nutrition and Food Technology, Tunis, Tunisia.
Université de Tunis El Manar, 2092 El Manar I Tunis, Tunisie.
Université de Carthage Tunis.
Centre National de Pharmacovigilance
Background: Genetic variation is an important determinant affecting the individual’s response to drugs. Several studies
have highlighted the importance of ethnicity in influencing drug response variability that should be considered during
drug development. The aim of this study is to characterize the genetic variability of pharmacogenes mainly involved in
the response to drugs used for the treatment of Metabolic Syndrome (MetS) in Tunisia and to compare them to the
worldwide populations.
Populations & Methods : A set of 135 Tunisian controls individuals was genotyped using the Affymetrix Chip 6.0 genotyping
array. Variants located in 24 Very Important Pharmacogenes (VIP) involved in MetS component drug response were
defined from the PharmGKB database and extracted from the genotyping data using the PLINK v2 software. Analysis of
variant distribution in Tunisian population compared to 20 worldwide populations selected from HapMap database and
from the literature were performed using FactoMinerR, SNPRelate, SNPassoc and Hierfstat packages in R environment.
Results: We identified 1056 variants within the 24 selected pharmacogenes extracted from controls genotyping data.
Among them, 743 variants are common between Tunisians and the 20 investigated worldwide populations. Principal
Component Analysis based on these variants showed that Tunisian population is closed to North African populations
and clustered with Tuscan, European (CEU) and Spain populations. The greatest divergence was observed with the
African population from Kenya (LWK). We performed Inter-ethnic comparison based on the genotype frequencies of
five VIP biomarkers selected from the 743 common variants. The genotype frequencies of the biomarkers rs3846662,
rs1045642, rs7294 and rs12255372 located respectively in HMGCR, ABCB1, VKORC1 and TCF7L2 are similar between
Tunisian, Tuscan and European populations (CEU). The genotype frequency of the variant rs776746 located in
CYP3A5 gene is similar between Tunisian and African populations and significantly different from European
populations (CEU).
Tome 92 (1-2)
27
Conclusion: This study provide the first pharmacogenomic investigation in Tunisia and our finding
demonstrate that the variability of pharmacogene involved in MetS component drug response in
Tunisian population and other ethnic groups is heterogeneous. This ethnic difference should be taken in
consideration to improve personalized medicine and to avoid serious adverse drug reactions.
Keywords: Genetic variability, pharmacogene, VIP variants, Ethnicity
O8- HIGH RESOLUTION MELTING METHOD FOR SNPS GENOT YPING
AND MUTATION DETECTION
H. BEN SALALH1, M. ASSIDI1, R. JLASSI1, I. BEN SGUAEIR1, R. AMMI2, I. BEN MRAD3, S. ZARROUK4, I. ZIDI5,
A. BOURATBINE1, K. AOUN1, H. CHELBI1.
1
2
3
4
5
LR 11-IPT-06 Laboratory of Medical Parasitology, Biotechnology and Biomolecules, Pasteur Institute of Tunis,
Tunisia
Gastroenterology department of regional hospital Ben Arouss Tunisia;
Externals consultants service Pasteur institute of Tunis, Tunisia;
CORE FACILTY Genomic pole, protemoming and immaging Pasteur institute Tunis Tunisia;
Department of Biology, Laboratoire Microorganismes et Biomolécules Actives, Sciences Faculty of Tunis,
Tunis, Tunisia
Introduction: Single nucleotide polymorphisms (SNPs) represent the most common type of human
population DNA variation. Genotyping these polymorphisms typically involves the generation of allele
specific products for SNPs of interest followed by their detection for genotype determination. A new
approach was developed, called “quantitative PCR (qPCR) high-resolution melting (HRM) (qPCR-HRM),”
which co mbines real time amplification and melt curve analysis. Aims: The aim of this work is to genotype
three SNPs: rs12472244A/G, rs2131109A/G and rs1776531A/C localized respectively in USP40, BSN and
USP03 genes using qPCR-HRM method and determine their distribution in Tunisian general population.
Methods: DNA from 115 individuals was extracted from whole blood. Positive Controls (known genotypes
samples) for each SNP were identified by PCR-RFLP and DNA sequencing (Sanger method) and were used
as reference when assigning genotypes for trial samples. Real time amplification was performed using BioRad CFX96 and Eva green dye. Melting curves were analyzed using precision melt analysis software. The
Hardy-Weinberg equilibrium was tested.
Results: qPCR-HRM analysis was successfully applied to SNP’s genotyping. We were able to recognize
the three studied SNP using qPCR-HRM with similar accuracy than PCR-RFLP and DNA sequencing.
Hardy-Weinberg equilibrium test shows that our population is in equilibrium for the three studied SNPs.
Minor allele frequency (MAF) of each SNP in Tunisian general population is 41% for rs1272244G, 36% for
rs2131109G and 34% for rs17765311C. During positive controls identification using DNA sequencing we
have detected a second SNP in USP40 target sequence. The sample tracked with additional variation has
generated, as expected, different shape (from A/A, A/G and G/G shape) and formed a cluster separately
when subjected to melt curve analysis.
Conclusion: qPCR-HRM is a rapid and cost-effective method suitable for testing a large series of samples.
Additional single variation detected by DNA sequencing has generated a new cluster during melt curve
analysis confirming the high senility of qPCR-HRM technique.
Keywords: Tunisian general population, SNP, qPCR-HRM.
28
SESSION 2: BIOINFORMATIQUE, BIOMATHÉMATIQUE
ET BIOSTATISTIQUE
O9- IN SILICO IDENTIFICATION AND BIOCHEMICAL VALIDATION
OF NOVEL INHIBITORS OF LEISHMANIA EUKARYOTIC INITIATION
FACTOR 4A
E. HARIGUA-SOUIAI1,2, Y.Z. ADELKRIM1, I. BASSOUMI-JAMOUSSI1, O. ZAKRAOUI1, G. BOUVIER2, J.
BANROQUE3, N. DESDOUITS2, H. MUNIER-LEHMANN4, M. BARHOUMI1, K. ESSAFI-BENKHADIR1, N.K
TANNER3, M. NILGES2, A. BLONDEL2, I. GUIZANI1*
1
2
3
4
Laboratory of Molecular Epidemiology and Experimental Pathology, Institut Pasteur de Tunis
Unite de Bioinformatique Structurale, Institut Pasteur, Paris
Laboratory of Microbial Gene Expression, Institut de Biologie Physico-Chimique, Paris
Unite de Chimie et Biocatalyse, Institut Pasteur, Paris
Background and objectives: Leishmaniases are neglected parasitic diseases in spite of the major burden
they inflict on public health. The identification of novel drugs and targets constitutes a research priority.
For that purpose we used Leishmania initiation factor 4A (LeIF), an important translation initiation factor
that belongs to the DEAD-box proteins family, as a potential drug target.
Results: We modeled its structure and identified two potential binding sites. A virtual screening of a
diverse chemical library was performed for both sites. We developed an original method based on SelfOrganizing Maps algorithm to analyze the screens’ outputs. Thus, compounds presenting consensual
docking poses were filtered, which led to the selection of 300 molecules. We tested these molecules for
their effects on the ATPase activity of LeIF and its mammalian homolog. Four samples caused inhibition of
this activity. Detailed kinetic study could be performed on the most potent compound (C208), having a
half maximal inhibitory concentration (IC50) of 150 ± 15 μM for 1 μM of protein. Compound C208 was
then used as a bait to browse the ZINC database for chemical analogs. This virtual chemical screen led to
the identification of 36 analogous molecules that were screened. Two molecules (CS48 and CT7) could
demonstrate inhibition of LeIF ATPase activity. All three compounds (C208, CS48 and CT7) were tested
for their effects in vitro on the viability of the free promastigote form of Leishmania parasites. Their
respective IC50 values were in the range of 1-4 µM.
Conclusions: Compound C208 and its analogs may constitute a novel route for drug design for antiLeishmania treatment. Further work will be undertaken to understand the mode of binding and interaction
between LeIF and its most promising inhibitor.
Mots clès: Leishmania, DEAD-box proteins, Drug discovery, Leishmanicidal.
O10- GENOMIC FEATURES AND INSIGHTS INTO THE BIOLOGY
OF MYCOPLASMA MELEAGRIDIS AND MYCOPLASMA GALLINARUM
THROUGH COMPARATIVE GENOMIC ANALYSIS WITH OTHER AVIAN
MYCOPLASMAS
E. YACOUB1, P. SIRAND-PUGNET2,3, A. BLANCHARD2,3 AND B. BEN ABDELMOUMEN MARDASSI1
Tome 92 (1-2)
29
1
2
3
Specialized Unit of Mycoplasmas, Laboratory of Molecular Microbiology, Vaccinology and Biotechnology
Development, Institut Pasteur de Tunis, Tunisia.
National Institute for Agronomical Research, France, University of Bordeaux, Bordeaux, France.
Université de Bordeaux, UMR 1332 de Biologie du Fruit et Pathologie, Villenave d’Ornon, France.
Email: elhem_ [email protected]
Introduction and objectives: Mycoplasma meleagridis and Mycoplasma gallinarum are avian
mycoplasma species often ignored and underestimated. We have previously reported that M. meleagridis
has broken the barrier of its turkey specific host since it was isolated from chicken. As for M. gallinarum,
usually considered avirulent, a pathogenic role was attributed to some of its strains. Few genomic data
are hitherto available for these avian mycoplasmas and little is known regarding their host range and
virulence determinants. By sequencing two Tunisian field strains of M. meleagridis (MM_26B8_IPT) and
M. gallinarum (Mgn_IPT), isolated from chickens, and by comparison of their genomic sequences with
those of M. meleagridis ATCC strain (MM_ATCC) and six other avian mycoplasmas, we attempted to
unravel the genetic factors ruling M. meleagridis transfer from turkey to chicken and to determine the
pathogenicity potential of M. gallinarum in chicken.
Materials and Methods: Genome sequencing of the three strains was achieved using MiSeq sequencer
(Illumina). De novo assembly was performed using CLC and ABySS softwares. Automatic annotation
was fulfilled by Rapid Annotation Subsystem Technology (RAST) and improved by additional manual
inspection. Genomic analysis was achieved using tools available in RAST and Molligen databases.
Results: M. meleagridis inter-strains whole genome comparison revealed that host transfer from turkey
to chicken is probably generated by genomic differences consisting in new DNA acquisition from Bacillus
coagulans and repetition of existing DNA, detected in MM_26B8_IPT. These differences, which their
sequence size is about 24 kb, have probably changed the proteomic landscape structure of M. meleagridis
field strain and allowed it to conquer a new host environment. Comparative genomic analyses based on
virulence factors have shown that MM_ATCC, MM_26B8_IPT, and Mgn_IPT are not armed with adhesins
and hemagglutinins as the most virulent avian mycoplasmas. It seems that they are rather relying on
nucleases and proteases to be harmful. Interestingly, Mgn_IPT was found to harbor additional genetic
determinants such as transposases, licD and lpd genes for which the involvement in virulence was
previously reported and proved.
Conclusion: Overall, this genomic comparative study had advanced biological knowledge about these two
mycoplasmas by discerning some of their host change and virulence factors.
Keys words: Mycoplasma meleagridis, Mycoplasma gallinarum, Sequencing, Comparative genomics
O11- INTERACTION MODEL OF PEPTIDIC CHLORIDE CHANNEL
BLOCKERS TO COLLAGEN BINDING DOMAIN OF MMP-2 PREDICTED
BY BIOMOLECULAR SIMULATION DOCKING AND FREE ENERGY
CALCULATION
H.E. OTHMAN1, S.A. WIENINGER2, M.C. SAADA1, M. ELAYEB1, M. NILGES 2 AND N. SRAIRI-ABID1
Université de Tunis El Manar, Institut Pasteur de Tunis, Laboratoire des Venins et biomolécules thérapeutiques
LR11IPT08, Tunis, 1002, Tunisia.
2
Département de Biologie Structurale et Chimie, Institut Pasteur, Unité de Bioinformatique Structurale, CNRS
UMR 3825, 25-28, rue Dr. Roux, 75 724 Paris, France
1
Email : [email protected]
30
Background: Glioblastoma is a highly invasive form of brain cancer. To aquire such potential, glioblastoma
cells activate a particular class of proteins called Matrix Metalloproteinasis (MMPs). Indeed, MMP-2 has
been shown to be highly expressed during the invasion. In the previous years, a new family of scorpion
peptides has emerged as a collection of putative inhibitors of MMP-2. In particular ClTx, the first peptide
characterized in the family and AaCTx purified in our Lab, inhibit differently glioblastoma cell invasion.
However their interaction mode with MMP-2 remains unknown.
Methods: A deep computational study implicating molecular modeling, Docking, molecular dynamics and
free energy calculation was used to present the first attempt of a generic interaction model of ClTx and
AaCTx with MMP-2.
Results: Our results suggest that the two peptides probably act on an exosite of MMP-2 comprising mainly
residues from the collagen binding domain, a feature that could be exploited to enhance the selectivity
toward MMP-2. Van der Waals and hydrophobic forces are the primary mediators of this interaction. The
N- and C-termini of the two peptides harbor the key residues of the interaction spread across a conserved
amino acid patch. In particular, F6 contributes mostly to the binding free energy in ClTx. We also suggest
that the lack of the C-terminal arginine and the residues P10 and R24, might be responsible for altering the
activity of AaCTx toward glioblastoma cells compared to ClTx.
Conclusion: Both AaCtx and ClTx interact with the collagen binding domain of hMMP-2, contrary to all
zinc chelator inhibitors, which block the catalytic binding site. The interaction surface of the peptides is
conserved and consists of hydrophobic amino acids surrounding a patch of polar residues. This amino
acid cluster might constitute a minimum structural feature required to inhibit the activity of hMMP-2 which
could be the subject of drug design assays.
Key-words: MMP-2; glioblastoma; collagen binding domain; chlorotoxin; molecular modeling
O-12 COUPLING OF PHYSIOLOGICAL AND ECOLOGICAL MODELS TO
EXPLORE FOOD FLUCTUATION EFFECTS ON THE SEX CHANGE IN
HERMAPHRODITE SPECIES
D. LOUATI1,2,4, S. BEN MILED2,3 AND N. BELLAMINE BEN SAOUD1
1
2
3
4
Université de la Manouba, Ecole Nationale des Sciences de l’Informatique, Laboratoire RIADI, Tunisie
Université de Tunis El Manar,Institut Pasteur de Tunis, Laboratoire BIMS
Université de Tunis El Manar, Faculté des Sciences de Tunis, Tunisie.
Université Pierre et Marie Curie, IRD-UMMISCO, France.
Email: [email protected]
One of the major evolutionary questions about sequential hermaphrodite is to determine where the direction and
the timing of sex change are viewed as responses to demographic and environmental parameters. To connect the
sexual behaviour of hermaphrodites to the environment parameters (e.g. food availability and population density)
it is indispensable to couple models at physiological and ecological levels. In this work, we aim to investigate the
food fluctuation effect on the optimal individual sex change size and on population sex-ratio. Our approach is
based on the study of the sex-ratio and sex change size as emergent parameters from individuals behaviour which
is based on energy allocation rules. We developed an agent based model coupling Dynamic Energy Budget model
at individual level and sexual allocation models at the population level. We designed experiments to determine
the most relevant parameters and study the effects of fluctuating food on the individual and population levels.
At constant food availability, both growth and maturation predicted by the model fit well with field observations.
Mots clès: Modelisation, Simulation, Ecology, Multi-level, Coupling.
Tome 92 (1-2)
31
SESSION 3 : MALADIES INFECTIEUSES
O13- SELECTION AND BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF
SMALL MOLECULES THAT INHIBIT LEIF: LEISHMANIA TRANSLATION
INITIATION FACTOR
Y.Z. ABDELKRIM1, E. HARIGUA1,2, J. BANROQUES3, H. MUNNIER LEHMANN4, K. ESSAFI-BENKHADIR 1,
M. BARHOUMI1, N.K. TANNER3 AND I. GUIZANI1
Laboratory of Molecular Epidemiology and Experimental Pathology (LR11IPT04)/ Laboratory of Epidemiology
and Ecology of Parasites, Institut Pasteur de Tunis – University Tunis el Manar, Tunis-Tunisia
2
Unit of Structural Bioinformatics, CNRS UMR 3528, Institut Pasteur, Paris, France
3
Laboratory of Microbial Gene Expression (EGM), CNRS UMR 8261/Université Paris Diderot, Institut de Biologie
Physico-Chimique, Paris, France
4
Unit of Chemistry and Biocatalysis, Institut Pasteur, Paris, France
1
LeIF is a Leishmania protein similar to the eukaryotic initiation factor eIF4AI, which is a prototype of
the DEAD-box protein family. LeIF has 56% identity and 84% similarity with mammalian eIF4AI. As with
other members of the DEAD-box-helicase protein family, LeIF is both an RNA-dependent ATPase and an
ATP-dependent RNA helicase. This protein is considered as a potential drug target because it is important
for the growth of the parasite in infected mammals. Thus, we are interested in developing novel control
strategies based on identifying and characterizing specific new anti-LeIF molecules. To identify eventual
drugs, potential compounds are first tested for their affects on the biochemical activities of the purified
protein. The aim of the present study is to screen and characterize small molecules that target LeIF. We
used recombinant LeIF protein containing His6 affinity tags that is purified on nickel nitrilotriacetic-acidagarose columns. We optimized the ATPase assay, based on previously published conditions for LeIF.
We established a biochemical screening platform for LeIF for testing its ATPase activity. We obtained the
following conditions: 340 ng/μl XI-C whole yeast RNA (Sigma), 1 mM ATP, 37 ng/μL of LeIF, and 5 mM
magnesium acetate for LeIF. Reactions were done at 37°C for up to 45 minutes. In addition, we tested
300 molecules, identified by a virtual screening of a three-dimensional model of LeIF, for their effect on
the ATPase activity of LeIF. Subsequently, we further analyzed four interesting hits exerting μM levels of
ATPase inhibition. We focused on the most promising compound (C208) that had a half maximal inhibitory
concentration (IC50) of 150 μM ±15 μM for further biochemical and enzymatic characterization. Finally,
we confirmed that the compound interferes with the RNA binding site, and that it inhibits the ATPase
activity of the protein by blocking or reducing the affinity for RNA. In conclusion, we have selected four
hits exerting μM levels of ATPase inhibition. These molecules could be considered as novel candidates in
the search for inhibitors against Leishmania.
Financial support: Institut Pasteur PTR (ID: 426) & MESRST- Tunisia (LR11IPT04) and by an ARN grant
(HeliDEAD ANR- 13-BSV8-0009-01) to J.B. and N.K.T.
O14- IMPLICATION OF HEDGEHOGS AS POTENTIAL RESERVOIR
HOSTS IN THE TRANSMISSION CYCLE OF LEISHMANIASIS IN TUNISIA.
H. SOUGUIR OMRANI1,2, J. CHEMKHI1, I. BEL HADJ ALI1, Y. SAADI1, A. FATHALLAH MILI1,3, I. GUIZANI1
ET S. GUERBOUJ1
32
Laboratoire d’Epidémiologie Moléculaire et Pathologie Expérimentale Appliquée aux Maladies Infectieuses
(LR11IPT04), Institut Pasteur de Tunis, Université Tunis el Manar, Tunis, Tunisie
2
Faculté des Sciences de Bizerte, Université de Carthage, Tunisie
3
Service de Parasitologie, Faculté de Médecine de Sousse, Université de Sousse, Tunisie
1
Leishmaniasis are vector-borne diseases ranging from cutaneous self-healing lesions to fatal if untreated
visceral forms. They are transmitted to human and other mammals by the bite of female phlebotomine
sandflies; several wild and domestic reservoir hosts are implicated in their transmission cycles. In Tunisia,
different clinical forms of human leishmaniasis co-exist and are caused by three Leishmania parasites
species. Reservoir hosts incriminated in their transmission include Psammomys and Meriones rodents
and dogs, which are confirmed reservoirs of zoonotic cutaneous and visceral leishmaniases, respectively.
However, other mammals could constitute potential reservoir hosts of leishmaniasis in Tunisia and over
the world. In order to explore the role of hedgehogs as potential reservoirs of leishmaniasis, 18 hedgehog
specimens were trapped from different endemic foci in Tunisia (ElKef, Kairouan and Kebili governorates).
After DNA extraction from 129 different biopsies, 4 PCR tests targeting kinetoplast minicircles, ITS1, a
conserved sequence in the ssu rRNA gene and a repetitive Leishmania specific sequence were applied
to identify Leishmania infection. To further identify the corresponding Leishmania species, an RFLP
analysis of the amplified fragments was performed with appropriate restriction enzymes and direct
sequencing was conducted on positive samples. Based on morphological characters, studied hedgehogs
were found to belong to 2 different species, Atelerix algirus (N=14) and Paraechinus aethiopicus (N=4).
PCR results showed infection of all studied hedgehogs specimens with Leishmania parasites, mainly in
samples from kidney, liver, spleen, heart and blood. Species identification showed hedgehogs’ infection
with the three Leishmania species with a dominance of L. infantum and L. major infection in 25 and 21
samples respectively. Interestingly, a co-infection with L. major and L. infantum was found in 5 different
specimens, and 3 of them showed it in the same organs. A co-infection with L. major and L. tropica was
also found in an eye swab biopsy from another specimen. The present study demonstrates, for the first
time in Tunisia, natural infection of hedgehog animals by Leishmania parasite species, inferring this wild
mammal could play a potential reservoir role in transmission of leishmaniasis, in Tunisia.
Acknowledgments: The study received support from the Ministry of Higher Education and Research in
Tunisia.
Mots clès: Leishmania, Leishmaniasis, hedgehogs, transmission cycle , reservoir host.
O15- LOCALIZATION AND DYNAMICS OF LIPID DROPLET DURING
LEISHMANIA MAJOR MACROPHAGE INFECTION
S. RABHI1,2, I. RABHI1,3, B. TRENTIN4, D. PIQUEMAL4, B. REGNAULT5, S. GOYARD6, T. LANG6, A. DESCOTEAUX 7,
J. ENNINGA8, L. GUIZANI-TABBANE1
1
2
3
4
5
6
Institut Pasteur de Tunis. Laboratoire de Parasitologies medicales biotechnologies et Biomolecules. University
of Tunis El Manar. 13, Place Pasteur - B. P. 74. 1002 Tunis-Belvedere.
Université de carthage. Sidi Bou Said, Avenue de la République - B. P .77. 1054, Carthage,Tunisie.
Biotechnology and Bio-Geo Resources Valorization Laboratory (LR11ES31); Higher Institute for Biotechnology
University of Manouba. Biotechpole of Sidi Thabet, 2020, Sidi Thabet, Ariana, Tunisia
Acobiom Cap Delta-Biopôle Euromédecine II. 1682, rue de la Valsière - 34184 Montpellier Cedex 4 - France
DNA Chip Platform, Genopole. Institut Pasteur de Paris, 25-28 rue du Dr Roux. 75015 Paris. France
Institut Pasteur, Département Infection et Epidémiologie, Laboratoire des Processus infectieux à
Tome 92 (1-2)
33
7
8
Trypanosomatidés, 26 rue du Dr Roux, 75724 Paris Cedex 15, France
INRS-Institut Armand Frappier and Centre for Host-Parasite Interactions, 531, boulevard des Prairies, Laval
(Québec) H7V 1B7, Canada
Institut Pasteur, Dynamics of host-pathogen interactions Unit, 25 Rue du Dr. Roux, 75724 Paris, France.
Leishmania, the causative agent of vector-borne diseases, known as leishmaniases, is an obligate
intracellular parasite within mammalian hosts. The outcome of infection depends largely on the activation
status of macrophages, the first line of mammalian defense and the major target cells for parasite
replication. Understanding the strategies developed by the parasite to circumvent macrophage defense
mechanisms and to survive within those cells help defining novel therapeutic approaches for leishmaniasis.
We previously showed the formation of lipid droplets (LDs) in L. major infected macrophages. Here, we
provide novel insights on the origin of the formed LDs by determining their cellular distribution and to what
extent these high-energy sources are directed to the proximity of Leishmania parasites. We show that the
ability of L. major to trigger macrophage LD accumulation is independent of parasite viability and uptake
and can also be observed in non-infected cells through paracrine stimuli suggesting that LD formation is
from cellular origin. The accumulation of LDs is demonstrated using confocal microscopy and live-cell
imagin in parasite-free cytoplasmic region of the host cell, but also promptly recruited to the proximity of
Leishmania parasites. Indeed LDs are observed inside parasitophorous vacuole and in parasite cytoplasm
suggesting that Leishmania parasites besides producing their own LDs, may take advantage of these high
energy sources. Otherwise, these LDs may help cells defending against parasitic infection. These metabolic
changes, rising as common features during the last years, occur in host cells infected by a large number of
pathogens and seem to play an important role in pathogenesis. Understanding how Leishmania parasites
and different pathogens exploit this LD accumulation will help us define the common mechanism used by
these different pathogens to manipulate and/or take advantage of this high-energy source.
O16- ASTERACEAE ARTEMISIA CAMPESTRIS AND ARTEMISIA HERBA
ALBA ESSENTIAL OILS TRIGGER APOPTOSIS AND CELL CYCLE ARREST
IN LEISHMANIA INFANTUM PROMASTIGOTES
Z. ALOUI1, C. MESSAOUD2, M. HAOUES3†, N. NEFFATI1†, I. B. JAMOUSSI1, K. ESSAFI-BENKHADIR1, M.
BOUSSAID2, I. GUIZANI1* AND H. KAROUI1*.
†, *: These authors contributed equally to this work
1
2
3
Laboratoire d’Epidémiologie Moléculaire et Pathologie Expérimentale Appliquée aux Maladies Infectieuses
LR11IPT04, Université de Tunis El Manar, Institut Pasteur de Tunis, 13 Place Pasteur, BP-74, 1002 Tunis
Belvédère, Tunisie.
Unité Ressources Phytogénétiques et Biotechnologie Végétale, INSAT, BP-676, 1080 Tunis, Tunisie.
Laboratoire de recherche sur la Transmission, le Contrôle et l’Immunobiologie des Infections LR11IPT02,
Université de Tunis El Manar, Institut Pasteur de Tunis, 13 Place Pasteur, BP-74, 1002 Tunis Belvédère, Tunisie.
Leishmaniases constitute a group of neglected, vector-borne tropical diseases that are widespread and
considered as major health problems. Due to toxicity and costs of current therapeutically formulations,
the development of new and non toxic affordable drugs, which can improve current therapies, constitutes
a research priority for the treatment of leishmaniasis. Plant secondary metabolites constitute promising
34
candidates recognized as low-cost starting materials rich in bioactive compounds. The aim of this
study was to investigate the chemical compositions, antioxidant effects and antileishmanial activities of
hydro-distilled essential oils (EOs) from Artemisia herba alba Asso. and Artemisia campestris L. species
collected in Tunisia. Chemical compositions of the essential oils were determined by GC-MS. Nineteen
compounds, representing 98.13% of the total oil, and twenty-four compounds representing 94.95% were
identified, respectively, in A. herba alba and A. campestris EOs. We evaluated the anti-Leishmania activity
of these two natural products. Both EOs possess significant anti-leishmanial activity against Leishmania
infantum promastigotes. Changes in the morphology of promastigotes and dose dependant growth
inhibition analysis following treatment confirmed the anti-proliferative effect of A. herba alba and A.
campestris EOs. The anti-leishmanial activity was mediated via apoptosis, as evidenced by externalization
of phosphatidylserine using Annexin-V/7-AAD staining, and cell cycle arrest at the sub-G0/G1 phase. By
using LDH release assay, we confirmed that even after 72 h exposure to both EOs the cell membrane of
the promastigotes remains intact and the parasites die with a programmed cell death mechanism. These
results showed that EOs from A. herba alba and A. campestris plants are promising candidates as antiLeishmania medicinal products which trigger L. infantum apoptosis. Our study expands the scope for
future design of novel chemotherapeutic strategies against leishmaniasis.
Key words: Artemisia essential oil, anti-leishmanial activity, Leishmania infantum, apoptosis, cell cycle
arrest.
O17- DEUX CONFORMATIONS SPATIALES DE L’ANTIGENE DE VIRULENCE
DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS, ESAT-6, SONT A L’ORIGINE DE LA
CONTROVERSE AUTOUR DE SES FONCTIONS BIOLOGIQUES
A. REFAI1,2, M. HAOUES1,2, H.E. OTHMAN2,3, M.R. BARBOUCHE1,2, P. MOUA4, A. BONDON4, L. MOURET4,
N. SRAIRI-ABID2,3 AND M. ESSAFI1,2
1
2
3
4
Institut Pasteur de Tunis, LTCII LR11 IPT02, Tunisia
Universite Tunis El Manar, Tunisia
Institut Pasteur de Tunis, LVBT LR11 IPT08, Tunisia
UMR CNRS 6226 ISCR, Plate-forme PRISM, Universite de Rennes1, France
Introduction et objectifs: «Early secreted antigenic target 6 kDa» (ESAT-6) et «culture filtrate protein 10 kDa»
(CFP-10) sont les facteurs de virulence majeur sécrétés par Mycobacterium tuberculosis (Mtb) et qui jouent un
rôle important dans la pathogenèse de la tuberculose. Bien qu’ESAT-6 a été largement étudiée, ses fonctions
biologiques font toujours l’objet d’une importante controverse. Dans le présent travail, nous proposons une
explication de cette controverse et soulignons l’importance de deux états conformationnels de la protéine.
Matériel et méthodes: Les analyses de la structure d’ESAT-6 ont été effectuées par chromatographie
d’exclusion, gel natif, dichroïsme circulaire et résonance magnétique nucléaire. L’étude in silico de l’interaction
des protéines d’ESAT-6 a été réalisée par docking à l’aveugle et sous contrainte. L’étude fonctionnelle des deux
formes d’ESAT-6 a été effectuée par le double marquage des macrophages à l’Annexin V et 7 ADD, western blot,
test d’hémolyse des globules rouges de mouton, ELISA et CFU.
Résultats et Conclusion: Les analyses de la forme recombinante d’ESAT-6 ont révélé qu’ESAT-6 forme des
dimères/multimères de haut poids moléculaire. Le traitement de ces dimères/multimères par un détergent tel
que l’amidosulfobetaine-14 (ASB) les dissocie et génère de nouvelles formes structurales. L’étude in silico de
l’interaction des protéines a suggéré un état d’association dimèrique d’ESAT-6. Fait intéressant, les deux
Tome 92 (1-2)
35
préparations d’ESAT-6 ont présenté un effet opposé sur l’infectivité mycobactérienne, la sécrétion de
l’IFN-g, la survie des macrophages et la formation de pores dans les membranes. Une forme recombinante
de l’hétérodimère physiologique ESAT-6/CFP-10 a été aussi produite et le détergent ASB a été encore
une fois capable de la dissocier. ESAT-6/CFP-10 a montré des fonctions similaires à celles des dimères/
multimères d’ESAT-6. Nos résultats suggèrent, qu’en absence de sa protéine partenaire CFP-10, les zones
hydrophobes des molécules d’ESAT-6 recombinantes s’associent entre elles pour former des dimères/
multimères mimant l’hétérodimère ESAT-6/CFP-10. Alors que la dissociation de ces dimères/multimères
d’ESAT-6 par un détergent génère de nouvelles conformations structurales de la protéine dotées de
fonctions différentes. Nos résultats proposent que les fonctions d’ESAT-6 dépendent directement de son
état d’association, ou non, avec son partenaire CFP-10. Ainsi, les deux conformations spatiales adoptées
par ESAT-6 affecteraient différemment la réponse de la cellule hôte et le devenir de l’infection par Mtb.
Keywords: Tuberculosis, ESAT-6, structure, conformation, fonctions biologique.
O18- DYNAMIQUE INVASIVE DE LA BACTERIE ENDOSYMBIOTIQUE
WOLBACHIA CHEZ LE MOUSTIQUE CULEX PIPIENS EN TUNISIE
M. BEJI1, M. WEILL 2, A. RHIM1, A. BOUATTOUR1
1
2
Institut Pasteur de Tunis- Université de Tunis el Manar ;
Institut des Sciences de l’Evolution Montpellier
Introduction et objectifs : Le souci de la santé humaine est l’une des principales raisons d’étudier les
moustiques nuisibles qui jouent un rôle principale dans la transmission de pathogènes tel que les Culex
pipiens. Limiter la pullulation de ces vecteurs nécessite l’élaboration de méthodes de lutte. Cependant, à
cause de l’impact indésirable des insecticides sur la santé humaine et sur l’environnement et la résistance
des moustiques, la lutte biologique est le moyen le plus recommandé. De nouvelles perspectives de lutte
biologique sont envisagées, notamment l’utilisation de Wolbachia, qui induit chez Culex pipiens une
incompatibilité cytoplasmique. Pour aboutir à cet objectif, il est primordial d’étudier la dynamique invasive
des Wolbachia chez le moustique Culex pipiens en Tunisie.
Matériel et méthodes : Pour ce faire, des prospections sur le terrain sont effectuées pour collecter
des larves de moustiques, caractérisées Culex pipiens après identification. Ces larves font l’objet d’une
extraction de l’ADN. La détection des Wolbachia est réalisée en amplifiant le gène ank2, permettant la
différenciation entre les souches de la bactérie. Afin d’étudier la dynamique invasive des Wolbachia et
leurs effets sur la reproduction des moustiques, on a eu recours à l’élevage des moustiques infectées et la
réalisation de plusieurs croisements.
Résultats : Cette étude a permis de confirmer qu’en Tunisie deux souches de Wolbachia infectent les Culex
pipiens (wPip11 et wPip31) et qu’elles ont une répartition géographique marquée. La souche wPip31 a
été trouvée au Nord et au Nord-Ouest, la souche wPip11 essentiellement à l’Est, au centre et au sud de
la Tunisie et une zone de contact entre les deux souches. Les croisements entre les souches montrent
qu’elles sont incompatibles lors d’un accouplement entre un mâle infecté par wPip11 et une femelle
infectée par wPip31. Contrairement à l’attendu théorique, le suivi de la dynamique des souches pendant
trois ans, n’a pas montré une évolution de leur distribution et les fréquences des souches demeurent
stables.
Conclusion : Afin d’expliquer cette stabilité de la zone de contact plusieurs hypothèses sont en cours
d’étude. Cette étude montre l’intérêt de la connaissance préalable du pouvoir invasif des Wolbachia chez
les vecteurs en vue de leur utilisation comme moyen de lutte biologique.
36
O19- ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBILIT Y, PLASMID-MEDIATED
QUINOLONE RESISTANCE, VIRULOT YPING, PULSED-FIELD GEL
ELECTROPHORESIS AND PLASMID ANALYSIS OF SALMONELLA
ENTERICA SEROT YPE ENTERITIDIS FROM CHICKENS AND
CHICKEN FARM ENVIRONMENT IN TUNISIA
R. BEN SALEM1,2, M.S. ABBASSI1, I. MESSADI4, M.R. RODICCIO3
Institut de Recherche Véterinaire de Tunisie, 20 Rue Jebel Lakhdhar, Bab Saadoun, 1006 Tunis, Tunisia,
Faculté des Sciences de Bizerte, Université de Carthage, Tunis, Tunisia
2
Faculté des sciences de Bizerte, Université de Carthage, Tunisie
3
Universidad de Oviedo, Departamento de Biología Funcional, Área de Microbiología, Julián Clavería 6,
33006 Oviedo, Spain
4
Ecole Nationale de Médecine Vétérinaire, Service de Microbiologie et Immunologie, Université of La
Manouba, 2020 Sidi Thabet, Tunisia
1
Salmonella enterica is one of the leading causes of foodborne illness worldwide, Salmonella Enteritidis being
the most common serovar. We have applied phenotypic and molecular techniques to 77 isolates of this serovar
collected during the 2009 to 2013 period from healthy and sick chickens and from environmental farm samples
in Tunisia. They were analyzed for resistance to 14 antimicrobials and the responsible genes, including plasmidmediated quinolone resistance (PMQR) genes, were identified. Fifty one (65%) isolates were pan-susceptible.
Amongst the remaining isolates, 20 (26%), five (6.5%), three (4%) and one (1.3%) were resistant to nalidixic acid
(Asp87 to Tyr and Asp87 to Asn substitutions in GyrA), ampicillin (blaTEM-1-like and blaSHV ), sulfonamides
(sul1 and sul3) and streptomycin (strB), respectively. A qnrB-positive isolate was detected, while qnrA, qnrS
or aac(6’)-Ib-cr were not found. Ten virulence genes were searched by PCR. The orgA, ssaQ, mgtC, siiD, sopB
genes, located on Salmonella pathogenicity islands, and spvC of the serovar-specific virulence plasmid, were
carried by all isolates. In contrast, the prophage-associated sopE-1, sodC1 and gipA genes, and the fimbrial bcfC
gene were variably represented. All isolates except one contained the 60 Kb serovar-specific virulence plasmid,
which appeared either alone or in combination with one or more plasmids ranging in size from 2 to 80 Kb.
One isolate carried a 90 Kb plasmid which has derived from the virulence plasmid. In all, seven resistotypes, six
virulotypes and six plasmid profiles were identified. XbaI-PFGE revealed four closely related pulsotypes, with
most isolates tested (80%) showing the same pattern. Isolates with this pattern exhibited different resistance,
virulence and plasmid profiles, suggesting that mobile genetic elements, particularly prophages and plasmids,
are playing an active role in diversification of the S. Enteritidis isolates circulating in chicken farms in Tunisia.
Keywords: Salmonella Enteritidis, poultry, antimicrobial drug resistance, virulence genes, PFGE.
O20- APPLICATION DE LA TECHNOLOGIE NUCLEOFECTIONTM POUR
L’IDENTIFICATION DES PROTEINES SALIVAIRES DE PHLEBOTOMUS
PAPATASI, CANDIDATS VACCINS CONTRE LA LEISHMANIOSE CUTANEE
CHEZ L’HOMME
A. TLILI1, S. MARZOUKI1, W. KAMMOUN-REBAI2, H. LOUZIR1, M. BEN AHMED1
1
2
Laboratoire de Transmission, Contrôle et Immunobiologie des Infections (LTCII) – Institut Pasteur de Tunis
Laboratoire de Parasitologie Médicale, Biotechnologies et Biomolécules – Institut Pasteur de Tunis
Tome 92 (1-2)
37
Introduction & objectif : Plusieurs données expérimentales démontrent que l’exposition préalable
des souris à la salive des phlébotomes est capable de conférer une immunité contre la leishmaniose
transmise par une piqûre infectante ultérieure. Nos travaux réalisés chez l’Homme montrent que les
protéines salivaires de Phlebotomus papatasi, vecteur de leishmania major, activent principalement des
lymphocytes T CD8 producteurs d’IL-10 et à un moindre degré des lymphocytes T CD4+ producteurs
d’IFN-γ. La caractérisation des antigènes salivaires cibles de la réponse immune de type Th1 est d’un grand
intérêt puisqu’elle pourrait définir des candidats vaccins potentiels contre la leishmaniose humaine. Vue
la difficulté d’obtenir les formes recombinantes des protéines salivaires de P. papatasi et afin d’identifier
les protéines d’intérêt activant une réponse cellulaire de type Th1 chez l’Homme, nous nous sommes
proposés de tester une nouvelle approche mettant en jeu la transfection des cellules mononucléées
humaines par des plasmides recombinants comportant les séquences des protéines ciblées.
Matériel & Méthodes : Les cellules mononucléées du sang périphériques (PBMC) ont été isolées à partir
du sang de 10 donneurs volontaires naturellement exposés aux piqures de P. papatasi. Les PBMC ont été
transfectées par les six plasmides d’intérêt (SP15, SP28, SP34, SP36, SP42 et SP44) ainsi que le plasmide
contenant la GFP pour évaluer le taux de transfection à 24 h. L’activation ou non d’une réponse immune
cellulaire de type Th1 a été évaluée en recherchant l’IFN-ɤ dans les surnageants de culture de 72 h par
ELISA sandwich et en évaluant la prolifération cellulaire par incorporation de la thymidine tritiée après 5
jours de culture.
Résultats : L’ensemble des données obtenus chez les donneurs immuns montrent que seules les « yellow
protéines » PpSP42 et PpSP44 et l’apyrase PpSP36 activent une réponse immune cellulaire de type Th1 et
constituent ainsi des candidats vaccins potentiels. Parmi ces trois protéines, la PpSP44 semble donner les
taux les plus élevés d’IFN-γ et ce, chez le plus grand nombre de donneurs.
Conclusion : Notre approche, basée sur l’utilisation d’une technologie innovante, NucleofectionTM, a
permis d’identifier trois protéines salivaires de P. papatasi candidats vaccins contre la leishmaniose cutanée.
Le but ultime est le développement d’un vaccin utilisable chez l’homme contre les différentes formes de
leishmanioses et comportant des antigènes parasitaires (au nombre de 3-4) et un à deux composants de
la salive du vecteur.
Mots clés : Leishmaniose cutanée – Candidat vaccin – Protéine salivaires de phlébotomes - NucleofectionTM
SESSION 4 : BIOTECHNOLOGIE APPLIQUEE
C21- LEBETIN 2, A SNAKE VENOM-DERIVED NATRIURETIC
PEPTIDE, ATTENUATES MYOCARDIAL ISCHEMIC INJURY IN A
POSTCODITIONNING MANNER IN EX VIVO AND IN VIVO ISCHEMIAREPERFUSION EXPERIMENTAL MODELS
B. TOURKI1,2, A. DUMESNIL3, J. MORAND4, M. ELAYEB1 E. BELAIDI-CORSAT4, N. MARRAKCHI1, V. RICHARD3,
P. MULDER3, E. MESSADI1
1
2
3
4
Laboratoire des Venins et Biomolécules Thérapeutiques (LR08) et Plateforme de Physiologie et de
Physiopathologie Cardiovasculaires (P2C), Institut Pasteur de Tunis – Université Tunis El Manar, Tunis, Tunisie
Université Carthage-Tunis, Tunis, Tunisie ;
Laboratoire Inserm U1096 et Institut de Recherche et d’Innovation Biomédicale, Université de Rouen, Rouen, France ;
Laboratoire HP2, Inserm U1042, Faculté de Pharmacie, Université Joseph Fourier, Grenoble, France.
38
Aims: Myocardial infarction (MI) remains a leading cause of morbidity and mortality worldwide. It is
associated with necrosis, profound alteration in function, inflammatory response and subsequent fibrosis
leading to cardiac dysfunction. Here, we aimed at testing the therapeutic potential of Lebetin 2 (L2), a
snake venom-derived natriuretic peptide and B-type natriuretic peptide (BNP) in ischemic-reperfusion
(IR) injury.
Methods: All wistar male rats were submitted to 30 min regional coronary artery occlusion. Two protocols
ex-vivo and in-vivo were conducted. In ex vivo protocol, Langendorff perfused rat hearts underwent 90min
reperfusion and were treated either with saline, BNP (10nM) or L2 (200nM) administered just prior to
reperfusion. Infarct size (IS), myocardial contractility, survival kinases and mitochondrial calcium retention
capacity (CRC) were assessed. For in vivo protocol, rats underwent 90min, 2 or 10 days reperfusion. Rats
were treated with either saline, BNP (50µg/kg) or L2 (100µg/kg), administered just before reperfusion. IS,
fibrosis and inflammation were evaluated.
Results: In Langendorff model L2 and BNP significantly decreased the IS by 60% compared to control
hearts (p<0.001). They also improved LVDP by 152 % and 135 % respectively (p<0.05). These effects are
abolished after pretreatment by antagonists isatin and 5-hydroxydecanoate. L2 and BNP also increased the
expression of phosphorylated PI3K/AKT/eNOS and PKCƐ/ERK/GSK3ß and increased the CRC by 86% and
124% respectively compared to control group. Regarding in vivo experiments, L2 and BNP significantly
decreased IS after acute IR (-60% and -40%, respectively p<0.01) and also10 days after reperfusion (-80%
and -60%, p<0.01). Both peptides reduced cardiac fibrosis by 60% for L2 and 35% by BNP (p<0.05) and leukocytes
(-35% and -20% respectively, p<0.05) and macrophage (-90% and -30% respectively, p<0.05) infiltration.
Conclusions: Our results demonstrate that L2 and BNP have potent cardioprotective effects during acute
and chronic experimental ischemia by reducing IS, improving cardiac contractility and decreasing postischemic fibrosis. The beneficial effects are mediated through the activation of natriuretic receptors and
the opening of mitochondrial KATP channels. The L2/BNP cardioprotection is at least due to inhibition of
IR-induced inflammation and improving mitochondrial dysfunction at the time of reperfusion.
Keys Words: Natriuretic Peptides, Cardioprotection, Ischemia-Reperfusion Injury, Rat Hearts
O22- A NOVEL MULTIPLEX RT-PCR COUPLED WITH LUMINEX® ASSAY
FOR THE SIMULTANEOUS DETECTION OF THE MOST IMPORTANT
AVIAN RESPIRATORY VIRUSES
N. LAAMIRI1,2, P. FÄLLGREN3, S. ZOHARI3, J. BEN ALI4, A. GHRAM1, M. LEIJON3 AND I. HMILA1
1
2
3
4
University Tunis El Manar, Laboratory of Epidemiology and Veterinary Microbiology, Institut Pasteur de
Tunis, 13 Place Pasteur, BP74, 1002 Tunis- Belvedere, Tunisia
University of Carthage, Faculty of Sciences Bizerte, 7021 Zarzouna Bizerte, Tunisia
Department of Microbiology, National Veterinary Institute (SVA), Ulls väg 2B, SE-751 89 Uppsala, Sweden
University of Tunis, Laboratory of Signal Image and Energy Mastery (SIME), National Higher School of
Engineers of Tunis, 5 Avenue Taha Hussein. P.O. Box 56, 1008 Tunis, Tunisia
E-mail : [email protected]:
Introduction: Viral respiratory diseases are leading causes of economic losses in the poultry industry
worldwide. The etiology of these diseases is complex and often involves more than one pathogen. The
most severe losses in terms of mortality are caused by very virulent viruses mainly Newcastle disease virus
(NDV ), avian influenza virus (AIV ), avian infectious bronchitis virus (IBV ) and infectious laryngotracheitis
virus (ILTV ). These viruses can cause disease independently, in association with each other, or in
Tome 92 (1-2)
39
association with bacterial agents. Single- or multiple-virus infections may induce similar clinical signs/
lesions. This complicates diagnostic decisions and clinical differentiation. Fast and sensitive detection
techniques that are capable of differentiating between these different respiratory viral infections are
needed for the surveillance of newly emerging viruses, outbreak management, as well as disease control.
Materials and methods: We have designed and validated a rapid identification method combining onetube multiplex reverse transcriptase PCR (RT-PCR) with Luminex xMAP bead hybridization and detection
technology to simultaneously identify the most important avian respiratory viruses in a single or a mixed
infection. A multiplex RT-PCR, followed by a monoplex or a multiplex Luminex assays, were realized using
a Luminex 200 analyzer instrument.
Results: Compared to the monoplex real-time RT-PCR, the sensitivity, specificity, and reproducibility
of the multiplex DNA suspension microarray system were evaluated. The results showed no significant
differences in the median fluorescence intensity (MFI) value in monoplex and multiplex Luminex assays.
The sensitivity and specificity proved to be completely concordant with the monoplex real-time RT-PCR.
The tests showed that the multiplex Luminex hybridization is able to detect all targets with no positive
cross-reaction signals.
Conclusion: We demonstrated that the multiplex DNA suspension microarray system is an accurate, highthroughput, and relatively simple method for the rapid detection of the main respiratory viruses of poultry.
Keywords: Luminex, multiplex RT-PCR, diagnostic, avian respiratory viruses.
O23- µBIOPHYSICAL CONTROL-QUALIT Y OF RHUG-CSF: EFFECT OF
DUAL TEMPERATURE-TIME PARAMETERS ON PROTEIN AGGREGATION
H. KRAIEM1,2, Y. MANON3, F. ZOUARI2, R. BEN ABDERRAZEK1, M. EL AYEB1, J. BEDOUI2, L. FILLAUDEAU3
& B.BOUHAOUALA-ZAHAR1, 4*
1
2
3
4
Laboratoire des Venins et Molécules Thérapeutiques, Institut Pasteur de Tunis, 13 Place Pasteur, BP74, Tunis
Belvédère- Université Tunis El Manar Tunisia
Laboratoires Pharmaceutiques UNIMED, ZI Kalâa-Kebira BP 38, Kalâa-Kebira, Tunisia
LISBP, Université de Toulouse, CNRS, INRA, INSA, 135, avenue de Rangueil, 31077 Toulouse, France
Faculté de Médecine de Tunis, 15 rue Djebel Lakhdhar, La Rabta, 1007, Tunis-Université Tunis el Manar,
Tunisia
Introduction and Aims: Nowadays, the similar biological medicinal products and in particular, the hematopoietic
factors represent an attractive market size (138 milliards US$ (2010)). Before granting authorization for human
use, the composition, conformation, biological activity and bioequivalence of one biosimilar product have to be
demonstrated. However, different stress during processing, shipping and long storage may affect the structural
stability and therefore biological function. Hence, more sensitive physical methods are required to deeper control
the quality of the bioproducts.
Material and Methods: This study concerns on commercial therapeutic formulation (0.3 mg/ml, pH4.0, with
5% sorbitol and 0.004% polysorbate-80). Our innovative approach has focused on detection, quantification and
characterization of subpopulations aggregates generated by a time-temperature treatment (at 37, 55 and 60°C up
to 72 h). To characterize the nanometric particle aggregates, conventional and physical alternative techniques
such as Dynamic Light Scattering (Zetasizer Nano ZS instrument), Electrophoresis (Agilent 2100 Bioanalyzer),
Differential Scanning Calorimetry (Micro DSC III), Morphogranulometry (Morphologi G3S) and Infrared
Spectroscopy (FTIR Nicolet-iS50) were used. These technologies were a real scientific and technological challenge
considering the low protein concentration in commercial solution and the apparatus detection level.
40
Results and Conclusion: As promising results, the Differential Scanning Calorimetry (DSC) shows a slight
endothermic peak corresponding to the temperature of fusion, Tm estimated at 68.4°C and characterizing
the activation energy of the aggregation mechanism which remains critical and dependent on the sample
concentration. Infrared spectra of native and aggregated forms are different from those in literature
and require further insight. Interestingly, particle sizes analyzed by DLS identify different aggregates
forms whose size and volume proportion vary according to time-temperature dual parameters. More
interestingly, electrophoresis (Bioanalyzer 2100, Agilent) was demonstrated as suitable for the visualization
and quantification of the first-order aggregation kinetics. Therefore, the temperature dependency can
be described by the Arrhenius’ law and identifying the activation energy (Ea) estimated at 166 KJ/mol
compared to 130KJ/mol (Eda et al.,1990) (Kraiem et al., under submission in Biophysical J).
Key words: Biosimilars, G-CSF, aggregation, particle, biophysical characterization.
O24- CARACTERISATION BIOCHIMIQUE ET PROPRIETES INTERFACIALES
DE DEUX PHOSPHOLIPASES A2 DE VENINS DE VIPERES TUNISIENNES
D. BAÏRAM1, I. AISSA2, H. LOUATI2, H.E. OTHMAN1, Z. ABDELKEFI-KOUBAA1, N. KRAYEM2, M. El AYEB1, N.
SRAIRI-ABID1, N. MARRAKCHI1, Y. GARGOURI2
1
2
Institut Pasteur de Tunis, Laboratoire des Venins et Biomolécules Thérapeutiques LR11IPT08, 13, Place Pasteur,
BP 74, 1002 Tunis-Belvédère
Laboratoire de Biochimie et de Génie Enzymatique des Lipases, Ecole Nationale d’Ingenieurs de Sfax (ENIS),
Route de Soukra, BP 1173, 3038 Sfax, Tunisie
Les venins de serpents comprennent un mélange de molécules biologiquement actives, parmi elles
la phospholipase A2. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la caractérisation des propriétés
cinétique et d’interface de deux phospholipases A2 isolées de venins de vipères tunisiennes : la CC-PLA2
de Cerastes cerastes et la MVL-PLA2 de Macrovipera lebetina transmediterranea.
Ces deux PLA2s partagent un grand nombre de similitudes aussi bien sur le plan structural que biochimique.
Elles possèdent, également, une large variété de propriétés pharmacologiques telles que anticoagulante,
antiagrégante plaquettaire, antitumorale et antiangiogénique.
L’objectif de ce travail est de caractériser la CC-PLA2 et la MVL-PLA2 sur le plan biochimique mais,
également, d’identifier les propriétés interfaciales de ces deux enzymes dans les mêmes conditions.
Sur le plan biochimique, nous avons entrepris une étude cinétique des deux PLA2s, par rapport à différents
critères: température, pH, concentration en calcium.
De plus, les activités pharmacologiques d’une phospholipase A2 sont, généralement, liées à sa capacité
à hydrolyser les phospholipides. Une approche intéressante pour étudier les interactions protéine-lipide
est l’utilisation de monocouches lipidiques étalées à l’interface air-eau. Il s’agit d’un outil intéressant pour
comparer les activités relatives de surface de différentes protéines ou encore les intéractions d’une même
protéine avec différentes monocouches lipidiques étalées sur une phase aqueuse d’une composition
donnée.
Les résultats ont montré que ces deux PLA2s prèsentent des caractéristiques différentes de fixation et
d’hydrolyse des phospholipides. En utilisant l’émulsion d’oeufs comme substrat à pH8, nous avons trouvé
que la MVL-PLA2 présente une activité spécifique de 1473U/mg à 37°C en présence de 1mM de CaCl2. De
plus, les donnés de cinétique interfaciale et de fixation indiquent que la MVL-PLA2 a une préférence pour
les monocouches zwitterioniques de phosphatidylcholine (PC). Contrairement à la CC-PLA2 qui a montré
une capacité à hydrolyser préférenciellement les phospholipides de charge négative (PG et PS) avec une
Tome 92 (1-2)
41
activité spécifique 9 fois plus importante que celle observée avec la MVL-PLA2.
Dans ce travail, nous rapportons pour la première fois, les caractéristiques biochimiques et cinétiques des
deux Asp49 PLA2 isolées des venins de vipères tunisiennes : CC-PLA2 de Cerastes cerastes, et MVL-PLA2
de Macrovipera lebetina mediterranea.
Mots clès: CC-PLA2, MVL-PLA2, monocouche phospholipidique, caractérisation biochimique.
O25- EVALUATION OF THE IMMUNOGENICIT Y OF AN ADENOASSOCIATED VIRUS 5 VECTORED VACCINE AGAINST HEPATITIS E
VIRUS DELIVERED VIA THE NASAL ROUTE
C. BEN TALEB 1, K. TRABELSI1, A. KAMEN2 & H. KALLEL1
1
2
Laboratory of Molecular Microbiology, Vaccinology and Biotechnology Development, Viral Vaccines Research
& Development Unit. Institut Pasteur de Tunis. 13, place Pasteur. BP.74 1002 Tunis. Tunisia
Department of Bioengineering. McGill University 817 Sherbrooke St. West Macdonald Engineering Building,
Room 387. Montreal. Canada.
Introduction and objectives: Hepatitis E is a disease caused by infection with hepatitis E virus (HEV) which is a small
(27–34 nm), non-enveloped RNA virus. The viral genome consists of a single-stranded, positive-sense RNA organized
into three open reading frames (ORF1, ORF2, and ORF3). In this work, we aim to assess the immunogenicity of a
novel vaccine against hepatitis E infection using adeno-associated virus AAV as a vector harboring the gene of the
truncated capsid protein of HEVORF2 (112-660aa).
Material and Methods: The rAAV5 was produced in Sf9 cells using the baculovirus expression vector system, and then
purified by chromatographic methods. Thereafter, we studied different protocols of immunization of female BALB/c
mice. The vaccine was delivered via the nasal route. We had particularly studied the effect of the injected dose, the use
of adjuvant (MPLA) and adjuvant concentration.
Results: The obtained results showed that nasal administration of rAAV5 induced high anti-HEVORF2 IgG titers. This
response was amplified when using monophosphoryl lipid A (MPLA) as an adjuvant. Furthermore, q-PCR analysis
showed the presence of the rAAV5 at the target organs (heart, muscles, lungs, central nervous system) in injected mice
and the most elevated amount was found in the lungs.
Conclusion: AAV5r gave the best results in the immunization trials. However, despite these satisfactory data, further
experimentations are needed.
Key words: HEV, adeno-associated virus.
O26- AT X-ENRICHED EXTRACT INDUCES INHIBITION OF AMILORIDE
SENSITIVE SODIUM CHANNEL CURRENT IN XENOPUS OOCY TES
CELL MODEL
A. CHEIKH1, H.TABKA1, Y. TLILI1, A. SANTULLI 2, N. BOUZOUAYA 3, B. BOUHAOUALA-ZAHAR1 AND R.
BENKHALIFA1
1
2
Laboratoire Venins et Molécules Thérapeutiques, Institut Pasteur de Tunis, Tunis, Tunisia. 2Laboratorio di
Biochimica Marina ed ecotossicologia, Dipartimento di Scenze della Terra e del Mare, Universita degli Studi
di Palermo, Italy.
La BiotechPole Sidi Thabet, 2020 Ariana, Tunisie.
42
ATX is the main carotenoid pigment, related to the large class of the xanthophyll family of carotenoids
(i.e. -carotene, zeaxanthin and lutein) found in algae and aquatic animals which exhibits powerful antioxydant activity. ATX has been identified in crustacean shells and heads which have been subject to
industrial transformation which could be extracted by using different chemical extraction methods.
Previous studies have revealed its beneficial antioxidative property and promising therapeutic agent for
various diseases. Hence, it is admitted that ATX can up-regulate the cortical endogenous antioxidant
agents and prevent oxidative damages, at adequate dose. However, there are few studies concerning the
underlying cellular mechanisms of ATX. There is no study investigating electrophysiological effects in
Xenopus oocytes cell model. Our study aimed to investigate whether ATX could change currents recorded
in oocyte giant cell. Our innovative strategy is based on endogenous currents tests in Xenopus oocytes,
using the two electrodes voltage-clamp method. Precisely, bioactive extract samples prepared from shrimp
under-products and ATX reference product have been tested on Xenopus oocytes amiloride-sensitive
sodium currents amplitude. Firstly, we demonstrate a specific inhibition of Xenopus oocytes current
amplitude in presence of 1 µg bioactive shrimp extract prepared by Supercritical Fluide Extraction method
(SFE-extract) recorded in BAMS solution (in mM: BaOH, 40; CsOH, 2 ; HEPES, 4 ; NaOH, 50 and pH is
adjusted to 7,4 by methane sulfonic acid). This current is abolished differently in presence of amiloride
or tetrodotoxine. ATX tested at different concentrations on isolated amiloride sensitive sodium channels
of Xenopus oocytes (xINa) shows a dose response effect with 36.76% of xINa inhibition at 0.1 µg of ATX
reaching 57% at 1 µg. Experiments carried on with SFE-extract alone or in presence of SFE-extract enriched
by ATX showed that: SFE-extract (5 µg) is not able to inhibit xINa in contrary to SFE-extract 10 µg which
inhibits 36.45% of xINa. Interestingly, the enrichment of SFE 5 µg with ATX reverses the amplification and
induces 41.61% of xINa inhibition. Indeed, in the experimental case of SFE-extract 10 µg enriched by ATX,
the inhibition reaches 66.51%. All these results suggest that ATX inhibitory activity could be measured
in bioactive SFE-Extract samples by TEVC method. Samples prepared by SFE extraction method even
containing low levels of ATX could be distinguished, since ATX 0.1 µg inhibits 36.76% of xINa.
This work demonstrates a specific modulation of amiloride sensitive sodium channels activity by ATX.
In fact ionic channels play a central role in inter-cellular communication and constitute major targets
for drug discovery because of their involvement in numerous human brain diseases. Promising results
obtained on Xenopus oocytes conductances highlight the considerable potential of ATX for the prevention
and treatment of various chronic inflammatory and neurodegenerative disorders. Further exploration of
voltage gated ionic channels modulation (sodium and potassium) role induced by ATX in neuronal and
skeletal cells models is in progress.
« Ces travaux de recherche et innovation sont effectués dans le cadre du dispositif MOBIDOC financé par l’Union
Européenne dans le cadre du programme PASRI et administré par l’ANPR »
O27- PROBIOTICS IN FRESHWATER FISHES: ISOLATION, MOLECULAR
IDENTIFICATION,PHYLOGENETIC,PHYLOPROTEOMIC AND GENOMIC
ANALYSIS
R. EL JENI1, 3, M. EL BOUR1, K. GHEDIRA2, B. BOUHAOUALA-ZAHAR3
1
2
3
Laboratoire de microbiologie et de pathologie des organismes aquatiques, Institut National des Sciences et
Technologies de la Mer (INSTM), rue 2 mars 1934 2025 Salammbô, Tunisie.
Laboratory of BioInformatics, bioMathematics and bioStatistics, Institute Pasteur Tunis, 13, place Pasteur BP
74 1002 - University Tunis El Manar, Tunisia.
Laboratory of Venoms and Tehrapeutic Molecules, Institut Pasteur Tunisie, 13 Place Pasteur, BP-74, 1002 ;
University Tunis El Manar, Tunisia.
Tome 92 (1-2)
43
To fight pathogenic bacteria, fishes have been protected by vaccination or chemotherapy treatments.
However, aggressive use of chemotherapeutic agents may leads to progressive pathogen resistance
(Balcázar et al. 2008, Merrifield et al. 2010). As an alternative to antibiotics, the use of probiotics in
aquaculture has shown promise to overcome this issue related to disease control.
Herein, we studied the potential use of novel lactic acid bacteria isolated from different organs of
freshwater fishes and involved their potential application as probiotics in raw and processed foods.
Firstly and using a selective medium (MRS) for the lactic microflora, 177 isolates were collected, from
which 72 strains producing antimicrobial activity have been selected and identified as belonging to the
Genera: Enterococcus (74%), Leuconostoc (24%), Lactococcus (3%) and Vagococcus (2%). Subsequently,
enzymatic tests that have been carried out on the filtered supernatant highlighted the bacteriocins nature
of their antimicrobial agents. The in vitro probiotic potential was carried out for the 4 most active lactic
acid bacteria, displaying an obvious and carrying significant probiotic profiles. Further, the four isolates
display, moderate heat resistance, adhesion ability to steel surfaces, and sensitivity to clinically relevant
antimicrobial agents (El Jeni et al, 2015).
In a second part, a study was conducted to evaluate the in vivo probiotic effect on Nile tilapia (Oreochromis
niloticus). The fishes were fed 20 days, with food, on the presence or absence of 2 selected probiotic
strains. Interestingly, the two lactic acid bacteria, phylogenetically and phyloproteomically identified as
Enterococcus faecium and Leuconostoc mesenteroides, are able to improve the growth and the weight
of fishes. The protein contents have been positively affected and a net increase of lysozyme activity
was observed in fish fed with a regime fortified by probiotics. This rate demonstrates the adaptation of
Oreochromis niloticus to experimental diets. Therefore, next generation sequencing (NGS) was carried
out to fully determine the genomes of both isolates. Comparative genome analysis revealed genome and
contig sizes, the encoding sequences and the gene numbers. These results give evidence for potential
application in minimally processed foods subjected to moderate heat processing (El Jeni et al, in
preparation).
Key words: Freshwater fish, lactic acid bacteria, MALDI-TOF MS, NGS, probiotics
O28- PRECLINICAL COMPARATIVE TOXICIT Y STUDY OF ENOXAPARIN
BIOSIMILAR PRODUCT VERSUS REFERENCE PRODUCT
Z. KOBBI1, H. KRAIEM2, Z. BENLASFAR3, A. MAROUANI4, T. MASSOUD5, S. BOUBAKER6, B. BOUHAOUALAZAHAR7 AND N. FENINA8
1
2
3
4
5
6
7
Faculty of pharmacy of Monastir, Rue Ibn Sina, 5000, University of Monastir, Tunisia
Laboratory of Venoms and Therapeutic Molecules, Pasteur Institute of Tunis, 13 Place Pasteur, BP74, 1002 Tunis, University of Tunis El Mananr, Tunisia
Animal unit , Pasteur Institute of Tunis 13 Place Pasteur, BP74, 1002 - Tunis, University of Tunis El Manar, Tunisia
Animal unit , Pasteur Institute of Tunis 13 Place Pasteur, BP74, 1002 - Tunis, University of Tunis El Manar, Tunisia
Laboratory of biochimestry, Child hospital of Tunis/ Faculty of pharmacy of Monastir , Rue Ibn Sina, 5000,
University of Monastir, Tunisia.
Laboratory of Human and Experimental Pathology, Pasteur Institute of Tunis, 13 Place Pasteur, BP74, 1002 Tunis, University of Tunis El Manar,Tunisia.
Laboratory of Venoms and Therapeutic Molecules, Pasteur Institute of Tunis/University of Tunis El Manar, 13
Place Pasteur, BP74, 1002 - Tunis, Tunisia8 Faculty of pharmacy of Monastir , Rue Ibn Sina, 5000, University
of Monastir, Tunisia
44
During last decades we observed explosion of biosimilars, which require comparative preclinical evaluation
conducted on animals. So far animal experimentation and testing protocol development has rarely been
disclosed and published as mainly conducted in pharmaceutical companies, and commercial facilities that
provide animal-testing services to industry. These studies are also termed “non-clinical” or “pre clinical”
as they are not performed in humans. Their primary purpose is safety testing. Toxicology and safety
pharmacology studies, with a potential extension to pharmacokinetics and bioavailability‎.
Enoxaparin is a low molecular weight heparin widely used for the prevention and treatment of
thromboembolism and is considered as a biological products. With the development of several Enoxparin
biosimilars, real medical concerns about their safety and efficacy were raised.
This repeated dose toxicity study part of the biosimilarity study consists of preclinical toxicological evaluation
of a similar biological version of enoxaparin drug product “Enoxa” manufactured by “les Laboratoires
Médis” (Tunisia), compared to the enoxaparin reference drug product “Lovenox” manufactured by
Sanofi-Aventis (France). Eighty (80) white Wistar rats were treated with enoxaparin biosimilar, versus the
reference product, using subcutaneous therapeutic dose and toxic doses, varying from 3.5 to 100 mg/kg/
day. Dose levels were adjusted and ultimately fixed at 3.5 mg/kg/day for a therapeutic dose and 20 mg/kg/
day for a toxic dose. A 0.9% sodium chloride solution was used for the control group and the comparative
study was conducted over a period of 14 days and 28 days.
Animals were observed before and during study, all animal were euthanized at the end of the study design
then necropsy, organs sampling and anatomo-histopathology were then performed. Hematology and
biochimestry evaluation of relevant parameters was performed on all animals.
Comparable effects were observed at all doses and all products with few adverse effects observed at doses
20 mg/kg/day for both enoxaparin biosimilar and reference products. Mortality started at a dose of 40mg/
kg/day and reached 25%, at 100 mg/kg/day for both products. Since results from the similar biological
version of enoxaparin drug product “Enoxa” and reference drug product “Lovenox”, have comparable
toxicity profile in rats, continuing investigation of biosimilarity on humans to confirm safety and efficacy
is suggested.
Kobbi et al, article under review in the journal “Regulatory Toxicology and Pharmacology”
Tome 92 (1-2)
45
46
COMMUNICATIONS AFFICHEES
Tome 92 (1-2)
47
48
P1- ETUDE GENETIQUE ET MOLECULAIRE DE LA MALADIE DE
XERODERMA PIGMENTOSUM DANS LA REGION DE SIDI BOUZID:
IMPLICATION DANS LE DIAGNOSTIC MOLECULAIRE
I. NABOULI 1,2 , M. BEN REKAYA 1,2 , A. CHIKHAOUI 1,2 , C. NAOUALI 1,2 , O. MESSAOUD 1,2 , M. JONES 2 ,
M. ZGHAL2, S. ABDELHAK1,2, H. YACOUB-YOUSSEF1,2
1
2
Laboratoire de Génomique Biomédicale et Oncogénétique (LR 11 IPT 05), Institut Pasteur de Tunis, Tunisie.
Université Tunis ElManar, Tunis, Tunisie3 Département de Dermatologie, Hôpital Charles Nicolle de Tunis,
Tunisie.
Introduction et objectif : Le Xeroderma pigmentosum (XP), est une maladie génétique héréditaire rare,
responsable d’une sensibilité extrême aux rayons UVs (ultraviolets) Les patients XP sont classés selon 8
groupes de complémentation génétiques du XP dont 7 groupes classé de XP-A à XP-G qui touchent le
système de réparation par excision des (NER) nucléotides et un seul Groupe XP-V qui touche le système
de réparation de la synthèse translésionnelle (TCR).
L’objectif de cette étude consiste à explorer par étude moléculaire de 9 familles de la région de Sidi Bouzid
pour recherche de la cause génétique de la maladie de XP
Matériel & Méthodes : Nous avons colligé 21 patients (appartenant à 9 familles) dans la région de SIDI
BOUZID. Les causes génétiques ont été investigués par la technique de PCR et la méthode de séquençage
par « SANGER ».
Résultats et conclusion : L’investigation génétique a permis d’identifier 3 formes de XP. 11 enfants atteins
sont de la forme XP-A, 9 enfants atteins sont de la forme XP-V et 1 enfants atteins est de la forme XP-C.
Reste deux cas non classés qui semblent présenter de nouvelles mutations. Nous avons mis en évidence
aussi et pour la première fois, la présence de deux formes de XP au sein de la même famille (XP142-116)
et (XP103-113-188-172et 180).
Nos résultats ont montré que la région de Sidi Bouzid est très hétérogène sur le plan génétique, 3 groupes
de XP ont été identifiés avec présence de 2 formes dans la même famille.
Mots clefs : Xeroderma pigmentosum (XP), XP-V, XP-A, XP-C
P2- ASSOCIATION ENTRE LES MOLECULES D’ADHESION VCAM-1,
ICAM-1, SELE ET SELP ET LA DREPANOCY TOSE
M. KAL AI 1 , L. CHAOUCH 1 , M. JAOUANI 1 , H. GHARBI 1 , I. DARRAGI 1 , I. BOUDRIGUA 1 , D.
CHAOUACHI 1 , F. MALLOULI 2 , S. ABBES 1
1
2
Université de Tunis El Manar, Institut Pasteur de Tunis, Laboratoire d’Hématologie Moléculaire et Cellulaire
Université de Tunis El Manar, Centre National de Greffe de Moelle Osseuse de Tunis
Introduction et objectifs : Les molécules d’adhésion jouent un rôle important dans la physiopathologie de la
drépanocytose. Elles sont fortement impliquées dans le processus de la crise vaso-occlusive en favorisant les
interactions entre les cellules sanguines et les cellules endothéliales. Les principales molécules d’adhésion sont :
VCAM-1, ICAM-1, SELE et SELP. Le but de cette étude est d’évaluer la relation entre les polymorphismes des gènes de
ces molécules et la sévérité de la drépanocytose ainsi que leurs expressions à travers un dosage plasmatique.
Tome 92 (1-2)
49
Matériel et méthodes : 104 patients drépanocytaires (dont 77 présentant des complications graves) et 106
témoins ont été inclus dans l’étude. L’analyse des polymorphismes a été faite par PCR/Séquençage et le
dosage des molécules d’adhésion a été réalisé par ELISA.
Résultats et conclusion : Les fréquences alléliques et génotypiques des polymorphismes étudiés chez
les drépanocytaires sont comparables à celles trouvées chez les témoins. Aucune association n'a été
observée entre ces polymorphismes et la sévérité de la maladie (p>0,05). En ce qui concerne les dosages
plasmatiques de VCAM-1, ICAM-1, SELE et SELP, nous avons noté une augmentation significative de ces
molécules solubles chez les drépanocytaires par rapport aux témoins avec la présence d’une corrélation
positive entre ICAM-1 et VCAM-1, ainsi qu'entre SELE et SELP.
L’absence d’association entre les polymorphismes étudiés et la sévérité de la drépanocytose dans
notre série pourrait être expliquée par la fréquence relativement faible des sujets drépanocytaires avec
complications modérées par rapport à ceux présentant des complications graves. La surexpression des
molécules d’adhésion pourrait être un marqueur biologique de l'activation endothéliale reflétant leur
participation dans le développement des crises vaso-occlusives.
Mots clés : molécules d’adhésion, drépanocytose, polymorphismes
P3- SERUM B2-MICROGLOBULIN OF ALGERIAN PATIENTS WITH
MULTIPLE MYELOMA-IS THERE A RELATION WITH RISK AND
PROGRESSION OF MYELOMA BONE DEASEAS?
K. OTMANI1, D. NAIMI1,2, M. BENHALILOU3 AND N. BOUDERSA4
1
2
3
4
Laboratory of microbiological engineering and applications molecular Biology and cellular physiology ,
Animal biology Department, Natural science and life Faculty Constantine1 Mentouri University, route de
Ain el bey, Constantine
Higher National School of Biotechnology, ( ENSB) Constantine, nouveau pole universitaire ali mendjli BPE66 ,25100,
Constantine.
Department of hematology hospital Dr BEN BADIS, Constantine.
Department of Rheumatology hospital Dr BEN BADIS, Constantine.
Introduction: Multiple myeloma (MM) is a hematological cancer in a clonal expansion of fully
differentiated B cells (plasma cells) in the bone marrow. It is characterized by osteolysis and a monoclonal
immunoglobulin secretion can develop an immune deficiency and severe renal impairment.
myeloma bone disease (MBD) are one of the most visible aspects in this disease. They developed in 79% of
patients with myeloma, which can reduce the quality of life of patients because of bone pain and pathological
fractures. The serum B2-Microglobulin is sensitive and specific prognostic marker of multiple myeloma .
Objectives: The aims of this study were to assess whether the quantitative of serum B2-Microglobulin
associated with Biochemical markers of bone turnover (phosphore) us marker of myeloma bone desase
material and method: the serum of 40 MM patients aged between 35 and 60 from three Wilayas in the East
of Algeria has been taken in 2014 and 2015 and analysed , some Biochemical markers of bone turnover
such us phosphore (phos) were measured by automated colometric assay, Serum B2-Microglobulin were
measured by automated immunoassay and quantified using freelite™ reagent sets from the bindingsite
Results and Conclusion: the results obtained show that Serum B2-Microglobulin was abnormal in 92% of
population (37patients) and high levels of Serum B2-Microglobulin correlated significantly (r=0.7470;P < 0.0001 )
with a higher concentration of markers of bone turnover (phosphore).
50
Our results suggest that the b2-microglobulin could be a prognostic marker for evaluating risk and
development of myeloma bone disease
Keywords: Le myélome multiple (MM), (myéloma bone disease MBD), B2-Microglobulin Biochemical
markers of bone turnover (phosphore)
P4- ETUDE DES VARIATIONS DU NOMBRE DE COPIES DANS L’AUTISME
CHEZ DES PATIENTS TUNISIENS
S. L AHBIB 1,2 , M.SAYEB 1,2 , C. CARTON 3 , A. MATHIEU 3 , B. REGNAULT 4 , M. DAGHSNI 5 , M.
TRABELSI 5,6 , F. MAAZOUL 6 , I. KRAOUA 7,8 , R. MRAD 5,6 , S. HL AIEM 8,9 , A. BOUDEN8 ,9 , A. BELHADJ 10 ,
S. ABDELHAK 1 , T. BOURGERON 3 , N. GADDOUR 11
Laboratoire de Génomique Biomédicale et Oncogénétique LR11IPT05, Institut Pasteur de Tunis, Tunisie.
Université Tunis El Manar, Tunisie.
3
Laboratoire de génétique humaine et fonctions cognitives, Institut Pasteur Paris, France.
4
Structure de Génotypage des Eucaryotes, Institut Pasteur Paris, France
5
Laboratoire de Génétique Humaine, Faculté de Médecine de Tunis, LR99ES10
6
Service des maladies héréditaires et congénitales, Hôpital Charles Nicolle, Tunis, Tunisie
7
Service de neurologie pédiatrique, Institut National Mongi Ben Hmida de Neurologie
8
Faculté de médecine, Tunis, Tunisie
9
Service Pédopsychiatrie, Hôpital Razi, Manouba, Tunisie
10
Service de pédopsychiatrie, Hôpital Mongi Slim, La Marsa, Tunisie
11
Département de psychiatrie, Faculté de médecine de Monastir, Université de Monastir
1
2
Introduction et objectifs : L’autisme est un trouble sévère et précoce du développement de l’enfant
d’origine neurobiologique. Il est caractérisé par un trouble de la communication, une perturbation des
relations sociales et des troubles du comportement. C’est une maladie multifactorielle. 50 à 60% des
étiologies sont d'origine génétique. L’hétérogénéité clinique de l’autisme est due en grande partie à son
déterminisme génétique complexe. Les variations du nombre de copies (CNVs) sont rapportées dans ~
5% des cas. Notre objectif consiste à étudier les CNVs chez des patients tunisiens atteints d’autisme.
Matériel et méthodes : Après le consentement éclairé signé, une collecte des données généalogiques et
cliniques sur un groupe d’enfants autistes a été réalisée. Nous avons collecté des prélèvements sanguins
de 60 patients avec leurs parents, leur fratrie saine et de 118 individus ne présentant pas un autisme.
Après l’extraction des ADNs, un génotypage à haut débit par une puce SNP a permis de généré des
données faisant l’objet des analyses bio-informatiques afin de détecter les CNVs chez toute la cohorte.
Pour d’identifier des CNVs susceptibles d’être endommageant, une étude comparative des CNVs rares
entre les patients et les témoins a été établie. Ensuite nous avons analysé la transmission des CNVs chez
les familles pour lesquelles le génotypage des parents a été réalisé.
Résultats et conclusion : Nous avons obtenu 480 CNVs rares pour 58 patients et 115 témoins. La
comparaison des nombres, des tailles et des types des CNVs n’a montré aucune différence significative
entre les patients et les témoins. L’analyse de transmission a révélé une duplication de novo du gène
SYNGR2, une duplication maternelle du gène DAOA et une duplication paternelle des gènes CAST et
PCSK1. Enfin, nous avons identifié une délétion homozygote des trois derniers exons du gène ELMOD3
chez un patient présentant un trouble de comportement avec une surdité et une déficience intellectuelle.
Des mutations décrites dans ce gène causent une surdité. Nos résultats montrent un taux faible de CNVs
potentiellement délétères chez les enfants autistes expliqué par l’hétérogénéité génétique de l’autisme et
Tome 92 (1-2)
51
la spécificité de notre population consanguine où les formes monogéniques de cette maladie seraient les
plus fréquentes.
Mots clés : Autisme- Génétique- Puce SNP- Variations du nombre de copies
P5- A CASE REPORT OF FANCONI ANEMIA DIAGNOSED BY GENETIC
TESTING FOLLOWED BY PRENATAL DIAGNOSIS.
F. TALMOUDI1-2 , A. BELHAJ ALI1-2 , M. BEN REKAYA 2 ,O. MESSAOUD2 ,M. MEDDEB3 ,W. AYED1-2 , S. ABDELHAK
1-2
A. AMOURI 1-2 AND THE TUNISIAN FANCONIANEMIA STUDY GROUP
1
2
3
Laboratory of Histology and Cytogenetics, Institut Pasteur de Tunis, Tunis, Tunisia.
Laboratory of Biomedical Genomics and Oncogenetics, Institut Pasteur de Tunis, Tunis, Tunisia.
Laboratory of Medical Genetics, Tunis, Tunisia.
Fanconi Anemia (FA) is a rare genetic disorder affecting multiple body systems. Genetic Testing, including
prenatal testing, is a prerequisite for the diagnosis of many clinical conditions.
However, genetic testing is complicated for FA because there are often many genes that are associated with
its development. Because of the severity of the disease and the limitations of therapeutic interventions,
many parents decide to perform a prenatal diagnosis in their family planning.
Here, we summarize our successful experience in genetic testing for prenatal diagnosis of FA in a Tunisian
family having already two affected children.
Molecular study was performed by genotyping four microsatellites flanking the FANCA gene.
Haplotype analysis showed that the affected members present the founder haplotype at a homozygous
state whereas the fetus shows a different haplotype likely segregating with the normal alleles. These results
were confirmed by Multiplex ligation-dependent probe amplification analysis.
Having a founder mutation specific of the Tunisian population made it easier to propose prenatal diagnosis
and genetic counselling for the investigated families.
Key words: Fanconi Anemia, FANCA, Molecular diagnosis, prenatal diagnosis
P6- SYNONYMOUS EGFR POLYMORPHISM AND EFGR PROTEIN
EXPRESSION IMPACTS ON PREDICTING RESPONSE OF METASTATIC
COLORECTAL CANCER PATIENTS TO ANTI-EGFR THERAPIES
A. JABALLAH2-3, H. TOUNSI2-3, I. BEN AYED2-3, H. YAICHE2-3, N. BEN JEMII2-3, A. SAAIDI2-3, M. KABBAGE2-3, N.
MEZGHANNI2-3, A. MAALOUL3, E. HABBACHI3, L. HAMZAOUI1, S. ABDELHAK2, S. BOUBAKER2-3.
1
2
3
Laboratory of Biomedical Genomics and Oncogenetics. Institut Pasteur de Tunis, University Tunis EL Manar,
Institut Pasteur de Tunis
Laboratory of Human and Experimental Pathology, Institut Pasteur in Tunis, Tunis, Tunisia
Gastroenterology Department, Mohamed Tahar Maamouri Hospital, Nabeul
Introduction and Objective: Currently, epidermal growth factor receptor (EGFR) is a therapeutic target in
metastatic colorectal cancer (mCRC). The benefit from EGFR inhibitors appears to be limited to a subset
of patients with mCRC. Mechanisms of resistance to EGFR inhibitors are being identified. KRAS activating
52
mutation is a predominate mechanism of resistance to EGFR inhibitors in around 40% of patients with
advanced CRC. Other potential mechanisms of resistance including EGFR expression and mutational
status require further research. Therefore, we aimed to evaluate both EGFR expression and mutations in
patients with mCRC.
Methods: This study enrolled 22 formalin-fixed paraffin-embedded metastatic colorectal cancer cases at
the same stage and grade. To evaluate EGFR expression we investigated immunohistochemistry using antiEGFR (NCL-EGFR-384) and an IHC score (H-score) proposed by Goldstein. A score of 0–1 was considered
low EGFR expression, and 2–3 indicated high EGFR expression.
To identify EGFR mutation status we proceeded by PCR followed by Sanger sequencing of exon 20.
Results and Conclusion: The results showed that rs1050171 (AG) and rs1050171 (AA) genotypes had an
equal distribution of 9/22 (40,9%), while wild type EGFR (GG) was found in 4/22 (18,18%).
EGFR expression compared to EGFR genotypes was as follow: high EGFR expression was found in (77,7%)
of AA genotype, in (44,4%) of AG genotype and in (25%) of WT specimens, whereas, low EGFR expression
was identified in (22,2%) of AA genotype, (55,5%)% of AG genotype and (75%) of WT cases.
A high EGFR expression was identified in (77.7%) of samples with rs1050171 (AA) genotype compared to
WT expression, this could suggest that the EGFR polymorphism AA genotype may act as an expression
enhancer of EGFR receptor.
Key words: CCR, EGFR expression, EGFR Polymorphism.
P7- BIOCHEMICAL AND BIOLOGICAL DIFFERENCES OF HPV16
E7 NATURALLY OCCURRING VARIANTS AND CHANGES IN THEIR
ONCOGENIC POTENTIAL
A. ZINE EL ABIDINE 1,2, T. VJEKOSLAV 3, R. BEL HAJ RHOUMA 1, PAOLA MASSIMI 3, I. GUIZANI 1, S.
BOUBAKER 2, E. ENNAIFER 1,2 AND L. BANKS3*
1
2
3
Laboratory of Molecular Epidemiology and Experimental Pathology Applied to Infectious Diseases, Pasteur
Institute, Faculty of Sciences of Tunis, University Tunis El Manar, Tunis, Tunisia;
Department of Human and Experimental Pathology, Institut Pasteur de Tunis, Université Tunis el Manar,
Tunis Tunisia;
Tumour Virology Laboratory, International Centre for Genetic Engineering and Biotechnology, Padriciano
99, Trieste, Italy
Introduction: High risk Human papillomavirus type 16 (HR HPV16) is one of the major and most prevalent
causes of cervical cancer (CC). E6 and E7 are the main HPV transforming oncogenes. Epidemiological
studies on the oncogenic risk of HPV16 variants have produced different conclusions, and the risk
association seems to vary with the population studied. In Tunisia the prevalence of HPV 16 E7 variants
seems to be associated with the severity of intraepithelial lesions.
Materials and methods: We performed a series of biochemical in vivo and in vitro study in addition to
biological experiment using a transforming assay of primary rodent cells by HPV 16E7 in cooperation with
EJ-ras to study whether the naturally occurring HPV 16E7 variant N29S and D21N which contain amino
acid substitutions in the N terminus, near to the pRB core-binding motif and the CKII phosphorylation
site, can affect E7 function.
Results: Interestingly, our results showed that the HPV16E7 N29S variant by gaining an additional CKII
phosphoracceptor site surpasses the prototype 16E7 oncoprotein in its ability to interact with TBP, Cullin2
and with pRB. One consequence of which is increased degradation of pRB and p130. In contrast the 16E7
Tome 92 (1-2)
53
D21N variant showed a reduction in this activity. The transforming assay of primary rodent cells showed
an increased level of transforming activity with the N29S variant.
Conclusion: This is the first report of a clear difference in the function of a common HPV16 E7 variant,
which correlates with increased transforming potential and suggests that this variant may be an additional
risk factor for the development of cervical cancer.
Key Words: HPV, E7, CKII phosphorylation, pRb.
P8- LES ß-THALASSEMIQUES MAJEURS ENTRE LES CONCEPTIONS
DU TRAITEMENT, L’OBSERVANCE THERAPEUTIQUE ET LE BESOIN
EDUCATIONNEL
M. BAROUNI1*, S. AROUA2, F. MELLOULI3, M. BEJAOUI3, S. ABBES1
Laboratoire d’hématologie moléculaire et cellulaire- IPT- *Université Tunis El Manar
FST et IPT
3
Centre National de Greffe de Moelle Osseuse
1
2
En Tunisie, la ß-thalassémie majeur ne cesse de constituer un véritable problème de santé publique. Face à
cette maladie génétique chronique, l’adhésion du patient à son traitement reste toujours un point critique
vue sa répercussion sur l’efficacité thérapeutique. Pour garantir une prise en charge optimale et une
meilleure qualité de vie, l’éducation et l’implication des patients sont alors primordiales. De ce fait, pour
pouvoir réduire le risque d’une prise en charge défectueuse d’un programme thérapeutique, il convient
de connaître les conceptions des malades relativement à leur traitement afin d’évaluer leur observance
thérapeutique et de comprendre leurs besoins éducatifs.
La présente étude vise à donner des pistes d’interventions pour mettre en place des mesures ciblées
permettant d’améliorer la prise en charge des malades thalassémiques.
Il s’agit d’une étude prospective qualitative, par questionnaire, qui a inclus 50 patients volontaires atteints
de la ß-Thalassémie majeure.
Les résultats basés sur l’analyse des réponses aux différentes questions révèlent que pour la majorité
des thalassémiques, la guérison n’est assurée que par les transfusions régulières. Ainsi, 96% d’entre eux
déclarent ne jamais rater leur RDV de transfusion sanguine, car 64% de ces patients considèrent que
la transfusion reste le traitement le plus efficace vue son effet immédiat visible sur leur santé. Quant
au traitement chélateur, bien que 72% des interrogés reconnaissent son rôle dans la diminution de la
surcharge martiale, près de la moitié (48%) le considère comme « peu nécessaire ». Selon 70% d’entre
eux « ce médicament ne permet pas une guérison définitive mais il a un rôle uniquement de calmer la
maladie et ralentir sa gravité ». De Telles conceptions sur la maladie et son traitement pourrait donner
une explication sur la mauvaise observance médicamenteuse notée à travers l’irrégularité de 78% des
interrogés.
Cette étude nous a permis de fournir une grille de lecture pour bien saisir les attitudes des patients
en matière d’observance. Nos résultats montrent effectivement qu’il est indispensable d’instaurer une
stratégie d’éducation et d’information au profit des hémoglobinopathes afin d’améliorer leur prise en
charge tout en les aidant à dépasser les obstacles ou les blocages dus aux raisonnements influencés par le
contexte socioculturel en vue d’une acquisition des connaissances scientifiques.
Mots clés: ß-thalassémie majeur, maladie génétique, observance thérapeutique, éducation du patient.
54
P9- HOCT1 GENE EXPRESSION AS A PREDICTOR OF OPTIMAL
RESPONSE TO IMATINIB IN CHRONIC MYELOID LEUKEMIA
I. BEN HASSINE1, I. SOLTANI1, H. GHARBI1, M. TEBER1, H. BELHADJ OTHMAN1, H. AMOURI1, A. FARRAH1,
S. ABBES1, S. MENIF1
1
Laboratory of Molecular and Cellular Hematology, Pasteur Institute of Tunis, University of Tunis El Manar,
Tunis, Tunisia
Chronic Myeloid Leukemia (CML) is a clonal hematopoietic malignancy characterized by the presence
of bcr-abl fusion gene. The resulting protein has a high Tyrosine Kinase (TK) activity. Imatinib Mesylate
(IM) was the first approved inhibitor for a specific tyrosine kinase protein. Remarkable clinical responses
have been then observed in most CML chronic-phase patients. However despite its high efficiency,
approximately 20 % of patients will fail to achieve or maintain optimal responses to this drug. The
bioavailability of Imatinib in leukemic cells is among the mechanisms involved in IM resistance. The human
organic cation transporter 1 (hOCT1), an influx transporter, is responsible for the uptake of IM into CML
cells and decreasing mRNA expression levels of hOCT1 gene may affect intracellular drug concentration,
resulting in the development of IM resistance.The aim of this study was to analyze hOCT1 expression
levels in CML patients and correlate these levels with Imatinib response.
61 CML patients treated with IM were included in this study. According to European leukemia NET
guidelines (2013), 31 patients had optimal response and 30 patients were resistant. Samples were collected
from peripheral blood and mRNA was obtained from total leucocytes. hOCT1 expression was assessed by
real-time PCR using TaqMan technology and considering GAPDH as endogenous control. The results were
analysed using 2-Ct method. The Student’s t-test was used to evaluate significant differences between two
groups of data and differences were considered significant when p value < 0.05.
Our findings showed that the hOCT1 gene was significantly downregulated in resistant patients when
compared with patients with optimal response after normalization to GAPDH expression levels (p= 0.047).
The median transcript expression level of hOCT1 gene in responders group is 0.0025 versus 0.0012 in
non-responders group. These results confirmed the hypothesis that the downregulation of Hoct1 gene
can reduce the intracellular concentration of imatinib inside leukemic cells, resulting in the development
of IM resistance. hOCT1 expression may serve as a clinical biomarker of response to imatinib and could be
useful to predict IM therapy outcome of CML patients.
Keywords: Chronic myeloid leukemia, Imatinib, Resistance, hOCT1 expression.
P10- THE ASSOCIATION BET WEEN FUNCTIONAL HLA-G 14BP
INSERTION/DELETION AND +3142C>G POLYMORPHISMS
AND SUSCEPTIBILIT Y TO MULTIPLE SCLEROSIS.
N. BEN FREDJ 1 , K. SAKLY2, D. BORTOLOTTI 3 , M. AISSI4, M. FRIH-AYED 4 , N. SAKLY 2 , M. AOUNI 1 ,
D. DI LUCA3, R. RIZZO3
Laboratory of Transmissible Diseases and Biological Active substances, LR99-ES27, Faculty of Pharmacy,
University of Monastir, Tunisia;
2
Research unit 03/UR/07 “autoimmunity and allergy”, Faculty of pharmacy, Monastir. , Tunisia;
3
Department of Medical Sciences, Section of Microbiology and Medical Genetics, University of Ferrara, Italy;
4 Department of Neurology, Fattouma Bourguiba University Hospital, Monastir, Tunisia;
1
Tome 92 (1-2)
55
Introduction: The purpose of this study was to investigate two main variants in the 3’ untranslated region
of the HLA-G gene, 14bp insertion/deletion (INS/DEL) and +3142C>G, which are known to control the
production of soluble HLA-G (sHLA-G).
Materials and methods: The study included 60 patients relasping-remitting (RR) MS patients and 112
healthy controls (HD). The mutations were identified with PCR and PCR–RFLP. The sHLA-G dosage was
performed on serum samples by a specific ELISA.
Results: A significant decreased frequency of the +3142 C allele was detected in RR-MS patients compared
to HD (36.6% vs 47.7%, p=0.04). The C/C genotype is the protective genotype (8.3% in MS patients vs
26.7 % in HD, p=0.004, OR 0.25).
In addition, an association was found between the haplotypes inferred by both HLA-G polymorphisms and
MS susceptibility. Indeed, the +3142G,14bpDEL haplotype may constitute a genetic risk factor for MS (p
= 0.04, OR= 1.84).
We also observed a lower age of disease onset (ADO) in +3142C/C MS patients suggesting that HLA-G
polymorphisms might play an important role in the immunoregulatory processes of MS.
Conclusion: Taken together, our findings demonstrate the association of HLA-G +3142 C>G
polymorphism with MS susceptibility in Tunisian population.
P11- PURIFICATION DES MOLECULES A EFFETS PHARMACOLOGIQUES
A PARTIR DES GLANDES SALIVAIRES DE LA TIQUE HYALOMMA
DROMEDARII
C. BENSAOUD 1 , D. BOUSETTA 1 , Z. ABDELKAFI KOUBAA 2 , H. BEN MABROUK 2 , N. MARRAKCHI 2 ,
A. BOUATTOUR 1 , Y. M’GHIRBI 1
1
2
Laboratoire d’Epidémiologie et Microbiologie Vétérinaire, Service d’Entomologie médicale, Institut Pasteur
de Tunis, Université de Tunis El Manar
Laboratoire de venins et biomolécules thérapeutiques, Institut Pasteur de Tunis, Université de Tunis El
Manar
La tique H. dromedarii est un arthropode chélicérate, hématophage obligatoire des vertébrés. Elle est
considérée comme l’espèce la plus étroitement associée au dromadaire. Elle se répartie au niveau des
zones sahariennes et arides, caractérisées par un été chaud et humide. En Tunisie, elle se répartie dans
les régions du sud, essentiellement à Gafsa, Kbelli et Tataouine. Des travaux réalisés sur la salive des
tiques ont montré sa diversité et sa richesse permettant même d’envisager la découverte de nouvelles
molécules à potentialité thérapeutique. En effet, de nombreuses protéines isolées de la salive des tiques
ont des pouvoirs anti-tumoraux et pourraient avoir des applications thérapeutiques dans le traitement des
cancers.
L’objectif de notre travail est de purifier les molécules de la salive de la tique H. dromedarii et d’exploiter
leur potentiel pharmacologique et anti-tumoral. Dans un premier volet de ce travail, nous avons collecté
104 femelles gorgées de l’espèce H. dromedarii sur les dromadaires de la région de Douz. Après
identification, nous avons extrait la salive de ces tiques par injection de dopamine. Puis nous avons purifié
la salive obtenue par chromatographie d’exclusion. Dans un deuxième temps, nous avons testé l’effet
des trois fractions retenues (F7, F8 et F9) sur différents processus cellulaires (viabilité, l’adhésion et la
migration) de la lignée tumorale de glioblastome primaire humaine U87. Les trois fractions testées sont
cytotoxiques pour les cellules cancéreuses U87. La fraction F7 (0,05 mg/ml) a un effet d’inhibition très
56
significatif sur l’adhésion des cellules U87 en présence de fibrinogène, alors que, que lafraction F8 a
un effet d’inhibition significatif sur l’adhésion des cellules U87 en présence de poly lysine. Tandis que la
fraction F9 ne présente aucun effet. Concernant le test de migration, seule la fraction F7 (0,05 mg/ml) a
inhibé la migration des cellules cancéreuses U87.
Nos résultats indiquent que les composés de la salive de H. dromedarii ne sont pas impliqués uniquement
dans la régulation de la cascade de cicatrisation des plaies de l’hôte, mais peuvent aussi moduler les
processus d’une cellule cancéreuse en interférant avec l’adhésion, la migration et la prolifération cellulaire.
Cependant, des études plus approfondies pour l’identification du composé (s) actif (s) et du mécanisme
induisant l’effet migratoire ou adhésif des cellules tumorales U87 sont nécessaires. En effet, une (ou
plusieurs) molécule (s) des extraits de la salive de la tique Hyalomma dromedarii serait un bon candidat
pour une thérapie anti-tumorale.
Mots clès: Hyalomma dromedarii, tick, salive, cellule tumorale U87, purification
P12- ANTITUMORAL EFFECT OF SNAIL SLIME AGAINSTIGR-39 AND SK-MEL-28
MELANOMA CELL LINES
C. ELLIJIMI1, M. BEN HAMMOUDA2, JB. THIBAUD3, H. BEN MABROUK1, T. CHAGOUR1, M. ELAYEB1, N.
MARRAKCHI1, K. ESSAFI-BENKHADIR2, N. SRAIRI-ABID1
1
2
3
Université de Tunis El Manar, Institut Pasteur de Tunis, Laboratoire d’Epidémiologie Moléculaire et Pathologie
Expérimentale appliquée aux Maladies infectieuses LR11IPT04, Tunis, 1002, Tunisia
Institut des biomolécules Max Mousseron (UMR 5247 CNRS-UM-ENSCM) Faculté de pharmacie, bât. E15,
avenue Charles Flahault BP 14491 F34093 Montpellier cedex 3, France.
Background: Melanoma is the most dangerous form of skin cancer and considered as the most difficult
cancer to treat once it had spread throughout the body. Even if targeted therapies gave promising results
against melanoma development, several chemotherapeutic drugs make cells resistant and help cancer
cells survive and grow. Discovery of new natural compounds with inhibitory potential can be helpful in
the development of novel treatments. Skincare brands are now embracing snail slime as a key ingredient
in increasing skin vitality. In this work we investigated the snail slime anti-tumoral activity against two
melanoma cell lines.
Methods: Cell viability was evaluated by MTT assay. Apoptosis was determined by flow cytometry after
Annexin-V staining.
Human melanoma cell adhesion to different Extracellular Matrix proteins as integrin ligands was
investigated. Cell migration was measured in a Boyden chambers and by the wound healing method.
Electro-physiological effect was evaluated by voltage Clamp to further characterize and analyze the effect
of snail slime on Kv1.3 channels.
Results: In this study, we showed that snail slime inhibits SK-MEL-28 and IGR-39 cell viability and induces
apoptosis, in both melanoma cell lines, in a dose-dependent manner. Snail slime treatment decreased
the attachment of cells to Fibronectin, Fibrinogen, Vitronectin matrix and poly-L-lysin: synthetic peptide.
Moreover, this natural compound impaired melanoma cell motility. Electrophysiological test showed that
snail slime inhibits the ionic currents through Kv1.3 channels.
Conclusion: The presented study reinforces the idea that snail slime could be a good candidate in
melanoma cancer therapy.
Tome 92 (1-2)
57
Key-words: melanoma, Snail slime, Cell viability, migration, apoptosis, Kv1.3 channels.
P13- CARACTERISATION DES VARIANTS GENIQUES ASSOCIES AUX
GENES IMPLIQUES DANS LES CARDIOMYOPATHIES CHEZ DES
PATIENTS TUNISIENS
H. JAOUADI1, A. ZAROUI1,2, Y. BOUYACOUB1, C. NAOUALI1, K. MCELREAVEY3, S. ZAFFRAN4, R. BENKHALIFA5,
S. ABDELHAK1, R. MECHMECHE1, 2,
1
2
3
4
5
Institut Pasteur de Tunis, LR11IPT05, Laboratoire de Génomique Biomédicale et Oncogénétique, 1002 Tunis,
Tunisie; Université Tunis el Manar.
Hôpital Universitaire La Rabta, Service des Explorations Fonctionnelles et Réanimation Cardiaque, 1007
Tunis, Tunisie.
Institut Pasteur de Paris, Laboratoire de Développement Humain, France.
Université Aix Marseille, INSERM, Génétique Médicale Génomique Fonctionnelle, Marseille, France.
Institut Pasteur de Tunis, Laboratoire des Venins et Molécules Thérapeutiques, 1002 Tunis, Tunisie.
Introduction: Les cardiomyopathies et les arythmies héréditaires proviennent majoritairement de défauts
monogéniques de transmission mendélienne et dont la pénétrance et l’expressivité clinique sont très
variables. Des progrès significatifs qui ont été réalisés dans l’identification des mutations associées aux
cardiomyopathies suite au séquençage à haut débit, cependant l’interprétation des variants identifiés
reste complexe. Cet enjeu de caractérisation des variant est particulièrement bien illustré par ces
cardiomyopathies hérités à cause de la grande variabilité génétique et phénotypique.
Objectifs : Notre objectif est d’évaluer le paysage génétique des patients tunisiens atteints de
cardiomyopathies. Il s’agit de déterminer le spectre de variants génétiques présents dans la population
tunisienne et qui peut constituer un « bruit de fond » dans l’analyse des données de NGS. Notre but ultime
est d’identifier les variants génétiques pertinents responsables des cardiomyopathies dans la population
tunisienne.
Matériel et méthodes : Nous avons analysé les données du séquençage de l’exome complet pour une
série de patients atteints de cardiomyopathies et celles d’une série d’individus apparemment indemnes
d’anomalies cardiaques. L’analyse a été faite par un outil d’analyse et de filtration de variants ( VarAFT) en
ciblant des gènes impliqués dans les cardiomyopathies.
Résultats et conclusion : Nous avons caractérisé l’ensemble des variants identifiés chez les patients
atteints de cardiomyopathies et la série de contrôles en fonction de type du variant et de sa localisation
génique, tout en considérant les variants ayant une fréquence allélique < à 0.01 selon « Exome Aggregation
Consortium ».
Nos résultats ne montrent pas de différences significatives entre les patients et les contrôles pour les
variants de type non-synonymes, splice-site et les insertions _ délétions. Cependant, nous détectons
l’absence de variations non-sens (mutation stop) chez les contrôles.
Ce criblage de variants montre que les patients portent plus de variations dans les régions régulatrices que
les contrôles, ce qui soulève la question sur le rôle de ces régions, notamment les ARN non-codants dans
les cardiomyopathies.
Ce travail contribue à l’identification de variants délétères et à une meilleure interprétation des variations
rares à signification incertaine. Cette interprétation doit prendre en considération le « bruit de fond
génétique » associé à la population tunisienne.
58
Mots clès: cardiomyopathie, whole exome, sequencing, variant
P14- HPV DETECTION AND HRAS MUTATIONS IN NONMELANOMA
SKIN CANCERS
I. BEN AYED1,2, H. TOUNSI KETTITI1,2, A. JABALLAH1,2, A. SAADI1, H. YAICHE, T. LASSILI1, N. MEZGHANI1,2,
S. ABDELHAK2, S. BOUBAKER1,2.
1
2
Laboratory of Human and Experimental Pathology Pasteur Institute of Tunis. Tunis, Tunisia.
Laboratory of Biomedical Genomics and Oncogenetics. Pasteur Institute of Tunis, University Tunis EL Manar
Tunis, Tunisia.
Background and objectives : A number of viruses have been proposed to play a role in the development
of non melanoma skin cancers (NMSC), but the most plausible evidence to date suggests that human
papillomavirus (HPV ) is the key instigating factor. Recently screening for mutation of RAS gene was also
used as a prognostic marker. The association between human papillomavirus (HPV ) infection and RAS
mutation has been studied in keratoacanthoma and no correlation was found.
We aimed in this study to evaluate the prevalence of HPV and investigate their relationship with the
presence of HRAS gene mutations in NMSCs.
Materials and Methods: 80 NMSC formalin fixed paraffin embedded tissues were enrolled. HPV detection
and genotyping was performed by nested PCR (PGMY09/PGMY11/GP5+/GP6+) followed by reverse line
blot hybridization. To identify the mutational status of HRAS (exon 2) gene, we performed PCR followed
by a Sanger sequencing using specific primers.
Results: Histological types of NMSCs were distributed as follow: 36.25% squamous cell carcinoma, 26.25%
keratoacanthoma and 37.5% basal cell carcinoma.
HPV positive samples account for 33.75% (27/80). HR HPV types were found in 88.8% (24/27).
HRAS mutations were detected in 12.5% of NMSC patients, 60% of them were point mutation found in
codon 27 and 20% in codon 12. In 30% of cases, HRAS mutations were associated with HPV infection but
there was no association between HPV infection and the mutational status of HRAS gene. (p=0.321).
Conclusion: This study shows that HPV prevalence was in agreement with previous studies. Viral infection
and HRAS activation appear to represent independent factors in the etiology of NMSC. Further studies are
required with larger sampling to validate these results.
Key words: HPV infection, HRAS mutation, Nonmelanoma skin cancer.
P15- CRYPTOSPORIDIUM PARASITE AND COLORECTAL CANCER IN TUNISIA
R. JELASSI1,2, S. BENAMROUZ3, H. CHELBI1, K. GUYOTE3, G. CERTAD3, M. TRABELBI4, I. BENSGHAEIR1,
A. BOURATBINE1, K. AOUN1, E. VISCOGLIOSI3
1
2
3
4
Laboratoire de Parasitologie Médicale, Biotechnologies et Biomolécules ; Institut Pasteur de Tunis
Université de Carthage ; Faculté des Sciences de Bizerte
Centre d’Infection et d’Immunité de Lille (CIIL), Institut Pasteur de Lille ; Equipe Biologie et Diversité des
Pathogènes Eucaryotes Emergents (BDPEE) ; Inserm U1019, CNRS UMR 8204, Université Lille Nord de France
Laboratoire de Génétique Humaine, Faculté de Médecine de Tunis ; Université de Tunis El Manar
Tome 92 (1-2)
59
Introduction and objectives: The genus Cryptosporidium is a protozoan parasite that infects the
gastrointestinal tract of a wide range of hosts including humans, causing self-limited diarrhea in
immunocompetent persons and a life threatening disease in immunocompromised persons. Several
clinical and experimental studies have reported an association between the parasite and the colorectal
cancer (CRC). In Tunisia, there are no studies that investigate the association between colorectal cancer
and microorganisms (particularly parasites). The aim of this present work is to study the association
between cryptosporidiosis and CRC in Tunisia.
Material and method: We analysed 122 formalin-fixed paraffin-embedded tissues and 17 frozen surgical
specimens. These intestinal biopsies belong to patients with colorectal cancer and were collected from
hospitals of Tunis area. DNA was extracted from collected samples using QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen).
The screening of Cryptosporidium was performed using real-time PCR (qPCR TaqMan) targeting a fragment
of 178 bp encoding the 18S rRNA gene in laboratory of Biology and Diversity of Emerging Eukaryotic
Pathogens; Pasteur Institute of Lille. The positive samples were sequenced by the Sanger method to
identify the species of Cryptosporidium. The resulting sequences were aligned using the BioEdit software
and compared to isolates available in the NCBI database.
Results: Four samples (3%) revealed positive for Cryptsporidium infection. Two localized in tumor region
and the two others in peritumoral region. One sample was sequenced and identified as C. parvum.
Conclusion: It seems to be interesting to increase the sample size and to establish a control group
consisting of benign polyps biopsies and/or cancers other than colon (Gastric) to more investigate for
association of cryptosporidium sp. and CRC in Tunisia.
Key words: Cryptosporidium sp., colorectal cancer, formalin fixed paraffin-embedded tissues, frozen
surgery samples, Q-PCR, Tunisia.
P16- LEBEIN, A SNAKE VENOM DISINTEGRIN, INDUCES APOPTOSIS
IN HUMAN MELANOMA CELLS
M. BEN HAMMOUDA 1,2, M. F MONTENEGRO 2, L. SÁNCHEZ-DEL-CAMPO 2, O. ZAKRAOUI 1, Z. ALOUI 1,
I. RIAHI-CHEBBI1, H. KAROUI1, J. NEPTUNO RODRÍGUEZ-LÓPEZ2 AND K. ESSAFI-BENKHADIR1*
1
2
Institut Pasteur de Tunis, LR11IPT04 Laboratoire d’Epidémiologie Moléculaire et Pathologie Expérimentale
Appliquée Aux Maladies Infectieuses, Université de Tunis El Manar, Tunis, Tunisia.
Department of Biochemistry and Molecular Biology A, School of Biology, IMIB, University of Murcia, 30100
Espinardo, Murcia, Spain.
Background: Melanoma, the most threatening form of skin cancer, has a very poor prognosis and is
characterized by its very invasive and chemoresistant properties. Despite the recent promising news
from the field of immunotherapy, there is an urgent need for new therapeutic approaches that are free
of resistance mechanisms and side effects. Anti-neoplasic properties have been highlighted for different
disintegrins from snake venom including Lebein; however, the exact effect of Lebein on melanoma has
not yet been defined.
Methods: Cell viability was evaluated by MTT assay. Apoptosis was analysed using enzyme-linked
immunosorbent assay and by flow cytometry after Annexin-V staining. A cell-permeable fluorogenic probe,
CM-H2DCFDA was used to evaluate ROS generation. Real Time Quantitative RT-PCR, cell fractionation,
confocal microscopy and western blotting analysis were used to further characterize cell death and analyze
the key cellular effectors affected by Lebein treatment.
60
Results: In this study, we showed that Lebein blocks melanoma cell proliferation and induces a more
differentiated phenotype with inhibition of extracellular signal-regulated kinase (ERK) phosphorylation
and microphthalmia-associated transcription factor (MITF) overexpression. Melanoma cells became
detached but were less invasive with upregulation of E-cadherin after Lebein exposure. Lebein induced a
caspase-independent apoptotic program with apoptosis inducing factor (AIF), BCL-2-associated X protein
(BAX) and Bim overexpression together with downregulation of B-cell lymphoma-2 (BCL-2). It generated
a distinct response in reactive oxygen species (ROS) generation and p53 levels depending on the p53 cell
line status (wild type or mutant).
Conclusion: We suggest that Lebein is a good candidate as a natural compound for further studies as a
potential anti-melanoma therapy.
Keywords: Lebein; disintegrin; snake venom; Macrovipera lebetina; melanoma; apoptosis.
P17- ANTI-ANGIOGENIC EFFECT OF ‘PIVL’, A KUNITZ INHIBITOR
FROM MACROVIPERA LEBETINA VENOM, ON HUMAN VASCULAR
ENDOTHELIAL CELLS THROUGH V3 AND 51 INTEGRIN INTERACTIONS.
M. MORJEN1, Z. ABDELKAFI KOUBA1, M. EL AYEB1, J. LUIS 2, N. MARRAKCHI1,3.
1
2
3
Laboratoire des Venins et Biomolécules Thérapeutiques, Institut Pasteur de Tunis, Université Tunis El Manar,
Tunisia.
APHM, Hôpital Timone, Service Pharmacie, Marseille, France.
Faculté de Médecine de Tunis, Tunisia.
Development and homeostasis of the vascular system requires integrin-promoting endothelial cell
adhesion, migration and survival. Nowadays, integrins represent potential targets for pharmacological
agents and open new avenues for the control of metastatic spread in the treatment of tumor malignancies.
We have already reported that PIVL, a serine protease inhibitor isolated from Macrovipera lebetina venom,
displays an anti-tumor effect on human glioblastoma cells. Here,we report that PIVL inhibits human vascular
endothelial cell (HMEC-1) adhesion and migration onto fibrinogen and fibronectin in a dose-dependent
manner without any cytotoxicity. In a second time, we performed a random two-dimensional motility assay
by using time-lapse videomicroscopy. This technique allows a more precise identification of the migratory
parameters that might be affected. They clearly demonstrated that PIVL dramatically reduced HMEC-1 cell
motility on fibronectin. These effects of PIVL on cell velocity and directional persistence may be due to
the alteration of protusion formation. Indeed, in the presence of 1 μM of PIVL, we noted that the HMEC-1
cell area was reduced and those cells failed to extend any lamellipodium. By using blocking antibodies,
we demonstrate that PIVL impairs the function of αvβ3 and α5β1 integrins. Furthermore, results herein
reveal that this peptide could also affect endothelial cell morphogenesis by enhancing the formation of
capillary-like structures on Matrigel™. To further characterize the anti-angiogenic properties of PIVL, we
performed ex vivo angiogenesis using chick chorioallantoic membrane (CAM) assays. Our result shows
that PIVL induced a marked reduction in the number of new capillaries and branching vessels in the CAM,
without affecting pre-existing vessels. Furthermore, a decrease in the vascular density could be observed.
These findings reveal a novel pharmacological effect for a Kunitz-type serine proteinase inhibitor.
Key-words: PIVL, angiogenesis, migration, video microscopy, tubulogenesis.
Tome 92 (1-2)
61
P18- APPORT DU SEQUENÇAGE HAUT DEBIT « NGS » DANS L’ANALYSE
DES FORMES FAMILIALES DU CANCER DU SEIN NON-BRCA
M. BOUJEMÂA1, Y. HAMDI1, M. BEN REKAYA1, S. LABIDI11,2, N. MIGHRI1, C. NAWALI1, M. NAGARA1, N.
MEJRI1,2, S. ABDELHAK1, J. SIMARD3, H. BOUSSEN1,2, ON BAHALF OF THE PEC-4-TUN CONSORTIUM2.
1
2
3
Laboratoire de Génomique Biomédicale et Oncogénétique Institut Pasteur de Tunis, Université de Tunis El
Manar
Service d’Oncologie Medicale Hopital Abdel Rahmen Mami Ariana
Centre Hospitalier Universitaire de Québec Research Center, Laval University, Quebec, Canada
Introduction et objectifs : En Tunisie et dans la grande majorité des pays du monde, le cancer du sein
représente la première cause de mortalité par cancer chez la femme. Il s’agit d’une maladie multifactorielle
qui résulte de l’interaction de plusieurs facteurs environnementaux et génétiques. Le cancer du sein
familial représente environ 10% de l’ensemble des carcinomes mammaires et 20 à 30% des cas familiaux
sont attribuables à des mutations dans des génes à forte pénétrance. Par conséquent la plus grande
majorité des cas familiaux reste inexplicable.
Cette étude a pour objectif l’identification de nouveaux gènes de prédisposition qui peuvent expliquer
une fraction des cas familiaux non attribuables aux gènes connues.
Matériel et méthodes : Onze patientes Tunisiennes atteintes de cancer du sein familial et onze témoins
ont été analysées en Whole Exome Sequencing ( WES). L’ADN génomique total a été extrait et utilisé
comme matrice pour le séquençage de l’exome au complet. Nous avons analysé les données générées
par l’outil VarAFT2.03 ( Variant Annotation and Filtering Tool). Ensuite les variants obtenus ont fait l’objet
d’une analyse haplotypique par les logiciels Haploview4.2 et PHASE2.1. Une famille ne présentant aucune
mutation dans les gènes BRCA a été sélectionnée pour une analyse plus détaillée.
Résultats et conclusion : En premier lieu l’analyse haplotypique nous a permis de comparer les haplotypes
ainsi que les blocs de déséquilibre de liaison observés chez les malades et les témoins. En second lieu,
nous avons pu identifier chez la famille Non-BRCA des variations intéressantes dans des nouveaux gènes
candidats.
La découverte de nouveaux gènes de susceptibilité est très importante afin de mieux comprendre la
composante génétique du cancer du sein en Tunisie. En perspective, on compte confirmer la pathogénicité
des nouvelles variations identifiées par des études fonctionnelles plus poussées.
Mots clés : Cancer du sein, Non-BRCA, analyse haplotypique, WES.
P19- ANALYSE DES REGIONS D’HOMOZYGOTIE DANS LE SUD TUNISIEN
(MEDENINE) : ESTIMATION DE COEFFICIENT DE CONSANGUINITE
(FROH) ET DE LEURS ASSOCIATIONS AVEC LA COMORBIDITE
M. SAYEB1,2, S. LAHBIB1,2, C. NAOULI1,2, Y. BENHALIMA1,2, S. ABDELHAK1 ET L. ROMDHANE1,3
1
2
3
Institut Pasteur de Tunis, LR11IPT05, Biomedical Genomics and Oncogenetics Laboratory, 1002, Tunis, Tunisia,
Faculté des Sciences de Tunis, Université de Tunis El Manar, 2092 El Manar I Tunis, Tunis, Tunisia,
Faculté des Sciences de Bizerte, Université de Tunis Carthage, Zarzouna Bizerte, Tunis, Tunisia,
62
Introduction et objectifs : La fréquence de la consanguinité dans le sud Tunisien (Médenine) reste
toujours très élevée, bien que le coefficient F était classiquement estimé à partir des généalogies. Mais
dans ces dernières années, grâce au puces de génotypage on peut estimer F à partir des fréquences
alléliques, il est possible de se servir des allèles homozygotes par descendance (HBD) d’un individu.
Ces segments peuvent être identifiés sur le génome en recherchant des régions d’homozygotie (Runs Of
Homozygosity, ROHs) dépassant une longueur donnée.
Matériel et méthodes : Notre étude a porté, sur une cohorte de 155 sujets originaires de Médenine qui ont
été colligés à partir de la file active du laboratoire et qui sont atteints de plusieurs maladies tel que Surdité,
Autisme, Ichtyose, Xeroderma Pigmentosum. Les sujets ont été génotypés à la Plateforme de Génotypage
des Eucaryotes à l’Institut Pasteur de Paris.
Résultats et Conclusion : Dans notre travail, on a observé un nombre moyen élevé de régions d’homozygotie
(ROHs) au-delà de 0,5Mb par individu au sein de notre population (12.09). Les ROHs de taille restreinte
(entre 1,5 et 4,99Mb), indicatrices de consanguinité éloignée, représentent 0,81% de l’ensemble du génome
alors que celles de moyenne (entre 1,5 et 4,99Mb) et longue taille (5Mb), indicatrices de consanguinité
plus récente, couvrent respectivement 1,13 et 0,90% du génome. Nos résultats indiquent aussi que les
coefficients individuels de consanguinité Fped déterminés à partir de pedigrees de 3-4 générations ne sont
pas des indicateurs fiables du niveau de l’homozygotie pan-génomique (FROH) déduit à partir des ROHs
aux seuils de 0,5 et 1,5Mb. En addition, on a remarqué que les plus longs ROHs (>45Mb) sont identifiés
chez les patients avec cooccurrence de deux maladies (comorbidité) et que les gènes mutés sont identifiés
dans ces régions. Le nombre important des ROHs observé dans cette étude semble être en accord avec
l’histoire démographique de la population étudiée.
P20- UNE SEULE MUTATION … PLUSIEURS PHENOT YPES …
N. KERKENI1, M. TRABELSI1.2, A. ACHOUR1.2, F. MAAZOUL1.2, I. TURKI3, R. M’RAD1.2.
1
2
3
Laboratoire de génétique humaine, faculté de médecine de Tunis, Tunisie
Service des maladies congénitales et héréditaires, EPS Charles Nicolle, Tunis, Tunisie
Service de neurologie de l’enfant et de l’adolescent, Institut Mongi ben Hmida de neurologie, Tunis, Tunisie
Introduction et objectifs : Le gène MECP2 (OMIM #300005) est localisé sur le bras long du chromosome
X (Xq28). Il code pour la protéine methyl-CpG-binding protein 2, qui se comporte comme un modulateur
épigénétique du génome entier. Les mutations du gène MECP2 provoquent la perte de fonction ou la
surexpression de la protéine conduisant ainsi à différentes pathologies neurologiques, parmi lesquelles le
syndrome de Rett (RTT, OMIM 312750).
Nous proposons dans cette étude de réaliser une étude clinique d’une cohorte de 3 patientes porteuses de
la mutation p.R168X du gène MECP2 et 1 patiente touchée par une autre mutation MECP2.
Patients et méthodes : L’identification de la mutation p.R168X a été effectuée par séquençage des exons
codants du gène MECP2.
Une étude clinique a été effectuée en explorant les dossiers médicaux de nos patientes porteuses de cette
mutation et une classification selon les critères diagnostic de RTT a été réalisée pour tous les cas étudiés.
Résultats et discussion : La mutation p.R168X est considérée comme la mutation la plus fréquente dans
le syndrome de Rett. Elle a été identifiée chez 2 patientes (P1 et P2) ayant une forme typique de ce
syndrome. Dans la littérature, une absence de corrélation génotype–phénotype a été notée au sein du
groupe des patients ayant cette forme clinique du syndrome de Rett. Cette variation clinique a été illustrée
entre nos 2 patientes P1 et P2. La p.R168X n’a jamais été décrite chez des patients atteints par d’autres
pathologies neurologiques, nous l’avons identifiée chez une patiente RTT(-) (P3).
Tome 92 (1-2)
63
La patiente P4, bien qu’elle soit porteuse de la mutation p.R255X du gène MECP2, elle est caractérisée par
un phénotype similaire à celui décrit chez la patiente P1.
Conclusion : La différence phénotypique décrite dans notre série peut être expliqué par l’implication du
phénomène de l’inactivation du chromosome X. L’identification d’une mutation MECP2 chez une patiente
RTT(-) prouve la nécessité d’adapter les critères diagnostics du syndrome de Rett chez la population
Tunisienne.
Mots clés: MECP2, Syndrome de Rett, mutation, génotype, phénotype.
P21- OLOGOGENISME ETRÉVERSION:DEUXPHÉNOMÈNESRÉVÉLÉS
PAR L’ANALYSED’EXOMEDEPATIENTSATTEINTS D’HYPOGONADISME
HYPOGONADOTROPECONGÉNITAL
R. MKAOUAR 1, L. CHERIF BEN ABDALL AH 1, S. ELOUEJ 1, C. NAOUALI 1, Z. TURKI 1, S. ABDELHAK 1,
O. MESSAOUD1
1
2
Laboratoire de Génomique Biomédicale et Oncogénétique, Institut Pasteur de Tunis, Université de Tunis
El Manar.
Service d’Endocrinologie, Institut de Nutrition, Tunis, Tunisie.
Introduction et objectifs : L’hypogonadisme hypogonadotropecongénital (CHH) se définit comme l’absence
de sécrétion des hormones sexuelles. Le CHH est caractérisé par une forte hétérogénéitéphénotypique et
génétique.
Nous sommes proposés de déterminer les bases génétiques des patients atteints de CHH afin de comprendre
les mécanismes moléculaires impliqués dans l’expressivité variable et la pénétrance incomplète. Ceci nous
permettra d’établir un diagnostic génétique approprié.
Patients et méthodes : Nous disposons d’une famillequi inclut une fille atteinte du CHH et porteuse d’une
mutation (p.290 P>S) à l’état homozygote au niveau du gène PROKR2, ainsi que son frère et son père, tous
deux asymptomatiques. Nous avons ainsi émis l’hypothèse d’oligogénisme ou de réversion. Pour cela, nous
avons réalisé un séquençage d’exome. L’analyse bioinformatique des données d’exome a été réalisée à partir
du fichier VCF ( Variant Calling Format).Nous avons fait l’annotation et la filtration des variants par l’outil
d’analyse VARAFT. Certaines mutations ont été confirmées par séquençage Sanger.
Résultats : Nous avons identifié une mutation (c.73 G>A)au niveau du gène TACR3à l’état homozygote chez
les cas asymptomatiques et à l’état hétérozygote chez le cas index. Cette mutation serait impliquée dans la
réversion par l’activation d’une voie alternative chez les homozygotes. Ce mécanisme serait à l’origine du
rétablissement du phénotype normal chez le frère et le père alors que la présence d’une voie défectueuse
expliquerait le maintien du phénotype malade chez la fille.
Nous avons également identifiéun variant au niveau du gène SEMA3A, présent à l’état homozygote chez la
patiente et à l’état hétérozygote chez les cas asymptomatiques. Un autre SNP, a été détecté, au niveau d’un
gène modificateur, NRP1, impliqué dans la même voie de signalisation que SEMA3A. Le variant au niveau du
gène SEMA3A serait impliqué dans l’oligogénisme. Son effet serait exercé en synergie avec celui du variant
identifié au niveau du gène modificateur, NRP1.
Conclusion : L’étude de la présente famille illustre à la fois le phénomène d’oligogénisme et de réversion comme
mécanismes génétiques pouvant être à l’origine du CHH. Cependant, une investigation fonctionnellepermettrait
d’élucider les processus moléculaires et physiologiques qui contrôlent ces deux phénomènes.
Mots clés : Hypogonadisme hypogonadotrope; oligogénisme; réversion.
64
P22- FAILURE OF SMAD- DEPENDANT PATHWAY IN SYSTEMIC LUPUS
ERY THEMATOSUS
R. REKIK1, M. SMITI KHANFIR2,3, S. HAMZAOUI3,4, I. ZAMALI1, O. KAMMOUN1, S. MRAD3,4, H. HOUMAN2,3,
M. BEN AHMED1,3
1
2
3
4
Laboratory of Transmission, Control and Immunobiology of Infection, LR11IPT02, Institut Pasteur de Tunis,
1002, Tunis, Tunisia;
Department of Internal Medicine, Hôpital La Rabta, Tunisia
Faculté de Médecine de Tunis, Université Tunis El Manar, 1068, Tunis, Tunisia
Department of Internal Medicine, Hôpital La Rabta, Tunisia
The pathogenesis of systemic lupus erythematosus (SLE) is incompletely deciphered. The mechanism
lea0ding to the disruption of self-tolerance remains elusive. The importance of TGF-β in the maintenance
of self-tolerance was recently emphasized by the targeted disruption of its signaling in mice T cells
resulting in a fatal autoimmune syndrome associated with lupus auto-antibodies production. We recently
demonstrated an impaired response of peripheral mononuclear cells to TGF-β in patients with active SLE
supporting its possible implication in the pathogenesis of the disease. We aimed in the present study to
delineate the exact mechanisms underlying the resistance of lymphocytes to TGF-β in SLE and to evaluate
the intrinsic or extrinsic nature of such default.
Thirty patients with SLE (16 active and 14 non active disease) as well as 28 healthy controls were
prospectively included in this study. The functional analyses of the response to exogenous TGF- were
performed on CD3+-T-cell-sorted lymphocytes. The dependent Smad-pathway has been explored by
analyzing the transcription of TGF-β target genes using quantitative reel time PCR. The identification of
the specific defect on the Smad-dependent pathway was conducted through the analysis of the membrane
expression of the TGF- recetor by flow cytometry and the phosphorylation of Smad2/3 after TGF-β
activation using Western blotting and intracellular staining by flow cytometry.
Our results showed a default of TGF-β target gene transcription only in active SLE patients (SLEDAI > 6)
confirming the extrinsic nature of the defect. None of the studied patients showed a quantitative lack of
TGF-β receptor expression. However, a defect of phosphorylation of Smad2/3 complex in T lymphocytes
after TGF-β activation has been demonstrated in active SLE patients either by flow cytometry or by Western
blotting. Our results confirmed the resistance of T lymphocytes to TGF-β effects in SLE and pointed to
the extrinsic nature of such defect. They also demonstrated that the defect lies on the phosphorylation of
Smad2/3 complex after TGF-β activation. Studies are in progress in order to identify the factors that are
directly responsible for the impairment of Smad2/3 phosphorylation in the active phases of SLE.
Key words: Smad pathway, TGF-β, systemic lupus erythematosus, auto-immunity
P23- EFFECTS OF IRON OXIDE NANOPARTICLES ON SH-SY5Y
NEUROBLASTOMA CELL LINE
D. ASKRI1,2,3,4, S. LEHMANN2,3,4,5, W. RACHIDI6, L. EL MIR7, M. SAKLY1, S. AMARA1 AND M. SEVE2,3,4
1
2
3
4
Univ. Carthage, Fac. Sciences of Bizerte, Unit of Integrated Physiology, Bizerte, Tunisia
Univ. Grenoble Alpes, LBFA and BEeSy, Grenoble, France
Inserm, U1055, PROMETHEE Proteomic Platform, Grenoble, France
CHU de Grenoble, IBP, PROMETHEE Proteomic Platform, Grenoble, France
Tome 92 (1-2)
65
5
6
7
Univ. Grenoble Alpes, ISTerre, Grenoble, France
CEA Grenoble, INAC/SCIB/LAN, Grenoble, France
University of Gabes, Fac. Sciences of Gabes, Laboratory of Physics of Materials and Nanomaterials Applied at
Environment, Gabes, Tunisia
E-mai l: [email protected]
Introduction and aims: Iron Oxide Nanoparticles (IONPs) are widely used in many fields especially in
Biomedicine. Due to their unique properties, they are used as theranostic agents for cancer, and also as
MRI contrast agents [1]. So, the safety of these NPs should be studied to optimize their benefits and to
minimize their risks [2]. Our study was designed to investigate IONPs effects on viability of neuroblastoma
cell line SH-SY5Y. Material and methods: To do, three fractions of IONPs were characterized by XRD and
TEM, and in solution by DLS. SH-SY5Y cells were seeded into 96 well plate at a density of 25.103 cell/
well 24h prior to exposure to IONPs at concentrations (12.5-200 µg/ml). Cell morphology changes were
evaluated using inverted microscope. Viability of cells after exposure to IONPs was assessed by MTT. The
absorbance was measured at 570nm using a microplate reader. Cell viability was expressed as percentage
of live cells / total cells.
Results: The cristallite sizes of IONPS 14, 22 and 30 nm were determined according to the highest peak
observed in XRD after three agitation times 15 min, 24 and 48 h respectively. Moreover, the results showed
that there is no other elemental impurities present in IONPs. After DLS measurments, we found that IONPs
had different sizes from their powder size and more interesting according to the type of the solution and
the degree of its complexity. After 24h treatment, cells exhibited morphological changes i.e decrease in
cell proliferation, cells are less flat, loose of the neuronal aspect and detachment from the wells comparing
to the control. This result was size and concentration dependent as well as the results from the MTT test.
Moreover, the IONPs with the highest size were found to be the most toxic for the cells by decreasing of
viability more than 50% at 100 and 200 µg/ml.
Conclusion: Our work evidences the toxic effects of IONPs on neuroblastoma cells which could
be promising for their use to treat this kind of cancer. Further studies should be conducted to better
understand these findings and particularly the cellular and molecular mechanisms.
Key words: Iron Oxide Nanoparticles, Toxicity, neuroblastoma cell line, Viability
P24- QUINCE PEEL POLYPHENOLIC EXTRACT BLOCKS HUMAN COLON
ADENOCARCINOMA LS174 CELL GROWTH THROUGH THE INHIBITION
OF CYCLIN D1 AND VEGF EXPRESSION, INDUCES A CASPASEINDEPENDENT CELL DEATH AND POTENTIATES 5-FLUOROURACIL
EFFICACY
I. RIAHI-CHEBBI1,4, M. HAOUES2,4, M. ESSAFI2,4, O. ZAKRAOUI1,4, S. FATTOUCH3, H. KAROUI1,4, K. ESSAFI-BENKHADIR1,4*
1
2
3
4
Institut Pasteur de Tunis, LR11IPT04 Laboratoire d’Epidémiologie Moléculaire et de Pathologie Expérimentale
Appliquée Aux Maladies Infectieuses, 1002, Tunis, Tunisie.
Institut Pasteur de Tunis, LR11IPT02 Laboratoire de Recherche sur la Transmission, le Contrôle et
l’Immunobiologie des Infections, 1002, Tunis, Tunisie.
Université de Carthage, Institut National des Sciences Appliquées et de Technologie (INSAT), Tunis, Tunisie.
Université de Tunis El Manar, 1068, Tunis, Tunisie.
66
Background: Conventional treatment of advanced colorectal cancer faces two major problems, namely the
development of tumor resistance and the toxicity toward normal tissues. Therefore, development of alternative
cancer-specific non toxic drugs would be of paramount importance. Here, we investigated the potential anti-tumoral
effect of peel (Peph) and pulp (Puph) polyphenolic extracts from the Tunisian quince Cydonia oblonga Miller on both
no-tumorigenic cells NIH 3T3 Fibroblasts and HEK 293 cells and human colon adenocarcinoma LS174 cells.
Methods: Cell proliferation and cytotoxicity were measured with MTT and LDH assays respectively. Cell cycle
distribution and the apoptosis levels were assessed by flow cytometry. Intracellular ROS levels were determined
using the fluorescent probe CM-H2DCFDA. Western blot was used to further characterize cell death and analyze the
signaling pathways affected by Peph treatment. The expression level of VEGF-A was evaluated by real time quantitative
PCR and further verified by quantifying the secreted cytokines by enzyme-linked immunosorbent assay.
Results: We found that Peph extract displayed the highest anti-proliferative effect specifically on LS174 cells. However,
each Peph phenolic compound alone did not exhibit any anti-proliferative activity, suggesting a synergistic effect of
phenolic molecules. Such effect was associated with a cell cycle arrest in the G1/S phase, a caspase-independent
apoptosis and an increase of the reactive oxygen species (ROS) production. Peph extract inhibited the pro-survival
signaling pathway NFκB and suppressed the expression of various cellular markers known to be involved in cell
cycling (cyclin D1) and angiogenesis (Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF). Interestingly, the combination
Peph extract and 5-FU exerted synergistic inhibitory effect on cell viability.
Conclusion: These data suggest that quince Peph extract through its dual inhibitory effect of colon cancer cell
survival/proliferation and angiogenesis promoting molecules could be proposed as promising cost effective non toxic
drug to employ alone or in combination with conventional anti-colorectal cancer. Moreover, quince rich regimen may
prevent the development and the progress of colon cancer.
Keywords: Quince peel polyphenolic extract, Cydonia oblonga Miller, Colon cancer, Anti-tumoral effect,
mechanism of action, 5-Fluorouracil.
P25- SPECIFIC DROMEDARY IMMUNE RESPONSE, LIBRARY CONSTRUCTION
AND RESCUED NANOBODY CHARACTERIZATION AGAINST CANCER
BIOMARKERS
S. DHAOUADI1, I. HENDAOUI2, R. BEN ABDERRAZEK1, A. TOUNSI1, S. BICHET2, L. HENDAOUI3,S. BOUBAKER4,
R. CHIQUET-EHRISMANN2 AND B. BOUHAOUALA-ZAHAR1
1
2
3
4
Laboratoire des Venins et Molécules Thérapeutiques; Institut Pasteur Tunis, 13 Place Pasteur, BP74, 1002 TunisUniversité Tunis El Manar Tunisia, Tunisia;
Friedrich Miescher Institute for Biomedical Research, Maulbeerstrasse 66, Novartis Research Foundation,
Basel, Switzerland;
Service de Radiologie, Hôpital Mongi Slim-La Marsa-Tunisia;
Service anaotomopathologie, Institut Pasteur Tunis, 13 Place Pasteur, BP74, 1002 Tunis-Tunisia; 5-Faculté de
Médecine de Tunis, 15 rue Djebel Lakhdhar, La Rabta, 1007, Tunis-Université Tunis el Manar, Tunisia.
Introduction and Aims: During last decade, increasing evidences have emerged showing that cell microenvironment
plays a prominent role in tumor progression through certain glycoproteins considered as biomarkers for early diagnosis.
In particular, the family members so called “Tenascins” have been shown to be differentially expressed within the tumor
stroma of several solid tumors. Indeed, during tumor genesis, Tenascin-C and Tenascin-W hexameric glycoproteins
participate to different tumorigenic processes. Their divergent expression profiles as well as their physiopathological
functions prompted us to investigate them as promising targets for the diagnosis of solid tumors. Therefore,
based on our expertise, we proposed to develop nanobodies (Nbs), naturally occurring in camelid serum.
Tome 92 (1-2)
67
Material and Methods: To put this new concept into practice, we first immunized a dromedary with a
cocktail of recombinant human Tenascin-C and Tenascin-W (i.e. TNC and TNW ) and demonstrated that the
dromedary raised a TN-specific immune response in their heavy-chain isotypes. Subsequently, peripheral
blood lymphocytes were collected from which we extracted total RNA and used it as template to prepare cDNA
and PCR amplification. The VHH combinatory library was obtained by cloning VHH repertoire into phage
display pMECS vector. Representative aliquots were rescued with M13KO7 helper phages and 3 rounds of
panning were carried out on TN-coated wells to enrich phage particles expressing a specific nanobody at their
tip. A combinatorial library of individual transformants was obtained and stored at -80°C. The pattern diversity
of VHH in phage display vector was determined using colony PCR.
Results and Conclusion:The highest enrichment was obtained during the third round of panning. We identified
three positive clones for Tenascin-C and four positive clones for Tenascin-W. The seven selected Tenascinspecific Nanobodies were produced, purified and tested to their ability to recognize and bind tenascins, in vitro
and in situ (tissues). Only rescued Tenascin-Nanobodies displaying high binding capacity are in progress to be
further characterized in terms of affinity and VHH sequence analysis. Hence, we demonstrated that raising a
highly specific immune response against Tenascin-C and Tenascin-W is a promising strategy to select novel protumoral binders (Dhaouadi et al., in preparation).
Keywords: VHH, biomarker, microenvironment.
P26- HSA-MIR-451 EXPRESSION IN WHITE BLOOD CELLS OF CML PATIENTS:
DIFFERENTIAL EXPRESSION IN OPTIMAL IMATINIB RESPONDERS AND
RESISTANTS
I. SOLTANI1, K. DOUZI1, H. GHARBI1, I. BENHASSINE1, M. TEBER1, S. ABBES1, S. MENIF1
1
Molecular and Cellular Hematology Laboratory, Tunis Pasteur Institute, Tunisia
Introduction: The treatment of chronic myeloid leukemia (CML) has been revolutionized by the development
of imatinib mesylate (IM). Despite high efficiency of IM, acquired resistance has been observed in a significant
proportion of patients. Aside mutations of the BCR/ABL gene, downstream factors may contribute to treatment
failure. Accumulating evidence for aberrant expression of miR-451 in several types of human cancer suggests
that it may be play a critical role in treatment response to IM in patients with CML.
Materials and Methods: 29 responders (molecular remission) and 30 non-responders were included in this
study. Both miR-451 expression and MYC transcript expression were measured by real-time quantitative RTPCR assay. Analysis of relative expression of miR-451 and MYC between groups was calculated according to the
2-ΔCt method. Putative targets of miR-451 were predicted by TargetScan and Microcosm. In addition, we used
Pach algorithm to identify transcription factor binding sites (TFBSs) in promoter region sequences of miR-451.
Results: Down-regulation of the expression of miR-451 was observed in non-responders as compared to
responders. Furthermore, in silico analyses identified MYC as a potential target of miR-451 which in turn may
regulates miR-451 expression as a transcription factor. Increased level of MYC was also detected in resistant
patients when compared to optimal imatinib responders. Combination of these findings suggests that there
may exist a feedback loop between miR-451 and MYC.
Conclusions: Our findings suggest that miR-451/MYC mini-circuitry may act as a potential therapeutic
target and disruption of suggested regulatory loop could help to improve CML therapy.
Mots clès: CML; Imatinib Mesylate ; Resistance ; miR-451 ; MYC
68
P27- LE SYNDROME DE LARON
F. TINSA1,2,3, I. BEL HADJ1,2, M. BEN ROMDHANE1,2, I. TRABELSI1,2, S. BOUSNINA1,2, K. BOUSSETTA1,2
1
2
3
Service de médecine infantile B, hôpital d’enfants de Tunis, Béchir Hamza
Faculté de médecine Tunis el Manar, Tunisie
Laboratoire de Génomique biomédicale et oncogénétique (LR11 IPT 05), Institut Pasteur de Tunis
Introduction et objectif : Le syndrome de Laron est une entité rare de transmission autosomique
récessive. Prés de 300 cas ont été rapporté dans la littérature à ce jour. Il est caractérisé par un nanisme en
rapport avec une insensibilité à l’hormone de croissance.
L’objectif de notre étude est de rapporter l’étude clinique, biochimique, génétique et évolutive (sur une
trentaine d’année) d’une famille tunisienne dont les quatre enfants sont atteints.
Patients et méthodes : Il s’agit de l’étude d’une famille dont les 4 membres sont atteints d’un nanisme de
Laron. Le diagnostic de syndrome de Laron a été porté sur la clinique et le dosage hormonal. Une étude
génétique a été complétée au service de biochimie - INSERM unité 91 -CHU Henri Mondor Créteil-France.
Résultats : Les quatre patients (2 garçons et deux filles) étaient issus d’un mariage consanguin du 2ème
degré. Aucun nanisme n’a été observé durant les 4 générations précédentes.
L’âge au diagnostic variait entre 6 mois et 11ans. Le retard staturo-pondéral portait plus sur la taille (entre
-5DS et -9DS) que le poids ( entre -3DS et -4DS). Une dysmorphie faciale caractéristique était constatée
dans les 4 cas. Les deux garçons présentaient un micropénis. Une luxation congénitale de la hanche a été
découverte chez une fille qui avait présenté des convulsions par hypoglycémie.
Le syndrome de Laron a été porté dans les quatre cas devant la clinique et un taux de HGH>2,5ng/ml avec
un taux indétectable d’IGF1. Le séquençage direct de l’ADNc a permis d’identifier chez les quatre enfants la
substitution de la thymidine en cytosine générant la sérine à la place de la phénylalanine en position 96 du
domaine extracellulaire du récepteur. Un seul enfant a bénéficié d’un traitement à base d’IGF1 avec un gain de
taille de +2,8DS. ’évolution à long terme était marquée par l’aggravation de l’obésité avec l’âge, l’installation
d’une ostéoporose dans un cas et par l’absence de survenue d’une dyslipémie dans tous les cas. L’insertion
socio-professionnelle de ces patients a été bonne dans deux cas et un patient a eu un enfant indemne.
Conclusion : Le syndrome de Laron est une entité rare dont l’évolution est émaillée de complications.
Le traitement par l’IGF1 améliore le pronostic statural.
Mots clès : nanisme, syndrome de laron, IGF1, GHR.
P28- IMPLICATION DU POLYMORPHISME (I/D) DU GENE DE L’ACE
DANS L’EPILEPSIE SYMPTOMATIQUE
M.H.E. TRABELSI1, I. BEDOUI2, H. DERBALI2, S. LAYOUNI1, A. SAYEH¹, N. FEKIH-MRISSA1, R. MRISSA2, B.
NSIRI1
1
2
Laboratoire de Biologie Moléculaire, Service d’Hématologie, Hôpital Militaire de Tunis
Service de Neurologie, Hôpital Militaire de Tunis
Introduction et objectifs: L’épilepsie idiopathique et l’épilepsie symptomatique sont généralement
faciles à différencier. Les épilepsies symptomatiques (ES) sont secondaires à des pathologies cérébrales
diverses d’origine malformative, métabolique ou génétique. L’un des facteurs génétiques impliqués dans
Tome 92 (1-2)
69
cette pathologie est le polymorphisme I/D du gène de l’ACE. Le but de cette étude est d’examiner l’implication
polymorphisme (I/D) du gène de l’ACE chez une population des patients qui souffrentd’une épilepsie symptomatique.
Matériels et méthodes: Notre étude a porté sur 48 patients (37 hommes et 11 femmes) avec un sexe-ratio H/F
égale à 3.36. L’âge moyen lors du diagnostic est de 42.70(±18.24 ans), alors que l’âge de début de la maladie
est 33.77(±20.18 ans) et 100 témoins appariés en âge et en sexe. Le génotypage du gène de l’ACE a été réalisé
par la technique PCR RFLP.
Résultats: L’étude épidémiologique a révélé que le génotype D/D présente la plus haute fréquence (58.33 %),
alors que le génotype I/I est présent avec la plus faible fréquence (4.16 %) et le génotype I/D est présent avec
une fréquence égale à 37.5 %. L’étude des fréquences alléliques a révélé que l’allèle D présente la plus haute
fréquence (77.08 %) par apport à l’allèle I qui présente une fréquence égale à 22.92 %.
Conclusion: L’étude génotypique et allélique du polymorphisme (I/D) du gène de l’ACE chez une population
tunisienne souffrant d’une épilepsie symptomatique a montré une prédominance du génotype D/D et de l’allèle
D par apport au génotype I/I et l’allèle I. Des études plus approfondies ainsi que l’augmentation du nombre de
patients pourraient mieux nous aider à comprendre le rôle de ce gène dans la physiopathologie de l’épilepsie.
Mots clès: Epilepsie symptomatique, ACE, PCR-RFLP.
P29- EFFET DES FRACTIONS DU VENIN DE SCORPION ANDROCTONUS
AUSTRALIS HECTOR (AAH) SUR LES CELLULES GLIOMATEUSES
W. MOSLAH1, D. AISSAOUI2, A. ELLAFI, T. CHAGOUR1, M. ELAYEB1, N. MARRAKCHI1, N. SRAIRI-ABID1
1
Introduction : Les glioblastomes sont les tumeurs primitives et les plus agressives des tumeurs du cerveau
ou gliomes. Les venins d’origine animale possèdent des agents pharmacologiques qui agissent sur les
différentes étapes du développement des cellules tumorales. Les molécules de petites tailles issues des
venins des scorpions ont donné des résultats très prometteurs contre les différentes étapes du cancer.
Ces molécules agissent via des canaux ioniques spécifiquement surexprimés au niveau des cellules
gliomateuses. Ces données nous ont incités à mieux explorer les peptides présents dans les venins de
scorpions.
Objectif : L’objectif de ce travail est d’isoler les molécules les plus actives de venin de scorpion Aah sur
les cellules U87.
Matériel et méthodes : Le venin de scorpion (Aah) est purifié par trois étapes de chromatographie en
commençant par le tamisage moléculaire suivi d’une chromatographie liquide rapide (FPLC) et enfin
une chromatographie liquide à haute performance (HPLC). Les fractions issues de chaque méthode de
fractionnement sont testées sur la prolifération, l’adhésion et la migration les cellules gliomateuses afin
d’identifier des molécules actives.
Résultats : La purification du venin de scorpion (Aah) (8 mg/ml) a donné quatre fractions M1 (0,2 mg/ml)
M2 (0,31 mg/ml) Aah G50 (0,41 mg/ml) et M3 (0,19 mg/ml). La fraction M3 (50 µg/ml) a montré un effet
important sur la prolifération et la migration (75%) des cellules U87 du glioblastome. Le fractionnement de
M3 par FPLC à donner 4 fractions dont F4 qui inhibe le plus la prolifération des cellules U87.
Conclusion : Nous avons montré au cours de ce travail que le venin de scorpion Aah possède des peptides
qui ont un effet important sur la prolifération et la migration des cellules U87.
Mots clés : glioblastome, Androctonus australis hector, venin, scorpion.
70
P30- L’ITE: UN TRAITEMENT POTENTIEL DE LA SCLEROSE EN PLAQUES ?
I. ZAMALI, R. REKIK, N. BELADJ HMIDA, M. BEN AHMED.
Laboratoire d’immunologie Clinique, Institut Pasteur de Tunis, 1002, Tunis, Tunisie.
Introduction et objectif : Au cours de la sclérose en plaques (SEP), les lésions sont induites suite à
l’activation des lymphocytes T CD4 auto-réactifs de type Th1 et Th17. Le rôle protecteur des lymphocytes
TH22, producteurs d’IL-22, a été récemment suggéré. En effet, le TCDD, un ligand toxique de l’AhR, facteur
de transcription de l’IL-22, induit une inhibition du développement des symptômes de l’encéphalomyélite
allergique extrinsèque (EAE) chez la souris via notamment l’expansion des lymphocytes T régulateurs. De
façon intéressante, un autre ligand non toxique de l’AhR, l’ITE était capable d’inhiber les symptômes de
l’EAE chez la souris. L’objectif de notre travail est d’étudier l’action de l’ITE sur la production in vitro d’IL22 chez l’homme mais aussi sur les lymphocytes T régulateurs aussi bien naturels que générés de novo.
Matériel et méthodes: Les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) ont été isolées à partir
de 6 donneurs sains. Ces cellules ont été, par la suite, stimulées durant 2 jours en présence d’ITE à
différentes concentrations. L’expression d’IL-22, d’IFN-γ et d’IL-17A par les lymphocytes T CD4 a été
étudiée par cytométrie en flux. Parallèlement, les lymphocytes T CD4+CD25- ont été triés puis mis en
culture en présence d’anticorps anti-CD3/CD28 et de TGF-β et ce, en présence ou non d’ITE à différentes
concentrations. Au bout de cinq jours, l’expression de FoxP3, a été étudiée par cytométrie en flux. L’effet
suppresseur des cellules générées à été aussi évalué en les co-cultivant en présence de lymphocytes T
CD4+CD25- autologues fraichement triées et stimulés par un anticorps anti-CD3 durant cinq jours. L’effet
de l’ITE sur les lymphocytes T régulateurs naturels a été étudié en testant le caractère anergique ou non
de ces cellules activées par l’anticorps anti-CD3 en présence ou non d’ITE à différentes concentrations.
Résultats: Nos résultats montrent que l’ITE, augmente la production de l’IL-22 par les lymphocytes T
CD4 périphériques humains mais n’exerce aucun effet sur la production d’IFN- γ ni d’IL-17. Par ailleurs,
l’ITE n’altère pas la génération de novo des lymphocytes T régulateurs. L’effet suppresseur des cellules
générées en présence d’ITE semble même amplifié. Enfin, l’analyse de l’effet de l’ITE sur les lymphocytes
T régulateurs naturels indique que l’ITE n’altère pas les fonctions anergiques de ces derniers.
Conclusion: Nos données suggèrent que l’ITE, ligand non toxique de l’AhR, pourrait être un candidat
potentiel dans le traitement de la SEP vu son effet inducteur de la production d’IL-22 qui a été confirmé
chez l’homme et son effet potentialisateur sur la génération de novo des lymphocytes T régulateurs.
Mots clé : Sclérose en plaques - ITE – IL-22 – Lymphocytes T régulateurs
P31- INTERACTION OF A SNAKE VENOM L-AMINO ACID OXIDASE WITH
DIFFERENT CELL T YPES MEMBRANE
Z. ABDELKAFI-KOUBAA1, I. AISSA2, M. MORJEN1, N. KHARRAT2, M. EL AYEB1, Y. GARGOURI2, N. SRAIRIABID1, N. MARRAKCHI1,3.
1
2
3
Laboratoire des Venins et Biomolécules Thérapeutiques LR11IPT08, Institut Pasteur de Tunis, 1002 Tunis,
Tunisia, Université de Tunis el Manar, 1068 Tunis, Tunisia.
Laboratoire de Biochimie et de Génie Enzymatique des Lipases, Ecole Nationale d’Ingénieurs de Sfax (ENIS),
3038 Sfax, Tunisia, Université de Sfax, Tunisia.
Faculté de Médecine de Tunis, 1007 Tunis, Tunisia.
Tome 92 (1-2)
71
Introduction: Snake venom L-amino acid oxidases (SV-LAAOs) are multifunctional enzymes that exhibited
a wide range of pharmacological activities. Although it has been established that these activities are
primarily caused by the H2O2 generated in the enzymatic reaction, the molecular mechanism, however,
has not been fully investigated.
Objectives: In this work, LAAO interaction with cytoplasmic membranes using different cell types and
Langmuir interfacial monolayers was evaluated.
Results: The Cerastes cerastes venom LAAO (CC-LAAO) did not exhibit cytotoxic activities against
erythrocytes and peripheral blood mononuclear cells (PBMC). However, CC-LAAO caused cytotoxicity on
several cancer cell lines and induced platelet aggregation in dose-dependent manner. Furthermore, the
enzyme showed remarkable effect against Gram-positive and Gram-negative bacteria. These activities were
inhibited on the addition of catalase or substrate analogs, suggesting that H2O2 liberation is required for
these effects. Binding studies revealed that CC-LAAO binds to the cell surface and enables the production of
highly localized concentration of H2O2 in or near the binding interfaces. On another hand, the interaction
of CC-LAAO with a mimetic phospholipid film was evaluated, for the first time, using a monomolecular film
technique. Results indicated that phospholipid /CC-LAAO interactions are not involved in their binding to
membrane and in their pharmacological activities.
Conclusions: Our results suggest that CC-LAAO interacts with specific cell type’s membrane and the
presence of H2O2 as catalyst, is required for its pharmacological effects. However, the interaction of CCLAAO did not involve neither hydrophobic nor electrostatic interactions. However, the glycosylated site
could be a plausible candidate and this awaits further studies.
Keywords: L-Amino acid oxidase, Phospholipid monolayers, Immobilized enzyme, Membrane interaction.
P32- DETERMINATION OF MIRNAS IN CANCER CELLS
M. ZOUARI1, S. CAMPUZANO2, J. M. PINGARRON2, N. RAOUAFI1
1
2
Department of Chemistry, Faculty of Sciences, University of Tunis El Manar, Rue Béchir Salem Belkheria, Tunis
El-Manar, 2092 Tunis, Tunisia.
Departamento de Química Analítica, Facultad de CC. Químicas, Universidad Complutense de Madrid,
E-28040 Madrid (Spain).
Introduction: A new method for the detection of miRNAs making use of a competitive RNA/RNA
hybridization configuration is described in this work.
Materials and methods: A biotinylated miRNA (biotin-miRNA) of identical sequence to that of the target
miRNA is mixed with the samples to be analyzed allowing competition to be accomplished with the target
miRNA for a thiolated RNA probe assembled onto a gold nanoparticles (AuNPs) modified screen-printed
electrode. After labeling the hybridized biotin-miRNA with streptavidin-HRP conjugates, amperometric
detection at -0.20 V was carried out using the H2O2/hydroquinone (HQ) system.
Results and Conclusion: The decrease in the amperometric response was proportional to the
concentration of model target miRNA-21 in the 100 fM to 25.0 pM range. The integrated sensor provided
a very low detection limit (25 fM) for miRNA-21 without any amplification step. The usefulness of the
developed method was demonstrated by determining the endogenous levels of the mature target miRNA
in total RNA (RNAt) extracted from cancerous and non-cancerous cells.
Keywords: miRNAs, GNPs-SPCEs, attomole sensitivity, cancer cells, amperometry.
72
P33- RECENSEMENT DES ICHT YOSES SYNDROMIQUES DANS LA
POPULATION TUNISIENNE
G. ABDESSALEM1, N. LAROUSSI1, A. ZAOUK2, C. KTAIFI1, M. MSAYEB1, H. HAMMAMI-GHORBEL2, I.
KRAOUA4, J. MARRAKCHI5, I. DORBOZ6, Y. BOUYACOUB1, M. CHARGUI1, C. NAOUALI1, L. ROMDHANE1, O.
BOESPFLUG-TANGUY6, I. TURKI4, G. BESBES5, S. ABDELHAK1, C. CHARFEDDINE1, M. MOKNI3
1
2
3
4
5
6
Laboratoire de Génomique Biomédicale et Oncogénétique, Institut Pasteur de Tunis, Université de Tunis El Mannar
Service de Dermatologie, CHU Habib Thameur
Unité des Troubles Héréditaires de la Kératinisation, CHU La Rabta
Institut National de Neurologie, Tunis
Service Oto-Rhino-Laryngologie, CHU La Rabta Tunis
Service de Neuropédiatrie et des Maladies Métaboliques, Assistance Publique des Hôpitaux de Paris
Introduction : Les Ichtyoses Syndromiques (IS) correspondent un groupe hétérogène de dermatoses
très rares qui se manifestent par des atteintes extra-cutanées telles que le retard mental l’épilepsie, la
surdité, la kératite, les manifestations allergiques etc., conduisant ainsi à une grande souffrance physique
et émotionnelle psychologique des patients, d’où la nécessité d’apporter une certaine prévention. Ces
affections sont également hétérogènes sur le plan génétique et mutationnel.
Bien qu’elles soient rares dans le monde, les ichtyoses syndromiques sont relativement fréquentes en
Tunisie à cause de la forte fréquence des mariages consanguins ou endogames.
Objectif : Dans un premier temps notre objectif a été de recenser les différentes formes d’ichtyose
syndromique dans la population tunisienne.
Matériel et méthodes : Nous avons collecté les données cliniques, généalogiques et moléculaires sur les
ichthyoses syndromiques identifiées en Tunisie soit à partir de données de la littérature, y compris de la
littérature grise, ainsi que les données à partir de la file active des plusieurs services de Dermatologie en
particulier du Service de Dermatologie du CHU la Rabta et du CHU Habib Thameur.
Résultats : Plusieurs formes d’ichthyoses syndromiques sont observées en Tunisie, en particulier les
formes qui s’associent aux atteintes neurologiques et/ou neurosensorielles. Parmi ces formes, certaines
correspondent à des entités cliniques bien différenciées comme le syndrome de Sjögren Larssen et
d’autres correspondent à des phénocopies de syndrome KID à savoir une ichtyose associée à une surdité.
Conclusion : Compte tenu de la forte fréquence des mariages consanguins, les ichtyoses syndromiques
en Tunisie doivent être obligatoirement confirmées par une analyse moléculaire. En effet, elles peuvent
correspondre à des phénocopies dues à la co-occurrence d’au moins deux mutations à l’état homozygote
dans deux gènes différents responsable chacun d’un phénotype distinct.
Mots clés : Génodermatoses en Tunisie, Bioinformatiques, Epidémiologie, Bio-statistiques.
P34- PRELIMINARY RESULTS OF THE ASSOCIATION OF APOLIPOPROTEIN A5 GENE WITH METABOLIC SYNDROME IN TUNISIAN
POPULATION
M. HECHMI1,§, H. DALLALI1,§, S. ELOUEJ1,§, H. JMEL1,§, Y. BEN HALIMA 1,§, M. NAGARA1, M. CHARGUI1,
A. ABID1,2, S. BAHRI3, A. BAHLOUS3, H. JAMOUSSI1,2, §, S. ABDELHAK1,4§, R. KEFI1,4,§,
Tome 92 (1-2)
73
Laboratory of Biomedical Genomics and Oncogenetics, Institut Pasteur de Tunis, BP 74, 13 Place Pasteur,
Tunis 1002, Tunisia.
2
Department of external consultation, National Institute of Nutrition and Food Technology, 11 rue Jebel
Lakhdar, Bab Saadoun, 1007 Tunis, Tunisia.
3
Central Laboratory of Medical Biology, Institut Pasteur de Tunis, BP 74, 13 Place Pasteur, Tunis 1002, Tunisia.
4
University of Tunis El Manar, 2092 El Manar I Tunis, Tunisia.
§ The MEDIGENE project, grant agreement number 279171, funded by the EC Seventh Framework Programme
theme FP7-HEALTH-2011.
1
Aim of the study: The metabolic syndrome (MetS) is a clustering of metabolic disorders such as: obesity,
insulin resistance, dyslipidemia and hypertension. MetS represents a health burden aggravated by an
increasing incidence worldwide. Numerous observations have identified Apolipoprotein A5 gene (APOA5)
as a strong modulator of plasma triglyceride (TG) levels. APOA5 has been linked to MetS or its traits in
several populations. In North Africa, only the Moroccan population was investigated. Our aim is to assess
the association between APOA5 gene variant rs651821 with the susceptibility to MetS and its components
in the Tunisian population.
Materials and Methods: A total of 168 participants (89 controls and 79 MetS patients) were randomly
recruited among women and men aged between 35 and 75 years from the Tunisian population. Individuals
were genotyped for the polymorphism rs651821, located in APOA5 gene using KASPar technology.
Statistical analyses were performed using R software.
Results: Our results show that there is no association of the variant rs651821 with metabolic syndrome
and its traits. Even after studying every single trait separately, no association was observed between the
rs651821 and obesity, HDL and triglyceride levels. In addition, our findings highlight a difference in the
distribution of genotypes according to the sex.
Conclusion: This is the first study investigating the association of APOA5 gene variant rs651821 with MetS
and its traits in Tunisia. No significant associations were found for this SNP. Additional SNPs need to be
studied on a larger Tunisian population. Further studies are needed to confirm the role of APOA5 in the
development of MetS.
Key words: Metabolic Syndrome, APOA5 Gene, rs651821, genetic association, Tunisia.
P35- ETUDE STRUCTURALE ET PHARMACOLOGIQUE D’UN NOUVEAU
PEPTIDE PURIFIE A PARTIR DU VENIN DE SCORPION
O. KHAMMESSI, H. OTHMAN, H. BEN MABROUK, N. MARRAKCHI, N. SRAIRI-ABID AND R. KHARRAT
Introduction et objectifs: Le cancer est une maladie redoutable qui implique plusieurs processus
physiologiques complexes. Au cours de la dernière décennie, plusieurs études ont montré l’implication
des intégrines, des métalloprotéases et/ou des canaux ioniques dans le développement de certains types
de cancer. Ces protéines émergent donc comme biomarqueurs potentiels et cibles pharmacologiques
appropriés pour le traitement du cancer. Les intégrines sont des récepteurs membranaires impliquées
directement dans toutes les étapes de la cancérogenèse, la réponse cellulaire à la signalisation due à
74
l’adhésion à la matrice extracellulaire. Il existe différents sous-types d’intégrines qui reconnaissent et
se lient à un motif de reconnaissance impliqué dans l’adhérence cellulaire, ses motifs agissent dans les
corrélations entre les cellules endothéliales, les cellules tumorales et la matrice extracellulaire. Dans ce
contexte, nos travaux visaient à rechercher purifier, et caractériser sur le plan structural et pharmacologiques
des molécules de venin de scorpion ciblant des récepteurs exprimés au niveau des cellules cancéreuses.
Materiels et méthodes : modélisation moléculaire ab initio, Docking moléculaire qui tient compte de la
flexibilité de la molécule, dynamique moléculaire des trajectoires et calcul des intéractions électrostatiques
des complexes.
Résultats : Nous avons purifié et caractérisé, à partir du venin de scorpion Buthus occitanus tunetanus,
un nouveau peptide, désigné KR, qui se démarque par une séquence courte réticulée par un seul pont
disulfure au lieu de trois retrouvés habituellement dans les toxines courtes. KR ne montre aucun effet
toxique in vivo ni in vitro jusqu’à des doses élevées. En revanche, il inhibe l’adhésion des cellules
tumorales aux matrices extracellulaires et ne présente aucun effet sur leur adhésion à la Lpolylysine
(matrice synthétique non spécifique) suggèrant qu ‘il exerce une activité spécifique intégrine dépendante.
L’ensemble de ces résultats montre que KR possède une importance pharmacologique prometteuse vue
l’implication de l’intégrine dans les différents processus de la tumorogenése.
Nous avons déterminé la structure de KR par modélisation moléculaire ab initio. Les résultats montrent
qu’en dépit de la présence d’un seul pont disulfure, KR présente une structure hautement flexible sans
éléments rigides de structure secondaire.
Conclusions : KR est un peptide naturel du venin de scorpion qui possède une activité antumorale.
Ce peptide pourrait représenter une structure de base pour concevoir de nouvelles alternatives pour la
thérapie ou le diagnostic de plusieurs types de cancer.
Key-words: peptide; scorpion; cancer; intégrines; modélisation moléculaire ab initio.
P36- CARACTERISATION ET MODELISATION DES MECANISMES
PATHOGENIQUES SUSCEPTIBLES DE REGULER LA MALADIE DE CROHN
S. KECHAOU-CHERIF1,2, O. SOUIAI1,2, A. BENKAHLA1,2.
1
2
Laboratoire de BioInformatique, bioMathématiques, et bioStatistique, Institut Pasteur de Tunis.
Université Tunis El Manar
Introduction et Objectifs: La susceptibilité génétique a été souvent incriminée comme étant un facteur
de risque important dans la maladie de Crohn. Plusieurs études génétiques et fonctionnelles ont identifié
de nombreux gènes et de nombreuses voies de signalisation pouvant en être la cause. Ces démarches ont
amélioré la compréhension du mécanisme physiopathologique de la maladie. Cependant, l’absence de
concordance totale chez des jumeaux monozygotes et l’observation de formes conjugales de la maladie
de Crohn (Söderholm JD et al (1999) ; Carbonnel F et al (2009)) montrent que la susceptibilité génétique
n’est pas l’unique déclencheur de la maladie. Durant la dernière décennie, l’approche de la maladie a
considérablement progressé et il a été montré que d’autres facteurs environnementaux jouent un rôle
important dans la pathogénie de cette maladie. Il a ainsi été montré que la diversité et la composition de
la flore intestinale en micro-organismes symbiotiques résidents figurent parmi les facteurs qui influent le
plus sur l’homéostasie intestinale (Knights D et al (2013)). De ce fait le microbiote intestinal joue un rôle
important dans la maladie et l’étude de son interaction avec les facteurs génétiques pourrait améliorer
notre compréhension de sa pathogénie (Gevers D et al (2014) ; Jones -Hall YL et al (2014)). L’objectif de ce
projet est d’identifier certains mécanismes impliquant des facteurs génétiques et environnementaux
Tome 92 (1-2)
75
(ex : microbiome) susceptibles d’être à l’origine et/ou de réguler l’évolution de la maladie de Crohn.
Matériels et Méthodes : Nous nous sommes intéressés aux études portant sur l’expression des gènes au
sein de la muqueuse intestinale et celles portant sur le microbiote intestinal. Nous avons extrait les gènes
et les voies de signalisation susceptibles d’être impliqués dans la maladie et allons procéder à une analyse
du métagénome intestinal.
Résultats et Conclusion : Les résultats émergeants de ces deux analyses nous serviront de plateforme pour
améliorer notre compréhension de la pathogénie de cette maladie. Nous allons présenter le protocole qui
est en train d’être mis en place ainsi que les résultats préliminaires obtenus.
Mots Clés: Maladie de Crohn, NGS, Métagénome
P-37 ASSESSMENT OF A NEXT GENERATION SEQUENCING- BASED
METHOD FOR THE DETECTION OF SINGLE-CELLED EUKARYOTES
PROTOZOA IN HUMAN FAECAL SAMPLES
A. CHIHI1,3, I. BEN ABDA1,2, O. ANDERSON LEE4, R. BEN ROMDHANE1, N. ZALLEGUA2, R.C. STENSVOLD4,
A. BOURATBINE1,2.
1
2
3
4
Research Laboratory LR11-IPT06 « Medical Parasitology, Biotechnologies et biomolecules , Pasteur Institute of
Tunis, Tunisia.
Parasitology- Mycology Laboratory. Pasteur Institute of Tunis, Tunisia.
University of Carthage, Faculty of Sciences of Bizerte
Department of Microbiology and Infection Control, Statens Serum Institut, Copenhagen, Denmark.
Background & objective: The eukaryotic community of the human gut microbiota includes a diversity of
protozoa parasites. Sensitive PCR methods have largely contributed to the detection and identification of
protozoa. However, these techniques are time-consuming and inconvenient for mixed infections. Actually, the
Next Generation Sequencing (NGS) is the best method of choice that allowing identification of various genera and
species of microorganisms in a single run. The aim of this study is to asses the contribution of NGS involving Illuminabased sequencing of eukaryotic ribosomal (18S) genes for identification of intestinal human protozoa.
Material and methods: Forty-three faecal samples, previously tested by microscopy and/or PCR, were included.
Eleven samples were microscopically positive: i) Blastocystis sp. (n=6), ii) Entamoeba (E.) hartmanni (n=5), iii)
Iodomoeba sp. (n=1). Thirty two samples were analyzed by both microscopy and PCR which 28 samples were
positive. Identified species were: i) Dientameba (D.) fragilis (n=16), ii) Endolimax nana (n=13), iii) E. coli (n=10),
iv) E. dispar (n=5), v) Giardia (n=5), vi) E. histolytica (n=1). Four samples were negative by both methods. DNAs
of all samples were submitted to NGS methods using three sets of universal eukaryotic primers targeting 18S genes.
Amplicons were subjected to Illumina sequencing. Sequences were analyzed using BION software (SSI, Denmark).
Results: In total, NGS detected protozoa in 42 out of 43 tested samples. Among protozoa tested only by
microscopy: Blastocystis sp. was identified in 5/6 positive samples (PS) and in 36/37 negative samples (NS), E.
hartmanni in 1/5 PS and in 5/38 NS and Iodomoeba sp. in the only PS. Among protozoa also analyzed by PCR: E.
coli was identified in 7/10 PS and in 1/ 31 NS and D. fragilis, Endolimax nana, E. dispar as well as E. histolytica
were detected in 2/16, 8/13, 4/5 and 1/1 of PS, respectively. As for Giardia, it was not identified in any of the 5 PS.
Subtype identification was possible by NGS revealing the predominance of Blastocystis ST3 and E.coli ST1.
Conclusion: Even if NGS missed the identification of Flagellate parasites, it represents an interesting alternative
to PCR, enabling identification of various genera, species and subtypes of protozoa in a single run.
Keywords: NGS, PCR, protozoa, gut, human.
76
P38- DEVELOPPEMENT D’UNE TECHNIQUE D’IMMUNO-SEPARATION
MAGNETIQUE POUR LE DIAGNOSTIC DE LA LEISHMANIOSE CUTANEE
I. TAYACHI 1,2, N. SAIDI 1, M. BENABID 1, I. BEN ABDA 1, I. BEN SGHAIER 1, A. BOURATBINE 1, Y. GALAÏ1
Laboratoire de Parasitologie Médicale, Biotechnologie et Biomolécules LPMBB, LR 11 IPT 06, Institut Pasteur
de Tunis, Tunisie
2
Université de Carthage, Faculté des sciences de Bizerte, Tunisie
1
Introduction : Le diagnostic de la leishmaniose cutanée (LC) repose sur la mise en évidence du parasite
au niveau des prélèvements de lésions cutanées ceci par observation microscopique de frottis de lames
colorés au MGG, la culture ou encore la PCR. Cependant, toutes ces techniques sont limitées par la faible
charge parasitaire. D’où l’objectif de ce travail, est de développer une méthode de Séparation ImmunoMagnétique (IMS) spécifique du parasite Leishmania au niveau du suc dermique afin d’améliorer la
sensibilité du diagnostic de la LC.
Matériel et Méthodes : Pour le développement de la technique IMS appliquée au parasite Leishmania, des
lapins femelles (n=2), âgées de 3 mois et de race californienne ont été infectées avec des promastigotes
métacycliques vivants L. major et ce afin de produire des IgG spécifiques anti-Leishmania. Ces dernières
ont été utilisées pour la sensibilisation de billes magnétiques marquées avec un anticorps de chèvre antiIgG de lapin (Dynabeads M280, Novex). L’optimisation a concerné les paramètres suivants : quantité
d’IgG anti-Leishmania et temps d’incubation des billes magnétiques avec les IgG. Les billes magnétiques
sensibilisées ont été appliquées à l’isolement du parasite L. major sous forme promastigote à partir de
cultures maintenues in vitro sur milieu synthétique RPMI ou encore sous forme amastigote à partir de
prélèvements de suc dermique obtenus chez des patients atteints de LC. La présence du parasite a été
vérifiée par microscopie et par PCR en temps réel ciblant l’ADN kinétoplastique.
Résultats et conclusion : La technique IMS telle qu’optimisée a permis d’isoler le parasite aussi bien sous
sa forme promastigote qu’amastigote. D’autres études sont nécessaires pour déterminer les performances
de la technique IMS dans le diagnostic de la LC.
Mots clés : Leishmania, Leishmaniose cutanée, Immuno-séparation magnétique, anticorps polyclonaux
P39- COSAVIRUS HUMAIN : PREVALENCE ET T YPAGE MOLECULAIRE
A. LAMARI, A. BEN YAHIA, H. TOUZI, Z. MEDDEB, H. TRIKI ET D. REZIG
Laboratoire de Virologie Clinique- Laboratoire de Référence Régional OMS pour la Poliomyélite et la Rougeole,
Institut Pasteur de Tunis- Tunisie
Introduction et objectifs: Le Cosavirus humain (HCoSV ) est un virus entérique, découvert grâce aux
prodigieuses avancées de la métagénomique. Il a été classé comme un nouveau genre de la famille des
Picornaviridae. Sa détection a été décrite pour la première fois au Pakistan et Afghanistan dans les selles
d’enfants atteints de paralysie flasque aiguë (PFA) non poliomyélitique ainsi que d’enfants sains de leur
entourage. Par la suite, HCoSV a été retrouvé dans dans différents pays (Etats-Unis, Australie, Chine, Inde,
Thaïlande et Brésil). Le diagnostic du HCoSV repose actuellement sur des techniques moléculaires de RTPCR. En Tunisie, deux études ont été conduites dans notre laboratoire de Virologie Clinique de l’Institut
Tome 92 (1-2)
77
Pasteur de Tunis, la première décrivant pour la première fois la propagation du HCoSV sur culture de
cellules et la deuxième rapportant pour la première fois aussi, la prévalence de ce nouveau virus dans notre pays.
Dans ce travail, nous nous sommes proposés de rechercher le HCoSV chez des patients immunocompétents
atteints de paralysie flasque aiguë (PFA), chez des contacts sains de leur entourage, ainsi que chez des
sujets immunodéprimés.
Matériel et méthodes : L’ARN viral a été extrait à partir des prélèvements de selles. La détection du HcoSV
a été faite moyennant un screening par une technique de RT- PCR nichée ciblant la région 5’NC du génome
viral. La caractérisation moléculaire du HCoSV a fait appel à une technique de RT-PCR nichée ciblant la
région VP1.
Résultats et Conclusion : La prévalence du HCoSV a été estimée pour chaque population. Différents
génotypes ont été retrouvés aussi bien chez les cas de PFA, leurs contacts ainsi que les patients
immunodéprimés. Ce travail contribue à une meilleure compréhension de la circulation et de la variabilité
de ces nouveaux virus, dont l’impact en pathologie humaine est encore mal connu.
Mots clés: Cosavirus Humain, Prévalence, Paralysie flasque aiguë, Immunodéprimés, Génotypage.
P40- APOPTOSIS OF BCG-INFECTED MACROPHAGES RELIES ON
ACTIVATION OF FOXO3 TRANSCRIPTION FACTOR: A POTENTIAL
TARGET TO IMPROVE BCG EFFICACY *
M. HAOUES1,3, A. REFAI1,3, A. MALLAVIALLE2, M.R. BARBOUCHE1, N. LAABIDI5, M. DECKERT2,4 AND M. ESSAFI 1, 3
Institut Pasteur de Tunis, LTCII, LR11IPT02, Tunis, 1002, Tunisia
INSERM, U1065, C3M, Microenvironnement, Signalisation et Cancer, F-06204, Nice, France
3
Université Tunis El Manar, Tunis, 1068, Tunisia
4
Université de Nice Sophia-Antipolis, Faculté de Médecine, Nice, France
5
Institut Pasteur de Tunis, serum and vaccines production department, Tunis, 1002,
* This work was published in Cellular Microbiology 2014 Apr 8. doi: 10.1111/cmi.12298.
1
2
Background and objectives : Alveolar macrophages are the first line of defense against tuberculosiscausing mycobacteria. Once infected, macrophages undergo apoptosis, a process considered as an important
innate defense mechanism involved in the elimination of the pathogen. Moreover, enhanced apoptosis of BCGinfected macrophages has been shown to induce stronger dendritic cell-mediated cross-priming of T cells,
leading to higher protection against Tuberculosis (TB). Uncovering host effectors underlying BCG-induced
apoptosis may then prove useful to improve BCG efficacy through priming macrophage apoptosis.
Methodology : In order to investigate the role of FOXO3 transcription factor in BCG-mediated apoptosis
of human macrophages, THP1 (TDMs) and human monocytes (MDMs)-derived macrophages were used
to assess FOXO3 activity in BCG-infected cells compared to non infected ones.
Results : We found that BCG-mediated apoptosis of human macrophages relies on FOXO3 activation.
BCG induced a significant apoptosis of TDMs and human MDMs macrophages when a high MOI was used,
as shown by annexin V/7-AAD staining. BCG-induced apoptosis was associated with dephosphorylation
of the prosurvival activated threonine kinase (Akt) and its target FOXO3. Cell fractionation and
immuno-fluorescence microscopy showed translocation of FOXO3 to the nucleus in BCG-infected cells,
concomitantly with an increase of FOXO3 transcriptional activity. Moreover, FOXO3 expression knockdown
by small interfering RNA (siRNA) partially inhibited the BCG-induced apoptosis. Finally, analysis of the
expression profile of BCG-infected macrophages, by real-time quantitative PCR (qRT-PCR), showed an
up-regulation of two pro-apoptotic targets of FOXO3, NOXA and p53 up-regulated modulator of apoptosis
78
(PUMA) that when their expression was hampered, the BCG-induced apoptosis of human MDMs was
significantly diminished.
Conclusion : Our results indicate that FOXO3 plays an important role in BCG-induced apoptosis of
human macrophages and may represent a potential target to improve vaccine efficacy through enhanced
apoptosis-mediated cross-priming of T cells.
Key words: Tuberculosis, Macrophages, BCG, Akt, Apoptosis, FOXO3
P41- EMERGENCE OF MULTI EXTENDED-SPECTRUM-BETA-LACTAMASE
PRODUCTION IN SALMONELLA ENTERICA SEROT YPE KENTUCKY AND
T YPHIMIRIUM IN TUNISIA: 2010-2014
N. AL-GALLAS, K. BELGHOUTHI, R. BEN AISSA
Laboratoire de Contrôle des eaux et denrées Alimentaires- Centre National des Salmonella, Shigella, VibrioEnteropathogénes. Institut Pasteur de Tunis
Sous le budget de projet Programmes Collaboratifs Internes - PCI09
E-mail : nazek_ [email protected]
The emergence or re-emergence of Salmonellosis infections shows that zoonoses should be considered as
emerging risks in human health, agricultural and animal breeding; and should be addressed by specific preventive
interventions. Individuals with weakened or suppressed immune systems, pregnant women, and the very
young and very old are most susceptible to infection and illness with Salmonella spp. In this present study we
retrospectively study for the first time in Tunisia the emergence trends in the isolation and susceptibilities of
Salmonella enteric serovar Kentucky and Typhimirium. This study, covering the period 2010-2013, was conducted
in the National Center of Salmonella, Shigella, Vibrio spp.-Enteropathogens- Pasteur Institut- Tunis. A total of
1258 Salmonella strains were included in this study: Salmonella Kentucky n=976 strains, and Salmonella
Typhimirium n=282 strains. The objectives of this study were to:1) detect antibiotic susceptibility patterns
against 23 antibiotics, 2) detected the Resistance to cephalosporins, due to the production of extended-spectrum
β-lactamases (ESBLs); 3) molecular detection for resistance β-lactamases (ESBLs) genes TEM, SHV, OXA and CTXM-encoding genes (blaTEM, blaSHV, blaOXA and blaCTX-M). These strains were from different regions in Tunisia
and different sources (food, human, animal, and environment). Among human isolates, S. Typhimirium was the
most common serotype, accounting for 44% (124/282) of Typhimirium isolates. For animal and food isolates, S.
Kentucky was the most predominant with 28, 55% (278/976) and 31% (302/976) respectively. The highest percentage
of isolation for studied Salmonella strains were in the capital Tunis, the Coastal regions (Sahel) and Sfax. Multidrug
resistance was seen in 152/976 (16%) isolates and 122/282(43%), all of which belonged to serotype Kentucky and
Typhimirium respectively. Among which 460/976 Kentucky strains were resistance for >1 antibiotics and 140/282
Typhimirium strains were resistance for >1 antibiotics. The highest rate of resistance were for β-Lactamine and
quinolone expressed by S. Kentucky. While S. Typhimirium expressed high resistance to β-Lactamine. Concerning
β-lactamine resistance strains: 170 strains were resistance to β-lactamine (Kentucky= 147, Typhimirium= 23) in
association with other families (quinolones, aminosides, macrolides). Eighty one S. Kentucky strains harboured
extended-spectrum β-lactamases genes: blaTEM (61/147), blaCTXMu (24/147 among which 4/24 harboured
blaCTX9 gene), blaSHV (5/147), bla OXA-1(4/147). Eleven S. Typhimirium harboured ESBL genes: blaTEM (9/23),
blaCTXMu (6/23), blaSHV (2/23). Combinations between genes were also observed. This study demonstrates the
emergence of a public health risk related to resistance to β-Lactams in Salmonella in Tunisia. The resistance trends
need to be monitored carefully.
Keywords: Salmonella, multidrug resistance, molecular identification, resistance genes ESBLs.
Tome 92 (1-2)
79
P42- ASSOCIATION BET WEEN GENETIC VARIATION OF TUNISIAN
MYCOPLASMA HOMINIS ISOLATES AND TETRACYCLINE RESISTANCE
S. BOUJEMAA, A. BEN ALLAYA, B. MLIK, B. BEN ABDELMOUMEN MARDASSI
Mycoplasmas Group, Laboratory of Molecular Microbiology, Vaccinology, and Biotechnology Development,
Institut Pasteur de Tunis, University Tunis El Manar, BP 74, 1002 Tunis Belvédère, Tunisia
Background and objectives: Mycoplasma hominis is a commensal of the human urogenital tract but is always
associated with invasive diseases such as adverse pregnancy outcomes and infertility. The tetracyclines have
always been in the forefront of antibiotic usage for genital mycoplasma infections in Tunisia. However, we
previously showed that tetracycline resistance rate in M. hominis clinical isolates in Tunisia was high (25%).
The aim of this study was to evaluate the relationship between the genetic diversity of this species and the
tetracycline resistance using a molecular typing method based on combined multi-locus sequence typing
(MLST) and multi-virulence-locus sequence typing (MVLST) analysis.
Material and methods: The MLST-MVLST assay used five housekeeping genes (uvrA, gyrB, tuf, ftsY and gap)
and five virulence genes (p120’, vaa, lmp1, lmp3, and p60). Tetracycline susceptibility was determined using
a quantitative broth microdilution technique. Those approaches were applied to PG21 reference strain and 55
M. hominis clinical isolates recovered from the genital tract of Tunisian patients with mainly infertility disorders.
Results: Our data showed that gyrB and ftsY genes were the most conserved genes while lmp1 and lmp3
were the most variable genes. Among the 55 M. hominis strains, 29 sequence types (STs: ST1 => ST29) were
identified and grouped into five clonal complexes (CC1 => CC5) and 14 singletons. ST3 and ST2 were the
predominant STs which contained 9 (16, 36 %) and 5 (9, 1%) isolates, respectively. The nonsynonymous to
synonymous substitutions ratio (dN/dS) indicated that all genes were under negative selection (dN/dS <1).
More importantly, the MLST-MVLST scheme showed a discrimination value (Simpson’s index of diversity [D])
of 0.9532. Twenty-two of the 55 M. hominis isolates (40%) were resistant to tetracycline (CMI ≥ 32 µg/ml).
Interestingly, we found a strong association between STs and tetracycline resistance. In fact, all isolates of CC3
(ST3, ST6), ST7, ST16, ST17, ST21, ST22, ST23, ST25 and ST26 were resistant to tetracycline.
Conclusion: Overall, this study highlighted the genetic heterogeneity of Mycoplasma hominis Tunisian
isolates and showed that MLST-MVLST method provided a highly discriminative typing tool for exploring the
epidemiology of Mycoplasma hominis clinical isolates in Tunisia and characterization of tetracycline-resistant
strains.
Key words: Mycoplasma hominis, MLST-MVLST scheme, ST, tetracycline resistance.
P43- AUTOMATED T YPING OF MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
USING IS6110: A STEP FORWARD TOWARDS HIGH-THROUGHPUT
ANALYSES WITH AN UNPRECEDENTED DISCRIMINATORY POWER
M.A. SKHAIRIA1, N. DEKHIL2, B. MHENNI3, AND H. MARDASSI1
1
2
Unit of Typing & Genetics of Mycobacteria, Laboratory of Molecular Microbiology, Vaccinology, and
Biotechnology Development, Institut Pasteur de Tunis.
Université Tunis El Manar, Tunis, Tunisia
80
Introduction and Objectives: Several technical hurdles and limitations have restricted the use of IS6110 RFLP,
the former gold-standard typing method for detecting tuberculosis (TB) transmission chains. This has prompted
us to conceive an alternative modality, IS6110-5’3’FP, which offers several advantages over the standard method.
Unlike IS6110 RFLP, IS6110-5’3’FP employs PCR amplification coupled to differential fluorescent labeling to
target both 5’ and 3’ IS6110 polymorphisms, and combines the advantages of automated size fractionation
on a capillary sequencer. Preliminary data showed that IS6110-5’3’FP could be further improved in terms of
discriminatory power and versatility. Here we introduced several amendments to the original IS6110-5’3’FP
protocol and compared its performance to that of 24-loci MIRU-VNTR, the current standard method for TB
transmission analyses.
Material and methods: Critical modifications in the IS6110-5’3’FP protocol involved: (i) the generation of
smaller-sized polymorphic fragments for better cloning and efficient PCR amplification, (ii) omission of the
bacterial plasmid amplification step for reduced turnaround time, (iii) the use of more stable fluorophores, (iv)
the automated elimination of background fluorescent signals, and (v) the automated conversion of fluorescent
peaks into binary code.
Results: In so doing, the turnaround time of IS6110-5’3’FP was reduced to less than 2 days. The method
detected almost all 5’ and 3’ IS6110 polymorphic fragments of any given strain in a single PCR reaction.
Strikingly, IS6110-5’3’FP demonstrated a higher discriminatory power than did the 24-loci MIRU-VNTR, and
proved stable enough to appropriately cluster high-copy-number IS6110 M. tuberculosis isolates involved in
recent transmission chains.
Conclusions: The IS6110-5’3’FP protocol outlined here was found more discriminatory than 24-loci MIRUVNTR, and will therefore be more suitable for accurate estimation of TB transmission. The method was
rendered simple enough to prompt its evaluation as a high-throughput real-time approach for the rapid
detection of TB outbreaks.
Keywords: genetic typing, IS6110, Mycobacterium tuberculosis
P44- POSITIVE ANTI-PHOSPHOLIPID ANTIBODIES DURING SEPSIS
A. ABOUDA2, 3, M. BEN AZAIZ2, J. AYACHI2,3, Z. HAJJEJ1,3, I. LABBENE1,3, E. GHAZOUANI2, M. FERJANI1, 3
Intensive care unit, Military Hospital of Tunis
Laboratory of Immunology, Military Hospital of Tunis
3
Research Laboratory LR12DN01
1
2
Introduction: The anticardiolipin antibodies (ACA) recognize cardiolipin, a major componant of the inner
membrane of mitochondria, but other anionic phospholipids: phosphatidylglycerol, phosphatidylinositol
and phosphatidylserine. They are mainly associated with antiphospholipid syndrome (APS). The ACA has
been reported in some infections. Their exact role in these cases is not completely understood. Few
studies have investigated these antibodies in sepsis.
Objective: The objective of our work is to study the evolution of ACA in sepsis and prognostic values.
Patients and methods: This prospective study was conducted in an intensive care unit over a period of 12
months. Two samples were taken for each patient at the time of diagnosis of sepsis (H0) and thereafter
on the second day of hospitalization (H48). The enzyme immunoassay, indirect-type ELISA was used for
the ACA highlighting to the two types of immunoglobulins IgM and IgG (Biosystem ®, Barcelona, Spain).
The normal value is 12 IU / ml for both isotypes. The SOFA score was calculated H0 and H48. We used
SPSS version 11.0, and the Wilcoxon test software comparison nonparametric variables. It is considered
statistically significant if p <0.05. We also used the Pearson test for studying correlations.
Results: We collected 36 septic patients. In our study, three women and one man of 36 were positive
Tome 92 (1-2)
81
including two ACA IgG and two IgM. We noted a significant increase in IgG and IgM ACA between H0 and H48
P = 0.01 and P = 0.02, respectively. We found a correlation between IgG ACA H0 to H48 and SOFA (R = 0.46).
Conclusion: ACA may significantly increase in sepsis. They can be a contributing element to the
management of septic patients. Their exact role in this disease remains to be determined. Further studies
are needed to verify these results.
P45- FIRST MOLECULAR DETECTION AND CHARACTERIZATION OF
SARCOCYSTIS SPECIES IN SLAUGHTERED CATTLE IN NORTH-WEST TUNISIA
S. AMAIRIA1, Y. AMDOUNI1, M. RIDHA RJEIBI1, M. ROUATBI1, S. AWADI 2 AND M. GHARBI 1
1
2
Laboratoire de Parasitologie, Univ. Manouba, Institution de la Recherche et de l’Enseignement Supérieur
Agricoles, École Nationale de Médecine Vétérinaire de Sidi Thabet, 2020 Sidi Thabet, Tunisia.
Regional slaughterhouse of Béja, 9000, Tunisia
Sarcocystis spp. is one of the most prevalent foodborne parasites infecting both animals and humans.
Humans can act as a definitive host of two Sarcocystis species; their intermediate hosts are cattle
(S. hominis) and pigs (S. suihominis). As definitive hosts, humans are infected by consuming raw or
undercooked cattle or pig meat containing cysts. The present study aimed to estimate for the first time,
the molecular prevalence of Sarcocystis species infecting slaughtered cattle in North-West Tunisia (Béja
governorate). DNA was extracted from 150 beef meat samples and a PCR-restriction fragment length
polymorphism was used for species identification. The overall infection prevalence by Sarcocystis spp.
was 38% (57/150). The highest overall molecular prevalence of Sarcocystis spp. was observed in Thibar
locality (12/17; 70.6±21.6%). Two species were identified, namely S. hominis (25%; 39/150) and S. cruzi
(12%; 18/150). For both species, the highest prevalence was in Thibar locality (52.9 and 17.6% for S. hominis
and S. cruzi, respectively). The molecular prevalence of S. cruzi was significantly higher in animals aged
between two and eight years (19.2%; 10/52). This is the first molecular identification of Sarcocytis species
in Tunisian cattle. Sarcocystis hominis is highly prevalent in North-West Tunisia compared to other
regions in the world. Thus public health authorities should give more importance to meat inspection in
slaughterhouses. Further studies in other region are needed to estimate the geographical distribution of
Sarcocystis in Tunisian cattle. Also, educational programmes must be established to inform the population
about the risk of consuming undercooked beef meat.
Keywords: Sarcocystis, Cattle, Meat, PCR-RFLP, Tunisia
P46- CO-INFECTION, SUPER-INFECTION AND VIRAL INTERFERENCE
BET WEEN TUNISIAN H9N2 LOW PATHOGENIC AVIAN INFLUENZA
VIRUS AND AVIAN INFECTIOUS BRONCHITIS VIRUS IN VIVO
R. AOUINI1,2, N. LAAMIRI1,2, S. SAID1,2, J. NSIRI1, K. MILED1 AND A.M. GHRAM1
1
2
University Tunis El Manar, Laboratory of Epidemiology and Veterinary Microbiology, Pasteur Institute of
Tunis, 13 Place Pasteur, 1002 Tunis- Belvedere, Tunisia.
University of Carthage, Faculty of Sciences Bizerte, 7021 Zarzouna Bizerte, Tunisia.
82
A new interaction between avian influenza virus (AIV ) and infectious bronchitis virus (IBV ) replication
interference was identified in this work using chicks by ELISA antibody, quantitative reverse transcription–
polymerase chain reaction (qRT-PCR) and histopathology. In this study chicks were infected with IBV vaccine
strain (H120) and a H9N2 LPAIV (A/CK/TUN/145/2012) simultaneously or sequentially three days apart.
Our research studied first the eventual replication interference of AIV and IBV in vivo using qualitative and
quantitative real-time reverse transcription–polymerase chain reaction (real-time qRT-PCR) to accurately detect
either AIV and IBV genomes or the number of viral copies during mixed infections. Second, we determined the
amount of IL-1 beta by ELISA and antibody of the infected chicks sera with AIV alone, IBV alone, Mixed AIV +
IBV, IBV 3days AIV and AIV 3 days IBV. Our data revealed that the second virus inoculated inhibits the growth
of the first one independently of its nature. In conclusion, co-infection of chicks with AIV and IBV affected
the replication dynamics of these viruses and affect clinical signs. These results propose that infection with
heterologous virus may result in temporary competition for cell receptors or competent cells for replication,
most likely interferon-mediated. The information obtained from these studies helps to understand the possible
interactions and outcomes of infection (disease and virus shedding) when HPAIV and IBV co-infect chicks in
the field. The knowledge obtained from the study serves the dual purpose of shedding light on the different
replication behaviours of LPAIV in early days of experiment which may be due to competition for receptor
binding with IBV, as well as the more pathogenic behaviour of LPAIV (H9N2) in chicks of Tunisia.
Key words: Avian influenza virus, Infectious bronchitis virus, Co-infection
P47- LES SALMONELLES ET LES ENTEROPATHOGENES ISOLEES A
PARTIR DE COPROCULTURES DANS LA REGION DE TUNIS DURANT
LES 3 ANNEES : 2014-2015-2016.
G. BEN GHORBEL1, N. AL-GALLAS1, N. KHADHRAOUI1, R. BEN AISSA1
1
Laboratoire de Contrôle des Eaux et Denrées Alimentaires.Centre National des Salmonella, Shigella, VibrioEnteropathogenes.Institut Pasteur de Tunis.
Objectif : Etudier la prévalence et la résistance de Salmonella et les Entéropathogènes isolées à partir de
coprocultures dans la région de Tunis durant 2014-2015-2016.
Matériels et Méthodes : Selle humain, milieux de cultures, bouillons nutritifs, Api 20 E, Antibiotiques.
Résultats : Cette étude a été effectuée durant la période de 2014 au 2016 à partir de 2823échantillons
de coprocultures dont 126 étaient positifs. La recherche des germes pathogènes met en évidence que :
parmi les souches isolées, identifiées et sérotypées nous avons trouvé 41,26% d’Escherichia Coli (52/126),
16.66% de Klebsielle (21/126), 15.07% de Salmonella (19/126), 12.69% de Citrobactere(16/126), 3.96%
d’Entérobacter cloacae(5/126), 1.58% de staphylocoques(2/126) et 0.8% Aeromenas hydrophila(1/126).
Les trois sérotypes de Salmonella les plus fréquemment identifiés sont les Salmonella Kentucky, Anatum
et Schwarzengrund. Durant ces trois années, les antibiogrammes de 55 souches d’Escherichia Coli et de
16 souches de Salmonella isolées à partir de coprocultures appartenant à des malades âgés de 2 à 28 ans
ont été réalisés afin de tester leurs résistances via 9 familles d’antibiotiques. Nous avons constaté que S.
Anatum était résistante au 7 antibiotiques suivants: S(3), TE(3), AMX(3), AMC(3), AM(2), TIC(1), C(9) ; S.
Schwarzengrund était résistante à : TE(3) ; Escherichia Coli était résistante aux : TE(15) et C(9). L’étude
s’est intéressé également aux autres germes pathogènes isolés. Klebsiella était résistante aux : l’AMX(15),
AM(12), TIC(6), TE(8), FOX(3), OFX(3) ; Citrobactere était résistante au TIC(3) ; Entérobactercloacae
était résistante aux : AMX(3), AMC(3), FOX(4), CEF(2).
Conclusion : la diversité des germes pathogènes isolés nécessite l’établissement des précautions et des
Tome 92 (1-2)
83
mesures préventives. Par ailleurs, Escherichia Coli et Salmonella Enterica sont les deux espèces les plus
fréquentes dans l’étiologie de la diarrhée. De même, l’étude des antibiogrammes a démontré que ces deux
espèces sont les plus résistantes aux deux familles : Béta lactame et Quinolones.
P48- LES RICKETTSIOSES : UN SIECLE DEJA APRES LEUR DECOUVERTE
EN TUNISIE
F. KHROUF1, S. ZOUARI1, Y. M’GHIRBI1, A. CHERIF2, A. RHIM1, L. MESSADI3 ET A. BOUATTOUR1
1
2
3
Université Tunis El Manar, IPT, LR11IPT03, Service d’entomologie médicale
Université Tunis El Manar, IRVT, Laboratoire d’Immunologie
Université de La Manouba, ENMV de Sidi Thabet, Laboratoire de Microbiologie
Introduction et Objectifs : Les Rickettsioses sont des zoonoses à transmission vectorielle largement distribuées dans
le monde. Les tiques (F. Ixodidae) parasitent les animaux et sont les vecteurs naturels de différentes espèces de
Rickettsia dont certains sont pathogènes à l’homme. En Tunisie, peu de travaux ont été accordés à l’identification des
espèces de Rickettsia infectant l’homme, les équidés et les tiques parasites du bétail. Notre objectif est d’identifier les
espèces de Rickettsia qui circulent au nord de la Tunisie chez les hôtes vertébrés et les tiques vecteurs.
Matériel et méthodes : Dans ce travail, nous avons menée une étude pendant les 4 saisons dans 5 gouvernorats du
nord pour la collecte du sang et le sérum des équidés et des vecteurs (tiques) infestant les animaux domestiques et les
analyser par IFI et par qPCR. Une étude multicentrique a été aussi réalisée afin de déterminer l’infection par Rickettsia
chez les patients suspects avoir une rickettsiose par les techniques sérologiques et moléculaires.
Résultats et conclusion : Au total 40 patients ont été analysés vis-à-vis de Rickettsia, la séroprévalence est de 53,6%
par IFI. Par qPCR, trois biopsies cutanées parmi 4 se sont révélées positives vis-à-vis de R. conorii.
L’analyse des équidés par PCR standard et QPCR a montré une infection de 1,2% (3/250) par Rickettsia. L’analyse des
équidés par immunofluorescence à montré une séroprévalence de 11,8% (19/160).
Sur les animaux domestiques, nous avons collecté 2247 tiques appartenant à 4 genres (Rhipicephalus, Boophilus,
Hyalomma, Haemaphysalis). Par qPCR, la prévalence globale de l’infection des tiques par Rickettsia est de 46%
avec une charge bactérienne moyenne de 105 Rickettsia spp/tique. Cette prévalence est variable selon les espèces de
tiques, les saisons, mais aussi le lieu de collecte. Le séquençage moléculaire, en utilisant 3 gènes cibles spécifiques de
Rickettsia (gltA, ompA, OmpB), nous a permis d’identifier R. massiliae chez Rh. turanicus, R. helvetica chez Ixodes
ricinus et R. aeschlimannii chez Hy. marginatum et Hy. excavatum. Ces résultats montrent que ces tiques ont un
rôle potentiel important dans la transmission des espèces pathogènes de Rickettsia à l’homme. Nous avons aussi
confirmé l’importance de l’infection par la fièvre boutonneuse Méditerranéenne chez les patients en Tunisie.
Mots clés : Rickettsia, Tiques, puces, qPCR, IFI.
P49- LE DIAGNOSTIC MOLECULAIRE ET CY TOLOGIQURE DE LA
TUBERCULOSE GANGLIONNAIRE EN TUNISIE
M. FLISS1, S. RAMMEH2, M. BEN MOUSSA3, M. FERJAOUI4, L. HILA1
1
2
3
4
Département de Génétique, Faculté de Médecine, Université Tunis El Manar, Tunis-Tunisie
Département d’Anatomie et de Cytologie Pathologiques, Hôpital Charles Nicole, Tunis-Tunisie
Departement de Microbiologie, hôpital militaire, Tunis-Tunisie
Département d’ORL, Hôpital Charles Nicole, Tunis-Tunisie
84
Introduction et objectives : La tuberculose, due à une contamination par des agents pathogènes du complexe
Mycobacterium tuberculosis, cause 1,3 à 1,6 million de décès chaque année dans le monde. Elle se présente sous
diverses formes: pulmonaire et extra pulmonaire. En Tunisie, les atteintes ganglionnaires représentent les localisations
extra pulmonaires de la maladie les plus fréquemment observées. L’objectif de cette étude était de, mettre en place
une PCR quantitative pour confirmer la présence de Mycobacterium permettant d’éviter la biopsie au malade et
d’avoir une meilleure qualité d’ADN moins altérés et de faire la comparaiison avec le diagnostic cytologique.
Matériel et méthodes : Notre étude a concerné une série de 41 cytopontions ganglionnaires, de patients cliniquement
suspectés de tuberculose ganglionnaire, qui ont fait l’objet d’un examen cytologique, d’une coloration à l’Auramine et
d’un examen moléculaire par la technique COBAS® TaqMan® MTB.
Le sexe feminin était prédominant avec 56%.
Résultats : La preuve cytologique a été faite chez 41 patients. La nécrose caséeuse a été observée dans 68, 3% des cas
et 37, 1% des échantillons étaient positifs à l’Auramine. Le diagnostic a été confirmé par la technique COBAS pour 45,
7% des patients et 50% des cas de nécrose caséeuse. Ces résultats sont en accord avec la littérature, confirmant ainsi
le diagnostic de la tuberculose ganglionnaire. Parmi les échantillons négatifs à l’examen direct, 33,3% étaient positifs
à la PCR, et pour les 13 positifs à l’examen direct, 69, 2% ont été confirmés par PCR.
Conclusion : La tuberculose ganglionnaire cervicale est une affection très fréquente.
La cytoponction ganglionnaire revêt un double intérêt thérapeutique et diagnostique.
En absence de résultats bactériologiques (lenteur des cultures, échantillons paucibacillaires) la PCR revêt un intérêt
diagnostic, sachant que la tuberculose ganglionnaire ne cesse d’augmenter en Tunisie. Cette étude met l’accent sur
l’intérêt de la PCR pour la confirmation du diagnostic chez des patients suspects, sur le plan anatomopathologique, de
tuberculose ganglionnaire avant de commencer un traitement anti-TB afin d’éviter une thérapie abusive.
Mots clès: Tuberculose ganglionnaire, PCR cobas taqman, Auramine, cytoponction, Mycobacterium.
P50- LEISHMANIA LEIF ANTIGEN AS AN IMMUNOTHERAPEUTICAL MOLECULE
I. BASSOUMI JAMOUSSI1, O. ZAKRAOUI1, M. BARHOUMI1, K. ESSAFI-BENKHADIR1 AND I. GUIZANI1
1
Institut Pasteur de Tunis, LR11IPT04 Laboratoire d’Epidémiologie Moléculaire et Pathologie Expérimentale
Appliquée Aux Maladies Infectieuses, Université de Tunis El Manar, Tunis, Tunisia.
Background: Leishmania, agents of leishmaniases, widespread tropical diseases, are obligate intracellular
parasites. They disrupt a multitude of cellular signals and protective mechanisms to infect and survive
within macrophages. Understanding these host-pathogen interactions brings knowledge to develop novel
strategies to control these neglected diseases. Leishmania LeIF antigen is known to be a natural Th1 type
natural adjuvant that has the ability to stimulate IL12 cytokine expression. However, the exact effect of LeIF
on human macrophages has not yet been elucidated. We showed LeIF induces resistance of J774 mice cells
to L. donovani infection. We extend here the study to investigate effect of LeIF on infection of a human
macrophage cell line by L. infantum parasites.
Methods: PMA-differentiated THP-1 cells were used in in vitro infections by L. infantum. Infection
conditions (MOI, strain, day of parasite harvest) were set to obtain optimal readout (% infected cells; mean
number of amastigotes/cell), done by light microscopy of Giemsa stained slides. Optimal LeIF amounts
that are not cytotoxic to the cells were determined. We also established the conditions of an MTT assay to
measure the parasite viability in infected cells. Cells were treated before the infection with recombinant
LeIF and/ or IFN-γ. Their effect on infection was measured on Giemsa stained slides.
Tome 92 (1-2)
85
Viability was evaluated by MTT assay. Cytokines were quantified using ELISA. Griess reagent was used to measure
Nitric Oxide (NO) generation. Immunoblotting was used to analyze LeIF treatment effect on key cellular effectors.
Results: In the infection model we established, the infection rate reached 70% with a mean of 6 intracellular
parasites. With LeiF +/- INFγ pre-treatment, infectivity of the PMA-activated THP-1 macrophages decreased to
39% and parasite load to a mean 2/cell, thus inferring that LeIF conferred to these cells resistance to Leishmania
infantum infection (80% parasitic index inhibition). It also induced secretion of TNF,α a proinflammatory
cytokine. NO measures are ongoing. Preliminary analysis highlighted activation of AKT on Ser 473 (but not Thr
308) and ERK1/2 kinase in exposed cells before the infection.
Conclusion: The study supports LeIF as a potential therapeutical molecule.
Financial support : Institut Pasteur PTR (ID: 426) & MESRST- Tunisia (LR11IPT04).
P51- PRODUCTION D’UN ANTIGENE DE TOXOPLASMA GONDII POUR
LE DOSAGE DE L’IFN-Γ
M.WESLATI2, R. BEN ABDALLAH1,2, O. SOUISSI1, K. AOUN1,2, A. BOURATBINE1,2
1
2
Laboratoire de Mycologie-Parasitologie, Institut Pasteur de Tunis
Laboratoire de Parasitoses Médicales, Biotechnologie et Biomolécules, Institut Pasteur de Tunis
Introduction et objectif : L’interféron-γ (IFN-γ) est une cytokine qui intervient lors de la réponse cellulaire
type Th1 au cours de l’infection par Toxoplasma gondii (T.gondii) par suite sa mesure permet d’évaluer
l’exposition au parasite. Ce dosage nécessite d’abord une stimulation des Lymphocytes T (LCT) par l’antigène
toxoplasmique. L’objectif de notre travail est la production d’un antigène de T.gondii pour la stimulation des
LCT en vue d’un dosage ultérieur de l’IFN-γ.
Matériel et méthodes : La souche parasitaire de T.gondii utilisée dans notre travail est la souche Toxo RH de
concentration 14x106 parasites/ml déjà conservée et congelée à -80°C dans notre laboratoire. Les souris utilisées
sont des souris swiss femelles de poids entre 30 et 35g élevées à l’animalerie de l’IPT. Après décongélation de
la souche, l’inoculation des tachyzoїtes a été faite par voie intrapéritoniale à raison de 0,1ml par souris. Après
3 ré-inoculations, afin de relancer la souche, les tachyzoїtes ont été recueillis à partir d’ascite de souris. Ces
derniers ont été lavés par l’eau physiologiques à 9‰ et lysés respectivement par une lyse chimique, une lyse
thermique par 4 cycles de congélation/décongélation et une lyse mécanique par 4 sonications pendant 20s
chacune à 70 watt. Cette suspension, représentant l’antigène total, a été dosée par la méthode de Bradford en
utilisant une gamme étalon d’un standard optimal « le sérum albumin » (BSA:1mg/ml): 0; 1,5 ; 3 ; 6 et 12 µg/ml.
Résultats : Les valeurs de densité optique obtenues à partir de la gamme étalon ont permis de tracer une droite
linéaire d’équation « y= 0,0066X + 0,1116 ». Ceci nous a permis d’obtenir une concentration d’antigène égale
à 466 µg/ml. Cette suspension a été diluée aux différentes concentrations 3 ; 6 ; 9 et 12 µg/ml qui ont été
conservées à -20°C.
Conclusion : Ces différentes concentrations d’antigène seront utilisées pour une stimulation ultérieure de LCT
en vue d’un dosage de l’IFN-γ.
Mots clés : Toxoplasmagondii, antigène, souris
P52- PHENOTYPIC STUDY OF MULTIDRUG RESISTANCE PATHOGENIC VIBRIO
SPP ISOLATED FROM AQUATIC ENVIRONMENT IN TUNISIA 2005-2014
N. KHADRAOUI1, N. AL-GALLAS1, G. BEN GHORBEL1 AND R. BEN AISSA1
86
1
Laboratoire de Contrôle des Eaux et Denrées Alimentaires -Centre National des Salmonella, Shigella, VibrioEnteropathogenes –IPT
Introduction: Vibrios are considered as one of the environment contaminant in aquatic environment
especially in developing countries around the world.
Objective: In Tunisia, a serious pollution in marine food were highly remarkable. In this study we were
interested in assessing the prevalence of Vibrio spp isolated during 9 –years (2005-2014) , testing their
antibiotic resistance and identifying phenotypically the isolates frequently founded in Tunisian coasts
particularly in Cap Farine Bizerte.
Materials and Methods : One hundred and thirty five Vibrio spp strains were isolated from wastewater,
patients and aquatic environment during 9 years and were tested for their antibiotic resistance. Also,86
isolates were taken by the National Institute of Science and Technology ( INSTM SALAMMBO ) from two
different species of fish (bream+wolf ) in Bizerte Cap Farina during the period 25/09/2012 to 30/10/2012
and were sent to our lab for a phenotypic identification .
Results: The agent that causes a high prevalence was identified as Vibrio alginolyticus 38.57% (52/135)
followed by Vibrio cholerae non-O1and non-O139 31.11% (42/135).The year 2012 marked the highest
levels of contamination in the aquatic environnement particularly in fish. Among the 86 isolates taken from
two different species of fish,65.12% (56 /86) were identified as Vibrio spp. The high prevalence serogroups
were: V.alginolyticus 79% (44/56), Vibrio vulnificus 18% (10/56). Among the 135 Vibrio strains, 42.22 %
(57/135) and 22.22 %( 30/135) of isolates were resistant to 3 and 4 antibiotics, respectively. Only 9.63%
(13/135) of the isolates were resistant to more than 5 antibiotics. High percent of resistance was to
β-Lactamine family.
Conclusion: The occurrence of V. cholerae isolates in the aquatic environment is warrant for a risk of
human infection in the future. The emergence of antimicrobial resistance requires national surveillance
that aims to ensure an effective treatment of Vibrio infections.
Keywords : Vibrio spp , Tunisia ,Aquatic environment, Phenotyping , Antimicrobial Resistance.
P53- PROFIL EPIDEMIOLOGIQUE ET MYCOLOGIQUE DES DERMATOMYCOSES
CHEZ LES DIABETIQUES
Y. BEN MUSTAPHA1, M. BOUCHEKOUA1, N. AL-GALLAS2 ET S. KHALED1
1
2
Laboratoire de Parasitologie-Mycologie de l’hôpital Charles Nicolle
Laboratoire de Contrôle des Eaux et Denrées Alimentaires, Centre National des Salmonella, Shigella, VibrioEnteropathogenes, Institut Pasteur de Tunis
Introduction : Le diabète est une maladie chronique qui constitue un terrain vulnérable aux infections
dont les dermatomycoses. Il s’agit d’atteintes de la peau et des phanères causées par trois classes de
champignons microscopiques: dermatophytes, levures et moisissures.
Objectif : L’objectif de cette étude était d’étudier le profil épidémiologique et mycologique des
dermatomycoses chez des patients diabétiques consultants au Laboratoire de Parasitologie- Mycologie à
l’hôpital Charles Nicolle de Tunis sur une période de 3 ans et 3 mois allant du 1er Janvier 2011 au 31 Mars 2014.
Matériel et Méthodes : Pour cela, nous avons réalisé une étude transversale portant sur des prélèvements
mycologiques effectuées chez 406 diabétiques. Le diagnostic mycologique s’est déroulé en 4 étapes :
prélèvement, examen direct, culture et identification.
Tome 92 (1-2)
87
Résultats : L’étiologie fongique a été confirmée pour 326 patients (80,3%). Leur sex ratio était de 0,88 et leur
moyenne d’âge était de 57 ans, avec une association statistiquement significative des dermatomycoses avec un
âge supérieur à 40 ans. A partir des 326 patients, ont été colligés 523 prélèvements positifs: ils concernaient les
ongles dans 323 des cas (61,8%), la peau dans 199 des cas (38%) et les cheveux dans un seul cas (0,2%). Les
mycoses des pieds représentées par les onyxis des pieds, les intertrigos inter-orteils et les atteintes plantaires
ont été les plus fréquentes. La survenue des onychomycoses des pieds a été statistiquement associée avec le
diabète type II et une ancienneté de la maladie de plus de 15 ans. Concernant les onychomycoses au niveau des
pieds, ce sont essentiellement les dermatophytes qui ont été isolés avec prédominance de T.rubrum (90,8%),
alors que les onyxis des mains étaient d’origine candidosique.
Conclusion : Les dermatomycoses peuvent entrainer des complications graves chez les sujets diabétiques.
Pour cela, le diagnostic mycologique s’avère nécessaire devant toute suspicion clinique pour confirmer le
diagnostic et guider la conduite thérapeutique.
Mots-clés : Dermatomycoses - Diabète – Onychomycoses- Intertrigos
P54- DIAGNOSTIC MOLECULAIRE DE LA LEISHMANIOSE CUTANEE
ZOONOTIQUE CHEZ UN RONGEUR RESERVOIR EN TUNISIE :
MERIONES SHAWI
S. CHAABANE, W. GHAWAR, B. MEJRI, H. TRABELSI, K. JAOUADI, S. SALEM, R. YAZIDI, J. BETTAIEB, A. BEN SALAH
Service d’épidémiologie médicale, Laboratoire de transmission, contrôle et immunobiologie des infections
La leishmaniose cutanée zoonotique due à Leishmania major est un problème de santé publique en
Tunisie. Elle est endémique au Centre et au Sud du pays. Meriones shawi est l’un des principaux hôtes
réservoirs décrits pour cette maladie. Le présent travail a pour objectif d’estimer la prévalence d’infection
leishmanienne chez cette espèce de rongeur par la méthode moléculaire d’ITS1-PCR-RFLP sur les broyats
d’oreilles pour la détection et l’identification des parasites Leishmania.
Le taux d’infection leishmanienne était de l’ordre de (28/167). Ceci coïncide avec le résultat précédemment
décrit pour cette espèce de rongeurs en utilisant la méthode d’examen direct. Par contre, il est plus
élevé que le résultat déterminé par la culture parasitaire et plus faible que le résultat déterminé par la
technique sérologique IFI. L’identification d’espèce par analyse RFLP a montré que les rongeurs infectés
sont porteurs de L. major ce qui confirme le rôle de M. shawi en tant que réservoir des parasites L. major.
Les résultats de ce travail démontrent l’intérêt d’utiliser les méthodes moléculaires dans le diagnostic de
la leishmaniose chez les rongeurs réservoirs.
Mots-clés: Leishmania major, Meriones shawi, ITS1-PCR-RFLP.
P55- CHRONOAMPEROMETRIC DETECTION OF INFLUENZA VIRUS
T YPE A USING NANOPARTICLES
M. SAYHI1, K. BELGACEM1, M. ARBI1, Y. TEPELI2, O. OUERGUI1, J. NSIRI1, A.. GHRAM1, U. ANIK2 & M.F. DIOUANI1
1
2
Laboratory of Epidemiology and Veterinary Microbiology, Pasteur Institute of Tunis, Tunis, Tunisia
Muğla Sıtkı Koçman University, Faculty of Science, Chemistry Department, Kotekli/Mugla, Turkey.
88
Influenza is a viral infectious disease, which mainly affects the respiratory tract. It is considered as a source
of many health problems and enormous socioeconomic disruptions because of the very high rates of
morbidity and mortality. Early identification of influenza virus remains the most effective way to monitor
the emergence of pathogenic strains to limit its spread. Hence, the need to develop sensitive, easy and
rapid, detection tools of the virus is of a paramount importance. Development of metallic nanoparticlesbased biosensors can meet such requirements. Here, we propose the capture and detection of the virus
through interactions, on the surfaces of magnetic (MNP) and gold nanoparticles (AuNP), between viral
antigens (M2 proteins and hemagglutinin) and biomolecules (Anti-M2 antibody and fetuin A), respectively.
First, magnetic nanoparticles were synthesized and then sensitized by an influenza virus type A specific
Anti-M2 antibody to form the MNP-Influenza virus complex. This latter was later fished by the application of
a magnetic field. The gold nanoparticles, synthesized and functionalized with fetuin A, captured the MNPInfluenza virus complex through the fetuin A-hemagglutinin interaction. The MNP-Influenza virus-AuNP
formed complex was immobilized onto the surface of a screen printed carbon electrode “SPCE”. The virus
detection was then assessed by the AuNP generated current using chronoamperometry. AuNPs amplify
by its catalytic activity the hydrogen ions reduction in acidic medium after application of an appropriate
potential and the generated current is considered like the analytical signal that is proportional to the virus
titer. This miniaturized, rapid and sensitive biosensor can detect all strains of influenza virus type A.
Keywords: Influenza, Biosensors, Nanoparticles, Chronoamperometry.
P56- PSAMMOMYS OBESUS: RESERVOIR HOST IN EPIDEMIOLOGY
OF ZOONOTIC CUTANEOUS LEISHMANIASIS IN TUNISIA, AND THE
POTENTIAL ROLE OF PSAMMOMYS VEXILLARIS
S. BEN OTHMAN1, W. GHAWAR2, J. CHEMKHI2, F. ROSER3, S. BEN ABDERRAZAK1
1
2
3
Laboratory of Medical Parasitology Biotechnology and Biomolecules. Pasteur Institute of Tunis. Tunisia
Laboratory of Medical Epidemiology. Pasteur Institute of Tunis. Tunisia
Laboratory of Parasitology, Faculty of Pharmacy, University of Barcelona. Spain
E-mail [email protected]:
Cutaneous leishmaniasis (CL) represents an important public health problem in Tunisia, we distinguish:
chronic cutaneous leishmaniasis (CCL) due to Leishmania (L.) killicki, sporadic cutaneous form (SCL)
caused by L. infantum and the predominant zoonotic cutaneous leishmanaisis (ZCL) due to L. major which
represents a major health problem with a large spectrum of clinical manifestations. Zoonotic cutaneous
leishmanaisis reservoirs are rodents of the Psammomy sp (P.) and Meriones sp.
Psammomys sp. has long been represented only by P.obesus specie, until confirmation in our laboratory of
the existence of a second specie P.vexillaris. These two species having long been confused, the existence of
their two different evolutionary units raises the question of the role that each species plays in leishmaniasis
epidemiology. Due to the unknown role of this mammal in epidemiology of Leishmania, the aim of this
research was to determine the potential role of P.vexillaris as reservoir compared to that of P. obesus. In
the present work, we investigated the infection of the reservoir P. obesus by the parasite based on clinical
examination and molecular tests and the potential role of P. vexillaris as host of Leishmania sp. This study
demonstrated that asymptomatic specimens are most susceptible to be reservoir of Leishmania sp.
Keywords: Leishmania sp, Psammomys sp, reservoir host, clinical examination, molecular analysis.
Tome 92 (1-2)
89
P57- FIRST OBSERVATIONS ON DINOPHYSIS (TOXIC MICRO-ORGANISMS)
LIFE CYCLE STAGES AND CELL DEFORMATIONS IN TUNISIAN COASTAL
WATERS (SW MEDITERRANEAN SEA)
A. AISSAOUI1,2, B. REGUERA3, Z. ARMI1, B. BEJAOUI, O.K. BEN HASSINE2, H. MISSAOUI1 AND S. TURKI1.
1
2
3
National Institute of Marine science and Technology Salammbô, 28 rue 2 mars 1934, 2025 Salammbô, Tunisia.
Research Unit of Biology, Ecology and Parasitology of Aquatic Organism, Faculty of Sciences of Tunis,
University Tunis El Manar, University campus 2092, Tunisia.
Spanish Institute of Oceanography (IEO), Oceanographic Centre of Vigo, Subida a Radio Faro 50, Vigo 36390, Spain
Never before cited in Dinophysis studies, deformations in Dinophysis species (Dinoflagellates, phytoplankton)
are reported throughout their cellular division phases (cytokinesis, and sulcal list regeneration) during five
in situ cell-cycle studies in Northern Tunisia. The Punic harbors of Carthage are composed by two shallow and
semi-enclosed basins, with limited water exchange with the adjacent Bay of Tunis. They are considered to be
eutrophic due to increased nutrient loading caused by a rapidly expanding human population in this region
since the 1990s. Two types of deformation were observed in the main toxic species in the region, D. acuminata
and D. sacculus: invaginations in the ventral and dorsal margin and protuberances at the base of the left sulcal
list. Neither viruses, nor bacteria were detected in Syber green-stained cells. In situ division rate (µ) estimates
varied among seasons and stations for each species. D. acuminata exhibited moderate (0.22 day-1) to high
(0.68 day-1) µ rates which were however very low (0.02-0.17 day-1) for D. sacculus in the autumn and moderate
(0.21 - 0.35 day-1) in late spring respectively. Invaginations and protuberances have been observed at the
dorsal and ventral borders of recently divided and fully developed cells of Dinophysis species recorded for
the first time in the world’s oceans and seas. Further prospective molecular and genetic studies and staining
with specific fluorescent strains may hopefully explain these Dinophysis cell deformations during their in situ
division.
Keywords: Toxic Dinophysis species, Punic harbors of Carthage, cell deformations, in situ division rate.
P58- IN SILICO SEQUENCE AND STRUCTURE ANALYSIS FOR NANOBODY
BINDERS: CRUCIAL RESIDUES AND SPECIFIC PATTERN REVEALS
SPECIFICIT Y AND NEUTRALISATION CAPACIT Y AGAINST T WO ‘AAH’
TOXIN GROUP.
AYOUB KSOURI AND BALKISS BOUHAOUALA-ZAHAR
Reaserch departement, Laboratory venoms and therapeutic molecules engineering group antibodies/
Bioinformatics , Institut Pasteur of Tunis, 13 Place Pasteur, BP74 / 1002/ Tunis, Belvedere, Tunisia
E-mail : [email protected], [email protected]
Background and aim: Scorpion envenoming are a serious public health problem in many underdeveloped tropical
and subtropical countries. Toxicity of the scorpion venoms is essentially due to the presence of small toxins (7 kDa).
Although, Several studies shows the hight performance efficiency of Nanobodies envenoming treatment, due to
their small size, robustness, stability and excellent manufacturing in yeast and bacteria. In this regard, the main aim
of this study is to perform an integrative analysis to address fundamental questions on the relationship between
available pharmacological properties and nanobody amino acid sequences data.
90
Methods: Different in silico analysis approachs were followed, basically sequence and structural analysis
methods
Results: The most appropriate multiple sequence alignment were selected after a comparative ‘MSA’
methods study, this part of work were considred as a capital and basic step. Clustering analysis is an
essential key step to elucidate the biological behavior of nanobodies according to their amino acids
sequences. While, a biologically significant clusters were found out then treated separately. Therefore,
patterns and key residue amino acids (in CDR1 and CDR3) were deduced specifically against each group
of toxin. A single nanobody sequence with highest neutralisation capacity were selected from Each cluster,
Structures were modelled using in silico methods. Folding, connecting patches and hydrophobic pockets,
were investigated in the surface structures with some conserved biochemical features. These specific
topologies were compared thereafter and divergences between the two sets of sequences To give more
insights into structure-function relationships, the modelled molecules were docked with their specifics
antigen (AahI or AahII toxin). The outputs of different approach steps were checked out and compared
between each others to find out by the final way; a pattern common between the two set nanobodies in
complementarity determining regions, a specific pattern against each toxin group, and crucial residues
making the difference in term of neutralisation capacity and affinity.
Conclusion: particular residues and crucial motifs observed may be attributed to the proximate paratope
responsible of the neutralization capacity. Such crucial elements as well as motifs will be confirmed
subsequently, using design of experimental engineering (e.g. Alanine scanning) or other molecular
approach.
Keywords: In Silico, Nanobody, ‘Aah’ toxin, Patterns, Crucial residues.
P59- HOW TO SPOT ILLICIT DRUG CONSUMPTION IN THE GREATER
TUNIS AREA BY ANALYZING WASTEWATER? UTILIT Y IN FORENSIC
EPIDEMIOLOGY.
B. MOSLAH1,2,3, E. HAPESHİ4, H. NAOUALİ1, A. JRAD1, D. FATTA-KASSİNOS4, A. HEDHİLİ2,3
1
2
3
4
Tunis International Center for Environmental Technologies CITET, 1080 Tunis, Tunisia
Faculty of pharmacy, 5000 Monastir, Tunisia
Department of Toxicology, Laboratory of Environment and Toxicology LR12SP07, Urgent Medical Assistance
Center (CAMU), 1089 Tunis
Department of Civil and Environmental Engineering and Nireas-International Water Research Center,
University of Cyprus, Nicosia, Cyprus
The application of an optimized multi-residue method for the simultaneous quantification and confirmation of illicit
drugs has been investigated in influent and effluent wastewater samples from seven wastewater treatment plants
(WWTPs) in north-eastern Tunisia. Analysis was performed through ultra performance liquid chromatography
tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). Quantification ranges were found to be 25_450 ng/L for cocaine and
its metabolite in influent samples. Cocaine consumption was back-calculated from the measured daily loads of its
major metabolite benzoylecgonine (BZE) and The city linked to WWTP1 (NE1) presents the highest consumption
of cocaine 600mg/day/1000 inhabitants.
Mots clès: Cocaine · Deuterated internal standards · Multi residue method · Illicit drugs · Tunisia · Wastewater
Tome 92 (1-2)
91
P60- IMPLICATION OF VERY LATE ACTIVATION ANTIGEN-4 ( VLA4) AND
CD36 ON HEMOLY TIC STATUS AND CLINICAL VARIABILIT Y AMONG
SICKLE CELL PATIENTS.
M. DRIDI1, M. KALAI2, L. CHAOUCH, I. MOUMNI, H. OURAGINI, I. DARRAJI, I. BOUDRIGUA, D. CHAOUACHI,
F. MELLOULI, M. BJAOUI, S. ABBES1.
1,2
Université de Tunis El Manar, Institut Pasteur de Tunis, Laboratoire d’Hématologie Moléculaire et
Cellulaire,Tunis, Tunisie.
Aims and background: Adhesion of sickle red blood cells (RBCs) to the endothelium could obstruct
blood flow and facilitate vasoocclusion occurrence. Several mechanisms for increased adherence have
been postulated and the well-studied are CD36 and VLA4 which encoded by ITGA4. Herein, we sought
to determine whether one polymorphism of CD36 namely: rs1984112 and 3 exons of ITGA4 (4, 5 and 6)
are implicated in hemolytic status and clinical events among sickle cell disease (SCD) Tunisian patients.
Material and methods: Our study involved 99 unrelated Tunisian subjects (63SS and 36Sβ). All SCD patients
are children (less than 16 years old). The rs1984112 and the ITGA4’s exons 4, 5 and 6 were analyzed for all
subjects by PCR/sequencing. The association of each genotype found with both clinical complications and
hemolytic status was performed using t-test. Clinical events studied included vaso-occlusive crisis ( VOC),
osteonecrosis, stroke, frequent infection, priapism and acute syndrome.
Results: Our findings show that rs1984112_G allele at CD36 gene revealed to be associated with a higher levels
of reticulocyte count (p<0.01). No association between rs1984112_G allele and the clinical severity of SCD
were found. Mutational screening of exon 4, 5 and 6 of ITGA4 gene revealed absence of mutated variant.
Conclusion: Our results are similar to those found in portuguese population which reported the role of
rs1984112_G in increasing reticulocyte level among SCD patients.
Key words: SCD, CD36, VLA4, reticulocytes.
P61- PURIFICATION ET CARACTERISATION DE NOUVELLES TOXINES DU
VENIN DE SCORPION BUTHUS OCCITANUS TUNETANUS ACTIVES SUR LES
CANAUX POTASSIUM
R. EL FESSI, R. KHARRAT
Laboratoire des venins et Molécules Thérapeutiques, Institut Pasteur de Tunis, 13 place Pasteur, BP-74, 1002, Tunis, Tunisie.
Introduction et objectifs : Les canaux potassium sont les plus répondus à travers l’organisme et les plus
diversifiés. Outre leur importance dans différents processus physiologiques, le moindre dysfonctionnement
de ces canaux entraine des pathologies sévères d’où un besoin aigu d’identifier des modulateurs de ces
canaux. les toxines de scorpion hautement spécifique pour ces types de canaux peuvent être des outils
de choix pour mieux comprendre le mode de leur fonctionnement et aussi de pouvoir les utiliser comme
agents thérapeutiques spécifiques.
Matériel et méthodes : Biochimiques: Purification, Spectrométrie de masse, Séquençage, Synthèse chimique.
Pharmacologiques: Toxicité, Electrophysiologique, Immunologiques. Etudes structurales: Modélisation
moléculaire, Docking moléculaire.
92
Résultats et Conclusion : Trois molécules provenant du venin de scorpion Buthus occitanus tunetanus ont
été purifiées, séquencées, et caractérisées sur le plan structural, pharmacologique et électrophysiologique.
La première toxine désigée Kbot21 appartient à la famille α-KTx19 alors que la deuxième toxines Kbot55
possède une séquence très différente des toxines déjà identifiées, elle est classée comme étant le premier
membre de la sous-famille α-KTx31. Des tests électrophysiologiques en voltage clamp ont montré qu’ils
s’agissent de deux inhibiteurs puissants de plusieurs sous-types des canaux Kv. La troisième toxine Kbot3
de 38 acides aminés réticulée par 3 ponts disulfures a été séquencée puis synthétisée par voie chimique
pour entreprendre des études pharmacologiques, structurales et de relation structure-fonction. Kbot3
dispose d’une activité inhibitrice de la prolifération des lymphocytes par la PHA et la sécrétion de certaines
cytokines. Sa cible n’est pas encore identifiée. L’étude des relations structure-fonction a permis d’identifier
les éléments structuraux responsables de la haute spécificité de ces trois toxines vis à vis des canaux Kv.
Mots clés : Les toxines de scorpion, les canaux KV, la sous-famille α-KTx31, pont disulfures, des agents thérapeutiques.
P62- ACTIVITE ANTIMICROBIENNE, DEPISTAGE DES GENES CODANT
LA PRODUCTION DES ENTEROCINES ET EVALUATION DU POTENTIEL
BIOTECHNOLOGIQUE D’ENTEROCOQUES BACTERIOCINOGENES ISOLES
DE DIFFERENTES SOURCES EN TUNISIE
I. JAOUANI1,2, M.S. ABBASSI1, S. RIBEIRO3, L. MESSADI4, C. DA SILVA3
Laboratoire de recherche en bactériologie, Institut de la Recherche Vétérinaire de Tunisie (IRVT).
Faculté des Sciences de Bizerte, Tunisie.
3
Laboratoire de microbiologie alimentaire, université des Açores, Portugal.
4
Service de microbiologie, Ecole Nationale de Médecine Vétérinaire de Sidi Thabet, Tunisie.
1
2
Introduction et objectifs : Les entérocoques sont des bactéries lactiques connus par leur capacité
d’inhiber le développement de bactéries pathogènes. L’objectif de ce travail est le criblage de l’activité
antimicrobienne de souches d’entérocoques, la détection des gènes codant la production des enterocines
et l’évaluation des propriétés technologiques pour leurs utilisations potentielles comme démarreur /
complément de cultures dans les aliments.
Matériel et méthodes : Cinquante-cinq souches d’entérocoques isolées de différentes sources (matières
fécales de volailles, de bovins et d’ovins, du lait cru, du fromage ricotta et de l’eau) en Tunisie ont été
criblées pour leur activité antimicrobienne. Cette dernière a été observée contre différents microorganismes pathogènes, tels que Listeria monocytogenes, Listeria innocua, Listeria ivanovii, Escherichia
coli, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Salmonella Enteritidis et Paenibacillus larvae.
Résultats : L’activité inhibitrice a été complètement perdue après l’ajout de la protéinase K, ce qui révèle
la nature protéique de la substance antimicrobienne. Les gènes codants les bactériocines entA, entB,
entP, entQ, entAS48, entL50A/B et bac31 ont été recherchés par PCR. Parmi les cinquante-cinq souches
d’entérocoques bactériocinogènes, vingt-deux souches n’abritent pas les gènes codant pour des facteurs
de virulence, étaient sensibles aux antibiotiques à intérêt clinique tels que la vancomycine, et se sont
révélées négatifs pour l’hémolyse, la production de l’histamine, l’activité de la gélatinase et l’activité de
DNase. Ces 22 souches ont été évaluées pour certaines propriétés technologiques, démontrant une faible
capacité d’acidification du lait, une faible activité protéolytique, une haute activité peptidolytique et la
production de diacétyle dans le lait.
Conclusion : Tenant compte de ses caractéristiques, ses souches pourraient être appliquées dans la
Tome 92 (1-2)
93
conservation des aliments (inhibition des bactéries pathogènes à l’Homme), dont certaines ont également
montré un bon potentiel biotechnologique leur permettant d’être utilisées comme démarreur ou
complément de cultures dans la fermentation et la production de fromage.
Mots clés : Entérocoques bactériocinogènes, Entérocines.
P63- DEVELOPMENT OF A VECTORED VACCINE AGAINST HEPATITIS
E VIRUS: PRODUCTION, PURIFICATION AND EVALUATION OF THE
IMMUNOGENICIT Y OF THE VACCINE
K. TRABELSI1, C. BEN TALEB 1, R. DHIFALLI1, A. KAMEN2 & H. KALLEL1
1
2
Laboratory of Molecular Microbiology, Vaccinology and Biotechnology Development, Viral Vaccines Research
& Development Unit. Institut Pasteur de Tunis. 13, place Pasteur. BP.74 1002 Tunis. Tunisia
Department of Bioengineering. McGill University 817 Sherbrooke St. West Macdonald Engineering Building,
Room 387. Montreal. Canada
Hepatitis E virus (HEV ) is now established as an emerging enteric viral hepatitis, and is considered as a
worldwide public health problem. It is the first cause of acute viral hepatitis in the world with an estimated
20 million infections every year, with 56 000 deaths and 3000 stillbirths. The disease is recognized by WHO
as a public health concern in many countries ( WHO report, 2016). Hepatitis E virus (HEV ) is a small,
non-enveloped, single-stranded, positive-sense RNA virus. The genome size is approximately 7.2 kb, and
contains three overlapping open reading frames (ORFs). ORF2 encoding the viral capsid protein, is highly
immunogenic, producing long lasting neutralizing antibodies. This antigen has been used for all vaccine
studies so far. In this work, we suggest to develop a novel vaccine against hepatitis E infection using
adeno-associated virus (AAV ) as a vector containing the gene of the truncated capsid protein of HEV (112
aa -660 aa), Sf9 cells were infected by recombinant baculoviruses (BacRep, BacCap or BacCap/Rep and
BacITRHEVORF2). To improve rAAV 2 and 6 productions in Sf9 insect cells, we optimized viral production
in Erlenmeyer flask using the experimental design method. We analyzed the effects of the following
factors: initial cell density, time of infection, temperature and Multiplicity of infection (MOI). The rAAVs
were purified by chromatographic methods. Collected fractions were analyzed by qPCR to determine rAAV
titer; fractions were also analyzed by SDS-PAGE. The vaccine will be delivered via the intramuscular route.
For this purpose, different groups of Balb/c mice were immunized according to different protocols. We
had particularly studied the effect of the injected dose, rAAV serotype and the use of adjuvant.
We determined optimal production conditions for all the serotypes of rAAV2 and 6. Each harvest of the
different serotypes of AAV was purified by affinity chromatography. AVB Sepharose column had resulted
in an overall yield varying between 67% to 100%, depending on the serotype. The obtained results showed
that the rAAV6 gave better immune response compared to rAAV2. After administration of rAAV, both nonadjuvated and adjuvanted vaccines induced high anti-HEVORF2IgG titers. The adjuvanted rAAV induces
a better immune response than rAAV alone. The study of the distribution of rAAV showed its presence in
the target organs (heart, muscles, lungs, central nervous system) and the highest amount of rAAV2 in the
muscle. Besides the humoral response, currently we are studying the cellular response in immunized mice.
Key words: Hepatitis E, Adeno-associated virus, Purification, immunogenicity, vectored vaccine
94
P64- CARACTERISATION DE SOUCHES D’ESCHERICHIA COLI
MULTIRESISTANTES AUX ANTIBIOTIQUES D’ORIGINE ANIMALE
H. KILANI1,3, M.S. ABBASSI1,3, R. DHIFALLI1, S. FERJANI3, M. SAIDANI2,3, R. MANSOURI1,4, N. BEN
CHEHIDA1, I. BOUTIBA-BEN BOUBAKER2,3
1
2
3
4
Université de Tunis El Manar, Laboratoire de recherche de bactériologie, Institut de la Recherche Vétérinaire de Tunisie,
Laboratoire de Microbiologie de l’hôpital Charles Nicolle de Tunis,
Laboratoire de Recherche ‘’Résistance aux Antimicrobiens’’ Faculté de Médecine de Tunis-Université
deTunis El Manar,
FAO, sub-regional office for north Africa, rue du Lac Winnipeg, 1053 les Berges du lac1-Tunis, Tunisie
Introduction et objectifs : La flore intestinale des animaux et les produits alimentaires d’origine animale
peuvent constituer un réservoir de bactéries multirésistantes aux antibiotiques capables d’infecter ou de
coloniser l’Homme via la chaine alimentaire. Les objectifs de notre étude étaient d’étudier de la sensibilité
aux antibiotiques d’intérêt clinique chez une collection d’E. coli d’origine animale, d’identifier les groupes
phylogénétiques, et de détecter les intégrons et les gènes de résistance aux tétracyclines et aux sulfamides.
Matériel et méthodes : Cette étude a concernée 107 isolats d’E. coli issus d’écouvillons buccaux, cloacaux,
trachéaux, sanguin, fécaux de différentes espèces animales malades (souffrant d’une diarrhée) et sains, et 9
souches isolées à partir de viandes de volailles. L’identification des isolats d’E. coli a été basée sur les caractères
culturaux, morphologiques et biochimiques. La sensibilité aux antibiotiques a été réalisée par la méthode de
diffusion en milieu gélosé. Les groupes phylogénétiques, les intégrons de classe 1 et 2 ainsi que les gènes de
résistance aux sulfamides (sul1, sul2, sul3) et aux tétracyclines (tetA, tetB, tetC) ont été identifiés par PCRs.
Résultats et Conclusion : Les taux de résistance retrouvés étaient de 61,2% pour la streptomycine, 73,27%
pour les tétracyclines, 57.75% pour les sulfamides et l’amoxicilline, de 50,86% pour l’association trimétoprime/
sulfaméthoxazole et de 37,93% pour l’acide nalidixique. Les isolats d’origine aviaire étaient plus résistants que
ceux d’origine bovine et ovine. Les souches appartenaient aux groupes phylogénétiques A (n= 55), B1 (n=
25), B2 (n= 14) et D (n= 22). Les intégrons de classe 1 et de classe 2 ont été respectivement détectés chez
60 et 4 isolats, dont trois hébergeaient les deux types. Les gènes tetA, tetB et tetC ont été respectivement
retrouvés chez 68, 20 et 1 isolats, alors que les gènes sul1, sul2 et sul3 ont été détectés respectivement chez
45, 19 et 11. Il ressort de cette étude que le secteur de l’industrie avicole constitue un réservoir de souches
d’E. coli multi-résistantes ce qui impose la mise en place d’un système de surveillance de l’antibiorésistance
en médecine vétérinaire.
Mots clés: Escherichia coli, intégrons, volaille, antibiotiques
P65- DICARBOXYLIC ACIDS FROM CAPER LEAVE AS NEW TOOLS TO FACE
PSEUDOMONAS AERUGINOSA
N. AISSANI1, G. DE NICOLA2, V. CORONEO3, P. CABONI1
1
2
3
Department of Life and Environmental Sciences, University of Cagliari, Via Ospedale, 72, 09124 Cagliari, Italy
Consiglio per la Ricerca e la sperimentazione in Agricoltura, Centro di Ricerca per le Colture Industriali (CRA-CIN), Via
Di Corticella 133, Bologna 40128, Italy
Dipartimento di Sanità Pubblica, Medicina Clinica e Molecolare, Laboratorio di Igiene degli Alimenti, Università di
Cagliari, Cagliari, Italy
Tome 92 (1-2)
95
Introduction and objectives: Plant-derived antimicrobial compounds can be potentially used as novel tools
to preserve food or to decrease the antibiotic resistance of bacteria. Caper (Capparis spinosa) offers a
natural promising alternative for food safety and bioconservation.
Material and methods: In this work, the methanolic extract of caper leaves (MCL) was tested for the ability
to inhibit the growth of a range of microorganisms using broth microdilution method. Organic acids from
MCL were then extracted with a mixture of water-ethanol (50/50 v/v). The antimicrobial activity of these
compounds and oxalic acid used as chemical control in combination with antibiotics was studied using
checkerboard methods and fractional inhibitory concentration (FIC) against P. aeruginosa. FICindex
values were then calculated to characterize interactions between the inhibitors.
Results and conclusion: MCL was found to be more effective against Pseudomonas aeruginosa at 225 μg/
ml as proved by the broth microdilution method. This inhibition was recorded to malic acid, malonic acid,
succinic acid and p-coumaric acid at 450 µg/ml while benzoic acid was active at 225 µg/ml. Malic acid and
oxalic acid were found highly effective in increasing the susceptibility of P. aeruginosa to vancomycin
(FICindex = 0.37 and 0.50 respectively) suggesting the possible use of dicarboxylic acids from caper
leaves as natural antimicrobials against P. aeruginosa.
Key words: Natural antimicrobials, organic acids, FICindex, Capparis spinosa, Pseudomonas aeruginosa
P66- MISE AU POINT D’UNE TECHNIQUE D’IMMUNOFLUORESCENCE
DIRECTE POUR LE DIAGNOSTIC DE LA LEISHMANIOSE CUTANEE
N. SAIDI1, I. TAYACHI 1, 2, M. BENABID1, I. BEN ABDA1, I. BEN SGHAIER1, A. BOURATBINE1, Y. GALAÏ1
1
2
Laboratoire de Parasitologie Médicale, Biotechnologie et Biomolécules LPMBB, LR 11 IPT 06, Institut Pasteur
de Tunis, Tunisie
Université de Carthage, Faculté des sciences de Bizerte, Tunisie
Introduction : Le diagnostic de la leishmaniose cutanée (LC) se base sur la mise en évidence microscopique
du parasite sous forme amastigote au niveau des aspirations de lésions cutanées (suc dermique), son
isolement par la culture sur milieu nutritif NNN ou encore la recherche de l’ADN parasitaire par PCR.
Toutes ces techniques de diagnostic direct de la LC sont confrontées à certaines limites. La technique
d’immunofluorescence directe (IFD) n’a jamais été employée dans le diagnostic de la LC. D’où l’objectif
de ce travail de développer une technique d’IFD permettant la mise en évidence du parasite Leishmania
sous sa forme amastigote au niveau des prélèvements lésionnels.
Matériel et Méthodes : Des prélèvements de suc dermique (n=41) ont été réalisés chez des patients
adressés au laboratoire de Parasitologie Clinique, IPT pour suspicion de LC. Ils ont servi pour la réalisation
de frottis sur des lames porte-objets. Le diagnostic de la LC est retenu lorsque l’observation microscopique
de la lame colorée au MGG montre la présence des leishmanies sous forme amastigote. Lorsque cette
dernière est négative, la recherche est complétée par la PCR en temps réel. La LC est éliminée lorsque le
résultat des lames colorées au MGG est négatif et que le résultat de la PCR en temps réel effectuée sur le
suc dermique est négatif. C’est ainsi que nos sujets ont été regroupés en LC- à savoir MGG-et PCR- (n=18)
et LC+ à savoir MGG+ ou PCR+ (n=23).
Des IgG spécifiques anti-Leishmania major ont été produites par immunisation de lapins (n=2) avec des
promastigotes métacycliques vivants L. major. Les IgG ont été purifiées par chromatographie d’affinité
96
puis conjuguées à l’isothiocyanate de fluorescéine. Une fois optimisée, la technique IFD a été appliquée
aux frottis tels que préparés ci-dessus.
Résultats et conclusion : Comparée aux résultats de l’examen direct complété par la PCR, l’IFD a montré
une bonne spécificité (94%) ainsi qu’une bonne sensibilité (96%).
Mots-clés : Leishmaniose cutanée, Leishmania major, Immunofluorescence directe, PCR, May Grünwald Giemsa
P67- EFFET DE L’APELINE SUR UN MODELE MURIN DE TROUBLES
COGNITIFS POST-OPERATOIRES (TCPOS)
M.H. LADJIMI1, F. LABASTE1, M. POUJADE1, C. DRAY2, V. MINVILLE2, P. VALET2 ET B. FRANCES1.
1
2
Université de Toulouse, Centre de Recherches sur la Cognition Animale, CNRS, UMR 5169, Université Paul
Sabatier, 118 Route de Narbonne, 31062, Toulouse, France. [email protected].
Université Paul Sabatier (UPS), Unité Mixte de Recherche (UMR) 1048, Institut des Maladies Métaboliques
et Cardiovasculaires (I2MC), Team 3: « Adipokines, obesity and associated Pathologies », 1 avenue Jean
Poulhès, BP 84225, F-31432 Toulouse Cedex 4, France
D’origine pathologique ou traumatique, un trouble cognitif est un trouble mental impliquant un
dysfonctionnement de la mémoire, de la perception ou de la capacité à résoudre un problème. Des troubles
cognitifs apparaissent chez 15 à 25% des patients adultes âgés de plus de 60 ans ayant subi un acte chirurgical,
quelques jours voire quelques mois après l’opération (Rosczyk et al., 2008). Plusieurs hypothèses ont été
formulées pour expliquer l’origine des TCPOs : l’âge avancé du patient, la saturation en O2, le type d’anesthésie,
une fragilité génétique ou encore une forte inflammation (Silva et al., 2011). C’est sur cette dernière hypothèse
que nous orienterons notre étude, à savoir est ce que l’inflammation induit des TCPOs ? Et si l’apeline permet
de réduire ces troubles ? Notre étude a donc été, dans un premier temps, de créer un modèle murin de TCPO
puis d’effectuer un traitement en IP d’apeline 13 durant une période de 3 à 15 jours. Nous avons ainsi pu
étudier le rôle de l’apeline 13 dans la préservation de la mémoire contextuelle par des expériences de Fear
Conditioning et de la mémoire spatiale par des expériences de Morris Water Maze (piscine de Morris).
Nous avons réussi à créer un modèle murin de TCPO sur la souris C57/Bl6 par une fracture fermée fixée par
enclouage centromédullaire du tibia arrière droit de la souris. Les souris fracturées ont présenté un trouble
cognitif au niveau de la mémoire contextuelle qui a été traité efficacement par un traitement par l’apeline.
Mots clés : Troubles, cognition, fracture, mémoire, apeline, souris.
P68- LA CARTE HAPLOT YPIQUE DE LA β-THALASSEMIE EN TUNISIE
A. GOUIDER1, I. MOUMNI1, I. DARRAGI1, L. CHAOUCH1, H. OURAGINI1, D. CHAOUECHI1, F. MELLOULI2,
M. BEJAOUI2 ET S. ABBES1
1
2
Laboratoire d’Hématologie Moléculaire et Cellulaire, Institut Pasteur, Tunis, Tunisie
Service d’Immuno-Hématologie pédiatrique, Centre National de Greffe de Moelle Osseuse, Tunis, Tunisie
La β-thalassémie est l’une des anomalies génétiques les plus fréquentes en Tunisie où elle cause un
vrai problème de la santé publique. C’est une anémie héréditaire autosomique récessive résultant de
Tome 92 (1-2)
97
la production réduite ou absente des chaînes β-globine. Cette anomalie est le plus souvent, le résultat des
mutations ponctuelles dont deux sont fortement représentées en Tunisie à savoir le codon39(C>T) et IVSI-110(G>A). Dans notre étude on s’intéresse à explorer les haplotypes de restriction du locus β-globine
et étudier les polymorphismes de séquence situés au niveau de la région 5’ du gène β-globine chez les
patients β-thalassémiques en établissant la relation entre les mutations βThal et les haplotypes auxquels sont
associées. Nos résultats de l’analyse des haplotypes de restriction du chromosome βThal ont montré une grande
hétérogénéité haplotypique avec une prédominance de l’haplotype I et l’émergence d’un autre haplotype Nd.
L’analyse de l’association des mutations βThal et les haplotypes de restriction montrent que la mutation IVSI-110(G>A) est associée majoritairement aux haplotypes I et Nd. La mutation codon39(C>T) est associée
à une forte hétérogénéité haplotypique mais les résultats de déséquilibre de liaison ont montré que cette
mutation est associée aux haplotypes I, II et Nd. Les mutations : codon 44(-C), codon 30 (G>C), codon27
(G>T) et IVSI-2 (T>G) sont associées respectivement aux haplotypes I, Nd, VIIa et IX. L’exploration des
haplotypes de séquence de la région 5’ du gène β-globine montre que toutes les mutations βThal étudiées sont
majoritairement associées à la configuration (AT7)T7. Un seul cas trouvé portant la mutation IVS-I-110 (G>A)
présente le motif (AT)9T5. Une hétérogénéité haplotypique est observée au niveau de marqueur (ATTTT)
n avec une prédominance du motif (ATTTT)5, on peut le considérer donc comme un marqueur génétique
pour les mutations βThal. Le travail reste encore ouvert et il serait d’une grande importance d’explorer d’autres
polymorphismes en Trans du gène HBB, les gènes modificateurs, en relation avec la variabilité clinique de la
maladie telle que le QTL du chromosome X.
Mots clés : β-Thalassémie, mutation, haplotypes.
P69- EVALUATION IN VITRO DE L’ACTIVITE ANTHELMINTHIQUE DE
THYMUS CAPITATUS SUR HAEMONCHUS CONTORTUS (PARASITE
GASTRO-INTESTINAL DES OVINS)
A. ABIDI1, E. SEBAI1; M. GHARBI1 & H. AKKARI2
1
2
ENMV Sidi Thabet
Institut supérieur de Biotechnologie de Béja
Introduction : Le cheptel des ruminants en Tunisie est confronté de plusieurs pathologies, parmi elles celles
d’origine parasitaire (les parasites gastro-intestinaux).
Objectif : L’objectif du présent travail est d’évaluer l’efficacité anthelminthique des huiles essentielles des fleurs
fraiches de Thymus capitatus (zaatar) sur Haemonchus contortus (nématode gastro-intestinal majeur des ovins).
Matériel et Méthodes : Matériel végétal Thymus capitatus est récolté de la région de Zaghouan et l’extraction des
huiles essentielle est faite par la technique d’hydrodistillation.
Matériel animal Deux agneaux donneurs âgés de 6 et 10 mois et infestés expérimentalement par des larves
infestantes L3 D’Haemonchus contortus.
Pour mettre en évidence cet effet antiparasitaire, deux tests in vitro : test d’inhibition d’éclosion des œufs et test
d’inhibition de la motilité des vers adultes.
Résultat : Une activité anthelminthique est suspectée en termes d’inhibition de l’éclosion après 48 h
d’incubation des œufs dans des concentrations différentes d’huiles essentielles (4mg/ml, 2mg/ml, 1mg/
ml, 0,5mg/ml, 0,25mg/ml et 0,125mg/ml). L’inhibition des vers adultes est testée après 0, 1, 4, 6, et 8 heure
d’incubation dans des concentrations différentes (0,25 ; 0,5 et 1mg/ml). En effet une inhibition totale de
l’éclosion est obtenue avec la concentration de 4mg/ml et une 70,8% d’inhibition de la motilité des vers adultes
après 8h d’incubation à 1mg/ml.
98
Conclusion : Thymus capitatus peut représenter une alternative prometteuse aux anthelminthiques
chimiques pour le traitement des nématodes gastro-intestinaux des ovins.
Mots clés : anthelminthiques Haemonchus contortus, ovins, Thymus capitatus.
P70- HIGH-RESOLUTION MELT ANALYSIS FOR MUTATION SCANNING
PRIOR TO SEQUENCING
H. BEN SALAH1, S. ZARROUK2, R. AMMI3, I. BEN SGUAIER1, K. AOUN1, A. BOURATBINE1, H. CHELBI1.
1
2
3
LR 11-IPT-06 Laboratory of Medical Parasitology, Biotechnology and Biomolecules, Pasteur Institute of Tunis.
Genomic pole of the technical platform Pasteur Institute of Tunis, Tunisia.
Out-patient services, Pasteur Institute of Tunis.
Introduction: Sanger DNA sequencing remains the most straightforward, reliable method for determining the
precise genetic sequence of DNA fragments. However, it requires a fairly significant investment in time and
materials. Mutation scanning strategies seek to quickly and efficiently scan DNA samples from many individuals
for minor genetic variations to identify candidates to be subjected to full sequencing analysis. High resolution melt
analysis (HRM), a technology that is based on the analysis of the melting profile of PCR products through gradual
temperature increase, is suitable for mutation scanning to Identify candidates for Sequencing.
Aim: The aim of this work is to apply qPCR-HRM for mutation detection based on the melting behavior of double
stranded DNA.
Method: DNA from 25 individuals was extracted from whole blood using salting out method then resuspended
in a low-salt buffer TE (10 mM Tris, 1 mM EDTA) prior to PCR. Primer couple was designed to amplify the target
sequence using primer3 software then specificity checked with BLAST tool. Amplification was performed into
Bio-Rad CFX96 thermo-cycler. Precision melt analysis software was used for melting curves analysis. Samples with
atypical shape are considered candidate to be subjected to sequencing in order to identify genetic variation. ABI
3100 genetic analyzer (Applied biosystem) was used to determine the nucleic acid sequence of candidate samples.
Results :We detected with HRM analysis one sample with shape and Tm different from the other samples and
forming a cluster separately. To confirm whether this change is due to a DNA variation or eventual troubleshooting,
the sample was sequenced. A single nucleotide variation was detected confirming the previous result of HRM.
Conclusion : This work allowed: (i) the application of qPCR-HRM method for mutation detection. (ii) Highlighting
the sensitivity of qPCR-HRM technique which allows the discrimination of single nucleotide variation.
Key words: qPCR-HRM, genetic variation
P71- PRISE DE FLUOXETINE PENDANT LA GROSSESSE ET IMPACT SUR LE
DEVELOPPEMENT NEUROLOGIQUE DE L’EMBRYON ET APPARITION DE
TROUBLES DU SOMMEIL CHEZ LE NOUVEAU NE
H. TABKA1, A. CHEIKH1, M.S. BOUBAKER2, Z. BEN LASFAR1, M. EL AYEB1 ET R. BENKHALIFA1
1
2
Laboratoire Venins et Molécules Thérapeutiques, Institut Pasteur de Tunis.
Laboratoire d’Anatomie Pathologique Humaine et Expérimentale, Institut Pasteur de Tunis
Tome 92 (1-2)
99
Le chlorhydrate de fluoxétine est un médicament antidépresseur utilisé dans le traitement de la
dépression, des troubles obsessionnels compulsifs et de nombreux autres états. C’est un inhibiteur sélectif
de la recapture de la sérotonine (ISRS). Au stade embryonnaire, l’expression du canal potassium Kv3.1
est significative dans les neurones et elle augmente progressivement au cours développement. Dans le
cerveau, Kv3.1 est exprimé au niveau de l’hippocampe, du néocortex, du bulbe olfactif et est au moins
deux fois plus représenté au niveau du cervelet par rapport aux autres régions. Il a un rôle régulateur sur
le cycle cellulaire et est impliqué dans le processus de prolifération des cellules neuronales.
Il a été rapporté que l’inhibition du canal Kv3.1 par la fluoxétine se produit au cours de l’activation du canal.
Il a été démontré également qu’une exposition à la fluoxétine à partir de la dernière semaine de gestation
jusqu’au sevrage, entraîne un certain nombre de changements des propriétés du rythme circadien chez
l’adulte et d’autre part, que la perturbation du rythme circadien est étroitement liée à l’activité du canal Kv3.1.
L’objectif principal de ce travail consiste en une étude expérimentale de l’effet de la fluoxétine sur
l’expression et la distribution des canaux de type-Kv3.1 à des stades embryonnaires différents chez la souris
gestante. L’expression de ce canal chez la souris commence au stade E15 et nous prélevons des cerveaux à
partir de cette date. A l’échelle cellulaire, une étude du rôle de la fluoxétine sur la distribution et le niveau
d’expression du Kv3.1 est en cours sur la lignée murine 1C11 et elle sera comparée au niveau d’expression
des récepteurs sérotoninergiques de type 5HT. Cette lignée représente le seul modèle in vitro capable
de mettre en place l’ensemble des fonctions des neurones sérotoninergiques ou noradrénergiques. Ce
clone constitue un modèle in vitro unique pour l’étude de l’intégration des fonctions sérotoninergiques,
des cibles et des interconnexions fonctionnelles des récepteurs sérotoninergiques induits au cours de la
différenciation (Kellermann et al., 2002)
Etant donné que la fluoxétine inhibe la recapture de la sérotonine, nous envisageons également l’étude
de l’effet de AahG50, et / ou des molécules, y purifiées et actives sur Kv3.1, sur la synthèse de sérotonine.
Mots clés : Kv3.1, Fluoxétine, développement embryonnaire, cellules souches neuronales, 1C11
P72- EFFET DES DERIVES DE CHOLESTEROLS 7KC ET 24S-OHC SUR LE
COURANT KV3.1
S. MAATOUG1, M. BEZZINE1,2, A. CHEIKH1, C. THOURAYA1, G. LIZARD2, M. EL AYEB1, R. BENKHALIFA1
1
2
Laboratoire de Venins et Molécules Thérapeutiques,Université de Tunis El Manar Institut Pasteur de Tunis.
Laboratoire Bio-PeroxIL, Biochimie du Peroxysome, Inflammation et Métabolisme Lipidique, Université de
Bourgogne,Faculté des Sciences Gabriel ; Dijon ; France.
E-mail :[email protected]
Introduction : La maladie d’Alzheimer (AD) est une pathologie neurodégénérative caractérisée par une
perte progressive et irréversible de la mémoire et des fonctions cognitives. Le développement du processus
dégénératif est, partiellement, dû à l’accumulation d’oxystérols et d’acides gras à longues chaînes AGTLs.
Par ailleurs, le canal Kv3.1 est principalement présent dans les cellules progénitrices neuronales et
impliqué dans la fonction de la mémoire ainsi que d’autres fonctions cognitives. Chez les patients atteints
d’Alzheimer, l’expression des canaux de type Kv3.1 diminue (Boda et al., 2011).
Dans notre travail, nous nous intéressons à l’effet des oxystérols 7KC et 24S-OHC et des AGTLs de type C24 :0
sur le fonctionnement des canaux Kv3.1
Matériels et méthodes : Les tests électrophysiologiques sont effectués par la technique de voltage-clamp en
doubles microélectrodes intracellulaires sur l’ovocyte de Xénope. L’expression du canal Kv3.1 dans l’ovocyte
est réalisée grâce à l’injection d’ADN ou d’ARN, respectivement, dans le noyau ou le cytoplasme de l’ovocyte.
Résultats : Dans un premier temps nous avons étudié l’effet des, oxystérols (7KC, 24S-OHC) et du C24:0
100
qui est un AGTL, sur le courant potassium endogène de l’ovocyte de xénope. L’application instantanée de 7KC (10
µg/ml), du 24S-OHC (10 µg/ml) et du C24 :0 (20 µg/ml) n’agit pas sur le courant potassium enregistré. De même,
les courants enregistrés en présence de ces trois composés après incubation de 6 et de 24 heures sont similaires
à ceux obtenus dans les conditions de contrôle. L’étude de l’effet des oxystérols sur les courants de type Kv3.1 a
montré que l’application instantanée de 7KC (10 µg) et de 24S-OHC (10 µg) n’agit pas sur le courant Kv3.1.
En revanche après une incubation de 24 heures, 7KC inhibe le courant Kv3.1 d’une moyenne de 28%. De même,
24S-OHC (10 µg) et après incubation 24h diminue le courant Kv3.1 de l’ordre de 37 %.
Conclusion et Perspectives : D’après nos résultats, seuls les oxystèrols 7KC (10 µg) et 24S-OHC (10 µg), après
incubation de 24h, modifient le fonctionnement des canaux Kv3.1 via une inhibition de l’amplitude du courant.
Actuellement, la purification de molécules présentes dans le venin de scorpion Androctonus australis hector et
actives sur le canal Kv3.1 est bien avancée. Nous envisageons l’étude de l’effet de ces molécules sur des modèles
pathologiques cellulaires par Patch Clamp comme une nouvelle approche thérapeutique.
Mots clés : Maladie d’Alzheimer, oxystérols, acides gras à longues chaînes, canal Kv3.1
P73- ETUDE DE L’EFFET DE L’EXTRAIT DES CARAPACES DE CREVETTES
SUR LES CONDUCTANCES SODIUM ENDOGENES DE L’OVOCY TE DE
XENOPE : ROLE DANS LA PROLIFERATION DES CELLULES DU MUSCLE
SQUELETTIQUE EN CULTURE PRIMAIRE
Y. TLILI1, A. CHEIKH1, T. CHAGOUR1, R. M’DIMAGH2, I. HASSEN2 ET R. BENKHALIFA1
1
2
Laboratoire Venins et Biomolécules Thérapeutiques, Groupe Electrophysiologie, IPT.
INRAP.
Introduction: Les canaux ioniques sont les éléments clés de la signalisation chez les cellules excitables. Ils sont
présents dans différents types cellulaires et impliqués dans de nombreux troubles neurologiques et musculaires.
En raison de la demande croissante dans la recherche de nouveaux médicaments d’origine naturelle, il y a un
grand intérêt pour les organismes marins.
Objectifs: Etude de l’effet d’un extrait bioactif issu des carapaces de Parapenaeus longirostris, sur les courants
sodium dépendants du potentiel chez l’ovocyte de xénope, en vue d’étudier son rôle sur la prolifération du
muscle squelettique.
Matériel et méthodes : 1. Etude électrophysiologique: Mesure des courants sodium endogènes en milieu OR2,
chez l’ovocyte de Xénope par la technique TEVC. 2. Etude de l’effet de l’ASE-Extract sur la prolifération des
myoblastes chez les myotubes de rats nouveau-nés en culture primaire.
Résultats : Deux types de courants sodium dépendants du potentiel ont été caractérisés. Le courant sodium lent
xINalent ayant une activation lente, non inactivable et résistant à la TTX. Et le courant sodium rapide xINarapide,
avec une cinétique d’activation et d’inactivation rapide et sensible à la TTX.
L’extrait bioactif, inhibe xINalent de 81.62% à une concentration de 1µg/ml et de 100% xINarapide à une concentration
de 0.25 µg/ml. Pour la prolifération des myoblastes en culture primaire, nous avons observé un ralentissement de
la vitesse de prolifération des myoblastes, en présence de l’ASE-Extract à une concentration de 1 µg.
Conclusion : Dans cette étude nous avons mis en évidence la présence de molécules actives sur les courants
sodium de l’ovocyte et sur la prolifération des myoblastes chez les mammifères. Une prospection de l’effet
des molécules pures de cet extrait sur les canaux ioniques de mammifères par TEVC ou par patch-clamp nous
permettra de déterminer leur(s) rôle(s) dans la physiologie de la contraction du muscle squelettique.
Mots clés : Courants Sodium, Canaux ioniques, ASE-Extract, Myoblastes.
Tome 92 (1-2)
101
P74- EXPRESSION OF S1 GLYCOPROTEIN OF INFECTIOUS BRONCHITIS
VIRUS IN THE METHYLOTROPHIC YEAST PICHIA PASTORIS
E. ZEDDINI1, S. BEN AZOUN1, I. HMILA2, H. KALLEL1
1
2
Laboratory of Molecular Microbiology, Vaccinology and Biotechnology Development, Biofermentation
Unit, Institut Pasteur de Tunis, 13, place Pasteur. BP. 74, Tunis, 1002, Tunisia.
Laboratory of Veterinary Microbiology, Institut Pasteur de Tunis, 13, place Pasteur, BP 74, 1002, Tunisia.
Introduction: Infectious bronchitis virus (IBV ) is a positive RNA coronavirus which attacks either the
respiratory or the urogenital tract of chickens, and causes great economic losses. The S1 subunit is highly
glycosylated, containing 14 potential N-glycosylation sites, 8 disulfide bonds is responsible for receptor
binding of the virus to host cells and is the major inducer of neutralizing antibodies and protective immune
response. The methylotrophic yeast Pichia pastoris has become one of the most popular platforms for
recombinant protein expression. So, we aimed to express and produce recombinant S1 protein in Pichia
pastoris to protect against IB.
Materials and Methods: Transforming the recombinant vector pPICZ alphaA harboring the optimized
gene of the target protein S1 in P.pastoris KM71H strain. Expression of interest protein was checked
for different clones in microplate cultures after induction in BMMY medium and maintained methanol
addition at 24H for 96H. Dot-blot was used to check expression and by real–time qPCR was used to
quantify the transcript of S1-IBV gene in all clones. Moreover , we co-overexpress of chaperones namely
PDI1, GPX1 and EROI in clone showing the highest transcriptional rate to improve expression and finally
we analyzed of the transcript levels of key genes involved in Unfolded protein response (UPR) and ERAD
(Endoplasmic reticulum-associated protein degradation).
Results and conclusion: After induction with methanol, there was no expression of recombinant S1
glycoprotein (rS1-IBV ) in the selected clones. After co-expression of chaperons, none of the clones showed
any expression of S1-IBV protein. Analysis of the transcript levels of key genes involved in (UPR) and ERAD
indicated that UPR response was triggered, despite the co-expression of chaperones. The nascent proteins
S1 failed to fold correctly, and were degraded by ERAD pathway.
Keywords: Infectious bronchitis virus, Pichia pastoris, spike protein S1, UPR, ERAD.
P75- RABIES VIRUS GLYCOPROTEIN ECTODOMAIN EXPRESSION IN THE
METHYLOTROPHIC YEAST PICHIA PASTORIS
H. ASKRI, S. BEN AZOUN, H. KALLEL
Laboratory of Molecular Microbiology, Vaccinology and Biotechnology Development, Biofermentation Unit,
Institut Pasteur de Tunis, Tunis, Tunisia.
Introduction: Rabies is still a major cause of human death around the world. Vaccination is the most
effective way to prevent this fatal disease. Effective rabies vaccines are commercially available; however
they show several limitations such as a high cost. Therefore the development of novel rabies vaccines
with improved features is needed. The rabies virus glycoprotein which is the major antigen responsible
for the induction of protective immunity, is a type I transmembrane glycosylated protein of 505 amino
102
acids (66 KDa), it carries four potential N-glycosylation sites and seven disulfide bonds and contains a
cytoplasmic domain, a transmembrane domain and an ectodomain exposed as trimers at the virus surface.
The ectodomain only, or the soluble form of rabies glycoprotein (RAVG-Ect), was found to be appropriately
antigenic and immunogenic and carried all the epitopes of the viral glycoprotein. In the present work the
methylotrophic yeast Pichia pastoris, used extensively and successfully to express numerous recombinant
proteins, was chosen as a host to express a codon optimized sequence of the RAVG-Ect under the control
of AOX1 promoter and using the α-factor as a secretion signal.
Objective: Expression of RAVG-Ect in the methylotrophic yeast Pichia pastoris under the control
of the AOX1 promoter. Enhance the production level of RAVG-Ect by coexpression of protein disulfide
isomerase (PDI) and the glutathione peroxydase (GPX) which are involved in oxidative protein folding.
Materials and methods: The codon optimized sequence of RAVG-Ect was cloned, in frame with the
α-factor sequence and under the control of the AOX1 promoter of pPICZαA, in Escherchia coli DH10B.
The P. pastoris KM71H strain was then transformed by the linearized recombinant vector. The expression
of RAVG-Ect was investigated in fourteen recombinant clones cultured in deep well plates and the secretion
of the target protein was examined by Western bloting. Multi-copy of RAVG-Ect gene clones were screened
by high resistance to Zeocin. Six recombinant clones were randomly selected to determine the expression
level by real-time q-PCR. The recombinant clone showing the highest transcriptional level of RAVG-Ect
was engineered to co-overexpress protein disulfide isomerase (PDI), as a chaperone protein playing a
key role in folding and secretion of proteins in yeast, and the glutathione peroxydase (GPX) involved
in the detoxification of reactive oxygen species (ROS). The enhancement of level production was then
investigated by SDS-PEGE electrophoreses.
Results: After induction of the expression by methanol during 72 hours, a low level of the soluble form
of RAVG-Ect was secreted into the culture medium. The cooverexpression of PDI an GPX enhanced the
amount of the produced RAVG-Ect
Conclusion: P. pastoris is a suitable host for heterologous expression of RAVG-Ect but critical elements
such as PDI and GPX are required for efficient secretion of this protein.
Key words: Rabies, virus glycoprotein, ectodomain, Pichia pastoris, recombinant protein.
P76- GENETIC STRUCTURE OF FUSARIUM OXYSPORUM F. SP. CITRI
IN TUNISIA
I.HANNACHI1, D. PRASAD RAVULAPALLI2, B. NASRAOUI1
1
2
National Institute of Agronomy of Tunisia (INAT), Av Charles Nicolle 43, 1082 Tunis, Tunisia.
Laboratory of Plant Pathology, Directorate of Oilseed Research, Rajendranagar, Hyderabad 500 030, India
Introduction and objectives: Wilt disease, caused by Fusarium oxysporum f. sp. citri, is ranked among
important destructive diseases of citrus. The use of resistant varieties is the most desirable and effective
control measure. Information on the pathogen population structure is essential, as durability of the
resistance and effective cultivar deployment are strongly linked to this structure.
Materials and methods: In this study, 30 Fusarium oxysporum f. sp. citri from different citrus producing
states in several regions of CapBon and Kairouan were analysed using SSR markers.
Results and Conclusion: Initially, four microsatellite markers were tested, which revealed 2 distinct
haplotypes distributed in the different geographical regions and cultivars. While AMOVA analysis showed
that 78,05% of the total variation occurred within regions, correlation between genetic and geographical
distances was found in the CapBon region. Results indicated that isolates from different regions comprise a
Tome 92 (1-2)
103
single population, which is predominantly clonal. The diversity found here points to the need for additional
studies, as this characteristic may be related to Fusarium oxysporum f. sp. citri evolutionary potential and
possibly to its ability to overcome the resistance from breeding programme-generated cultivars. This is the
most comprehensive study on population biology of Fusarium oxysporum f. sp. citri in Tunisia.
Keywords: Genetic variability, Wilt disease, Population biology.
P77- THE IMPORTANT ROLE OF BONE ALKALINE PHOSPHATASE IN
HEMODIALYSIS PATIENTS
M. BOUKSILA1, A. BAHLOUS2, W. SMAOUI2, M. SLOUMA3, M. MRAD1, N. LEBBENE1, H. SAHLI3, I. CHEOUR3,
K. ZOUARI2
1
2
3
Department of Clinical Biochemistry to The Institute Pasteur of Tunis
Department of Nephrology at The Hospital Rabta
Laboratory of Immunology / rheumatology at the Hospital Rabta
Introduction: The bone lesions establish one of the major complications of the patient dialysis patient
and the anomalies which deteriorate with the duration of the treatment. The objective of this work was to
estimate the dosage of the bone alkaline phosphatase (Palo) in the diagnosis of the type of ostéodystrophie
renal at the patient hemodialysis and to look for a possible correlation between the (PALo), the total
alkaline phosphatases (PALt) and the intact parathormone (iPTH).
Materials and Methods: We brought together 90 patients chronic hemodialysis containing 58 men and 32
women. The average age of our population was 53.01 +/-14.60 years old. The duration of the hemodialysis
was 3.94 +/-1.99. The dosage of the PALo was realized by an immunoenzymatique technique ( Access).
iPTH was measured by électrochimiluminescence.
Results: In our study we found that the average rates of PALo and PALt were respectively 26,84 +/-26,99 ng / ml
and of 88,35 +/-72,56 UI / L . the average rates of PALo and PALt was respectively 26,54 +/-26,99 ng / ml and
of 88,35 +/-72,56 UI / L. We found that all the hemodialysis patients had a high PTH, that 40 % of them had a
PALo > 20 ng / ml and 35 % had a PALo > 20ng / ml associated with a PTH > 200pg / ml. The concentrations
of the PALo were normal in 54,7 % of the cases. 7 % of the patients had an osteodystrophy adynamic. In our
study, we noticed the existence of a positive correlation between the PALo and the PALt (r 0,850; p0,001)
and a correlation is positive between the PTH and the parameters of bone formation (PALt, PALo).
Conclusion: Plasma PALo provides useful information about bone remodelling in hemodialysis patients.
104
PRESENTATIONS LIBRES
Tome 92 (1-2)
105
MOZILLA IPT STUDY GROUP
Le Mozilla Science Lab aide un réseau mondial de chercheurs ou développeurs d'outils à collaborer
pour faire avancer la science sur le web. L'idée princeps est de faire en sorte de créer des opportunités
d'interactions entre collègues pour collaborer sur la base des "Open Research Practices". En d'autres
termes, l'objectif principal de Mozilla Open Science est d'initier les chercheurs à l'Open Science en
soutenant une culture de partage de compétences. Cette activité crée une dynamique entre les collègues
qui peuvent ensuite interagir en petits groupes plus restreints sur un projet commun.
Nous avons ainsi programmé le lancement d'un Mozilla Open Science "Study Group" à l'institut. Le but de
cette activité est de regrouper les chercheurs en un groupe de participants qui s'aideront mutuellement
dans le cadre de réunions de travail à acquérir diverses compétences nécessaires à faire progresser leurs
travaux respectifs ou communs.
Ceci corrobore parfaitement le projet "Recherche Responsable et Innovation" initié au sein de l'Institut
Pasteur de Tunis en partenariat avec le RIIP.
Nous avons choisi comme thématique générale: "bioinformatique: environnement et outils de base". et
un mini website a été mis en place: http://amelgh.github.io/IPT_Tunisia/. Ce dernier servira notamment
à partager les différentes présentations, partager des suggestions, des commentaires, etc. Les participants
inscrits ont fait part de leurs compétences et leurs besoins et des formations ont été organisées pour
répondre aux besoins en bioinformatique de certains membres. Les participations futures programmées
se feront dans le cadre de projets de recherche communs.
ASSOCIATION DES JEUNES CHERCHEURS DE L’INSTITUT PASTEUR
DE TUNIS
Le Comité d’organisation du Colloque Jeunes Chercheurs a décidé de créer une association composée des
jeunes chercheurs de l’IPT.
L’Association des Jeunes Chercheurs de l’Institut Pasteur de Tunis présente des objectifs s’ouvrant sur
deux volets : un volet scientifique et un volet social. Le volet scientifique inclut l’organisation annuelle du
colloque et la multiplicité des activités scientifiques. Le volet social offre une combinaison harmonieuse
entre le domaine de la Science et le domaine social. Le chercheur ne se cantonnant pas à l’activité
scientifique, mais développe ses capacités artistiques et culturelles afin de créer un environnement où sa
créativité contribue au progrès scientifique
H3ABIONET A PAN AFRICAN BIOINFORMATICS NET WORK FOR
H3AFRICA
Authors: H3ABioNet consortium
Correspondance: E-mail: [email protected]
H3ABioNet (http://www.h3abionet.org) is an NIH-funded Pan African Bioinformatics network comprising
32 Bioinformatics research groups distributed amongst 15 African countries and 2 partner Institutions
based in the USA. The main goal of H3ABioNet is to create a sustainable Pan African Bioinformatics
Network to support H3Africa researchers and their projects through Bioinformatics capacity development
on the African continent.
H3ABioNet is being developed to support H3Africa researchers through the development of bioinformatics
capacity on the continent. Specifically H3ABioNet aims to:
omic and environmental resources for translation into improved health in Africa.
Tome 92 (1-2)
107
•Develop a core bioinformatics infrastructure (hardware and human resources) to aid research in
genomic medicine, high throughput biology, systems biology, genetics, and medicine, for the study of
human heredity and health.
•Develop tools and bioinformatics solutions appropriate for exploitation and interpretation of biological
information in Africa, and make these more accessible to H3Africa researchers.
•Develop research partnerships and promote interaction between bioinformaticians, clinicians, molecular
geneticists and ethics researchers to ensure integrative research into health issues in Africa.
•Develop the bioinformatics capacity of people in Africa to empower them to perform cutting edge
research, and to ensure retention of bioinformatics skills on the continent.
•Facilitate secure, high fidelity storage and management of data generated within the H3Africa framework
and their deposition in public databases, so that maximum value can be derived from these data.
•Ensure that the increasing amount of information from genomic analyses and high-throughput molecular
biology is accessible to all H3Africa researchers, to promote health research, scientific progress and
global competitiveness in Africa.
These aims will be achieved through the following major activities:
1. Training and Education
2. Research and Tool Development
3. User support and Communication
4. Infrastructure Development
5. Node Assessment and Accreditation
The H3ABioNet node in Tunisia is at IPT.
Acknowledgment: H3ABioNet was funded by NHGRI grant number U41HG006941.
Key words: H3Africa, bioinformatics, training, infrastructure, communication.
108
WORKSHOPS
Tome 92 (1-2)
109
110
WORKSHOP MONTAGE ET MANAGEMENT DES PROJETS
Pr. Sonia ABDELHAK, secrétaire général de l'association la recherche en action et expert indépendant
auprès de la commission européenne
La première édition du Colloque Jeunes Chercheurs de L'Institut Pasteur de Tunis organise les 6 et 8
décembre un atelier sur le montage et le management des projets collaboratifs de recherche et d’innovation
animé par le Pr Sonia Abdelhak.
Cette formation est destinée aux jeunes chercheurs et est adaptée au contexte tunisien. Elle leur permettra
de développer leur savoir faire et leur savoir être. Elle portera sur des aspects théoriques et pratiques:
chercher des partenaires, planifier, rédiger le projet et décrocher un financement. Savoir réfléchir,
concevoir, manager, collaborer et implémenter un projet.
Ce Workshop sera adapté aux besoins des participants énoncés dans les lettres de motivations et dans les CV.
Ci dessous une présentation schématique en forme de nuage de mots des résultats de l'analyse des besoins
des participants inscrits au workshop CJC 2016.
Tome 92 (1-2)
111
112
COACHING DE CROISSANCE PERSONNELLE ET PROFESSIONNELLE
Cyrine HAYOUNI : [email protected]
Vous voulez expérimenter une nouvelle manière d’entrer en relation professionnelle? Vous voulez en
apprendre plus et en profondeur sur vous-mêmes et sur ceux qui vous entourent ? Vous voulez apprendre
à co-créer dans l’enthousiasme avec vos collègues et vos équipes ?
L’atelier Révélez-vous vous permettra d’ouvrir des fenêtres de conscience et de partager votre vision du
métier et les enjeux de votre contribution avec vos collègues. Découvertes et expérimentations sont au
programme pour laisser émerger de nouvelles pistes pour vous et vos équipes !
« Soyons le changement que nous voulons voir dans le monde » Ghandi
Tome 92 (1-2)
113
114
SESSION BREAKTHROUGH
Tome 92 (1-2)
115
116
PRESENTATION DE LA SESSION BREAKTHROUGH
Cette session est basée sur le concept d’« open science », soit le partage libre des idées scientifiques, sans
restriction, afin d’enrichir les idées par la collaboration et la contribution. Cette session est organisé en
partenariat avec la société Wiki Start Up.
Inspirée de la session breakthrough organisée chaque année lors du symposium du Réseau international
des Instituts Pasteur (RIIP), la session Breakthrough du CJC est conçue pour vous aider à présenter des
projets innovants devant une assemblée de scientifiques et un jury composé d’expèrt:
•Balkiss Bouhaouala: Proffeseur de biochimie à la faculté de médecine de Tunis et chef de l’équipe
d’ingénierie des anticorps LVMT à l’Institut Pasteur de Tunis
•Sonia Abdelhak: Secrétaire général de l'association la recherche en action et expert indépendant auprès
de la commission européenne
•Mondher Khanfir CEO de Wiki Start Up
•Hamadi Ayadi PDG de la Biotechpole Sidi Thabet
C’est une occasion unique pour les porteurs de projets d'interagir étroitement avec des scientifiques
de haut niveau pour discuter, échanger des idées et établir des contacts intéressants afin de trouver des
collaborateurs, concrétiser leur projets scientifiques, administratifs ou start up et établir un réseau de
compétences.
Le candidat aura 5 minutes pour présenter son projet. La session Breakthrough est suivie d’une pause-café
interactive pour mieux discuter les idées de projet, établir un réseautage et trouver des collaborateurs.
BREAKTHROUGH SUCCESS STORY
Vers une Recherche/Innovation Responsable (RRI) à l’IPT
Hichem BEN HASSINE
PROJETS
1.Boite de suggestion pour le personnel
Feten BEN ALI
2.Rendez-vous au lab
Emna HANNACHI
3.Projet de mise en place d’un système de gestion du risque chimique à l’Institut Pasteur de Tunis
Wael BELLILA
4.Création d’une plateforme d’échanges scientifiques et de partage des bonnes pratiques pour
les chercheurs Tunisiens.
Maria KABBAGE
5.Gestion des réservations, du consommable et des pannes
Sonia MAATOUG
6.Réussir sa publication scientifique
Chaima BENSAOUD
Tome 92 (1-2)
117
7.Développement d'une interface web d'analyse métagénomique intégrant une
pipelinebioinformatique d’analyse d’ARNr 16S pour l’étude de l’abondance bactérienne dans
un échantillon.
Hiba JABRI
8.Introduction de la médecine personnalisée en Tunisie: Expérience d’un laboratoire d’analyse
médicale privé LAB TRAB
Faten TALMOUDI
9.Rational rapid test based on PpSP32 a biomarker of exposure to sand fly bites
Soumaya MARZOUKI
10.Languettes pour la détection non-invasive de glucose dans la salive
Amal RABTI
11.Development of a better version of BCG vaccine to prevent/treat Tuberculosis
Meriem HAOUES
12.Full Track and Trace Solution
Noura CHAABOUNI
118
TABLE-RONDE
Tome 92 (1-2)
119
120
PRESENTATION DE LA TABLE RONDE
Depuis sa création en 1893, l’Institut Pasteur de Tunis (IPT) pratique une politique exigeante et
perfectionniste basée sur l’optimisation de l’environnement scientifique afin d’augmenter la compétitivité
des chercheurs et renforcer leur reconnaissance à l’échelle internationale. Cependant, malgré la qualité
des équipes et des projets de recherche, un grand nombre de jeunes chercheurs pasteuriens, comme la
majorité des jeunes étudiants-chercheurs en Tunisie, rencontrent de grandes difficultés pour s’intégrer au
marché du travail tunisien. Ainsi, conscients des contraintes économiques liées à cette étape transitoire
par laquelle passe la Tunisie, les étudiants et post-doctorants de l’IPT organisent une table ronde qui aura
lieu juste avant la clôture du Colloque des Jeunes Chercheurs (CJC) de l’IPT et traitera en profondeur ce
sujet d’actualité qu’est la place des jeunes chercheurs dans le marché du travail et leur insertion dans la vie
professionnelle. Un ensemble d’experts dans le domaine de la recherche scientifique et des représentants
du secteur privé seront invités pour discuter des éventuelles réformes du recrutement des jeunes
chercheurs dans le secteur public et des alternatives possibles qui leurs sont offertes par le secteur privé.
A cette occasion, les panélistes, les invités, et les participants (chercheurs, enseignants universitaires et
chefs de laboratoires) seront présents pour:
• S'interroger sur les possibilités de l'insertion professionnelle des jeunes chercheurs.
• Connaitre les mécanismes de financement des projets Startup en Tunisie.
• Discuter des nouvelles compétences qui seront attendues dans les prochaines années chez le
chercheur débutant et expérimenté afin de faciliter son insertion professionnelle dans les entreprises.
• Echanger les solutions opérationnelles pour mieux préparer ces chercheurs et satisfaire les besoins du
marché
Nous espérons que cette discussion au cours de la table ronde pourra orienter les jeunes diplômés
tunisiens vers un avenir meilleur en lien avec leurs compétences et leurs ambitions.
Modérateur:
Ikbel Naouar, chercheur post-doctorante, Membre du comité d’organisation CJC
Rapporteur :
Hichem Ben Hassine, Chargé de communication, IPT
Panélistes :
• Hechmi Louzir, Directeur Général de l’IPT
• Saida Ounissi, Secrétaire d’état à la Formation professionnelle chargée de l'Initiative privée
• Khaled Ghedira, Directeur Général de l’ANPR
• Mondher Khanfir, Partenaire Associé, Colombus Consulting & CEO, Wiki Start Up
• Youssef Fennira, Directeur, Centre d'Orientation et de Reconversion Professionnelle (CORP)
Invités:
• Imen Amouri, Présidente de l’Association Tunisienne des Docteurs et Doctorants en Sciences (ATDOCS)
• Riadh Ben Mansour, Membre du bureau de l’Association Tunisienne des Docteurs et Doctorants en Sciences (ATDOCS), Responsable de Formation
Tome 92 (1-2)
121
122
RECOMMANDATIONS AUX AUTEURS
Les Archives de l'Institut Pasteur de Tunis publient,
après acceptation par le Comité de Rédaction, des travaux de sciences biologiques fondamentales ou appliquées concernant le Maghreb et plus particulièrement
la Tunisie. Les publications peuvent paraître sous les
rubriques suivantes:
I- TRAVAUX ORIGINAUX
A- ARTICLES ORIGINAUX
Articles couvrant tous les domaines de la biologie et
plus particulièrement les recherches fondamentales et
appliquées relevant des disciplines Pastoriennes. Les
articles seront évalués sur leurs qualités scientifiques et
leur apport à une meilleure connaissance des systèmes
biologiques. Ils ne doivent pas excéder 20 pages dactylographiées.
B- LETTRE A L'EDITEUR
Correspondance critique relative à une publication
antérieure des Archives de l'Institut Pasteur de Tunis et
faisant éventuellement part de l'expérience personnelle du correspondant. Elle ne doit pas dépasser deux
pages dactylographiées.
C- COMMUNICATION BREVE
Note destinée à rapporter un résultat original saillant.
Elle ne doit pas dépasser 5 pages dactylographiées.
B-REVUE GENERALE
Revue faisant le point de l'état des connaissances sur un
thème proposé par le Comité de Rédaction. Elle ne doit
pas dépasser 15 pages dactylographiées.
III- FORUM
A- NOUVELLES SCIENTIFIQUES
Faits scientifiques saillants apparus dans la littérature et
/ ou manifestations scientifiques récentes.
B- FAITS
Rapports, compte-rendus... de séminaires et manifestations scientifiques ayant trait particulièrement à la vie
Pastorienne.
IV- PRESENTATION GENERALE
DES ARTICLES
A- MANUSCRIT
Le texte rédigé en Anglais ou en Français sera dactylographié en double interligne recto sur format A4.
-- La page Une comportera obligatoirement :
- Le titre en Français et en Anglais.
- Un titre abrégé (running title) de 3-4 mots.
- Les affiliations.
- L'indication de l'auteur correspondant.
- Les mots clés en Français et en Anglais.
Mises au point sollicitées par le comité de rédaction
des Archives de l'Institut Pasteur de Tunis et apparaissant sous les rubriques suivantes:
-- La page Deux comportera le résumé en Français et en
Anglais; ceux-ci ne dépassant pas chacun 15 lignes
dactylographiées.
-- La page Trois et Suivantes comporteront le texte avec
les chapitres suivants dans l'ordre :
- Introduction.
- Matériel et Méthodes.
- Résultats.
- Discussion.
- Remerciements.
- Références.
A- EDITORIAL
Prise de position sur un sujet d'actualité et d'importance particulière ne dépassant pas deux pages dactylographiées.
B- ILLUSTRATIONS
Les tableaux seront numérotés en chiffres romain et les
figures en chiffres arabes suivant l'ordre de passage
dans le texte.
D- NOTE TECHNIQUE
Actualisation (amélioration, perfectionnement, simplification) d'une technique à la lumière de l'expérience
personnelle des auteurs. Elle ne doit pas dépasser deux
pages dactylographiées.
II- AUTRES PUBLICATIONS
Tome 92 (1-2)
123
Pour les figures, le sens (haut, bas, droite, gauche) sera
indiqué au verso. Seuls les originaux en 3 exemplaires
seront acceptés.
C- REFERENCES
Dans le texte, chaque citation sera suivie d'un numéro
en exposant, correspondant à celui de la référence citée
par ordre d'apparition dans le texte. Les références
figureront sur des pages séparées du reste du
manuscrit. et selon le modèle ci-dessous, en indiquant:
-- Le ou les initiales du prénom des auteurs suivi de
leur nom.
-- L'année de parution (entre parenthèses).
-- Le titre de l'article, le nom de la revue (utilisant les
abréviations couramment admises dans Current
Contents), du tome en gras, du numéro ainsi que de
la première et de la dernière page de l'article.
EXEMPLES
1- J.L. GUÉNET, H. JAKOBO, J.F. NICOLAS ET
F.JACOB (1974). TÉRATOCARCINOME DE LA SOURIS
: ÉTUDE CYTOGÉNÉTIQUE DES CELLULES À
POTENTIALITÉ MULTIPLE. ANN. MIOCROBIO. INS.
PASTEUR, 125 A, 135-151.
V- REMARQUES GENERALES
Les manuscrits doivent être adressés en trois exemplaires: 1 exemplaire original et 2 copies d'excellente
qualité, et sur disquette ou CD-Rom avec une lettre
d'accompagnement au Rédacteur en Chef des Archives
de l'Institut Pasteur de Tunis. 13, Place Pasteur, B.P. 74,
1002 Tunis-Belvédère- Tunisie.
La lettre d'accompagnement devra être signée par l'auteur principal indiquant que tous les co-auteurs ont pris
connaissance du contenu de l'article, approuvent sa
soumission aux Archives de l'Institut Pasteur de Tunis et
attestent que le contenu de l'article n'est pas et ne sera
pas soumis à une autre revue.
Les articles incomplets et ne respectant pas les recommandations sus-indiquées ne seront pas pris en considération. Les articles soumis ne sont pas retournés. Le
Comité de Rédaction se réserve le droit de refuser les
textes qui lui seront soumis. Les opinions émises dans
les publications n'engagent que la responsabilité de
leurs auteurs.
Les Références concernant les ouvrages (monographies, traités, compte-rendus de congrès...) doivent
être présentées selon l'exemple suivant :
2- A.T. STONE AND J.J.MORGAN (1990).
KINETICS OF CHEMICAL TRANSFORMATIONS IN
THE ENVIRONMENT. IN AQUATIC CHEMICAL
KINETICS (EDITED BY STUMM W.), CHP.1, PP.1-42.
WILEY- INTERSCIENCE, NEW YORK.
124

Revue de publication semestrielle fondée en 1906 par Charles

Transcription

Documents pareils

L`AIB organise une communication financière de la société

Excursion Cap Bon Départ de Tunis 1 étape : visite de Nabeul , une

Commerce

extrait d`acte de naissance - Ambassade du Cameroun en Tunisie

Fiche du projet Restauration de l`ancien Hôtel de ville de Tunis

Consultation n°22/2015 - Ministère de la Justice Tunisie

La Direction Régionale du Ministère de la Justice de Tunis Avis de

La recherche sur les maladies rares à l`Institut Pasteur de Tunis

Habitat : Approbation du plan d?aménagement des

Engagement - Université de Tunis El Manar