Titre du stage :

Master Biologie Santé
Paris Saclay
Proposition de stage 2016-2017
Fiche de proposition de stage de M2 :
- Pour faciliter le classement des propositions, vous pouvez indiquer le parcours de formation
souhaité en M2 pour un étudiant qui rejoindrait votre équipe dans le cadre de ce stage :
M2 Gene Cell and Development: Génétique, Biologie Cellulaire, Biologie du Développement,
Cellules Souches (parcours en anglais, les propositions peuvent être rédigées en français ou
en anglais).
M2 Gen2Ev: Génétique, Génomes et Evolution.
(les deux parcours peuvent être cochés)
Plusieurs disciplines sont proposées pour identifier la formation initiale que vous attendez de
l’étudiant. Supprimez les disciplines inutiles.
Pour faciliter la présentation de l’offre, veillez à ce que la fiche tienne sur une feuille rectoverso (sans modifier les marges).
Merci de nous renvoyer la fiche au format word en intitulant IMPERATIVEMENT le fichier sous
le format suivant (pour pouvoir le classer): Ne laisser que les parcours convenant à votre
offre: GCD ou Gen2Ev ou GCD_Gen2Ev
M2_GCD_Gen2Ev_2017_NOM du responsable de l'équipe-NOM du maître de stage.doc
Merci de renvoyer le fichier Pdf à Mme Fairhead, co-responsable de Gen2Ev, qui se charge de collecter
les offres: [email protected] avant le jeudi 30 juin 2016
A noter pour information:
-
les stages se déroulent pour la plupart de début ou mi janvier à fin juin, pour une durée
d’environ 5.5-6 mois au total.
-
Les étudiants de GCD et de Gen2Ev suivent l’UE Projet Scientifique qui consiste à faire
une recherche bibliographique approfondie de leur future thématique de stage et d’en
établir le contexte scientifique, les questions posées et les stratégies retenues à mettre
en œuvre pendant la partie expérimentale du stage. Cela nécessite que vous accueilliez
et encadriez l’étudiant pendant cette période qui se solde par un rapport écrit et une
soutenance orale qui a lieu avant les vacances de Noël ou juste après.
Master Biologie Santé
Paris Saclay
Proposition de stage 2016-2017
Titre du stage : Determining cell cycle status and signaling pathways of early and late
MeLiM melanomas
5 Mots clés
Flow cytometry
Cell cycle
Fluorescence
microscopy
Melanoma
models
tumorigenesis
Responsable de l’équipe d’appui :
Intitulé et adresse du laboratoire : UMR1313 Génétique Animale et Biologie Intégrative, INRA’
AgroParisTech, équipe Génétique Immunité Santé, sous-équipe mélanome
INRA, Centre de Recherche de Jouy-en-Josas, Domaine de Vilvert, F-78352 Jouy-en-Josas,
Maître de stage : Egidy Maskos, Giorgia Ph.D.
Email :
[email protected]
Tél : 0134652128
Description du stage :
Context : Melanoma which derives from transformed melanocytes is the deadliest skin cancer. When
metastases are present, prognosis is highly reduced because current chemo, radio and targeted
therapies are not efficient. Nonetheless, novel immune checkpoint blockers appear as promising tools for
restoring anticancer surveillance, although side effects are severe. Most melanomas are sporadic, up to
8% are familial. Melanoma affects not only humans but also animals like horses, dogs, or minipigs. While
solar and sunbed UV radiation exposure is the best known causative agent in human melanomas,
animals models of melanoma most frequently carry a genetic predisposition. Among spontaneous
mammalian models, MeLiM minipigs are particularly interesting because their skin and melanomas are
structurally similar to human’s and because melanomas spontaneously regress. Melanomas develop
during the perinatal period and can metastasise. Eventually they regress from the third month of age
onwards. The immune system seems to be successfully involved in this phenomenon. Pathways involved
in melanoma progression are not well characterized (Egidy et al 2008). Preliminary results point at
pathways also found activated in human melanomas, although in the absence of the most frequent
human’s mutations. These mutations mainly affect BRAF and NRAS oncogenes, or NF1 tumor
suppressor leading to the constitutive activation of MAPK or MAPK and mTOR pathways, respectively
(TCGA, 2015). MeLiM melanocytic lesions are quite big in size. MeLiM melanomas display abundant
proliferation marks together with cell cycle arrest marks. These data may suggest a spatial cell
heterogeneity in proliferative capacity or alternatively, a cell autonomous arrest that could add to the
belated immune effect. We also work with the mouse melanoma model Tyr::NRasQ61K, Cdkn2a-/-,
Pax3GFP/+ which develops cutaneous melanoma later in life (Campagne et al 2016). In this model,
melanocytes carry the constitutively active NRas protein which drives skin hyperpigmentation due to the
proliferative effect of the mutation, together with the knock out of the tumor suppressor Cdkn2a locus,
and the fluorescent melanocytic reporter allele. Yet additional changes are needed to drive melanocytic
transformation. Melanomas in this model often produce metastasis to other organs, they show abundant
proliferation marks but few cell cycle arrest marks. Cancer regression is not obvious in this model.
Aims: We wish 1) to determine whether proliferation and cell cycle arrest marks are colocalised in
melanoma cells in MeLiM melanomas sampled at different ages, 2) to establish the proportion of single or
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Paris Saclay
Proposition de stage 2016-2017
double labeled cells at different ages, and 3) to analyse the signaling pathways associated with the
groups.
Methods: Fresh melanoma cells obtained from slices of excised lesions will be isolated and characterized
by flow cytometry for cell type and cell cycle markers. Alternative slices will be saved for
immunohistological examination. Pharmacological treatments of primary cultures will help establish the
active signaling pathways. Additional signs of proliferation, quiescence, and arrest / senescence will be
analysed. Mouse Tyr::NRasQ61K, Cdkn2a-/-, Pax3GFP/+ melanoma cells will be used as controls.
Applicants will work with fresh clinical samples from the 2 animal models to be used for in situ and in vitro
characterisation. They will practise tissue culture techniques, antibody powered strategies, from
cytometry to structured illumination microscopy, image processing.
Références
- Egidy G et al.Transcription analysis in the MeLiM swine model identifies RACK1 as a potential marker of
malignancy for human melanocytic proliferation. Mol Cancer. 2008 Apr 28;7:34.
- TCGA : Cancer Genome Atlas Network.Genomic Classification of Cutaneous Melanoma.Cell. 2015 Jun
18;161(7):1681-96.
- Campagne C et al. Haplosufficiency of PAX3 for melanoma development in Tyr: NRASQ61K; Cdkn2a-/- mice
allows identification and sorting of melanoma cells using a Pax3GFP reporter allele. Melanoma Res. 2016
Feb;26(1):12-20.
Parcours de M2 :
θ GCD
Profil de l’étudiant recherché (formation initiale) :
- Biologie Cellulaire
- Biologie Moléculaire
Ce stage peut-il se poursuivre par une thèse :
Ecole Doctorale de Rattachement : SdV
- Développement
- Génétique
θ OUI
Nom de la personne titulaire d’une HDR qui encadrerait la thèse : Giorgia Egidy (à passer en 2017)
Accord de principe pour proposer le sujet (éventuellement modifié) à un étudiant de M1 (stage de
7-8 semaines généralement de mi-avril a mi-juin) si votre proposition n’a pas été pourvue par un
étudiant de M2 : approuvé