TP - Initiation à la microscopie optique

TP - Initiation à la microscopie optique
I-Notions théoriques
• Un champ microscopique ou champ d’observation est la zone d’observation éclairée qui
apparaît au manipulateur lors d’une observation au microscope :
Diamètre du champ microscopique
Le diamètre du champ microscopique est fonction de l’objectif utilisé : il est donc nécessaire
de le connaître pour chacun des objectifs que l’on utilise.
• La connaissance du diamètre du champ microscopique, permet d’estimer la taille des objets
que l’on observe.
Exemple :
→ observation d’une cellule au grossissement x40 (objectif x …..)
Champ microscopique
Cellule observée
Diamètre du champ = 5 mm
En sachant que le diamètre du champ microscopique est de 5 mm, estimer la taille de la
cellule observée :
II-Observations microscopiques sur lame
1-Estimation du grossissement
Prendre une lame en verre, et dessiner en son centre un point avec un marqueur indélébile.
Observer le point avec l’objectif x10.
Constater le grossissement important (le point occupe une grande partie du champ).
→ Estimer approximativement combien de fois est grossi le point ?
2-Caractéristique de la vision microscopique
Ecrire un petit R sur la lame et observer à l’objectif x10. Commenter l’image observée.
3-Détermination du diamètre du champ microscopique
• Découper un morceau de papier millimétré d’environ 1 cm par 1 cm, et le coller sur une
lame de verre avec du ruban adhésif. Observer le papier avec les objectifs x4, x10, puis x40.
• Observer les différentes possibilités d’éclairement du champ :
-en faisant varier l’intensité de la lampe.
-en faisant varier la hauteur du condenseur.
-en manoeuvrant le diaphragme.
• En utilisant comme référence, le quadrillage du papier millimétré (1 carreau = 1 mm),
estimer pour chaque objectif, le diamètre d’un champ d’observation (en mm). Pour cela
remplir le tableau ci-dessous :
Objectif
Grossissement
Distinction des carreaux
(bonne, mauvaise…)
Nombre de
carreaux comptés
Diamètre estimé
du champ (mm)
Cette méthode de mesure vous parait-elle suffisamment précise pour déterminer avec
précision la taille d’un champ d’observation ?
Quelle est la relation entre le grossissement et la taille du champ d’observation ?
• On sait que la taille du champ d’observation avec l’objectif x4 est précisément de 4,50 mm. En
fonction de cette valeur, calculer précisément pour les objectifs x10, x40 et x100, le diamètre
du champ microscopique (exprimer les résultats en mm et les convertir en µm). Pour les objectifs
x10 et x40, comparer les résultats obtenus aux estimations effectuées précédemment.
III-Observation microscopique d’une eau de mare
• Déposer à l’aide d’une pipette Pasteur, une petite goutte d’eau de mare au centre d’une lame
en verre. Recouvrir la goutte d’une lamelle en verre.
• Faire les observations aux grossissements x100, et x400. Rechercher différents organismes,
et les représenter sur une feuille blanche. Estimer leur taille moyenne.