Conjugués de PerCP pour la cytométrie en flux

Spécialisé dans les anticorps secondaires et les conjugués
Conjugués de PerCP pour la cytométrie en flux
Le PerCP est un complexe péridinine-chlorophylle-protéine fluorescent isolé à partir de dinoflagellés. Nous
proposons la forme trouvée dans Dinophyceae sp. avec un poids moléculaire d'environ 35.5 kDa. Il a un
large spectre d'excitation avec un pic principal à 472 nm, et un long déplacement Stokes vers un pic
d'émission à 677 nm (Figure 1).
Figure 1. La forme et la position relative des spectres dans la région du pic
d'excitation (bleu) et d'émission (violet) pour le PerCP conjugué à un anticorps
secondaire purifié par affinité de Jackson lmmunoResearch. Des comparaisons
quantitatives ne doivent pas être faites puisque les hauteurs de pic ont été
normalisées. Des spectres ont été obtenus avec un système de spectrofluorimètre
de série M de Photon Technology International, Inc.
Des conjugués PerCP d'anticorps secondaires
fortement adsorbés sont proposés pour marquer des
anticorps primaires non conjugués, et le complexe
PerCP-streptavidine est proposé pour marquer des
anticorps primaires ou secondaires biotinylés (Figures
2 et 3). Deux protocoles pratiques de marquage sont
possibles avec les produits.
Comparé à un anticorps primaire conjugué au PerCP
en une seule étape (Figure 2), à peu près le même
niveau de fluorescence est obtenu avec une
procédure en deux étapes, en utilisant un anticorps
primaire biotinylé et de la streptavidine conjuguée au
PerCP. Un signal régulier et légèrement supérieur est
obtenu en utilisant un anticorps primaire non conjugué
et un anticorps secondaire conjugué au PerCP. Bien
que les procédures en trois étapes ne soient
généralement pas souhaitables pour la cytométrie,
une amplification légèrement plus forte peut être
obtenue avec un anticorps primaire non conjugué, un
anticorps secondaire biotinylé et de la streptavidine
conjuguée au PerCP (Figure 3).
Tel: +44 (0)1638 782616
Figure 2. Des lymphocytes périphériques humains ont été colorés soit directement
avec de l'anti-CD3 conjugué au PerCP (orange) de BioLegend, soit indirectement
avec de l'anti-CD3 conjugué à la biotine (B-D Pharmingen) et du PerCPstreptavidine, de Jackson ImmunoResearch (bleu), de BioLegend (violet) ou du B-D
Pharmingen (rouge). Pour une comparaison approfondie, les cellules ont été colorées
avec de l'anti-CD3 non conjugué (B-D Pharmingen), anticorps secondaire conjugué
au PerCP de Jackson ImmunoResearch (vert). Les cellules colorées ont été
analysées dans un cytomètre en flux FACSCalibur à double laser (Becton Dickinson).
Figure 3. Des lymphocytes périphériques humains ont été colorés avec de l'anti- CD3
non conjugué (B-D Pharmingen) et un anticorps secondaire conjugué au PerCP de
Jackson ImmunoResearch (vert), ou avec de l'anti-CD3 conjugué à la biotine (B-D
Pharmingen) et du PerCP-streptavidine de Jackson ImmunoResearch (blue). Pour
une comparaison approfondie, les cellules ont été colorées avec de l'anti-CD3 non
conjugué (B-D Pharmingen), anticorps secondaire biotinylé et de la streptavidine
PerCP de Jackson ImmunoResearch (rouge). Les cellules colorées ont été analysées
dans un cytomètre en flux FACSCalibur à double laser (Becton Dickinson)
www.jireurope.com
Fax: +44 (0)1638 668462 Email:[email protected]
Les conjugués PerCP peuvent être utilisés seuls ou avec du Alexa Fluor® 488 (ou FITC) et R-PE pour des
analyses de une à trois couleurs avec un cytomètre en flux à simple laser équipé d'un laser à argon émettant
à 488 nm. Il est possible d'obtenir facilement jusqu'à quatre analyses de couleur avec faible compensation,
en ajoutant des anticorps conjugués APC avec une excitation à 633 ou 635 nm, fournie par un cytomètre
en flux à double laser (Figure 4).
Figure 4. Spectres d'excitation (gauche) pour les anticorps secondaires conjugués au PerCP-(bleu), à l'Alexa Fluor® 488/FITC-(vert), au R-PE-(rouge) et à l'APC-(marron) de
Jackson ImmunoResearch. Spectres d'émission (droite) pour les anticorps secondaires conjugués à l'Alexa Fluor® 488/FITC-(vert), au R-PE-(rose), à l'APC-(marron) et au
PerCP-(violet) de Jackson ImmunoResearch. Des comparaisons quantitatives ne doivent pas être faites puisque les hauteurs de pic ont été normalisées. Tous les spectres ont
été obtenus avec un système de spectrofluorimètre de série M de Photon Technology International, Inc.
Certifié par UKAS selon la norme BS EN ISO 9001:2008 sous le certificat numéro 12017/1.
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