RMV 03:Revue 08

Prévalence et gènes de virulence des
Salmonella isolées des viandes hachées
crues de dinde à Casablanca (Maroc)
B. KARRAOUAN1, A. FASSOUANE2, H. EL OSSMANI4, N. COHEN1, O. CHARAFEDDINE3, B. BOUCHRIF1*
Laboratoire de Microbiologie et d’Hygiène des Aliments et des Eaux. Institut Pasteur, 1 Place Abou El Kacem Ez-Zahraoui, BP 120, Casablanca, MAROC.
Laboratoire de Biochimie, Université Chouaib Doukkali, Faculté des Sciences, Rte Ben Maachou, B.P. 20 24000 El Jadida, MAROC.
Laboratoire de Microbiologie, Faculté des Sciences et Techniques Mohammedia, BP 146 Route de Rabat Mohammedia 20650, MAROC.
4
Laboratoire de Génétique de la Gendarmerie Royale, avenue Ibn Sina, Rabat, MAROC.
1
2
3
* Auteur chargé de la correspondance : [email protected]
RÉSUMÉ
Une étude a été menée pour estimer la prévalence, la sensibilité aux antibiotiques et la distribution des sérotypes et des gènes de virulence de
Salmonella, dans la viande hachée crue de dinde à Casablanca, Maroc. 192
échantillons ont été prélevés au cours de l’évaluation microbiologique des
denrées alimentaires entre 2005-2008. Sur les 192 échantillons examinés,
Salmonella a été isolée dans 39 (20,31 %) des échantillons. Sur les 39 souches
de Salmonella isolées, 15 sérotypes différents ont été identifiés, parmi lesquels
S. Kentucky (20,5 %) était le plus fréquent, suivi par, S. Corvallis (15,3 %),
S. Muenster (12,8 %), S. Newport (12,8 %), S. Typhimurium (5,1 %) et 1 %
pour les autres sérovars . Les résultats des tests de sensibilité aux antibiotiques ont montré que 82 % des Salmonella isolées ont résisté à au moins un
antibiotique, 51,3 % au moins à deux antibiotiques, et 23 % à la ciprofloxacine,
le médicament habituellement prescrit pour traiter les adultes victimes de
salmonellose. Toutes les souches Salmonella étudiées étaient positives pour
le gène d’invasion invA, alors que les gènes de virulences spvC et h-li sont
respectivement d’une fréquence de 2,6 % et 18 %. Comme ces bactéries
résistantes peuvent être transmises aux humains par les aliments, il s'agit
d'un problème de santé publique préoccupant au Maroc.
Mots-clés : Salmonella, viande hachée crue, sensibilité
aux antibiotiques, gènes virulences.
SUMMARY
Prevalence and virulence genes of Salmonella in raw minced meat
from turkey in Casablanca, Morocco
A study was conducted to estimate the prevalence, antibiotic resistance and
the distribution of serovars and virulence genes of Salmonella in raw turkey
minced meat at Casablanca, Morocco. 192 samples were collected during
the microbiological assessment of food between 2005-2008. Of the total 192
samples examined, Salmonella was detected in 39 (20,31%) of the samples
analysed. Out of the total 39 Salmonella isolates, 15 different serotypes
were identified of which S. Kentucky (20,5%) was the most frequent followed by , S. Corvallis (15,3%), S. Muenster (12,8%), S. Newport (12,8%), S.
Typhimurium (5,1%) and 1% for all the other serovars isolated. Results of
the present study indicated that thirty two of 39 (82%) strains were resistant
to one or more of the antibiotics employed and multi-drug-resistant strains
constituted 51,3% of all isolates. Nine of these isolates were resistant to
ciprofloxacin, which is the treatment of choice of severe non typhoidal
Salmonella infections in adults. Examination by PCR revealed presence of
the virulence gene invA in all serovars, and the spvC, h-li gene were found
respectively in 2,6% and 18%. Results of the present study indicated that
there was a high level of Salmonella contamination of raw turkey minced
meat, which could be considered as one of the major potential source of
human salmonellosis in Morocco.
Keywords: Salmonella, raw minced meat, antibiotic
resistance and virulence genes.
Introduction
Les Volailles et les produits avicoles sont généralement
incriminés dans la dissémination des épidémies de salmonelloses
humaine. Au cours des dernières décennies, les infections
par les Salmonella ont été reconnues comme une menace
pour la santé publique dans la plupart des pays développés.
Au Maroc, 7 118 cas de toxi-infections alimentaires ont été
rapportés entre 2000 et 2004 dont plus de 86 % sont d’origine
bactérienne [9].
Au Maroc plusieurs cas de gastroentérites liés à la consommation de la volaille mal cuite, aux œufs et aux produits de
la pêche sont répertoriés chaque année [9]. Le diagnostic
étiologique n’étant pas connu pour de nombreuses gastroentérites, elles peuvent vraisemblablement être liées à des
Salmonella.
Revue Méd. Vét., 2010, 161, 3, 127-132
Au Maroc, la production de viande de volaille, en particulier
de dinde, est passée de 10,5 à 50 millions de tonnes ces dernières années [3], ce qui explique la forte consommation de
ces viandes, vu leur coût accessible.
Des résistances ont été signalées un peu partout dans le
monde, concernant surtout les sérotypes autres que Salmonella
sérovar Typhi dont le tableau clinique est donc resté moins
sévère [8].
Au Maroc, une évaluation de la sensibilité des germes aux
antibiotiques a montré des taux de résistance très élevés aux
quinolones chez Salmonella sérovar Kentucky [6] et des
Salmonella sérovar Typhimurium résistantes aux céphalosporines de 3ème génération [2, 7].
Plusieurs travaux ont été réalisés sur la prévalence et la résistance des Salmonella dans divers produits à base animale mais
aucune étude n’a été entreprise pour la virulence des Salmonella.
128
Le présent travail s’inscrit dans ce cadre. Les objectifs
sont, d’une part, l’évaluation de la qualité hygiénique des
viandes hachées crues de dinde, la distribution des différents
sérovars de Salmonella non Typhi, d’autre part, d’étudier la
sensibilité aux antibiotiques et les gènes de virulence par des
techniques microbiologiques et moléculaires.
Matériel et Méthodes
ORIGINE DES SOUCHES
Des échantillons de viande hachée crue de dinde d’une
unité scellée d’un kilogramme sont prélevés et placés dans
des sachets stériles pour chaque lot de production. Ces prélèvements sont transportés au laboratoire dans une glacière
isotherme, et analysés dans les deux heures qui suivent le
prélèvement. L’étude a été réalisée sur une période de quatre
années (2005-2008) à raison de 4 prélèvements par mois
(n=192 échantillons) pendant laquelle nous avons isolé,
identifié, et collecté les souches de Salmonella dans le laboratoire de microbiologie et d’hygiène des aliments et des
eaux - Institut Pasteur du Maroc. L’isolement des souches de
Salmonella à partir de ces échantillons est réalisé selon la
norme ISO6579. Les tests de l’oxydase et de l’uréase sont
réalisés pour toutes les colonies suspectées suivis d’une identification par des systèmes API 20E (Bio-Mérieux). La
confirmation moléculaire de ces Salmonella isolées est réalisée
par la technique d’amplification génique (PCR) nichée d’un
fragment d’ADN de 1Kb du géne InvA du chromosome (N°
M90846.1 de la Salmonella Typhimurium) spécifique aux
Salmonelles utilisant les amorces: sens F-5’accacgctctttcgtctgg3’
et antisens R-5gaactgactacgtagacgctc3’, utilisant le programme
suivant : une dénaturation initiale d’une 1 min à 95°C suivi
de 30 cycles, une dénaturation de 45 sec à 95°C, hybridation
de 30 sec à 58°C , élongation de 72°C à 45 sec et extension
finale à 72°C pendant 10 min. Le produit de PCR est analysé
par une électrophorèse sur gel d’agarose à 1,5 %.
SÉROTYPAGE DES SOUCHES DE SALMONELLA
Les sérotypes ont été déterminés par les tests d’agglutination
sur lame avec les immuns sérums de groupe et des immuns
sérums spécifiques dirigés contre les antigènes O, H et Vi des
Salmonella (Bio-Rad). La lecture des résultats a été faite
selon le tableau de Kauffmann White [10].
RÉSISTANCE AUX ANTIBIOTIQUES
L’antibiogramme a été réalisé par la méthode de diffusion
sur gélose Mueller-Hinton de disques d’antibiotiques (BioRad). L’interprétation des résultats a été faite selon les règles
et les recommandations du Comité d’antibiogramme de la
Société française de microbiologie. Les antibiotiques suivants ont été testés : amoxicilline, l’association amoxicilline
et acide clavulanique, céfalotine, céfoxitine, céftriaxone,
céftazidime gentamicine, kanamycine, acide nalidixique,
BOUCHRIF (B.) ET COLLAORATEURS
ciprofloxacine, sulfamides, tétracycline, streptomycine et
chloramphénicol.
EXTRACTION PLASMIDIQUE
L’extraction de l’ADN plasmidique est réalisée par la
méthode rapide de Kado et Liu modifiée [11], de toutes les
souches de Salmonella isolées, à partir des cultures fraîches
sur gélose nutritive TCS. Les plasmides ont été résolus par
une électrophorèse sur un gel d'agarose à 0,75 % dans le tampon
TBE 0,5x (10 mM Tris-Cl, 0,4 mM Acide borique et 1,0 mM
EDTA [pH8]), à 50 mA (120 Volts) pendant 2 heures à température ambiante, visualisés par une coloration au Bromure
d'Ethidium à 0,4 µg/mL et photographiés par le système
GelDoc1000 (Bio-Rad). Pour l'estimation de la taille moléculaire, la souche de référence Escherichia coli VA517
hébergeant 8 plasmides (53,7, 7,2, 5.6, 5.1, 3.9, 3.0, 2.7, et
2.1 kbp) est utilisée comme marqueur de poids moléculaire.
RECHERCHE DES GÈNES D’INVASION INVA ET DE
VIRULENCE SPVC ET H-LI
Toutes les souches de Salmonella recueillies dans la présente
étude, ont été testées pour la recherche du gène d’invasion
invA utilisant les amorces: sens F-5’tatcgccacgttcgggcaa3’ et
anti-sens R-5’tcgcaccgtcaaaggaacc3’, et du gène de virulence
h-li utilisant les amorces: sens F-5’agcctcggctactggtcttg3’ et
anti-sens R-5’ccgcagcaagagtcacctca3’, et le gène de virulence
spvC utilisant les amorces: sens F-5’cggaaataccatcaaata3’ et
anti-sens R-5’cccaaacccatacttactctg3’, décrit par [12,1].
L’ADN est extrait par la méthode rapide, adaptée à des petits
volumes: les colonies prélevées à partir d’une culture fraîche
de 18 à 24 heures sur gélose nutritive TCS sont mises en
suspension dans 500 μL d’eau biologie moléculaire, lysées
par action thermique dans une eau bouillante pendant 10
minutes, suivi d’une centrifugation à 12000 rpm pendant 5
minutes, on récupère le surnageant qu’on stocke à -20 °C jusqu'à
l’utilisation. 2,5 µL d’ADN est utilisé pour les réactions
d’amplifications effectuées avec des amorces spécifiques
permettant l’identification du gène invA, spvC et h-li selon
les conditions déjà décrite. Les produits PCR sont visualisés
par coloration au Bromure d’Ethidium après migration par
électrophorèse en gel d’agarose à 1,5%. Salmonella
Typhimurium penta-résistante type (ACTeStSul) est utilisée
comme contrôle positif et Escherichia coli V517 comme
témoin négatif.
Résultats
CONFIRMATION GÉNOTYPIQUE DU GENRE SALMONELLA
NON TYPHI PAR PCR
Toutes les souches isolées sont négatives pour les caractères
suivants (lactose, Uréase et oxydase) et sont testées par le
système API20E et ont été amplifiées par une PCR utilisant
les amorces spécifiques déjà décrit. Les résultats montrent
Revue Méd. Vét., 2010, 161, 3, 127-132
GÈNES DE VIRULENCES ET ANTIBIORÉSISTANCE DES SALMONELLA CHEZ LA DINDE- MAROC
que toutes ces souches possèdent une bande commune avec
la souche de contrôle testée Salmonella Typhimurium pentarésistant type (ACTeStSul) d’une taille d’environ 1kb
(Figure1).
129
étude a montré une prévalence globale du genre Salmonella
de 20,31 (39/192) dans l’ensemble des prélèvements analysés.
Sur les 39 souches de Salmonella isolées, 15 sérotypes différents ont été identifiés, parmi lesquels S. Kentucky (20,5 %)
était le plus fréquent, suivi par, S. Corvallis (15,3 %), S.
Muenster (12,8 %), S. Newport (12,8 %), S. Typhimurium
(5,1 %) et 1 % pour les autres sérovars (Tableau 1,2). Sept
souches sont non typables à notre niveau au laboratoire.
ETUDE DE LA SENSIBILITÉ AUX ANTIBIOTIQUES
FIGURE 1 : Electrophorèse sur gel d’agarose des amplicons générés par
des PCR simples de Salmonella utilisant des amorces spécifiques
des gènes de virulence. Ligne 1, 1-Kb Salmonella amplicon ;
ligne 2, 669-bp spvC amplicon ; ligne 3,275-bp invA amplicon ;
ligne 4, 173-bp h-li amplicon ; ligneT1, T2, T3 et T4 S.
Typhimurium penta-résistant type (ACTeStSul) et M : 100-bp
DNA ladder.
La détermination du phénotype de résistance a été obtenue
par la méthode de diffusion vis-à-vis de 14 antibiotiques testés,
selon les recommandations du CA-SFM. Les résultats ont
montré que 82 % (32/39) des souches sont résistantes au
moins à un antibiotique testé. Les Salmonella non Typhi
multi-résistantes constituent 51,3 % (20/39) de l’ensemble
des souches isolées. Toutes ces souches sont sensibles aux
céphalosporines de troisième génération. Neuf Salmonella
Kentucky présentent un haut niveau de résistance aux quinolones
avec des CMI de 4 à 16 µg/mL avec une double mutation
dans le gène gyrA (Ser83Phe et Asp87Asn) et une mutation
dans le gène parC (The57Ser) [6].
SÉROTYPES DE SALMONELLA ISOLÉS
Les résultats des identifications biochimiques et moléculaires des souches de Salmonella non Typhi isolées lors de
cette étude sont rapportés dans les tableaux 1 et 2. Cette
Sérotype
S. Muenster
S. Muenster
S. Muenster
S. Muenster
S. Muenster
Date
13.07.05
27.07.05
11.11.05
21.12.05
23.11.06
Profil-Résistance
Na
Sul
Sul
Sul
Sul
S. Newport
S. Newport
S. Newport
S. Newport
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
Non
Non
13.07.05
03.01.06
06.12.06
20.12.06
12.04.07
12.04.07
22.05.07
29.05.07
12.06.07
21.06.07
24.01.08
22.02.08
19.07.05
19.07.07
Te; Na
A; Cf; Te; Na
Te; Na
Sul
A;Te;Na
Sul; Na
A;Cf;Amc;C;Te;St;Sul
A;Cf;Amc;Te;Sul;Na; Cip
A;Cf;Amc;Te;St;Sul;Na; Cip
A;Cf;Amc;C;Te;St;Sul;Na;Cip
A;Cf;Amc;Te;St;Gm;Sul;Na;Cip
A;Cf;Amc;Te;Sul;Na; Cip
Te
Sensible
PLASMIDES
Toutes les Salmonella non Typhi isolées au cours de cette
étude (n=39) ont fait l’objet d’une analyse du contenu
Sérotype
S. Corvallis
S. Corvallis
S. Corvallis
S. Corvallis
Non
S. Mm’bandaka
S. Branderup
S. Aalbert
S. Typhimurium
Non
S. Bredeney
S. Hadar
S. Gallinarum
S. Derby
S. Kiel
S. Altona
Non
S. Infantis
Non
Non
Date
13.07.05
21.07.05
04.07.06
04.07.07
05.07.07
23.03.06
09.01.07
13.07.05
01.11.05
04.07.07
03.12.06
04.10.07
08.09.08
24.03.07
12.07.05
21.0705
28.07.05
17.08.05
27.06.07
22.08.07
Profil-Résistance
Sul
Sensible
S;Sul
A;Te;C;St;Sul
Sensible
Cf;Sul
Sul
Cf;Te;St;Sul;Na
A;Cf;Te;Sul;Na
Sul
Sul
Amc;Cf;St;Te;Sul;Na
Cf;Sul
A;Cf;Amc;Sul
Sensible
Sensible
A;Cf
Sensible
Sul
Sensible
A: amoxicilline; Cf: céfalotine;Te: tetracycline; Amc: amoxicilline + acide clavulanique; St: streptomycine; C: chloramphénicol; sul: sulfonamides;
Gm: gentamycine; Na: acide nalidixique; Cip: ciprofloxacine.
Non: nontypable.
TABLEAU I : Profil de sensibilité aux antibiotiques des 39 Salmonella isolées.
Revue Méd. Vét., 2010, 161, 3, 127-132
130
BOUCHRIF (B.) ET COLLAORATEURS
Sérotype
S. Muenster
S. Muenster
S. Muenster
S. Muenster
S. Muenster
S. Newport
S. Newport
S. Newport
S. Newport
Plasmides
(Kbp)
2
2
2
2;1;3;3,6
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
S. Kentucky
Non
Non
3; 3,6
54
-
Résultat de PCR
invA spvC h-li
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
-
Sérotype
Plasmides
(Kbp)
S. Corvallis
54;90
S. Corvallis
54
S. Corvallis
S. Corvallis
Non
S. M’bandaka
S. Branderup
2;3
S. Albert
2;3
S. Typhimurium
3;90
Non
S. Bredeney
S. Hadar
2, 3;7
S. Gallinarum
54
S. Derby
90
S. Kiel
S. Altona
54; 90
Non
S. Infantis
Non
Non
-
Résultat de PCR
invA spvC h-li
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
TABLEAU II : Les résultats des PCR des gènes de virulence invA, spvC et h-li de 39 Salmonella étudiées.
plasmidique utilisant la méthode rapide de Kado et Liu déjà
décrite. Les résultats ont montré que 61,5 % (24/39) ne portent
pas de plasmides alors que 38,5 % (15/39) hébergent des
plasmides de taille allant de 2 – 90 kbp. Les résultats sont
rapportés dans le tableau 2.
GÈNES D’INVASION ET DE VIRULENCE
Les résultats de l’amplification par PCR utilisant les amorces
spécifiques ont généré des produits de la taille prévue. Les
gènes d'invasion invA et gènes de virulences spvC et h-li présentent des tailles d'environ 275 pb, 669 bp et 173 pb, respectivement, tel que déterminé par électrophorèse sur gel d'agarose
(Figure1).
Toutes les souches (n=39) de Salmonella étudiées étaient
positives pour le gène d’invasion invA. Les sérotypes Muenster,
Newport, Corvallis, Albert, Bredeney, Hadar, Derby, Kiel,
Altona et Infantis sont tous négatifs pour les deux gènes de
virulence spvC et h-li, alors que 50 % (4/8) du sérotype Kentucky
est positif pour le gène h-li. Seule le sérotype Gallinarum qui
porte un plasmide de taille de 54 kb est positif pour le gène de
virulence spvC.
Discussion
L’objectif de ce travail consiste à une évaluation du degré
de contamination de la viande hachée crue de dinde par
Salmonella, les sérotypes circulant et la prévalence des gènes
d’invasion et de virulence. Les résultats ont montré qu’environ
20,31 % des échantillons de viande hachée crue de dinde
analysés ont été détectés positifs pour la présence de
Salmonella (tableau I).
La prévalence des troupeaux de reproduction positifs pour
Salmonella au sein de la Communauté Européenne était de
13,6 %, alors que la prévalence des troupeaux d’engraissement
positifs pour Salmonella était de 30,7 % [4].
Le résultat obtenu de l’analyse du sérotypage a montré une
distribution très hétérogène des sérotypes de Salmonella
dans la viande hachée crue de dinde. Cette distribution hétérogène suggère que la plupart des sérotypes de Salmonella se
transmettaient essentiellement parmi les troupeaux de dindes
d’engraissement avant l’abattage et la préparation de la viande
hachée crue de dinde. De même cette distribution hétérogène
des sérotypes de Salmonella a été mise en évidence au cours
d’une étude effectuée sur les facteurs associés à la prévalence
des troupeaux infectés par Salmonella et distribution des
sérotypes de Salmonella dans les états membres de l’Union
Européenne en 2008 [4]. Par contre en Australie, dans une
étude étalée sur 262 échantillons de viande de dinde, 0,4 %
(1/262) est positif pour Salmonella sérovar Heidelberg [13],
cette faible fréquence peut être attribuée au niveau d’hygiène
au cours du processus d’abattage et de la préparation de la viande.
Au Maroc, la corrélation est apparemment faible entre les
sérotypes de Salmonella présents chez les dindes et les sérotypes isolés à partir de cas de salmonellose humaine. Ce qui
suggère que le rôle de la dinde en tant que source d’infections
humaines à Salmonella est plus faible que celui de certaines
autres espèces animales comme Entéritidis, Typhimurium et
Revue Méd. Vét., 2010, 161, 3, 127-132
GÈNES DE VIRULENCES ET ANTIBIORÉSISTANCE DES SALMONELLA CHEZ LA DINDE- MAROC
Gallus gallus (chez poulets de chair et poules pondeuses) [4].
Seule Salmonella Kentucky résistante à la ciprofloxacine a
été isolée en 2006 dans les selles d’un enfant de huit mois
admis au service pédiatrie à l’hôpital universitaire Ibn-Rochd
à Casablanca pour une diarrhée aiguë fébrile et qui présentait
un même pulsotype d’électrophorèse en champ pulsé utilisant
l’enzyme de restriction XbaI, que celle isolée dans la viande
hachée crue de dinde [6]. Ces dernières années, l’isolement
des Salmonella Kentucky dans différentes denrées alimentaires
(viande hachée crue de dinde, fruits de mers et produits à
bases d’œufs), constitue probablement un réservoir de dissémination de ces Salmonella Kentucky. La contamination
humaine, causée par ces Salmonella Kentucky peut avoir des
conséquences lourdes sur la santé publique.
Les résultats obtenus dans cette étude ont montré que 82 %
(32/39) des souches sont résistantes au moins à un antibiotique testé, alors que les souches multi-résistantes constituent
51,3 %, présentant des résistances à l’amoxicilline (n=12), à
la tétracycline (n=15), au chloramphénicol (n=2), aux sulfonamides (n=25), à l’acide nalidixique (=14) et à la ciprofloxacine (n=5) (Tableau1). L’analyse de la sensibilité aux
antibiotiques n’a révélé aucune bêta-lactamase à spectre
étendu (BLSE). Toutes ces souches étudiées sont sensibles
aux céphalosporines de troisième génération. Neuf Salmonella
Kentucky présentent un haut niveau de résistance aux quinolones
avec des CMI de 4 à 16 µg/mL avec une double mutation
dans le gène gyrA (Ser83Phe et Asp87Asn) et une mutation
dans le gène parC (The57Ser) [6].
Au Maroc, peu d’études ont été réalisées sur la résistance
des Salmonella non Typhi. En 1995 toutes les souches isolées
au centre hospitalier universitaire Ibnou Sina de Rabat entre
1980 et 1991 présentaient un bas niveau de résistances aux
antibiotiques [14], par contre en 1998 une bêta-lactamase à
spectre étendu type TEM-3 a été isolée chez Salmonella
Typhimurium au centre hospitalier Ibn Rochd Casablanca
[2]. En 2008 les résistances aux quinolones, surtout à la
ciprofloxacine, l’antibiotique de première intention dans les
traitements des salmonelloses chez les adultes, ont été mise
en évidence chez le sérotype Kentucky et en 2009 des résistances aux céphalosporines de 3ème générations type BLSE
SHV-12 portées par un plasmide conjugatif d’environ 60Kbp
réplicon IncI et Cmy-2 portée par un plasmide de taille environ 210-kb non conjugatif réplicon IncA/C respectivement
chez Salmonella Typhimurium et Salmonella Newport [7].
L'examen par la réaction d'amplification en chaîne par la
polymérase (PCR) a indiqué la présence du gène de virulence
invA dans tous les sérovars isolés de la viande hachée crue
de dinde. Abouzeed et al, a rapporté les mêmes résultats du
gène invA en analysant, 75 Salmonella isolées des viandes
de dinde [1]. Seul le sérotype Gallinarum qui porte un plasmide de taille environ 54 Kb est positif pour le gène spvC,
alors que quatre sérotypes: Derby (n=1), Corvallis (n=1),
Altona (n=1) et Typhimurium (n=1), malgré qu’ils possèdent
un plasmide d’environ 90 Kb décrit dans la littérature
comme un plasmide de virulence, sont négatifs, pour le gène
spvC. Sept sérotypes sont positifs pour le gène de flagelline
h-li qui est souvent utilisé avec succès en liaison avec les
gènes pho et hin pour la détection de l’ADN spécifique des
Salmonella mobiles [12]. Le gène h-li est impliqué dans le
Revue Méd. Vét., 2010, 161, 3, 127-132
131
contrôle de changement de phase et de la motilité des
Salmonella. Dans cette étude, la PCR simple n’a pu détecter
que 18 % (7/39) de gène h-li avec une taille de l’amplicon de
173 bp. L’absence du gène h-li chez 82 % des cas étudiés
suggère soit l’absence de l’antigène flagellaire ou le nombre
des exemplaires sont trop faible pour être amplifié chez ces
espèces. Aux états Unis d’Amérique, sur étude de 29 souches
de Salmonella étudiées, sont toutes négatives pour le gène hli utilisant la PCR multiplexe [12]. Une autre étude réalisée
sur la recherche du gène spvC chez différents sérovars de
Salmonella isolés à partir des bovins et des produits pathologiques humains par PCR a révélé une fréquence de 28 %
(21/75) des isolats et aucun des sérotypes de Salmonella
[Heidelberg (n=17), Infantis (n=10), Schwarzengrund
(n=11) ] isolé du poulet de chair n’a été positif pour le gène
spvC [1].
Conclusion
Plus de soixante pour cent (60 %) des toxi-infections dans
le monde sont dues à Salmonella. Les salmonelloses sont de
ce fait devenues un problème de santé publique ce qui justifie
l'implication de l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS)
dans la lutte contre les salmonelloses [5].
Au Maroc, les Toxi-Infections Alimentaires à Salmonella
liés aux viandes hachées crues de dinde n’ont jamais été notifiées,
mais la forte demande de ces types de viande blanche par la
population et la présence des Salmonella multi-résistantes et
possédant des gènes de virulence constituent un sujet d'inquiétude tant des instances officielles que des consommateurs.
Le contrôle des Salmonella dans le secteur avicole devra
nécessairement faire appel à tous les partenaires du secteur,
réunis dans un plan de lutte intégral, incluant des mesures
hygiéniques, des vaccinations, un choix très sélectif de
matières premières et d’additifs pour les aliments ainsi qu’une
vigilance permanente.
Remerciements
Ce travail est réalisé grâce au soutient de l’Institut Pasteur
du Maroc (IPM). Tous les auteurs tiennent à remercier
Monsieur le Professeur HASSAR Mohammed Directeur de
l’IPM pour son soutien et son aide.
Bibliographie
1. - ABOUZEED Y.M., HARIHARANA H., POPPEB C., KIBENGEA
F.S.B.: Characterization of Salmonella isolates from beef cattle, broiler
chickens and human sources on Prince Edward Island. Comparative
Immunology, Microb. Infect. Dis., 2000, 23, 253-266.
2. - AITMHAND R., SOUKRI A., MOUSTAOUI N., AMAROUCH H.,
ELMDAGHRI N., SIROT D., BENBACHIR M.: Plasmid-mediated
TEM-3 extended-spectrum beta-lactamase production in Salmonella
Typhimurium in Casablanca. J Antimicrob Chemother., 2002, 49,169-72.
3. - ANONYMOUS: Fisa . Documentations & statistiques., 2008.
4. - ANONYMOUS : Rapport scientifique: Analyse de l’étude de référence sur la prévalence de Salmonella dans les troupeaux de dindes
132
BOUCHRIF (B.) ET COLLAORATEURS
dans l’UE, en 2006-2007. The EFSA Journal / EFSA Scientific
Report., 2008, 198, 1-224.
5. - ANONYMOUS : Salm-Surv G: Un réseau de l'OMS pour la surveillance des maladies d'origine alimentaire. In note d'information
INFOSAN N°6 / Programme Global Salm-Surv de l'OMS., 2005.
6. - BOUCHRIF B., KARRAOUAN B., ENNAJI M. M., TIMINOUNI,
M.: Quinolones-resistant Salmonella spp. in Casablanca - Morocco.
Med Mal Infect., 2008, 38, 615-6.
7. - BOUCHRIF B., LE HELLO S., PARDOS M., KARRAOUAN B.,
PERRIER J.D.G.C., ENNAJI M.M., TIMINOUNI M., WEILL F.X.:
Ceftazidime-Resistant Salmonella enterica, Morocco. Emerging Inf
Dis., 2009, 15, 1693-1694.
10. - GRIMONT PATRICK AD, WEILL F.X. Antigenic Formulae of the
Salmonella serovars: Who Collaborating Centre for Reference and
Research on Salmonella. 2007 9th edition.
11. - KADO C.I., LIU S.T.: Rapid procedure for detection and isolation
of large and small plasmids. J Bacteriol., 1981, 145, 1365-73.
12. - NAYAK R., STEWART R., WANG T., LIN R. F., CERNIGLIA J.,
KENNEY C. E.: Genetic diversity and virulence gene determinants
of antibiotic-resistant Salmonella isolated from preharvest turkey
production sources. Int J Food Microbiol., 2004, 91, 51-62.
8. - CAVALLO J.D., MEYRAN M. : Les salmonelles et leur pathologie:
base bactériologique du traitement. Med Mal Infect., 1992, 22, 331-9.
13. - SIGRID M., PAULSEN P., SMULDERS J.S.M., HILBERT F.:
Antimicrobial resistance profile of five major food-borne pathogens
isolated from beef, pork and poultry. Int J Food Microbiol., 2004.
97, 23-29.
9. - COHEN N., ENNAJI H., HASSAR M., KARIB H.: The bacterial
quality of red meat and offal in Casablanca (Morocco). Mol Nutr
Food Res., 2006. 50, 557-62.
14. - ZOUHDI M., BENOUDA A., ALAOUI M.A., HASSAR M. :
Sensibilité à 10 antibiotiques des Salmonella mineures d’origine
Humaine isolées au Maroc. Biol Infect., 1995, Tome I, N°2.
Revue Méd. Vét., 2010, 161, 3, 127-132