18 FORM 43 Rapport Gobal 2014 1 ANCA

EXPERTISE, PRESTATIONS DE SERVICE ET RELATIONS CLIENTS
QUALITE DES LABORATOIRES MEDICAUX
COMMISSION DE BIOLOGIE CLINIQUE
COMITE DES EXPERTS
EVALUATION EXTERNE DE LA QUALITE
DES ANALYSES EN BIOLOGIE CLINIQUE
RAPPORT GLOBAL DEFINITIF
SEROLOGIE NON INFECTIEUSE – ANCA
ENQUETE 2014/1
ISP-2014/1/Sérologie non infectieuse/23
Expertise, prestations de service et relations clients
Qualité des laboratoires médicaux
Rue J. Wytsman, 14
1050 Bruxelles | Belgique
www.wiv-isp.be
ISSN: 2294-3390
COMITE DES EXPERTS
ISP (secrétariat)
Coordinateur d’enquête:
Dr. Van Campenhout
Remplaçant coordinateur
d’enquête:
Dr. Van Blerk
TEL:
e-mail:
FAX: 02/642.56.45
02/642.55.22
02/642.53.95
[email protected]
TEL:
e-mail:
02/642.53.83
[email protected]
TEL:
016/34.70.09
e-mail:
[email protected]
TEL:
352/488.288.380
e-mail:
[email protected]
TEL:
011/30.97.42
e-mail:
[email protected]
TEL:
02/477.25.07
e-mail:
[email protected]
TEL:
02/764.67.95
e-mail:
[email protected]
TEL:
053/72.47.91
e-mail:
[email protected]
TEL:
02/477.52.01
e-mail:
[email protected]
TEL:
Experts:
Dr. BOSSUYT X.
Dr. HUMBEL R.
Dr. MEWIS A.
Dr. SERVAIS G.
Dr. TOMASI J.P.
Dr. VAN HOOVELS L.
Dr. VERCAMMEN M.
FAX:
016/34.70.42
FAX:
352/488.288.385.
FAX:
011/30.97.50
FAX:
02/477.21.63
FAX:
FAX:
02/764.11.11
053/72.45.88
FAX:
Réunion du comité d’experts: 08/04/2014
Autorisation de diffusion de rapport: Par C. Van Campenhout – Coordinateur d’enquête le 20/05/2014.
Tous les rapports sont également consultables sur notre site web:
https://www.wiv-isp.be/QML/activities/external_quality/rapports/_fr/rapports_annee.htm
TABLE DES MATIERES
INTRODUCTION ............................................................................................................................................. 5
INFORMATION SPECIFIQUE A L’ENQUETE ............................................................................................... 5
NATURE DES ECHANTILLONS .................................................................................................................... 5
PARTICIPATION ............................................................................................................................................. 5
RECHERCHE DES ANCA .............................................................................................................................. 6
RÉSULTATS DE L’ÉCHANTILLON SN/9367 ................................................................................................ 6
IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE - TYPAGE ................................................................................................. 7
IDENTIFICATION DES ANCA............................................................................................................................ 9
RÉSULTATS DE L’ÉCHANTILLON SN/11376 ............................................................................................ 10
IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE – TYPAGE DE L’ASPECT .......................................................................... 10
IDENTIFICATION DES ANCA.......................................................................................................................... 10
DISCUSSION DES RESULTATS OBTENUS POUR LA MISE EN EVIDENCE ET
L’IDENTIFICATION DES ANCA’S .......................................................................................................... 11
RÉSULTATS POUR L’ÉCHANTILLON SN/9367 ........................................................................................ 11
IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE – IDENTIFICATION DE L’ASPECT : ................................................. 11
IDENTIFICATION DES ANCA PAR EIA ET IFI: ............................................................................................ 11
RÉSULTATS POUR L’ÉCHANTILLON SN/11376 – INDIVIDU SAIN ......................................................... 12
IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE – IDENTIFICATION DE L’ASPECT: .................................................. 12
IDENTIFICATION DES ANCA PAR EIA ET IFI: ............................................................................................ 12
PROTOCOLES PATIENTS .......................................................................................................................... 12
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DETECTION ET IDENTIFICATION DES ANCA
INTRODUCTION
Information spécifique à l’enquête
Les échantillons de l’enquête 2014/1 ont été envoyés le 10 mars 2014. L’enquête a
été clôturé le 24 mars 2014. Les résultats ont été discutés et validés lors de la
réunion du comité experts le 8 avril 2014.
Le rapport préliminaire a été publié sur notre site web le 20/05/2014.
Nature des échantillons
A l’occasion de l’enquête 2014/1, tous les participants ont reçu deux échantillons
liquides.
L’échantillon SN/9367 est fourni par le Prof. R. Humbel (Laboratoire
Luxembourgeois d’Immuno-Pathologie) et provenait d’une patiente atteinte d’une
« Granulomatose avec polyangéite (Wegener’s) ».
Nous remercions le Prof. Humbel qui nous a procuré l’échantillon et donné les
renseignements cliniques nécessaires.
L’échantillon SN/11376 est fourni par L’ISP et provenait d’un individu sain.
Les échantillons SN/9367 et SN/11376 ont été préalablement approuvés par
les membres du comité d’experts.
Participation
Deux laboratoires luxembourgeois et 84 laboratoires belges ont participé à cette
enquête.
Lors de cette enquête, il a été demandé aux laboratoires de nous fournir aussi le
rapport/protocole patient et ceci pour vérifier le type de protocole envoyé aux
prescripteurs.
Dans le cadre du « European Autoimmune Standardisation Initiative-EASI » en
même temps que cette enquête, les laboratoires ont été invités à répondre à un
questionnaire concernant la stratégie de recherche et de typage des anticorps
ANCA, aussi bien que l’identification et la façon de rapporter aux prescripteurs
etc…
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RECHERCHE des ANCA
Résultats de l’échantillon SN/9367
L’échantillon provenait d’une patiente diagnostiquée « Granulomatose
avec polyangéite (Wegener’s) » avec présence d’un aspect c-ANCA et des
anticorps anti-PR3.
Pour cet échantillon :
- 74 laboratoires ont recherché la présence des ANCA par immunofluorescence
indirecte (IFI). (screening + typage de l’aspect)
- 7 laboratoires qui n’ont effectué qu’un screening pour la recherche des
ANCA ont tous utilisé un EIA pour l’identification de ces anticorps.
-12 laboratoires n’ont pas effectué un typage de l’aspect par IFI mais
uniquement une identification par un test EIA (ELISA/FEIA/DOT) ou IFI.
- 7 laboratoires n’ont pas effectué une identification des ANCA, mais
uniquement un typage de l’aspect par IFI.
67/74 laboratoires qui ont fait la recherche des ANCA par IF (screening et
typage), ont effectué une identification de ces anticorps par des techniques EIA.
Le tableau ci-dessous montre les combinaisons des tests effectués par les
laboratoires :
SN/9367
EIA effectué
EIA non effectué
TOTAL
IFI
typage de l’aspect
effectué
IFI
typage de l’aspect TOTAL
non effectué
67
12
79
7
0
7
74
12
86
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Immunofluorescence indirecte - typage
66/67 laboratoires ayant effectué un typage par IFI, ont tous observé un aspect
c-ANCA ; 1 laboratoire a rapporté comme négatif l’aspect c-ANCA avec
interférence par des AAN. (aspect finement moucheté du noyau- interférence par
AAN).
18 de ces laboratoires ont aussi confirmé l’aspect c-ANCA par un test IFI sur des
cellules fixées en formol.
7/86 laboratoires ont uniquement effectué un typage par IFI et pas d’EIA; ils ont
tous obtenu un aspect c-ANCA.
Les 7 laboratoires qui ont uniquement effectué un test screening en IFI, ont tous
identifié la présence des anticorps anti-PR3 par des techniques EIA. Un
laboratoire a également rapporté la présence des anticorps anti-MPO (0.3 IU/mL;
cut-off = 0.2 IU/mL).
54/67 laboratoires ont mentionné le titre dont 53 également le cut-off.
7 laboratoires ont uniquement rapporté la valeur du cut-off, mais pas de titre.
La dispersion des valeurs des cut-off est le plus importante pour les utilisateurs
des réactifs d’Euroimmun. (1/10 - 1/40).
La table ci-dessous illustre le nombre d’utilisateurs pour chaque fabricant ainsi
que l’aspect mentionné et le cut-off du titre rapporté par les utilisateurs :
Fabricant
N
Aspect
Immunoconcepts
BioRad
DiaSorin
Euroimmun
Inova
Menarini
Launch Diagn. Ltd
Total
1
1
1
29
23
7
5
c-ANCA
c-ANCA
c-ANCA
c-ANCA (28)*
c-ANCA
c-ANCA
c-ANCA
Cut-off (titre)
1/10(1)
1/20(1)
1/20(1)
1/10 (8) - 1/20 (13) – 1/40 (2)
1/20(7) – 1/40(9)
1/20(3) – 1/40(3)
1/20(4) – 1/40(1)
67
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Les distributions des titres obtenus pour c-ANCA sont reprises ci- dessous par
fabricant si le nombre de participants est >4.
EUROIMMUN
N=23
INOVA
7
5
6
>1/10 (1)
>1/20 (1)
>=1/160(1)
>1/20 (2)
>=1/40 (1)
>1/320 (1)
>=1/640(1)
>1/2560(1)
4
N Labs
N Labs
5
4
3
N=17
3
2
2
1
1
0
0
1
21/20 31/40 41/80 1/160
5
61/320 71/64081/1280
9
Titer/Titre
MENARINI
5 1/160
N=6
6 1/320 7 1/640 8 1/1280 9
Titer/Titre
LAUNCHE DIAGNOSTICS N=5
3
3
2
Nb Labs
Nb labs
>1/320 (1)
1
0
2
1
0
4
1/80
5 1/160
6 1/320
7
1/640
8
6
1/320
Titer /Titre
7
1/640
8
Titer/Titre
La dispersion des titres est importante pour les réactifs d’Euroimmun et de
Inova.
Titres pour les fabricants avec moins de 5 participants :
•
•
•
BIORAD : 1/320 (1)
DIASORIN : 1/160 (1)
IMMUNOCONCEPTS : 1/320 (1)
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Identification des ANCA
- 79/86 laboratoires ont réalisé l’identification des ANCA (PR3 ou MPO) avec une
EIA ou par IFI
- 75/79 mentionnent la présence des anticorps anti-PR3. 3 de ces laboratoires
ont également mentionné une faible présence des anticorps anti-MPO.
- 4/79 laboratoires mentionnent l’absence des anticorps anti-PR3 ; parmi
eux, 2 ont par contre rapporté la présence des anticorps anti-MPO (encodage
erroné) et 2 n’ont obtenu aucun résultat positif.
Le tableau ci-dessous illustre les résultats obtenus pour anti-MPO et anti PR3:
SN 9367
MPO Positif
MPO Négatif
3
72
PR3 Négatif
2
2
Total
5
74
PR3 Positif
La table ci-dessous illustre les résultats obtenus avec les diverses techniques
EIA (ELISA/FEIA/DOT) et IFI.
TOTAL
ELISA
FEIA/
CLIA
DOT
IFI
Anti
PR3
Anti
MPO
NEG
DiaSorin
1
1
0
0
0
0
0
1
AESKU
2
0
0
2
0
2
0
0
Euroimmun
16
5
0
8
3
1*
0
Phadia
42
0
42
0
0
1°-1’
0
Inova
Biomedical
Diagnostics
7
6
1
0
0
16
39
(+1)*
7
0
0
6
0
0
6
0
6
0
0
Alphadia
4
0
0
4
0
4
1*
0
2
2
0
0
0
1
1
0
Menarini
1
1
0
0
0
1
0
0
TOTAL
81§
15
43
20
3
77§
5
1
Fabricant
Diesse Diagnostica
Senese
* faiblement positif
° 1 résultat MPO = 0.3; cutoff = 0.2
’ 1 résultat MPO positif et PR3 négatif
§ 2 labos ont utilisé 2 techniques
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Résultats de l’échantillon SN/11376
L’échantillon provenait d’un individu sain, avec absence d’autoanticorps.
Immunofluorescence Indirecte – typage de l’aspect
2/86 laboratoires ont rapporté pour cet échantillon une positivité pour présence
des ANCA ;
- 1 laboratoire a répondu c-ANCA
(erreur d’encodage- protocole patient étant correct)
- 1 laboratoire mentionne un aspect faible p-ANCA, obtenu par IFI effectué
sur des cellules fixés en éthanol (pas de titre rapporté ; cut-off 1/20);
anti-MPO et PR-3 anticorps négatifs.
3/86 laboratoires ont mentionné un aspect « atypique » c.à.d. une fluorescence
péri-nucléaire sur lame éthanol et négatif sur lame formol.
Identification des ANCA
• Pour cet échantillon, seulement 58/86 laboratoires ont effectué une
identification par des techniques EIA. Aucun laboratoire n’a rapporté la
présence des anticorps anti-MPO.
Par contre, 2 laboratoires ont rapporté la présence des anticorps anti-PR3.
Néanmoins les résultats rapportés comme « négatif » sur le protocole de
patient étaient corrects (erreur d’encodage).
Sérologie non infectieuse, rapport global 2014/1. Date de publication: 20/05/2014.
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DISCUSSION DES RESULTATS OBTENUS POUR LA MISE EN
EVIDENCE ET L’IDENTIFICATION DES ANCA’S
Résultats pour l’échantillon SN/9367 - Patiente atteinte d’une
« Granulomatose avec polyangéite (Wegener’s) », avec présence d’un
aspect c-ANCA et des anticorps anti-PR3.
IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE – Identification de l’aspect :
L’immunofluorescence indirecte a été effectué par 74/86 laboratoires
participants :
- 73/74 laboratoires qui ont fait la recherche des ANCA par IFI (dépistage et
typage), ont répondu « positif ».
Parmi les 67 laboratoires qui ont aussi fait le typage des ANCA par IFI, 66 ont
identifié l’aspect c-ANCA, ce qui est en accord avec la pathologie de la
patiente.
Un laboratoire a répondu « négatif » ce qui n’est pas correct vu la pathologie
de la patiente connue avec présence confirmé des anticorps anti PR3.
- Une dispersion importante est observée aussi bien pour les titres obtenus
avec les réactifs d’Euroimmun et Inova, que pour les valeurs de cut-off
d’Euroimmun.
IDENTIFICATION des ANCA par EIA et IFI:
L’identification par des techniques EIA ou IFI a été effectuée par 79/86
participants :
- 75/79 laboratoires ont rapporté la présence des anticorps anti-PR3.
Parmi eux, 3 laboratoires ont également mentionné une faible présence des
anticorps anti-MPO.
- 4/79 laboratoires n’ont pas retrouvé les anti-PR3.
Parmi eux 2 ont mentionné la présence des anticorps anti-MPO
(erreur d’encodage) vu que le protocole du patient mentionne la présence
d’anti-PR3.
2 autres laboratoires ont répondu « négatif » pour la présence des anticorps
anti-PR3 et anti-MPO.
Sérologie non infectieuse, rapport global 2014/1. Date de publication: 20/05/2014.
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11/14
Résultats pour l’échantillon SN/11376 – Individu sain
IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE – identification de l’aspect:
L’immunofluorescence indirecte a été effectuée par 74/86 des participants.
L’échantillon provenait d’un individu sain, avec absence d’autoanticorps.
1 laboratoire qui a fait la recherche par la technique IFI, a répondu un aspect
c-ANCA (et présence des anti-PR3). Il s’agit d’une erreur d’encodage vu que le
protocole du patient mentionne « négatif » pour la présence des ANCA.
1 laboratoire a répondu “aspect p-ANCA faiblement positif” (l’identification
pour anti-MPO et PR3 étant négative).
IDENTIFICATION des ANCA par EIA et IFI:
L’identification par des techniques EIA ou IFI a été effectuée par 58/86 des
laboratoires :
2/58 laboratoires ont rapporté la présence des anticorps anti-PR3, par contre
les comptes rendus mentionnent correctement “négatif” pour présence des anti
MPO et anti-PR3. (erreur d’encodage)
LES COMPTES RENDUS
Lors de cette enquête, les laboratoires ont été demander de nous envoyer aussi
leur protocole patient pour les deux échantillons.
69/86 (80%) de laboratoires nous ont envoyé le protocole patient pour les deux
échantillons de cette enquête.
Sérologie non infectieuse, rapport global 2014/1. Date de publication: 20/05/2014.
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12/14
COMMENTAIRES
Granulomatose avec polyangéite (de Wegener) : nouveau nom
pour la granulomatose de Wegener
En novembre 2010, l’ACR (American College of Rheumatology), l’ASN (American
Society of Nephrology) et la EULAR (European League Against Rheumatism) ont
décidé, par consensus, d’adopter une nomenclature des vascularites dénuée
d’éponymes. Le terme « granulomatose de Wegener » a ainsi notamment été
remplacé par la dénomination « granulomatose avec polyangéite », en abrégé
« GPA ».
Pour permettre une transition sans heurt et éviter toute confusion, il a été
proposé de reprendre pendant quelques années l’appellation originale de la
maladie
dans
la
nouvelle
nomenclature.
Cela
se
traduit
donc
par « granulomatose avec polyangéite (de Wegener) ».
Les laboratoires qui utilisent cette terminologie dans des comptes rendus,
commentaires, procédures et autres sont invités à adapter celle-ci en
concertation avec les rhumatologues, si cela n’a pas encore été fait.
Falk RJ, Gross WL, Guillevin L, et al. Granulomatosis with polyangiitis (Wegener's): an
alternative name for Wegener's granulomatosis. Ann Rheum Dis 2011; 70:704.
Les ANCA dans le cadre du diagnostic de l’inflammation
« médiée par les neutrophiles » – nouvelles évolutions
Les anticorps anti-cytoplasme des polynucléaires neutrophiles (abréviation :
ANCA) sont associés aux inflammations des petits vaisseaux médiées par les
neutrophiles. Leur présence est caractéristique de certaines vascularites
systémiques idiopathiques, à savoir les vascularites associées aux ANCA (AAV)
comme la granulomatose avec polyangéite (GPA – de Wegener), la polyangéite
microscopique (PAM) et, dans une moindre mesure, le syndrome de ChurgStrauss (SCS).
Conformément aux directives publiées (Ann Rheum Dis 2009;68:310-317), on
obtient une spécificité diagnostique optimale en associant la technique
d’immunofluorescence indirecte (C-ANCA/P-ANCA) à la détermination de la
spécificité antigénique (PR3/MPO) des anticorps éventuellement présents.
Si la spécificité antigénique ne permet pas toujours de différencier les
vascularites associées aux ANCA, on peut néanmoins affirmer que la présence
des anticorps de type C-ANCA/PR3-ANCA est le plus souvent associée à la GPA
alors que les anticorps de type P-ANCA/MPO-ANCA sont le plus souvent
détectés en cas de PAM et de SCS.
Sérologie non infectieuse, rapport global 2014/1. Date de publication: 20/05/2014.
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13/14
Nous attirons votre attention sur le fait qu’un aspect C-ANCA n'est pas
obligatoirement associé à la présence des anticorps anti-PR3.
Dans la maladie de Churg-Strauss les anti-MPO peuvent aussi être associés à
un aspect C-ANCA.
Les techniques les plus utilisées sont l’immunofluorescence indirecte (IFI) et les
méthodes conventionnelles de type ELISA, line/dot immunoassays qui ont
recours à des systèmes de détection colorimétriques/enzymatiques. Les
systèmes automatisés font usage tantôt des fluoroenzyme-immuno-assays
(FEIA) tantôt des chemiluminiscent-immuno-assays (CIA). La plupart de ces
techniques utilisent des antigènes (PR3 ou MPO) fixés sur un support. Les
anticorps éventuellement présents peuvent alors s’y lier et leur présence révélée
dans une seconde étape.
L’immunofluorescence indirecte (IFI) sur granulocytes fixés à l’éthanol présente
une sensibilité élevée
mais une faible spécificité qui est principalement
imputable à la présence de P-ANCA non dirigés contre la MPO (par exemple en
cas de maladie inflammatoire chronique de l’intestin (MICI) ou d’interférence
des anticorps anti-nucléaires (AAN).
Par rapport à l’IFI, les tests ELISA présentent généralement une sensibilité plus
faible et une meilleure spécificité. La pureté et la nature des antigènes utilisés
(recombinant versus natifs /utilisation de peptides linéaires) sont des facteurs
permettant d’expliquer les différences parfois importantes que l’on peut
rencontrer entre les différents tests. Une faible sensibilité peut aussi parfois
s’expliquer en partie par la destruction ou la séquestration d’épitopes
conformationnels lors de la fixation de l’antigène sur les supports et l’utilisation
de peptides linéaires.
L’emploi de techniques de type « Capture EIA » ou « Anchor EIA », qui conservent
mieux la structure antigénique, permet d’améliorer la sensibilité, sans perdre de
la spécificité.
La possibilité de calibrer les différents systèmes grâce à la mise à disposition de
matériel de référence (CDC PR3-ANCA Human Reference Serum #16 et CDC
MPO-ANCA Human Reference Serum #15 – exprimé en unités
internationales IU/mL) ouvre la voie à une interprétation plus objective des
résultats obtenus particulièrement en cas de discordance entre les tests.
FIN
© Institut Scientifique de Santé Publique, Bruxelles 2014.
Ce rapport ne peut pas être reproduit, publié ou distribué sans l’accord de l’ISP.
Sérologie non infectieuse, rapport global 2014/1. Date de publication: 20/05/2014.
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