RMV 10:Revue 08-09.qxd - Revue de Médecine Vétérinaire

Premières identifications de Leishmania
infantum MON-80 chez le chien en Algérie
et en Tunisie
R. BENIKHLEF1, K. AOUN2*, K. BEDOUI3, Z. HARRAT1, A. BOURATBINE2
Service d’Eco-épidemiologie Parasitaire, Institut Pasteur d’Alger, Dely Ibrahim 16 047 Alger, ALGERIE.
Laboratoire de recherche «Parasitoses émergentes» LR 05-SP-03, Institut Pasteur de Tunis, 13 place Pasteur, B 74, 1 002 Tunis, TUNISIE.
3
Service Vétérinaire et d’Hygiène alimentaire, Ministère de l’Intérieur, Avenue Habib Bourguiba, 1001 Tunis, TUNISIE.
1
2
* Auteur chargé de la correspondance : [email protected]
RÉSUMÉ
Cette étude présente l’identification, pour la première fois, de Leishmania
infantum zymodème MON-80 chez 6 chiens provenant d’Algérie et de
Tunisie par la méthode de migration électrophorétique comparatives des
iso-enzymes parasitaires. Ce variant enzymatique ayant déjà été signalé
chez l’homme lors de leishmanioses viscérales et cutanées en Europe du sud
et au Maghreb (Algérie et Tunisie), ces résultats viennent renforcer le rôle
du chien comme réservoir principal du complexe Leishmania infantum.
Mots-clés : Leishmaniose, Leishmania infantum zymodème MON-80, Algérie, Tunisie, iso-enzymes, chien.
SUMMARY
First identifications of Leishmania infantum MON-80 in dogs in
Algeria and Tunisia
This study presents for the first time the identification of Leishmania infantum zymodeme MON-80 in 6 dogs stemming from Algeria and Tunisia
using the method of comparative electrophoresis migration of the parasite
iso-enzymes. As this enzymatic variant has been already described in
humans with cutaneous and visceral forms of leishmaniasis in south Europe
and in the Maghreb (Algeria and Tunisia), these observations reinforce the
role of the dog as the principal reservoir host for Leishmania infantum complex.
Keywords: Leishmaniasis, Leishmania infantum zymodeme MON-80, Algeria, Tunisia, iso-enzymes, dog.
Introduction
Depuis sa première identification chez l’homme, en
Espagne en 1989 chez un patient atteint de leishmaniose viscérale (LV) [13], Leishmania (L.) infantum MON-80 est
régulièrement identifié en Méditerranée aussi bien au cours
de LV que de leishmaniose cutanée (LC) [1, 4, 6, 7, 10].
L’incidence des isolats humains de ce zymodème semble
plus importante en Algérie et en Tunisie [1, 7], où LV et LC
co-existent au nord et au centre des deux pays. Cependant,
malgré le nombre élevé d’isolements chez le chien dans les
différents pays d’endémie et l’identification de plusieurs
variants iso-enzymatiques canins du complexe L. infantum
dont les zymodèmes MON-1, MON-34, MON-37, MON-77
et MON-108 [7, 8, 13], jamais L. infantum MON-80 n’a été
identifié dans cette espèce « réservoir » [10]. Cette étude présente les premiers isolements de L. infantum MON-80 chez
le chien, conjointement en Tunisie et en Algérie.
algérienne, âgés de 3 à 7 ans, ont présenté des signes cliniques fortement évocateurs de leishmaniose (amaigrissement, asthénie, dépilation, hypertrophies ganglionnaires,
onychogriffose). Le diagnostic de leishmaniose a été confirmé
par sérologie par un test d’immunofluorescence indirecte
(IFI) dont le seuil de positivité est de 1/80 (Tableau I).
L’isolement des souches a été établi dans le cadre du diagnostic biologique ou lors d’enquêtes épidémiologiques
concernant la maladie par hémoculture sur milieu NovyNicolle-Mac-Neal (NNN) [11]. Brièvement, les échantillons
de sang total prélevé sur citrate ont été centrifugés pendant
10 minutes à 4°C à 2 500 g et la couche leucocytaire obtenue
a été ensemencée sur le milieu NNN. Les milieux de culture
ainsi inoculés ont été incubés à 24°C puis examinés et repiqués
toutes les 2 semaines. Une culture a été considérée positive
lorsque des promastigotes de Leishmania ont été mis en évidence à l’examen microscopique de la phase liquide du milieu.
IDENTIFICATION DES LEISHMANIES
Matériel et Méthodes
ANIMAUX ET ISOLATS
Dans cette étude, 6 chiens (4 bergers allemands, 1 Staffordshire et 1 Epagneul), 3 d’origine tunisienne et 3 d’origine
Le typage des Leishmanies a été effectué par la méthode
de migration électrophorétique des iso-enzymes parasitaires
décrite par RIOUX et al. sur la base de 15 systèmes enzymatiques [15]: malate déshydrogénase (MDH) EC1.1.1.37;
enzyme malique (ME) EC1.1.1.40; isocitrate déshydrogénase
Revue Méd. Vét., 2009, 160, 10, 460-462
LEISHMANIA INFANTUM MON-80 CHEZ LE CHIEN EN ALGÉRIE ET TUNISIE
N° chien
1
2
3
4
5
6
Origine
Alger (Algérie)
Azazga (Algérie)
Alger (Algérie)
Tunis (Tunisie)
Tunis (Tunisie)
Tunis (Tunisie)
Age (an)
Race
4
BA
3
BA
5
BA
3
Epagneul
7
BA
7
Staffordshire
Signes cliniques
Amaigrissement, Lésions cutanées
Adénopathie, Dépilations, Kérato-conjonctivite
Amaigrissement
Amaigrissement, Adénopathie
Amaigrissement, Adénopathie, Kératite
Amaigrissement, Adénopathie, Epistaxis
461
IFI1
640
80
80
400
1 600
1 600
BA : berger allemand ; IFI : immunofluorescence indirecte.
Titre d’anticorps en immunofluorescence indirecte.
1
TABLEAU I : Donnés épidémiologiques, cliniques et biologiques des six chiens étudiés.
(ICD) EC1.1.1.42; 6phosphogluconate déshydrogénase (PGD)
EC1.1.1.44; glucose-6-phosphate déshydrogénase (G6PD)
EC1.1.1.49; glutamate déshydrogénase (GLUD) EC1.4.1.3;
NADH diaphorase (DIA) EC1.6.2.2; purine nucléoside
phosphorylase (NP1) EC2.4.2.1; purine nucléoside phosphorylase (NP2) EC2.4.2; aspartate amino-transférases (AST1,
AST2) EC2.6.1.1; phosphoglucomutase (PGM) EC5.4.2.2;
fumarate hydratase (FH) EC4.2.1.2; mannose phosphate isomérase (MPI) EC5.3.1.8 et glucose phosphate isomérase
(GPI) EC5.3.1.9. De plus, une isoélectrofocalisation a été
réalisée selon la méthode de PIARROUX et al. afin d’identifier la purine nucléoside phosphorylase (NP) [12]. Trois
souches marqueurs ont été systématiquement testées lors des
migrations : L. infantum zymodème MON-1 (MHOM/FR/
78/LEM75), L. infantum zymodème MON-24 (MHOM/DZ/
82/LIPA59) et L. infantum zymodème MON-80 (MHOM/
DZ/83/LEM425).
Résultats et discussion
Les 6 isolats de leishmanies ont présenté un profil de
migration électrophorétique des iso-enzymes sélectionnées
complètement identique à celui de la souche marqueur LEM
425 correspondant au zymodème MON-80 (Tableau II). La
leishmanie identifiée est donc L. infantum MON-80. Ce
variant se distingue du zymodème MON-1, beaucoup plus
Souche
LEM 75
LIPA 59
LEM 425
Chien n°1
Chien n°2
Chien n°3
Chien n°4
Chien n°5
Chien n°6
Zymodème
MON-1
MON-24
MON-80
MON-80
MON-80
MON-80
MON-80
MON-80
MON-80
MDH
100
104
104
104
104
104
104
104
104
ME
100
100
100
100
100
100
100
100
100
fréquemment identifié chez le chien [2, 7, 8, 14] par la
migration de 2 électromorphes distincts de la malate déshydrogénase (MDH104) et de la purine nucléoside phosphorylase 1 (NP1130) (tableau II). L. infantum MON-80 s’avère
un zymodème rare mais non exceptionnel chez le chien. En
effet, les six souches identifiées font partie d’un échantillon
de 192 isolats canins (soit une proportion de 3,1 %) typés
dans les laboratoires de l’Institut Pasteur d’Alger (94 isolats)
et de l’Institut Pasteur de Tunis (98 isolats) [1-3, 7]. La proportion d’identification de L. infantum MON-80 chez le chien
est cependant significativement inférieure à celle reportée
chez l’homme dans les 2 laboratoires suscités : 10.3 % sur un
total de 117 isolats humains provenant à la fois de cas de LV
et de LC à L. infantum (p = 0,015) [1, 4, 7]. Il est à préciser
qu’aucune technique de biologie moléculaire ne permet à ce
jour de distinguer les différents zymodèmes du complexe L.
infantum.
Cette identification de L. infantum MON-80 chez le chien
n’est pas surprenante. En effet, le chien est considéré comme
un réservoir principal de L. infantum dont plusieurs variants
(L. infantum MON-1, MON-24, MON-34, MON-77, MON108) ont déjà identifiés chez cet hôte [2, 3, 7, 8, 13, 14]. La
mise en évidence relativement tardive de ce zymodème chez
le chien, 18 ans après le lancement du typage iso-enzymatique des leishmanies [15], serait due d’une part à sa rareté et
d’autre part à d’éventuelles difficultés de son isolement sur
milieu NNN comme c’est aussi le cas du zymodème L.
Electromorphes
ICD PGD G6PD GLUD DIA NP1* NP2 AST1 AST2 PGM FH
100 100 100
100 100 100 100 100 100 100 100
100 100 100
100 100 140 100 100 100 100 100
100 100 100
100 100 130 100 100 100 100 100
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100 100 100
100 100 130 100 100 100 100 100
MPI
100
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100
100
100
100
100
100
100
Les 3 souches marqueurs utilisées sont LEM 75, LIPA 59 et LEM 425.
*Electromorphes permettant de distinguer les zymodèmes MON-1, MON-24 et MON-80 de L. infantum
TABLEAU II : Identification des souches de Leishmanies isolées sur les 6 chiens étudiés par migration électrophorétique comparative des
iso-enzymes.
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GPI
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100
100
100
100
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100
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infantum MON-24 [5]. Le lieu de ces premiers isolements,
l’Algérie et la Tunisie, s’expliquerait quant à lui par la plus
forte fréquence du zymodème en question dans ces 2 pays
comparativement aux autres pays du bassin méditerranéen
comme le prouvent déjà les données épidémiologiques
humaines [1, 4, 6-8, 14]. En outre, même si le chien peut être
aussi considéré comme un réservoir de L. infantum MON80, la nature du vecteur reste encore hypothétique [7, 14] ; Il
appartiendrait cependant très probablement au sous-genre
Larroussius, qui est le vecteur confirmé de L. infantum dans
le bassin méditerranéen [9].
Remerciements
Les auteurs remercient I. Boufaden, N. Zallagua, E.
Chouihi et H. Ghorbel pour avoir participé au recrutement
des chiens et à l’isolement des souches de leishmanies étudiées. Le travail a bénéficié du soutien financier du LR
05SP03 et du projet ACIP A-04-2007.
AOUN (K.) ET COLLABORATEURS
6. - HAOUAS N., GORCII M., CHARGUI N., AOUN K.,
BOURATBINE A., MESSAADI AKROUT F., MASMOUDI A.,
ZILI J., BEN SAID M., PRATLONG F., DEDET J.P., MEZHOUD
H., AZAIEZ R., BABBA H.: Leishmaniasis in central and southern
Tunisia: current geographical distribution of zymodemes. Parasite,
2007, 14, 239-246.
7. - HARRAT Z., PRATLONG F., BELAZZOUG S., DEREURE J.,
DENIAU M., RIOUX J.A., BELKAID M., DEDET J.P.: Leishmania
infantum and L. major in Algeria. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg,
1996, 90, 625-629.
8. - JIMENEZ M., FERRER-DUFOL M., CANAVATE C.,
GUTIÉRREZ-SOLAR B., MOLINA R., LAGUNA F., LOPEZVELEZ R., CERCENADO E., DAUDEN E., BLAZQUEZ J.,
LADRON DE GUEVARRA C., GOMEZ J., DE LA TORRE J.,
BARROS C., ALTES J., SERRA T., ALVAR J.: Variability of
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Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg, 1994, 88, 3-34.
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2. - AOUN K., DIOUANI M.F., BENIKHLEF R., BOURABTINE A.,
BEN HADJ ALI S. Harrat Z., Belkaïd M., Kilani M., Ben Ismaïl R. :
Leishmania infantum MON-1: seul zymodème isolé chez les chiens
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