BIO57 – Travaux dirigés Page 1 sur 3 La drépanocytose Exemples d

BIO57 – Travaux dirigés
Page 1 sur 3
TD « blot » (transferts)
(D. Charmot)
Æ Quelles techniques va-t-on employer pour qualifier (présence/absence ; taille) et quantifier (même grossièrement) un acide
nucléique après son fractionnement ?
Schéma du Southern blot
Le moyen : l’hybridation moléculaire. En effet, on va tirer
parti des propriétés d’hybridation des acides nucléiques
simples brins lorsque leurs séquences sont complémentaires
Comment dénaturer une double hélice ?
Qu’est-ce qu’une sonde ?
Notion de stringence
Exemples d’application de la technique du Southern blot : diagnostic prénatal
La drépanocytose
La myopathie de Duchenne
BIO57 – Travaux dirigés
Page 2 sur 3
Technique du Northern blot
À quoi va-t-elle nous servir ?
Exemples d’application de la technique du Northern blot : stabilité d’un ARNm ou expression tissulaire
Stabilité de l’ARNm du récepteur de la transferrine
Expression tissulaire du gène CF (à l’origine de
la mucoviscidose)
BIO57 – Travaux dirigés
Page 3 sur 3
ET LES PROTEINES ???
On applique aussi le principe du transfert sur un support permettant l’analyse qualitative et quantitative à partir du support qui a
servi au fractionnement : c’est le western blot.
Technique du Western blot
la technique
ƒ Le fractionnement
ƒ Le transfert
ƒ Quelle sonde on utilise ?
ƒ Comment on révèle (le sandwich d’anticorps)
Exemples d’application de la technique du Western blot : détection de protéines pour établir un diagnostic
Diagnostic du SIDA : présence de protéines du
HIV
Diagnostic de la maladie de Creutzfeld-Jacob :
détection de la protéines prion anormale PrPSc