Mise en page 1 (Page 1)

EVALUATION DE L’ANALYSEUR MULTIPARAMETRIQUE OLYMPUS AU680
LASNIER E. - QUINTON F. - VAUBOURDOLLE M.
Service de Biochimie A, Pôle Biologie-Imagerie, Hôpital Saint-Antoine, AP-HP, Paris, France
INTRODUCTION
L’Olympus AU680 est un nouvel analyseur multiparamétrique ouvert, équipé d’un module ISE, pouvant
réaliser 60 tests photométriques simultanément dont 48 en bi-réactifs. Des méthodes à 3 réactifs sont
également disponibles. Nous avons évalué les performances analytiques du système (contamination,
cadence, linéarité, imprécision, justesse, interférences) selon le protocole VALTEC établi par la commission
Validation de techniques de la Société française de Biologie Clinique (SFBC) ainsi que la praticabilité de
l’analyseur.
MATERIELS ET METHODES
Caractéristiques de l’appareil :
- Volume échantillon 1-25 µL
- Volume réactif 15-250 µL
- Volume réactionnel total 120-425 µL
- 165 cuvettes en quartz, 13 longueurs d’onde 340-800 nm
- Temps réactionnel jusqu’à 8 minutes, 33 secondes
Interférences de la lipémie, de l’hémoglobine et de la bilirubine étudiées par surcharge d’un pool
d’échantillons avec de l’Intralipide et des solutions d’hémoglobine et bilirubine, respectivement.
Analyse statistique conforme aux recommandations du protocole Valtec de la SFBC à l’aide du logiciel
PC Valtec 97 version 1.0.5.
Tableau 1. Caractéristiques analytiques des méthodes évaluées et des méthodes de comparaison
Evaluation de l’instrumentation :
L’étude de la contamination d’un spécimen par un autre a été testée sur la CPK en alternant des séquences
comprenant un échantillon d’activité basse (19 U/L) un échantillon d’activité élevée (3120 U/L).
La contamination inter - réactifs a été évaluée sur les réactifs de dosage ALAT et LDH.
La cadence a été calculée en mesurant le temps nécessaire au passage de 100 tubes : 70 tubes avec
17 paramètres, 10 tubes avec 23 paramètres, 10 tubes avec 11 paramètres et 10 tubes avec 6 paramètres.
Le dosage de sodium, potassium et chlore faisait partie de chaque bilan.
Paramètres évalués :
16 paramètres sanguins (Na, K, Cl, CO2, protéines, urée, créatinine, glucose, triglycérides, bilirubine totale
et conjuguée, ASAT, ALAT, GGT, PAL, albumine) et un paramètre urinaire (créatinine). Tous les dosages ont
été réalisés avec les réactifs et les adaptations proposés par la société Olympus.
Imprécision mesurée sur 2 niveaux de contrôles (Bio-Rad Liquichek 1 et 2 pour les paramètres
plasmatiques et Bio-Rad Lyphochek 1 et 2 pour le paramètre urinaire).
RESULTATS ET DISCUSSION
• Instrumentation
Les études de contamination inter-échantillons et inter-réactifs ne montrent aucun effet contaminant.
La cadence mesurée est de 815 tests/heure, en incluant les électrolytes. Lorsque l’appareil est à l’arrêt le
1er tube est prélevé après 5 minutes et le 1er bilan à 17 paramètres est obtenu en 14 minutes et
57 secondes.
• Linéarité (Tableau 2)
Les limites hautes de linéarité testées sont conformes ou supérieures à celles annoncées par le
constructeur et sont satisfaisantes pour la plupart des pathologies rencontrées en pratique hospitalière.
• Imprécision (Tableau 3)
L’ensemble des résultats obtenus est conforme aux critères d’acceptabilité du protocole. L’imprécision est
excellente pour les ISE (CV répétabilité < 0,4%, CV reproductibilité < 0,9%).
• Justesse (Tableau 4)
Les coefficients de corrélation des droites de régression obtenues pour l’inexactitude sont élevés pour
tous les paramètres (> 0,96). Pour 13 paramètres les corrélations sont acceptées par le protocole Valtec à
tous les niveaux de concentration. Pour l’ASAT l’exactitude est acceptable mais présente une différence
proportionnelle (+12%) probablement liée aux calibrateurs différents utilisés (CFAS Roche sur AU640,
Olympus sur AU680). La créatinine présente une erreur systématique liée à l’utilisation de la méthode de
Jaffé corrigée raccordée à la méthode IDMS sur l’AU680 alors que la méthode non corrigée est utilisée sur
l’AU640. Ces 2 méthodes utilisent le même réactif, mais des paramétrages différents avec la soustraction
systématique de 18 µmol/L pour la méthode corrigée et un ciblage différent du calibrateur. Pour le CO2
l’erreur systématique observée correspond probablement à un problème de conservation une fois le
tube ouvert. L’albumine présente une erreur proportionnelle associée à une erreur systématique qui se
compensent mutuellement dans les valeurs moyennes et élevées mais qui entraîne un rejet pour les valeurs
basses. La créatinine urinaire présente une erreur systématique qui entraîne un rejet dans les basses
concentrations. Le paramétrage sur les 2 appareils est différent car les calibrateurs utilisés sont différents :
sur l’AU640 le facteur de calibration est le même que pour la créatinine plasmatique alors que sur l’AU680
un calibrateur spécifique urinaire est utilisé.
• Interférences
L’hémoglobine (Hb) à une concentration supérieure à 60 µmol/L entraîne une interférence négative sur
le dosage de la bilirubine (-7 µmol/L pour une concentration de 84 µmol/L). L’ Hb supérieure à 210 µmol/L
provoque une interférence positive sur le dosage des protéines (+3 g/L pour une valeur à 61 g/L). La
bilirubine aux concentrations supérieures à 350 µmol/L provoque une interférence négative sur l’ALAT
(-7 U/L pour ALAT à 88 U/L)) et les protéines (-3 g/L pour une valeur à 60 g/L) et une interférence positive
(à partir de 200 µmol/L de bilirubine) sur le dosage du CO2 (+2 mmol/L pour une concentration
à 21 mmol/L). La turbidité n’interfère pas jusqu’à la concentration de 6 mmol/L de triglycérides testée.
• Praticabilité
- Avantages Apprentissage : rapide, logiciel convivial.
Traitement des échantillons : visualisation à l’écran du statut de l’échantillon (identifié, terminé) avec
heure de rendu du résultat ; réanalyse automatique ou manuelle, avec possibilité de prise d’essai réduite,
identique ou augmentée ou dilution vraie ; circuit de réanalyse automatique différencié et prioritaire ; faible
volume mort (30 µL en cône).
Traitement des réactifs : réactifs concentrés, faible volume réactionnel, méthodes à 3 réactifs (par exemple
transaminases IFCC avec ajout extemporané du phosphate de pyridoxal).
Traitement des informations : très bonne traçabilité des calibrations.
Développement de méthodologies utilisateurs : appareil ouvert, programmation facile des méthodes, choix
des paramètres de réanalyse.
- Inconvénients Environnement : appareil en 2 parties nécessitant une mise à niveau et ne pouvant pas être déplacé
facilement.
Traitement échantillon : temps de latence avant démarrage.
Traitement des réactifs : manque de pertinence des informations sur l’écran de gestion des réactifs
(nombre de tests affichés global par analyse et non par flacon), nombre de tests et positions réactifs
disponibles sur 2 écrans différents, impossibilité d’entrer manuellement un numéro de lot ou de flacon pour
les réactifs sans code à barre.
Tableau 2. Limite haute de linéarité
Analyte
Inexactitude évaluée par comparaison de méthodes sur échantillons de patients.
- Echantillons sans anticoagulant pour l’albumine, et sur héparinate de lithium pour les autres paramètres,
choisis parmi nos échantillons de routine pour couvrir l’ensemble des variations physiopathologiques.
- Méthodes de comparaison sur Immage Beckman-Coulter pour l’albumine et sur Olympus AU640 pour
les autres paramètres. Le tableau 1 résume les caractéristiques analytiques des méthodes évaluées et de
comparaison.
Annoncée
Testée
Vérifiée
Unités
Bilirubine totale
513
620
620
µmol/L
Bilirubine conjuguée
170
198
170
µmol/L
ASAT
1000
3140
3000
U/L
ALAT
500
3870
2000
U/L
GGT
1200
2973
1200
U/L
PAL
1500
1470
1470
U/L
Analyte
Méthode évaluée
Méthode de comparaison (analyseur, réactif, calibrant)
Na+ / K+ / Cl-
Potentiométrie indirecte
Potentiométrie indirecte (AU640, Olympus, Olympus)
CO2 total
Enzymatique PEPC-MDH
Enzymatique PEPC-MDH (AU640, Olympus, Olympus)
Protéines
Biuret point final
Biuret point final (AU640, Olympus, Olympus)
Urée
Uréase-GLDH
Uréase-GLDH (AU640, Olympus, Olympus)
Créatinine
Jaffé temps fixé, standardisée IDMS
Jaffé temps fixé non compensé (AU640, Olympus, Olympus)
Glucose
Hexokinase-G6PDH
Hexokinase-G6PDH (AU640, Olympus Olympus)
Triglycérides
Glycérol phosphate oxydase-PAP
Glycérol phosphate oxydase-PAP (AU640, Olympus, Olympus)
Bilirubine
DPD
DPD (AU640, Olympus, C.F.A.S Roche)
ASAT, ALAT
IFCC (avec phosphate de pyridoxal)
IFCC (avec phosphate de pyridoxal) (AU640, BioMérieux, C.F.A.S Roche)
GGT
IFCC (substrat carboxylé)
IFCC (substrat carboxylé) (AU640, Olympus C.F.A.S Roche)
PAL
IFCC (tampon AMP)
IFCC (Tampon AMP) (AU640, Diasys, C.F.A.S Roche)
Albumine
Vert de bromocrésol
Néphélémétrie (Beckman-Coulter Immage, Beckman-Coulter)
Créatinine urinaire
Jaffé temps fixé
Jaffé temps fixé (AU640, Olympus, Olympus)
Tableau 3. Evaluation de l’imprécision
Analyte
Répétabilité (n = 20)
ET
CV %
m
Plasma
Sodium (mmol/L)
Potassium (mmol/L)
Chlorures (mmol/L)
CO2 total (mmol/L)
Protéines (g/L)
Urée (mmol/L)
Créatinine (µmol/L)
Glucose (mmol/L)
Bilirubine totale
(µmol/L)
Bilirubine conjuguée
(µmol/L)
Triglycérides
(mmol/L)
ASAT (U/L)
ALAT (U/L)
GGT (U/L)
PAL (U/L)
Sérum
Albumine (g/L)
Urines
Créatinine (mmol/L)
m
Reproductibilité (n = 20)
ET
CV %
134,0
147,9
3,92
6,40
85,3
103,2
16,3
30,9
43,9
69,5
5,35
16,74
68,2
487,7
4,61
15,64
18,26
83,01
6,32
20,56
1,09
2,01
36,0
208,6
27,4
96,1
34,1
152,2
105,1
499,1
0,4
0,4
0,01
0,02
0,3
0,2
0,1
0,3
0,2
0,3
0,05
0,09
0,7
3,1
0,02
0,05
0,12
0,31
0,10
0,19
0,01
0,01
0,6
1,2
0,6
0,6
0,4
0,7
0,7
3,0
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,2
0,6
1,1
0,4
0,4
1,0
0,5
1,0
0,6
0,4
0,3
0,7
0,4
1,5
0,9
0,4
0,5
1,6
0,6
2,1
0,6
1,1
0,5
0,7
0,6
134,2
147,8
3,93
6,36
85,2
102,9
16,5
29,9
43,4
69,4
5,35
16,85
68,6
490,6
4,64
15,69
18,46
83,13
0,7
0,8
0,02
0,05
0,4
0,6
0,8
1,1
0,5
0,7
0,08
0,15
,9
5,8
0,07
0,23
0,46
1,98
0,5
0,5
0,6
0,8
0,5
0,6
4,8
3,8
2,1
1,0
1,5
0,9
1,4
1,2
1,6
1,5
2,5
2,4
19,83
1,08
1,98
35,6
208,4
26,7
95,8
33,9
153
105,3
500,4
0,45
0,03
0,05
0,8
2,0
0,8
1,3
0,4
1,7
1,8
4,2
2,3
2,8
2,4
2,3
1,0
2,8
1,4
1,1
1,1
1,7
2,9
26,46
41,38
0,1
0,28
0,4
0,7
26,53
41,61
0,33
0,47
1,25
1,14
7,44
21,23
0,06
0,13
0,8
0,6
7,33
21,11
0,22
0,62
3,0
2,9
Tableau 4. Evaluation de la justesse
A : accepté - R : en dehors des limites du protocole
Analyte
n
Coefficient
corrélation
Droite de Deming
Normes acceptabilité Valtec
Bas
Moyen
Elevé
Déviants
n
Sodium
121
0,98
y = 1,07 x – 9,96
A
A
A
0
Potassium
122
0,99
y = 1,01 x – 0,08
A
A
A
0
Chlorures
121
0,99
y = 1,04 x – 3,06
A
A
A
0
CO2
116
0,97
y = 1,03 x – 2,06
R
A
A
0
Protéines
117
0,99
y = 1,01 x – 0,20
A
A
A
0
Urée
117
0,99
y = 0,98 x + 0,04
A
A
A
0
Créatinine
127
0,99
y = 1,04 x – 16,94
R
A
A
31
Glucose
111
0,99
y = 1,01 x – 0,21
A
A
A
1
Bilirubine totale
108
0,99
y = 0,99 x – 0,31
A
A
A
1
Bilirubine conjuguée
113
0,99
y = 0,98 x + 0,39
A
A
A
3
Triglycérides
102
0,99
y = 0,98 x + 0,03
A
A
A
0
ASAT
109
0,99
y = 1,12 x – 0,48
A
A
A
1
ALAT
109
0,99
y = 0,97 x + 1,41
A
A
A
1
GGT
110
0,99
y = 1,00 x – 1,25
A
A
A
0
PAL
108
0,99
y = 1,09 x – 4,40
A
A
A
0
Albumine
110
0,99
y = 0,91 x + 5,06
R
A
A
5
Créatinine urinaire
118
0,99
y = 0,99 x + 0,87
R
A
A
4
CONCLUSION
Les méthodes évaluées sur l’Olympus AU680 ont montré un domaine de mesure étendu, une précision très
satisfaisante et une bonne corrélation avec les techniques de validation. Le logiciel a été apprécié pour sa
praticabilité et sa convivialité. L’Olympus AU680 est un automate bien adapté aux besoins rencontrés en
Biochimie.